酒精对小鼠NIT-1细胞胰岛素分泌及COXⅡ基因表达的影响

目的:观察酒精对小鼠NIT-1细胞胰岛素分泌功能的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养的小鼠NIT-1细胞,经不同浓度酒精(0、50、100、200、400mmol/L)作用6、12、24h后,用放免法测定NIT-1细胞分泌胰岛素情况,半定量RT-PCR方法检测细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochromeoxidaseⅡ,COXⅡ)基因mRNA的表达。结果:酒精作用6h,NIT-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加;作用12h、24h,葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低。酒精作用6h,COXⅡmRNA表达升高,12h表达开始降低,24h时高浓度组表达呈显著性降低。结论:酒精可增加或降低NIT-1细胞胰岛素分泌,与酒精作用时间、浓度有关。酒精导致COXⅡmRNA表达水平的改变很可能是酒精影响NIT-1细胞胰岛素分泌的机制之一。     

IGF-1对体外培养囊胚细胞抗凋亡的作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养囊胚细胞抗凋亡的作用。方法:获取妊娠3.5天小鼠囊胚,分别移入3个培养皿中,为A、B、C 3组,A组(基础培养液)、B组(基础培养液+30 mmol/L的葡萄糖溶液)、C组(基础培养液+30 mmol/L的葡萄糖溶液+100 ng/ml的人重组IGF-1)。连续培养72 h后,采用免疫组化S-P法检测各组囊胚细胞中Bax和Bcl-2的表达,利用计算机图像分析技术测量各组囊胚细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达的平均光密度和平均阳性面积。结果:B组囊胚细胞中Bax的表达明显高于A组和C组(P<0.05),而B组囊胚细胞中Bcl-2的表达却低于A组和C组(P<0.05)。结论:IGF-1对高糖诱导的小鼠着床前早期胚胎凋亡起了抑制作用。     

高压氧中毒对小鼠肺毛细血管细胞色素氧化酶活性的影响

采用超微结构细胞化学和计算机图象定量分析方法，测量计算了高压下氧中毒小鼠肺毛细血管线粒体、线粒体细胞色素氧化酶二维形态学和三维立体学参数。结果表明，小鼠暴露于０．５ＭＰａ高压氧后，肺毛细血管线粒体二维形态学和三维立体学参数的值没有发生变化，但线粒体细胞色素氧化酶的活性明显降低。     

葡萄糖对HK-2细胞的糖毒性及ALA/LA的干预作用

目的探讨高浓度葡萄糖对人肾脏近曲小管上皮(HK-2)细胞的糖毒性及α-亚麻酸/亚油酸(ALA/LA)的改善作用。方法常规方法培养接种HK-2细胞,设置11个葡萄糖浓度,MTT法检测葡萄糖的糖毒性;设立正常对照组、高糖模型组、阳性对照组、ALA组、LA组和ALA/LA组,检测a-ALA/LA的干预作用;葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测HK-2细胞的葡萄糖吸收。结果高浓度葡萄糖(≥25.3 mmol/L,培养48h)显著抑制HK-2细胞的存活率(P0.05);培养48 h,葡萄糖浓度25.3~56.5 mmol/L可作为HK-2细胞葡萄糖毒性造模条件;适宜剂量的ALA、LA及适宜比例的ALA/LA,能够降低HK-2细胞的葡萄糖毒性,增加HK-2细胞的葡萄糖吸收。结论必需脂肪酸ALA/LA能降低葡萄糖对HK-2细胞的糖毒性,增加其葡萄糖吸收功能。     

铁皮石斛对高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响

目的研究铁皮石斛多糖对体外高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响及其作用机制。方法将常规培养的人脐静脉内皮细胞分为DMEM/低糖培养基组(对照组)、DMEM/高糖培养基组(33.3 mmol/L)(高糖组)、3个不同浓度铁皮石斛多糖高糖组(100、200、400μg/ml)共5组,培养48 h后MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 33.3 mmol/L高糖环境下人脐静脉内皮细胞生长受抑,细胞线粒体膜电位降低,铁皮石斛多糖能剂量依赖性地有效拮抗上述改变,且有统计学意义(P0.05)。结论铁皮石斛多糖可能通过升高高糖环境下的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位,增加高细胞活力,而对其具有较好的保护作用。     

铜锌对大鼠神经元细胞色素氧化酶活力的影响

目的 观察铜锌对原代培养的神经元细胞色素氧化酶(COX)活力的影响，以探讨其对神经元能量代谢的作用。方法 用神经元与胶质细胞分离式原代培养的方法进行大鼠大脑皮质神经元培养，以硫酸铜0．05、0．16、0．5mmol／L，醋酸锌0．05、0．16、0．5mmol／L进行染毒，以及铜锌3x3联合染毒，用细胞化学方法，图象处理定量分析细胞色素氧化酶的活力。结果 铜组，0．16、0．5mmol／L时，COX活力降低，与对照组差异有显著性，单独染锌组COX活力与对照组之间差异无显著性。铜锌联合染毒时，交互作用无显著性。结论 铜能明显降低神经元能量代谢关键酶—COX的活力，将对神经元能量活动产生损伤作用，但在本实验暴露水平下，铜锌未能显出明显的交互作用。     

p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用

目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性。转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平。结果细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P0.05)。细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NCsiRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、 ZO-1、 Occludin表达水平明显上调(P0.05)。结论高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加。[营养学报,2019,41(2):154-162]     

PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响

【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。     

胎鼠缺血缺氧性脑损伤时一氧化氮合酶与线粒体介导的神经细胞凋亡的关系及其抑制剂的保护作用

目的 探讨一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）与线粒体介导凋亡过程中能量代谢、细胞色素C和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的相互关系及其抑制剂的保护作用。方法 ①建立胎鼠宫内窘迫模型。②分为5组：对照组、急性缺血组、治疗1组、缺血再灌注组、治疗2组。③检测脑组织中caspase-3的表达、细胞色素C的胞浆释放量；检测胎鼠脑组织神经型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达量[以吸光度（A）值表示]，诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、线粒体细胞色素氧化酶活性。分析不同时段细胞色素氧化酶活性、细胞色素C胞浆释放量及caspase-3阳性细胞数的变化趋势。结果①急性缺血组在5min，15min两个时间点nNOSA值明显高于治疗1组，差异有显著意义（P〈0．05），且两组nNOSA值均明显高于对照组。②缺血再灌注组各时间点iNOS活性明显高于治疗2组（P〈0．05），且两组iNOS活性明显高于对照组（P〈0．05）。③急性缺血组缺血5min，15min线粒体细胞色素氧化酶活性均高于对照组（P〈0．05）。治疗1组缺血30min线粒体细胞色素氧化酶活性虽高于急性缺血组，但仍低于对照组（P〈0．05）。缺血再灌注组和治疗2组各时间点的细胞色素氧化酶活性均低于对照组，而治疗2组的均高于缺血再灌注组（P〈0．05）。④在5min，15min两个时间点，急性缺血组及治疗1组的细胞色素C胞浆释放量和caspase-3免疫阳性细胞计数与对照组比较，差异无显著性。缺血30min时，治疗1组胞浆中细胞色素C含量及caspase-3免疫阳性细胞计数较急性缺血组虽明显降低，但仍高于对照组（P〈0．05）。缺血再灌注组和治疗2组胞浆细胞色素C含量及caspase-3免疫阳性细胞计数均高于对照组。治疗2组各时间点的胞浆细胞色素C含量与caspase-3免疫阳性细胞计数低于缺血再灌注组（P〈0．05）。结论①nNOS和iNOS介导了宫内窘迫不同阶段的胎鼠脑神经细胞细胞色素氧化酶活性的损害、细胞色素C的胞浆释放及caspase-3表达的增加。②左旋硝基精氨酸（L-NNA）在一定时间内对胎鼠脑急性缺血期线粒体能量代谢障碍和神经细胞凋亡有预防作用。而氨基胍（AG）对胎鼠脑缺血再灌注期的线粒体能量代谢障碍和神经细胞凋亡有良好的保护作用。     

维生素A酸对体外培养小鼠囊胚发育的影响

目的:观察维生素A酸(RA)对小鼠囊胚细胞的凋亡效应,探讨RA对体外培养小鼠囊胚发育的影响。方法:获取妊娠3.5天小鼠囊胚,分别培养在含0、1μmol/L和10μmol/L的RA的M199培养基中24 h,用带有荧光(FITC)标记的原位末端标记检测法(TUNEL)检测RA对小鼠囊胚细胞凋亡的影响。结果:RA可诱导囊胚细胞凋亡。结论:维生素A酸对小鼠囊胚的发育具有细胞毒性作用。     

锌对骨发育影响的体外研究

目的　研究锌对骨发育的影响。方法　将 1 6 d孕龄的小鼠 (每组 1 2只 )脱颈椎处死 ,无菌条件下切下胎鼠的前肢分 5组 ,分别在基础培养基 (Zn2 + 浓度为 2 0 μmol/L)及基础培养基中加终浓度为 2 0 μmol/L的 Zn2 +络合剂 (TPEN) ,及基础培养基中加 Zn SO4 至 Zn2 +浓度分别为45 μmol/L、70 μmol/L、1 2 0 μmol/L的培养基中培养 6 d。结果　 1 .培养后的胎鼠右肢与未培养左肢相比 ,其长骨长度、骨组织密度均有所增加 ;组织学分析显示 :骨组织呈活跃增殖分化相 ,骨小梁增加 ,骨基质深染。2 .生化指标及 4 5Ca示踪显示 :培养基中缺锌和在培养基中补充 Zn2 + 至 Zn2 + 浓度1 2 0μmol/L时 ,骨组织中骨钙素 (OC)和 4 5Ca含量减少 ,碱性磷酸酶 (AKP)活性降低 (P<0 .0 5 ) ;当在培养基中补充 Zn2 + 至 Zn2 + 浓度 45μmol/L、70μmol/L时 OC合成量 ,骨组织对钙的吸收及AKP活性增加 (P<0 .0 5 )。 3 .形态学指标 :X- ray显示 ,培养液中缺锌和锌浓度为 1 2 0 μmol/L时 ,长骨长度和密度与对照组相比 ,长骨长度较短 ,骨密度降低 ;当在培养液中 Zn2 +浓度分别为 45μmol/L和 70 μmol/L时 ,与对照组相比 ,长骨长度及其骨密度有所增加。结论　锌参与骨组织发育的生理和生化过程 ,锌缺乏 /过量时均可影响骨的正常     

活性氧在P，P’-DDE诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

[目的]研究活性氧在2,2-双-（对氯苯基）-1,1-二氯乙稀（P,P’-DDE）诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用。[方法]从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3d,用0、10、30、50μmol／L的p,p＇-DDE及加有300μmol／L的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）的P,P’-DDE（50μmol／L）继续培养24h,应用流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）水平、线粒体膜势能（Aym）、凋亡发生率。[结果]50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞ROS显著升高,10、30、50μmol／LP,P’-DDE处理组的线粒体膜势能下降,30、50μmol／L的P,P’-DDE可以诱导支持细胞凋亡,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;NAC有效抑制了ROS升高,削弱线粒体膜势能下降,减少了凋亡发生率,与50μmol／L的P,P’-DDE处理组相比,差异有显著意义（P〈0．05）。[结论]P,P’-DDE可以诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,ROS产生可能是其重要原因之一。     

不同形态砷化合物对非致瘤性人源性肝细胞的毒性作用

目的探讨不同形态砷化合物对非致瘤性人源性肝(QSG7701)细胞的毒性及氧化应激作用。方法将处于对数生长期的QSG7701细胞分别暴露于亚砷酸钠(砷浓度为1、5、25、100μmol/L)、砷酸钠(砷浓度为10、25、100、500μmol/L)及MMA和DMA(砷浓度均为100、500、1 000、2 000μmol/L)培养24 h,并设对照(含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活性;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、谷草转氨酶(AST)活力、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果一定浓度的As~(Ⅲ)(≥1μmol/L)、As~Ⅴ(≥10μmol/L)、MMA(≥100μmol/L)和DMA(≥2 000μmol/L)均能显著降低QSG7701细胞的存活率,差异有统计学意义(P0.05);且随着As~(Ⅲ)、As~Ⅴ及MMA和DMA染毒浓度的升高,QSG7701细胞的存活率呈逐渐降低的趋势。经计算,QSG7701细胞暴露于As~(Ⅲ)、As~Ⅴ、MMA和DMA 24 h的IC_(50)分别为170.89、863.73、2 235.67、4 045.31μmol/L,对QSG7701细胞生长的抑制作用依次为As~(Ⅲ)As~ⅤMMADMA。在当As~(Ⅲ)浓度为5~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L及MMA中的砷浓度为1 000、2 000μmol/L和DMA中的砷浓度为2 000μmol/L时,QSG7701细胞的LDH释放率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);另外,当As~(Ⅲ)浓度为1~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L及MMA和DMA中的砷浓度为100~2 000μmol/L时,QSG7701细胞培养液中的AST活力均高于对照组;且随着As~(Ⅲ)、As~Ⅴ及MMA和DMA染毒浓度的升高,QSG7701细胞的LDH释放率和细胞培养液中的AST活力呈上升的趋势。与对照组比较,当As~(Ⅲ)浓度为5~100μmol/L、As~Ⅴ浓度为10~500μmol/L时,QSG7701细胞中的MDA含量均较高,而T-SOD活力均较低;与对照组比较,当MMA和DMA中的砷浓度均为500~2 000μmol/L时,QSG7701细胞中的MDA含量均较高;而当MMA中的砷浓度为100~2 000μmol/L和DMA中的砷浓度为100、500μmol/L时,QSG7701细胞中的T-SOD活力均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,4种砷化合物均可不同程度地损伤肝细胞膜,破坏肝细胞的氧化平衡状态,产生氧化应激并导致脂质过氧化,对人肝细胞QSG7701的毒性作用依次为As~(Ⅲ)As~ⅤMMADMA。     

魔芋多糖对小鼠瘦素和Na~+-K~+-ATP酶水平的影响

目的探讨魔芋多糖对高脂饮食小鼠血清瘦素和小肠粘膜Na+-K+-ATP酶水平的影响。方法将实验动物分为正常对照组、高脂对照组和高、中、低剂量魔芋多糖与高脂联合处理组共5个组,连续喂饲20天,用ELISA法测定血清瘦素水平,分光光度法测定小肠粘膜Na+-K+-ATP酶活性以及体重、体脂、血糖等指标。结果第10天高脂对照组的体重和餐后血糖为(31.3±2.11)g和(7.5±1.15)mmol/L,魔芋多糖高剂量组则为(28.0±2.06)g和(4.8±0.73)mmol/L。第20天高脂对照组的血清瘦素浓度和小肠粘膜Na+-K+与高脂联合处理-ATP酶活性为(1078.5±61.69)pg/ml和(16.2±1.48)μmolPi/(mg pro·h),魔芋多糖高剂量与高脂联合处理组则为(820.5±58.52)pg/ml和(11.2±1.10)μmolPi/(mgpro·h)。两组间各项指标差别均有显著性意义(P<0.05)。结论魔芋多糖能够降低高脂饮食小鼠餐后血糖、血清瘦素水平和小肠粘膜Na+-K+-ATP酶活性,抑制体重和体脂的增加。     

Hcy对脐静脉内皮细胞eNOS和caveolin-1表达影响

目的研究不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对静息和钙离子导体(A23187)激活状态下人脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和小凹蛋白-1(caveolin-1)mRNA和蛋白表达的影响。方法人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)随机分4组:对照组、Hcy组(20、50、100、300μmol/L)、A23187(1μmol/L)组及上述浓度Hcy分别与A23187(1μmol/L)共同孵育组,测定各组eNOS和caveolin-1蛋白及mRNA表达情况,同时检测各组一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量和eNOS、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果对照组caveolin-1蛋白表达为1.13,Hcy各组该蛋白为0.21～2.05,呈浓度依赖性增高,差异有统计学意义(F=30.163,P<0.05);各组eNOS mRNA表达为1.80～2.08,差异无统计学意义;对照组eNOS活力和NO含量分别为1.20 U/mL和122.41μmol/L,Hcy组eNOS活力和NO含量分别为0.65～0.74 U/mL和65.33～98.91μmol/L,均呈浓度依赖性降低,差异均有统计学意义(F=5.12、18.91,P<0.05)。结论 Hcy可能通过增强caveolin-1蛋白表达,使其与eNOS藕联增加,进而抑制了eNOS活力。     

益生菌对重症感染性肺炎病儿血糖的稳定作用及其机制研究

目的:探讨益生菌对重症感染性肺炎病儿血糖水平的调节及作用机制。方法:前瞻性纳入重症感染性肺炎病儿80例,随机分为两组,对照组给予常规治疗,治疗组采用常规治疗加用益生菌。两组病儿分别于入组当天和治疗第8天监测血糖浓度,并测定血浆硫化氢(H2S)、D-乳酸以及粪便短链脂肪酸(乙酸、丙酸、正丁酸)水平,同时观察两组病儿的血糖变化、波动情况和预后,并进行分析。结果:两组病儿入组当天的各项指标均无显著性差异(P0.05)。治疗第8天时,治疗组病儿血浆H2S浓度和粪便中乙酸、正丁酸水平明显高于对照组(P0.05);同时,治疗组病儿血浆D-乳酸浓度也较对照组明显降低(P0.05)。治疗第8天,治疗组病儿的血糖水平和高波动比例显著低于对照组(32.5%)(P0.05)。治疗组病儿的临床治愈率也明显高于对照组。而且血糖浓度与H2S、乙酸水平呈明显负相关,与D-乳酸浓度呈显著正相关(P0.05)。结论:重症感染性肺炎病儿应用益生菌可调整肠道菌群结构,加强肠道屏障功能,增加血浆H2S的浓度,调节和稳定血糖水平,并改善临床预后。     

1,4-苯醌暴露下小鼠骨髓细胞p15基因表达和甲基化状态

目的 探讨1,4-苯醌(1,4-BQ)暴露下,体外原代培养的小鼠骨髓细胞中抑癌基因p15的mRNA表达及启动子区的甲基化状态.方法 体外分离小鼠骨髓细胞,测定0、0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L的1,4-BQ对小鼠骨髓细胞活力的影响,最终确定以0、0.1、1.0、10.0 μmol/L的1,4-BQ染毒骨髓细胞24 h;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p15基因mRNA的表达变化;重亚硫酸盐测序法(BSP)检测启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果 1,4-BQ对小鼠骨髓细胞具有剂量依赖的毒性作用,其LC50为8.3 μmol/L(95%CI:4.6～10.6 μmol/L).与对照组(100.0%)比较,10.0、20.0、40.0μmol/L 1,4-BQ染毒组小鼠的骨髓细胞生存率(35.9%、35.8%、30.5%)均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).10.0μmol/L染毒组p15 mRNA表达为对照组的43%,与对照组比较,1.0和10.0 μmol/L染毒组p15基因mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).BSP测序结果显示,染毒组和对照组相同,p15基因启动子区域CpG岛上56个甲基化位点仍保持非甲基化状态.结论 1,4-BQ暴露可导致原代培养的小鼠骨髓细胞中p15基因的mRNA表达量下降,但启动子区域CpG岛的甲基化状态未受影响,提示甲基化不参与1,4-BQ介导的p15基因表达下调.

Abstract：

Objective To detect the expression and the CpG island methylation status of tumor suppressor gene p15 after exposure to 1,4-benzoquinone (1,4-BQ) in primary cultivated C57BL/6J mouse bone marrow cells in vitro. Methods The mouse bone marrow cells were isolated in vitro. The effect of 0, 0.1, 1, 5,10, 20, and 40 μmol/L 1,4-BQ on cell viability (CKK-8) was detected. 0, 0.1, 1, 10 μmol/L 1,4-BQ were used to intoxicate the mouse bone marrow cells for 24 h; Real-time PCR was employed to analyze the mRNA expression level of p15; The bisulfite sequencing PCR (BSP) was used to look into the methylation status of CpG islands in p15 promoter region. Results 1,4-BQ exhibited dose-dependent toxicity to mouse bone marrow cells, and the LC50 was 8.3 μmol/L (95% CI: 4.6-10.6 μmol/L). The mRNA expression of p15 in 10 μ mol/L group was only equivalent to 43% of control group. Compared with control group, the decrease of p15 mRNA expression in 1 and l0 μ mol/L concentration were obvious, and the differences had statistical significance(P＜0.05 or P＜0.01 ). BSP sequencing results were same between the exposure groups and control group, the 56 CpG sites on CpG islands remained in the state of unmethylated. Conclusion mRNA expression of p15 gene decreases after exposure to 1,4-BQ, but the CpG islands menthylation status in promoter is not affected, suggesting that methvlation does not participate in 1,4-BQ-mediated p15 gene expression decrease, other effect mechanisms still need to be investigated.     

锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响

目的:观察锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响,为锌的合理营养提供实验依据。方法:应用恒温旋转胚胎培养箱对12 d孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察锌缺乏与过量对胚胎肢芽发育的影响,并进行Neubert评分。结果:锌浓度为43.0~86.0μmol/L时,对胚胎肢芽发育具有明显的促进作用;锌缺乏(0.0μmol/L)能导致胚胎肢芽发育评分下降,肢芽细胞分化,组织器官形态分化均受到不同程度抑制;锌过量(172.0~215μmol/L以上)时,能使VYS血管形成及神经系统、心脏、肢芽的器官形态分化受抑,所有生长发育和组织器官形态分化指标值均明显低于对照组(P<0.05);肢芽各软骨的发育分化差,Neubert评分少。结论:锌缺乏和锌过量均可影响小鼠胚胎肢芽的发育和分化。