氯化镉诱导细胞c-fos和c-jun原癌基因转录表达

目的 探讨镉化物的分子致癌机理。方法 应用差异RT－PCR技术对氯化镉（CdCl2)诱导BALB／c-3T3细胞原癌基因c-fos和c-jun进行研究。结果 氯化镉在5－40μmol/L浓度范围内可诱导细胞原癌基因c-fos转录表达，与对照组比较，其差异有高度显著性。经与β-actin标准化后，氯化镉染毒浓度与c-fos表达水平之间存在明显的剂量反应关系。同样，氯化镉在20－40μmol/ml浓度范围内可致另一种细胞原癌基因c-jun高表达。结论 本研究结果提示，原癌基因c-fos和c-jun的超额表达与氯化镉的分子毒作用密切相关。这些结果可部分解释镉化合物的细胞转化作用及其可能的致癌机理。     

NMDA诱导神经元胆囊收缩素mRNA表达及其机制研究

目的：探讨NMDA诱导神经元胆囊收缩素mRNA表达及其机制。方法：利用体外培养的胚胎大鼠大脑皮层神经元和Northern Blot技术，观察NMDA诱导神经元胆囊收缩素mRNA的表达以及c-fos、c-jun反义寡聚核苷酸对该作用的影响。结果：NMDA刺激神经元2h后，胆囊收缩素mRNA的表达量与对照相比升高317％（P＜0．01），而预先给予50uMol-100uMol的c-fos、c-jun反义寡聚核苷酸后该作用被明显抑制（抑制率分别为71．5％、216．5％，P＜0．01）。结论：NMDA可通过c-fos,c-jun的介导作用诱导神经元合成胆囊收缩素，该结果在小剂量NMDA对谷氨酸兴奋性神经毒性的拮抗作用中具有重要意义。     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究*

[目的]研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制.[方法]采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-jun cDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化.[结果]与对照血清+内皮素组(cpm 2 534.54±54.2/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm 1 104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P＜0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-jun mRNA表达也较弱.[结论]本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-jun mRNA的表达有明显的抑制作用.     

脉平对血管紧张素II所致平滑肌细胞基质金属蛋白酶变化的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶（MMPs）变化的作用及药物对其影响。方法采用RT-PCR方法检测在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下血管平滑肌细胞MMPs的变化和卡托普利、氯沙坦及脉平对其影响。结果血管紧张素Ⅱ可诱导血管平滑肌细胞MMPs的表达,MMP-9表达较MMP-1和MMP-2出现早;应用药物后对血管紧张素Ⅱ的作用有明显的抑制作用。结论血管紧张素Ⅱ具有一定促进血管平滑肌细胞MMPs表达作用,尤其在大剂量作用较明显;脉平可明显抑制血管紧张素Ⅱ的作用。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

反义EGFR寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ促VSMC增殖的影响

目的探讨脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸基因转染对血管紧张素Ⅱ促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响．方法用反义表皮生长因子受体寡核苷酸脂质体复合物转染Sprague—Dawley大鼠血管平滑肌细胞，通过RT—PCR、Western—Bloting分别检测转染后EGFRmRNA及蛋白的表达情况，用^3H—Tdr掺入率实验检测经反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染再用血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞的增殖情况，结果反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染大鼠血管平滑肌细胞后，EGFRmRNA及蛋白的表达较正义组及对照组明显减少（P〈0．05）；用血管紧张素Ⅱ刺激后，反义组细胞的^3H—Tdr掺入较正义组及对照组明显降低，经方差分析两者有显著差异（P〈0．05），结论脂质体介导的反义表皮生长因子受体寡核苷酸转染减弱了血管紧张素Ⅱ的促血管平滑肌细胞增殖效应，证明了表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中起重要作用．     

改构体酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血再灌注损伤中AP-1表达的影响

目的：观察外源性给予改构体酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）后,肠缺血-再灌注损伤中转录因子AP-1（fos/jun复合物）表达规律。方法：以大鼠肠系膜上动脉（SMA）夹闭造成肠缺血-再灌注损伤模型,并将动物随机分为假手术组（C）、生理盐水对照组（R）、改构体治疗组（F）。除假手术组外,其余各组动物均于缺血45 min后2、6、12、24h活杀,取小肠组织标本,免疫组化检测原癌基因c-fos、c-jun表达规律。结果：在正常大鼠,原癌基因c-fos、c-jun分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧的细胞膜上。缺血和再灌注的初期,原癌基因c-fos、c-jun的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长逐渐增强。改构体aFGF使原癌基因c-fos、c-jun的表达有明显的增强。缺血和再灌注使PCNA的表达增加,在再灌注后6 h达到高峰。F组PCNA的表达较R组相应时间点显著增加（P〈0.05）。结论：转录因子AP-1与PCNA表达一致,在缺血-再灌注损伤的修复中起积极作用;改构体aFGF对此有促进作用。     

血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶-活性氧物质信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法用培养的二至四代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为标本;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别测定细胞增殖率、细胞内活性氧及p22phox蛋白mRNA的表达。结果①加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、活性氧物质量、p22phox蛋白mRNA的表达均明显高于空白对照组,差异统计学意义（P〈0．05）。②细胞增殖与活性氧物质的生成量、p22phox蛋白mRNA的表达成明显正相关关系,相关系数分别为0．92、0．967。结论血管紧张素Ⅱ在浓度为10μmol／L时,促进人肠系膜动脉平滑肌增殖、细胞内活性氧物质的生成、细胞内的p22phox蛋白的表达,推测血管紧张素Ⅱ促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用部分机制是通过血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧通路来实现。     

大鼠颈动脉气囊导管损伤早期原癌基因c-Fos、c-Jun的表达研究

目的：采用RT-PCR方法研究动脉损伤早期原癌基因c-fos、c-jun的表达规律。方法：制备大鼠颈动脉气囊导管扩张损伤模型，采用RT-PCR方法检测损伤早期不同时相点动脉壁平滑肌细胞（VSMC）c-fos、c-jun基因的表达丰度，同时用免疫组化方法观测c-fos蛋白的表达。结果：c-jun 在损伤后30min达高峰。术后1h、2h仍能检测到明显的表达，术后5h后不能检出。c-fos在术后30min、1h均可检测到该基因多量的表达，以后随时间的推移表达逐渐下降，5h时不能检出。损伤后45min中膜残留VSMCc-fos蛋白表达阳性，阳性率86%。结论：在动脉损伤后极早期即有c-fos、c-jun的大量表达，TR-PCR检测原癌基因的表达为研究动脉损伤早期VSMC的活化机理提供了一个的敏感方法。     

原癌基因c-fos及其相关因子

c-fos基因是原癌基因的重要成员,其表达受多种细胞活性物质的影响,通过其表达产物c-Fos蛋白参与转录激活蛋白1的组成发挥生物学作用,并可以反过来对细胞因子进行调节,从而参与细胞的生长、增殖、分化途径上环节的调控.本文就原癌基因c-fos及其相关因子进行了综述.     

孕激素对MG-63细胞株孕激素受体和c-fos、c-jun的影响

目的观察18-甲左炔诺孕酮对人成骨肉瘤MG-63细胞株增殖、孕激素受体和c-fos、c-jun表达的影响。方法用不同浓度18-甲左炔诺孕酮干预MG-63细胞株,以不含左炔诺孕酮的MEM培养液作对照,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR测定孕激素受体(PR)、c-fos、c-jun mRNA表达,Western Blot和免疫组化法测定PR、c-fos、c-jun蛋白质的表达。结果与对照组比较,10-10mol/L、10-8mol/L和10-6mol/L左炔诺孕酮分别增加MG-63细胞增殖达7.72%、24.36%和36.54%(P<0.01或P<0.05)。干预24h后,MG-63细胞中PRA、PRB mRNA和蛋白质表达无明显变化(P>0.05)。干预2h后,左炔诺孕酮增加MG-63细胞中c-fos、c-jun mRNA和蛋白质表达(P<0.01或P<0.05),呈剂量依赖性。结论孕激素可能通过增加c-fos、c-jun的表达来促进MG-63细胞增殖。     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

缺氧适应与缺血低氧对c-fos和c-jun表达的影响

目的：探讨缺氧适应对缺血低氧脑c-fos，c-jun基图表达的影响。方法：昆明纯种雄性小白鼠36只随机分组：（1）对照组；（2）缺血低氧组（IH）；（3）缺氧适应与缺血低氧组（HA—IH）。采用免疫组化技术检测c-fos，c-jun基因表达。结果：IH组C—fos和c-jun阳性细胞在30min均呈低密度分布，c—fos在1h表达高峰，12h基本消失，而c-jun基因的表达高峰在3h；与IH组比较，HA—IH组c—fos阳性细胞数减少，c-jun表达增加。结论：缺血低氧可诱发中枢神经系统c-fos、c-jun基因表达，且有时间依赖性；缺氧适应可抑制缺血低氧脑c-fos基因的表达，增强c-jun基因的表达。     

缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注后即早基因c-fos、c-jun表达的影响

目的观察缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注后即早基因c-fos、c-jun表达的影响。方法采用大鼠原位部分缺血再灌注模型,96只SD大鼠随机分为缺血再灌注组(IR),缺血预处理组(IPC),每组又分为8个亚组(n=6),于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12和24h取材,应用RT-PCR法检测各组c-fos、c-junmRNA的表达,流式细胞仪检测Ki67和Sub-G1。结果与IR组相比,IPC组血清ALT、AST在复灌后的0.5￣8h组明显降低(P<0.05);Ki67在复灌后的0.5、1和2h明显升高,24h明显降低(P<0.05);Ap指数在复灌后的1h以上明显降低(P<0.05);IPC组c-fos和c-junmRNA的表达较IR组低,其中c-jun在0.5、1和2h组明显降低(P<0.05)。结论缺血预处理能有效地保护肝脏免受缺血再灌注造成的损伤,这种保护效应的机制可能与影响即早基因的转录有关。     

异丙酚麻醉对大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白表达的影响

目的观察不同浓度异丙酚静脉全身麻醉对大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白表达的影响。方法 40只Wistar大鼠随机分成4组:空白对照组(A组)、小剂量异丙酚组(50 mg/kg,B组)、中等剂量异丙酚组(100 mg/kg,C组)和大剂量异丙酚组(150 mg/kg,D组)。采用反转录-聚合酶联反应和蛋白印迹方法检测大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白的表达水平。结果 A组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.32±0.06,0.27±0.05;0.37±0.07,0.28±0.07),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(0.47±0.12,0.41±0.10;0.51±0.14,0.44±0.09);B组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.54±0.11,0.41±0.10;0.61±0.12,0.44±0.12),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(0.75±0.24,0.72±0.21;0.82±0.27,0.68±0.17);C组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.87±0.23,0.75±0.18;0.92±0.27,0.72±0.21),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(1.07±0.37,1.01±0.32;1.12±0.38,0.97±0.25);D组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(1.22±0.30,0.96±0.24;1.31±0.34,0.95±0.28),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(1.43±0.41,1.38±0.39;1.46±0.41,1.31±0.33)。大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因和蛋白的表达水平随着异丙酚麻醉药物作用浓度的增加显著性升高(P<0.05);海马CA3区未发现异丙酚对c-fos、c-jun基因和蛋白表达水平的影响。结论异丙酚可能通过影响c-fos、c-jun基因及蛋白的表达,从而发挥抑制中枢神经系统的作用,且此作用部位存在明显的差异性。     

云南白药对体外培养人牙周膜成纤维细胞C-fos、C-jun基因表达的影响

［摘要］目的　研究云南白药水溶液对牙周膜成纤维细胞C-fos、C-jun基因表达的影响，探讨云南白药水溶液促进人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）增殖和成骨分化的可能机制．方法　原代培养HPDLFs，取第4～6代细胞用于实验．分为空白对照组，云南不同浓度云南白药水溶液组，阳性对照组．各组细胞与云南白药水溶液共培养4h，采用反转录聚合酶链反应检测C-fos和C-jun mRNA的表达．结果　RT-PCR 的结果说明，与空白对照组相比，云南白药水溶液能促进HPDLFs细胞C-fos和C-jun mRNA 的表达．且促进作用呈浓度依赖性，与对照组比较，各组差异有统计学意义（P＜0.05）．结论　云南白药水溶液能够上调HPDLFs中C-fos、C-jun的表达．云南白药水溶液可能通过上调C-fos、C-jun的表达促进HPDLFs的增殖和成骨分化，促进骨形成．     

角质形成细胞转染人乳头瘤病毒后c-jun、c-fos及MDM2基因的表达

目的 研究正常角质形成细胞转染人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６后，c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ表达情况。方法 在无血清的Ｍ１５４培养基上培养角质形成细胞，适当时进行传代培养。采用转染试剂ＦuＧＥＮＥ∧ＴＭ６将质粒pＳＶ２－neo/ＨＰＶ１６转入正常角质形成细胞，应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法检测转染后角质形成细胞中c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ表达。结果 转染质粒pＳＶ２－neo/ＨＰＶ１６后角质形成细胞形态的所改变，细胞变大，胞核结构疏松，胞浆出现颗粒。转染细胞株中，检测到ＨＰＶ１６mＲＮＡ的表达，扩增产物为１１０bp；同时检测到ＨＰＶ１６ＤＮＡ片断（７．９kb）。转染后角质形成细胞中有c－jun、c－fos、ＭＤＭ２mＲＮＡ的表达。结论 体外试验提示ＨＰＶ感染可能通过c－jun、c－fos、ＭＤＭ２的表达而促进细胞的增生。     

头痛宁对偏头痛大鼠c-fos和c-jun基因表达的影响

目的 探讨头痛宁对偏头痛大鼠c-fos和c-jun基因表达的影响。方法 Wistar大鼠60只,分为生理盐水组、偏头痛模型组、盐酸氟桂利嗪组,头痛宁高、中、低剂量组,除生理盐水组外,其余各组注射硝酸甘油建立偏头痛模型,并用免疫组化方法观察c fos 和c jun基因的表达。结果 偏头痛模型组c fos和c jun阳性细胞数增多,与生理盐水组相比有统计学差异(P<0.01);头痛宁高剂量组和盐酸氟桂利嗪组c-fos和c-jun阳性细胞数减少,与偏头痛模型组比较有统计学差异(P<0.01);头痛宁中剂量组c-fos和c-jun阳性细胞数减少,与偏头痛模型组比较有统计学差异(P<0.05);头痛宁低剂量组c-fos阳性细胞数减少,但与偏头痛模型组比较无统计学差异;头痛宁低剂量组c-jun阳性细胞数减少,与偏头痛模型组有统计学差异(P<0.05)。结论 头痛宁可以减弱由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos、c-jun的表达,从而抑制痛觉信息的传递。