孤啡肽对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的研究孤啡肽对白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法选择人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60为实验模型,应用MTT比色法、形态学观察及流式细胞术(FCM)等方法对孤啡肽诱导其凋亡情况进行研究。结果孤啡肽能显著抑制HL-60细胞增殖,使细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率增加,FCM DNA直方图上G_0/G_1峰前有明显的亚二倍体凋亡峰,表明孤啡肽能明显抑制HL-60细胞的生长,诱导其发生凋亡,且存在时间依赖性,而剂量依赖性不明显。结论孤啡肽对HL-60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用。     

小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究

二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抑制肿瘤细胞增殖,调控细胞周期依赖素激酶、信号转导,诱导肿瘤细胞分化、凋亡及影响癌基因与抑癌基因表达的作用。小剂量DADS(1·25mg·L-1)可以抑制JAK1/STAT3信号通路,将HL-60细胞阻滞在G0/G1期,诱导HL-60细胞向粒系分化,其作用与全反式维甲酸(ATRA)相当[1~3]。本实验将探讨小剂量DADS与ATRA联合应用对HL-60细胞的生长抑制及诱导分化效应。1材料和方法参见文献2。2结果2.1DADS与ATRA单独或联合用药对HL-60细胞生长的影响1·25mg·L-1DADS或ATRA对体外培养的HL-60细胞均…     

DADS通过Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路诱导白血病HL-60细胞G_2/M期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞及其分子机制。方法采用细胞计数、软琼脂克隆形成实验及流式细胞术观察DADS对HL-60细胞生长抑制与周期阻滞效应。Western blot检测DADS对HL-60细胞Chk1/2以及下游分子的影响。结果细胞计数显示,60、120μmol·L-1DADS处理后,其群体倍增时间从19.14 h增加到35.03、71.82 h(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验表明,30、60、90、120μmol·L-1DADS对HL-60细胞克隆形成率的抑制率分别为35.06%、62.10%、93.79%、99.35%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60和120μmol·L-1DADS分别作用HL-60细胞24 h后,DADS可呈时间与浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。60μmol·L-1DADS处理HL-60细胞后,p-Chk1可呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1与Chk2总蛋白和pChk2无改变(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB 1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但14-3-3蛋白表达没有改变(P>0.05)。结论 DADS能够抑制HL-60细胞增殖,并通过Chk1/Cdc25C/CyclinB 1/CDK1通路阻滞HL-60细胞于G2/M期。     

重组L-门冬酰胺酶前体脂质体对HL-60细胞生长的影响

目的:研究L-门冬酰胺酶(L-ASNase)脂质体对体外培养的人早幼粒细胞白血病(HL-60)细胞活性的影响.方法:实验分3组:对照1组加入新鲜RPMI1640培养液倍比稀释的空白脂质体;对照2组加入L-ASNase(终浓度分别为2.5,5,10,20和40 μg·mL-1);实验组加入L-ASNase脂质体(前体脂质体水合而得,终浓度分别为2.5,5,10,20和40 μg·mL-1).MTT法测定细胞存活率,电镜观察细胞形态学,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期的改变.结果:L-门冬酰胺酶脂质体(经前体脂质体水合而得)组HL-60细胞的G0/G1期细胞量明显增加,S期的细胞明显减少;增殖指数(PI)显著下降;HL-60细胞凋亡比例显著增多.结论:L-门冬酰胺酶脂质体抑制HL-60细胞的繁殖,可能与抑制细胞的S期有关.     

大黄素可能通过抑制Akt信号通路诱导HL-60细胞凋亡

为研究大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及Akt信号通路在其中的作用, 应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响；细胞周期分析、线粒体细胞凋亡流式检测法分析细胞周期变化及细胞凋亡；Western blotting检测Akt信号通路蛋白表达水平的变化。结果显示，大黄素能有效抑制HL-60细胞的增殖，作用48 h的IC₅₀约为20 μmol·L^-1， 并能诱导其凋亡, 随药物作用浓度的增加， 凋亡率也逐渐上升； 大黄素作用后， HL-60细胞G_0/G1期细胞增多， 而S期及G₂期的细胞减少； Western blotting检测结果显示， 大黄素下调HL-60细胞Akt、p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR及p-mTOR蛋白的表达。因此,大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，将细胞阻滞于G_0/G1期，诱导其凋亡；Akt信号通路可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程。     

四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果:ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力,10 ng.ml-1ZGDHu-1作用HL-60细胞24~72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率分别为(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%和(21.3±1.2)%,均显著高于对照组(P<0.01);48 h、72 h的IC50分别为180、180 ng.ml-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;出现典型的细胞形态改变,DNA片端化,经50~1 000 ng.ml-1的ZGDHu-1作用后,SubG1由(3.2±1.6)%上升至(67.7±5.9)%,与对照组(0.7±0.5)%比较,具有显著性差异(P<0.05),Annexin-V/PI标记升高,TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10~100 ng.ml-1ZGDHu-1作用3 d后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas表达增强,而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加,ΔΨm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论:ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力,低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化,高浓度时促进细胞凋亡,其机制可能与Bax表达上调,线粒体膜电位下降等有关。     

重组L-门冬酰胺酶前体脂质体对HL-60细胞的生长影响

目的研究L-门冬酰胺酶脂质体对体外培养的人早幼粒细胞白血病(HL-60)细胞活性的影响.方法MTT测定L-门冬酰胺酶脂质体的抗肿瘤活性,电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响,流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响.结果L-门冬酰胺酶脂质体(经前体脂质体水合而得)组与肿瘤细胞作用后,HL-60细胞的G0/G1期细胞量明显增加,而进入S期的细胞明显减少.增殖指数L-门冬酰胺酶脂质体组的PI值显著下降.HL-60细胞凋亡比例显著增多.结论L-门冬酰胺酶脂质体抑制HL-60细胞的繁殖,可能与抑制细胞的S期有关.     

猪胆汁酸钠对人早幼粒白血病细胞系HL-60的增殖抑制及分化诱导作用(英文)

猪胆汁酸钠不仅是人工牛黄的主要成分,而且有广泛的临床用途.近年来,文献报道已经在实验大鼠证实口服少量牛磺胆酸可以克服长期摄入维生素A酸(retinoic acid,RA)或其衍生物所引起的副作用.鉴于RA是髓系白血病细胞分化的生理性诱导剂,临床试用表明口服RA对急性早幼粒白血病有较满意疗效,我们设想胆汁酸与RA联合用药可能对早幼粒白血病的治疗是有意义的.本文报道体外试验结果表明,药用猪汁酸钠明显抑制HL-60细胞增殖(IC_(50) 400μg/ml)并诱导HL-60细胞向终末方向分化.诱导后的HL-60细胞具有嗜中性粒细胞和单核/巨噬细胞的某些形态及细胞化学特征,表现出明显的细胞呼吸爆发功能.细胞周期分析表明猪胆汁酸钠阻断细胞从G_0+G_1期进入S期.小鼠急性中毒试验测定其LD_(50)为:腹腔注射LD_(50)462±SD 35 mg/kg,灌胃LD_(50)>1 g/kg。药用猪胆酸钠体外试验对粒系白血病原代细胞的增殖抑制及分化诱导作用以及体内试验对某些小鼠白血病的作用正在进一步观察.我们认为进一步研究猪胆汁酸钠和RA的联合应用是有意义的.     

人参皂甙Rg1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的探讨人参皂甙Rg1对急性早幼粒细胞性白血病细胞HL-60的增殖抑制作用以及对细胞周期和凋亡的影响。方法采用MTT法测定药物对细胞的抑制率,通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡,应用流式细胞仪进行细胞周期分析。结果人参皂甙Rg1呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖,48 h后抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为85μg±25μg。流式细胞仪分析结果显示25~400μg/m l人参皂甙Rg1作用于HL-60细胞24-72 h后,呈剂量依赖性的将细胞阻滞于G1期,使G1期不能运行到S期,从而影响了肿瘤细胞的有丝分裂,并且在低于G0/G1期出现典型的凋亡峰。细胞形态学观察可见分裂细胞以及凋亡细胞。结论人参皂甙Rg1能够抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞的增殖,诱导G1期阻滞及细胞凋亡。     

NO前药JS-K对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的观察一氧化氮前体药物JS-K对白血病HL-60细胞增殖分化的影响。方法体外传代培养HL-60细胞,用不同浓度的JS-K处理HL-60细胞24～96h,MTT法测定细胞活力,观察细胞生长情况。流式细胞仪检测细胞分化的表面分子变化。结果按对数浓度差0.5的间距加入JS-K0.3～10μmol.L-1,处理24～96h,随着JS-K浓度的增加和作用时间的延长,MTT法检测所得各组的光密度值呈剂量依赖性和时间依赖性降低,细胞生长抑制率增高,JS-K作用96h抑制HL-60细胞增殖的IC50为(1.025±0.23)μmol.L-1。JS-K3和10μmol.L-1处理96h后,显微镜下可见细胞数量明显减少,细胞皱缩、细胞碎片明显增加。JS-K3μmol.L-1作用96h后,表达CD11b阳性和CD14阳性细胞的百分率明显提高。结论JS-K可明显抑制HL-60细胞的增殖,促进HL-60细胞分化。     

人参皂甙Rg1诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的探讨人参皂甙Rg1对急性早幼粒细胞性白血病细胞HL-60的增殖抑制作用以及对细胞周期和凋亡的影响.方法采用MTT法测定药物对细胞的抑制率,通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡,应用流式细胞仪进行细胞周期分析.结果人参皂甙Rg1呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖,48 h后抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为85 μg±25 μg.流式细胞仪分析结果显示25～400 μg /ml人参皂甙Rg1作用于HL-60细胞24-72 h后,呈剂量依赖性的将细胞阻滞于G1期,使G1期不能运行到S期,从而影响了肿瘤细胞的有丝分裂, 并且在低于G0/G1期出现典型的凋亡峰.细胞形态学观察可见分裂细胞以及凋亡细胞.结论人参皂甙Rg1能够抑制急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞的增殖,诱导G1期阻滞及细胞凋亡.     

阿糖胞苷、二甲基亚砜对HL-60细胞周期动力学的影响

本文应用流式细胞仪技术研究了二甲基亚砜(DMSO)、阿糖胞苷(Ara-c)诱导HL-60分化成熟过程中,细胞周期动力学的变化。结果表明DMSO、Ara-c作用3天后,具有S、G_2期DNA含量的细胞占全部细胞的百分率,在DMSO组减小,而Ara-c组略有增加。     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

鲁斯可皂苷元对HL-60与EC V304细胞黏附的影响

目的考察麦冬中主要皂苷元鲁斯可皂苷元(Rusco-gen in)抑制细胞黏附的作用,为深入研究其抗炎作用机制提供依据。方法采用MTT比色法检测Ruscogen in对人原髓性白血病细胞株HL-60细胞与正常或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)活化的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞黏附的影响及其对ECV304与HL-60细胞增殖的影响。结果Ruscogen in 0.1,1.0μmol.L-1预处理ECV304细胞后,均抑制TNF-α诱导的ECV304细胞与HL-60细胞黏附的增加,Ruscogen in 0.001,0.01,0.1μmol.L-1预处理HL-60后,亦抑制TNF-α诱导的ECV304细胞与HL-60细胞黏附的增加;同时Ruscogen in在实验浓度范围内不影响ECV304细胞与HL-60细胞的增殖及二者之间的正常黏附。结论Ruscoge-n in可通过抑制HL-60细胞与活化的ECV304细胞之间的黏附作用,发挥抗炎活性。     

2-乙氧甲酰亚甲基-4-氰基-5,6-二苯哒嗪-3-酮对L1210细胞周期的影响

本文研究了哒嗪(DPP)衍生物PD032对L1210细胞周期移行的影响。结果表明,PD032(2～10μmol/L)作用24h,G_1期细胞明显减少,G_2+M期细胞增加5～10倍。同时观察到有丝分裂指数增加,细胞体积增大及多核现象。S期在高浓度(10μmol/L)PD032时有减少,这时[~3H]TdR参入DNA也有轻度抑制。洗去药物后24～48h,上述变化有不同程度的恢复。以上结果说明PD032是有丝分裂抑制剂。     

ERK抑制剂U0126通过下调cyclin D1与survivin蛋白表达抑制乳腺癌细胞增殖

目的研究ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其调控机制。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB231,将细胞分组干预,MTT法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡; Western blot检测细胞中p-ERK/ERK、cyclin D1、survivin及cleaved caspase-3蛋白表达。结果MTT结果显示,U0126干预24、48 h后,MCF-7、MDA-MB231细胞抑制率明显增加(P <0. 01); MCF-7、MDA-MB231细胞经U0126干预24 h后,检测细胞周期及细胞凋亡,G_0/G_1期细胞比例较对照组明显增加,S及G_2期细胞比例下降(P <0. 05);而干预组细胞凋亡率较未干预组明显增多(P <0. 01); U0126处理人乳腺癌细胞2 h后,可阻断ERK的磷酸化,减少cyclin D1的蛋白表达,抑制survivin而上调cleaved caspase-3的表达,与对照组相比差异有显著性(P <0. 01)。结论 U0126通过阻断MCF-7、MDA-MB231细胞中ERK信号通路,调控cyclin D1,将细胞周期阻断在G_0/G_1期,抑制survivin而增加cleaved caspase-3表达,增加细胞凋亡,继而使乳腺癌细胞MDA-MB231、MCF-7的增殖受到抑制。     

丙戊酸对HL-60/HT细胞P27~(Kip1)、P170表达水平的影响

目的了解丙戊酸对HL-60/HT细胞P27~(Kip1)的影响。方法建立白血病耐药细胞株HL-60/HT,MTT法检查丙戊酸作用前后细胞增殖情况及对Ara-c耐药性的改变,流式细胞仪检测HL-60、HL-60/HT细胞P27~(Kip1)、P170的表达。结果 VPA能增加HL-60、HL-60/HT细胞P27~(Kip1)的表达水平(P<0.05),而不影响P170的表达(P>0.05);Ara-c不能影响HL-60、HL-60/HT细胞的P27~(Kip1)、P170的表达(P>0.05);VPA与Ara-C联用能增加HL-60、HL-60/HT细胞P27~(Kip1)的表达水平(P<0.05),不影响P170的表达(P>0.05)。结论 HL-60/HT细胞P27~(Kip1)低于HL-60,丙戊酸能增加HL-60/HT细胞P27~(Kip1)的表达。     

石蒜碱内铵盐对小鼠艾氏腹水癌细胞周期及核分裂的影响

石蒜碱内铵盐是一种有效的抗癌物质,本工作以荧光激活细胞分类器方法证明,它在治疗剂量40mg/kg时能使G_1期细胞百分比下降,G_2+M期细胞明显上升,对G_2期细胞向G_1期的过渡有阻滞作用。在给药后8～72h使癌细胞有丝分裂指数明显下降。至第6d趋向恢复。此药对早期和中期细胞分裂象的抑制作用较强,尤其在用药后8h为最显著,对晚期、末期的作用不明显。     

CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究

目的探讨CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、分化的作用机制。方法以急性髓系白血病细胞株HL-60为研究对象,以ATRA为阳性对照,以同型抗体IgG2a为阴性对照,以HI44a作为实验组,应用台盼蓝拒染法检测HI44a对HL-60细胞增殖的影响,瑞氏染色法及流式细胞学检测HI44a对HL-60细胞分化的影响,RT-PCR方法检测HI44a处理HL-60细胞前后TGFβ1和TGFβR1基因表达变化,应用荧光定量RT-PCR法检测HI44a处理HL-60细胞前后髓系分化相关的细胞因子及受体信号通路(GM-CSFRα、OPN)基因表达变化,以及DNA序列分析法检测HI44a处理HL-60细胞前后OPN异构体表达改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测实验组与对照组培养上清液的OPN水平。结果经HI44a作用后,HL-60细胞增殖受抑;细胞形态变化表现为体积变大,核固缩,核浆比例降低,核仁减少,出现核分叶等特征;细胞表面分化抗原CD15表达上调;HL-60细胞的GM-CSFRα及TGFβ1 mRNA表达水平增高,而OPN mRNA表达水平降低,TGFβR1 mR-NA表达水平无变化;OPN序列分析结果表明HI44a作用后OPN的3种异构体的组成发生改变,HI44a处理后的OPN水平明显下降。结论 CD44抗体HI44a通过上调GM-CSFRα、TGFβ1及下调OPN mRNA表达水平,减少OPN的分泌,抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化。     

白杨素对人白血病细胞柔红霉素化疗敏感性及PI3K/Akt通路的影响

摘要：目的:研究白杨素联合柔红霉素诱导体外培养的急性粒细胞性白血病细胞株（HL-60）的细胞凋亡作用,通过其对磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的活化,增加HL-60对柔红霉素的敏感性。方法:用MTT法测定对照组、白杨素组(20μmol·L-1)、柔红霉素组(0.5μg·ml-1)和白杨素(20μmol·L-1)+柔红霉素(0.5μg·ml-1)组对HL-60细胞的抑制率,观察各组HL-60细胞形态变化,并用吖啶橙和溴化乙锭（AO/EB）双荧光法观察细胞凋亡情况;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测白杨素与柔红霉素联用对HL-60细胞PI3K相关基因S期激酶相关蛋白2（Skp-2）、抑癌基因P27、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响;用蛋白质免疫印迹法（Western Blotting）方法检测白杨素与柔红霉素联用对HL-60细胞PI3K相关蛋白Skp-2、P27、Bcl-2和Bax表达的影响。结果:白杨素与柔红霉素联用能显著增强HL60对柔红霉素的化疗名感性,降低HL60细胞存活率,增加细胞凋亡,下调Skp-2、Bcl-2 mRNA及蛋白表达,上调P27 mRNA及蛋白表达,与单药组比较差异有统计学意义（P<0.05）;而Bax mRNA及蛋白表达变化不明显（P>0.05）。结论:白杨素可以有效靶向诱导HL-60肿瘤细胞凋亡,并通过PI3K/Akt信号通路增加HL-60对柔红霉素的化疗敏感性。