黑色素瘤细胞经太空环境诱变后致瘤性和基因表达变化

目的 筛选经太空环境诱变后B16细胞致瘤性改变的细胞株,观察其基因表达的改变,寻找与黑色素瘤发生及转移密切相关的基因.方法 将小鼠黑色素瘤B16细胞搭载于第20颗返回式卫星,返地后克隆化,随机选择5株克隆细胞株（1^#、5^#、6^#、7^#和8^#）,接种C57BL/6J小鼠,分别观察细胞致瘤性、荷瘤小鼠生存期及瘤体病理变化,用基因表达谱分析其中2株初筛致瘤性改变细胞株（1^#和8^#）的基因表达情况。结果 与对照组比较,1#细胞株接种小鼠后,肿瘤潜伏期延长（P＜0.05）,1^#和8^#细胞株移植瘤瘤体重量减小（P＜0.01）,且荷瘤小鼠生存期延长（P＜0.01）;病理诊断结果显示：1^#和8^#细胞移植瘤内血管不及对照组丰富,坏死区较少,瘤体内浸润淋巴细胞较对照组有不同程度的增多,瘤旁组织内有较多淋巴细胞;基因芯片分析结果表明：与对照B16细胞相比,2株诱变细胞（1^#和8^#）分别有145和125个基因表达水平发生改变（P＜0.05）,其中9个基因为共同变化基因,前列腺素D2合成酶基因在2株细胞中的表达均明显增高,与对照相比,差别在5倍以上。结论 1^#和8^#细胞株致瘤性减弱,且2株细胞的移植瘤肿瘤新生血管及癌旁浸润减少,癌旁组织中有较多淋巴细胞,推测可能与前列腺素D2合成酶等多种肿瘤相关基因表达的改变有关。     

太空环境诱变黑色素瘤细胞的实验研究

目的观察太空环境对B16细胞生物学特性的影响，寻找免疫原性增强的细胞株。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞搭载于第20颗返回式卫星，返地后单克隆化，选择1株形态变异的单克隆细胞株（1^#），MTT法检测细胞增殖情况，接种C57BL／6J小鼠，分别观察细胞致瘤性、荷瘤小鼠免疫器官、生存期及瘤体病理变化。结果1^#太空诱变细胞株，形态呈现树突状，增殖速率与对照细胞比较差异无统计学意义（P〉0．05），接种C57BL／6J小鼠，肿瘤潜伏期延长（P〈0．01），瘤体重量减小（P〈0.01），胸腺系数增大（P〈0．01），且荷瘤小鼠生存期延长（P〈0，01），而脾系数与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05），病理学结果显示：1^#细胞组瘤体内血管不及对照组丰富，坏死区较少，瘤体内浸润淋巴细胞较对照组有不同程度的增多，瘤旁组织内有较多淋巴细胞。结论空间诱变1^#细胞株可能趋向分化，体内实验结果提示：1^#诱变细胞株抗原性可能被增强，激发了小鼠的免疫应答，该结果为进一步筛选免疫原性增强的细胞株，确定抗原的强化特征提供了实验基础。     

太空环境对黑色素瘤B16细胞生物学特性的影响

目的初步研究太空环境对黑素瘤B16细胞生物学特性的影响.方法将B16细胞搭载于第20颗返回式卫星,返地后回收细胞,单克隆化,获得110株太空B16细胞,按顺序编号.从中选取10株的太空B16单克隆细胞株,利用光镜观察其形态变化,MTT方法检测细胞增殖曲线,FCM测定细胞DNA含量,观察太空诱变细胞周期分布.结果与对照细胞相比,太空B16细胞形态改变,有些细胞表面可见其分泌的黑色素颗粒;细胞增殖速率呈多向性变异;太空B16细胞G1期延长,S期缩短.结论太空环境的复合因素可诱导B16细胞生物学特性发生变化.     

胰腺节细胞性成神经细胞瘤一例

患者　男 ,9个月。 1个月前无意中发现腹部包块 ,伴尿频、盗汗。体检 :皮肤、巩膜无黄染 ,浅表淋巴结无肿大。左中上腹触及 9ｃｍ× 9ｃｍ× 5ｃｍ大小肿物 ,质硬、界清 ,有移动感 ,腹水阴性。实验室检查 :胎甲球蛋白 5 .6 6 μｇ/Ｌ ,尿儿茶酚胺 (- ) ,肝功能正常。Ｂ超 :左上腹脾静脉前方探及11 1ｃｍ× 8 5ｃｍ× 6 7ｃｍ大小低回声包块 ,形态不规则 ,略有分叶 ,边界清楚。内部回声欠均匀 ,可见斑片状及块状强回声影。胰头大小形态正常 ,部分胰体、尾部探查不清 ,左肾受压变扁。ＣＴ平扫 :胰体尾部见 8ｃｍ× 9ｃｍ×11ｃｍ大小略呈分叶…     

B16细胞中FLT3表达的检测及FLT3—Ligand对B16细胞生长的？…

目的;检测造血生长因子受体ＦＬＴ３在非造血来源的黑素瘤细胞系Ｂ１６中的表达,并研究其配基ＦＬＴ３－Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）对ＧＬ１６细胞的作用。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂ１６细胞中ＦＬＴ３ｍＲＮＡ的表达,流式细胞仪检测ＬＦＴ３蛋白在Ｂ１６细胞表面的表达,在培养液中加入不同浓度的ＦＬＴ对Ｂ１６细胞进行培养。结果：ＦＬＴ３在Ｂ１６细胞中有ｍＲＮＡ的表达,在Ｂ１６细胞表面有蛋白质的表达。     

HLA—DR基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

获得表达ＨＬＡ－ＤＲ基因的小鼠墨色素瘤细胞，方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ中克隆了ＨＬＡ－ＤＲ３α和β链ｃＤＮＡ，并经测序证实。将其分别插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ和ｐＣＥＰ４中，用脂质体转上鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，然后用Ｇ４１８和Ｈｙｇ双重筛选。     

空间环境对黑色素瘤细胞基因表达谱的影响

目的探讨空间环境对黑色素瘤B16细胞基因表达谱的影响。方法利用“细胞在常温条件下长期存活装置”将B16细胞进行无源搭载。返地后常规培养，以常规培养的野生型B16细胞及地面装置组作为对照，甲基噻唑基四唑法测定细胞生长曲线，基因芯片分析细胞18240个基因的差异表达。结果搭载细胞返地培养后，与对照组细胞相比，生长速率差异没有显著性意义。与常规培养的对照相比，地面装置组细胞及空间组细胞分别有61及156个基因发生明显改变；其中35个基因为地面装置组及空间组细胞二者共同与常规对照组细胞差异表达，30个基因为空间培养细胞与地面装置组细胞之间差异表达；差异表达的基因涉及Wnt及Ca^2＋等信号传导途径。结论空间环境作用后，B16肿瘤细胞基因表达改变，一些信号传导途径及能量代谢表现为对空间环境较为敏感。     

高营养状态对肿瘤细胞形态和成瘤性的影响

目的 营养状态在癌症治疗中的作用一直受到广泛关注.该文旨在研究高营养状态对肿瘤细胞的影响.方法 在肿瘤细胞的培养体系中添加不同浓度的胎牛血清(FBS,5％、10％、25％、50％),以模拟不同的营养状态.培养3周后,CCK-8法测定细胞增殖;克隆形成和体内成瘤实验评价肿瘤细胞成瘤性;最后通过油红染色、流式细胞术、电镜和蛋白质印迹检测探讨可能的机制.结果 高血清浓度能促进人乳腺癌细胞系SKBR3细胞和人前列腺癌细胞系PC3M细胞的增殖,但会引起细胞空泡化,并抑制其克隆形成和成瘤能力.诱导后的PC3M细胞,自噬过程特征蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ比例上调,电镜中观察到自噬小体增多,表明高浓度的血清可能通过激活自噬来抑制肿瘤细胞的成瘤性.结论高营养状态对肿瘤细胞成瘤性有明显抑制作用,有望成为新的癌症治疗策略.     

太空环境对生物工程细胞CHO(dhfr-)的影响

目的 探讨空间环境对细胞的影响. 方法 利用基因工程细胞的航天搭载装置将细胞进行无源搭载,将生物工程CHO（dhfr-）细胞搭载于第18颗返回式卫星.随机选取3株诱变细胞株,MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,同时观察诱变细胞染色体变化,检测细胞周期调控相关基因p21Cip1/Waf1表达情况. 结果 太空诱变CHO（dhfr-）细胞增殖速度出现快慢不一的变化;细胞周期分布改变,G1期细胞显著增多（P〈0.05）,S期细胞明显减少（P〈0.05）;细胞染色体异常核型增加;p21^Cip1/Waf1基因表达上调,mdm2基因没有明显变化. 结论 太空环境可导致细胞产生多种变异,为改造、筛选优化哺乳动物宿主细胞表达系统提供了新手段.     

辐射诱导pEgr-p16表达增强及其体外抑制B16黑色素瘤作用

目的研究pEgr-p16重组质粒在转染的黑色素瘤B16细胞中的辐射诱导表达特性,验证其联合放射治疗体外抑制B16细胞增殖的作用。方法将脂质体包裹的pEgr-p16重组质粒,转染B16细胞株;采用定量PCR方法检测不同剂量X射线诱导后p16的表达和同一剂量X射线诱导下p16的表达时程,流式细胞数术检测细胞凋亡率的变化;MTT法检测pEgr-p16基因协同放射治疗后B16细胞的存活情况。结果pEgr-p16重组质粒转染B16细胞,不同剂量X射线均可诱导p16表达增强,为假照组的3.78-6.67倍（P〈0.01）;2GyX射线照射后,p16表达随时间延长而逐渐增强,在照射后72h达到最高值。p16基因联合放射可诱导B16细胞凋亡,凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组（P〈0.05-0.01）;转染pEgr-p16质粒的细胞经2GyX射线照射,8d后细胞数明显低于同时间其他实验组（P〈0.05-0.001）。结论pEgr-p16基因-放射联合治疗有明显的抑制黑色素瘤B16细胞生长的作用,其作用优于单纯给予射线或基因转染。     

Effects of l-DOPA pre-loading on the uptake of boronophenylalanine using the F98 glioma and B16 melanoma models

The present study was undertaken to evaluate the effects of l-DOPA pre-loading on the uptake of BPA using the F98 rat glioma and the murine B16 melanoma models. In vitro pretreatments of F98 glioma and B16 melanoma cells with l-DOPA, followed by exposure to BPA increased boron uptake, as determined by inductively coupled plasma-optical emission spectroscopy (ICP-OES). Based on this, in vivo studies were initiated in F98 glioma bearing rats. Initially, the l-DOPA dosing paradigm was evaluated. Maximum tumor boron uptake was observed following i.p. administration of l-DOPA (50 mg/kg) followed 24 h later by BPA (31.8±8.9 vs. 17.2±6.3 µg/g for BPA alone). Next, the effect of l-DOPA pre-loading as a function of the route of administration of BPA was evaluated in F98 glioma bearing rats. The greatest increase in uptake was seen following i.v. administration of BPA, while in contrast no significant increase was seen following intracarotid (i.c.) administration (38.6±12.4 vs. 34.2±10.9). Cellular localization of the F98 glioma, as determined by secondary ion mass spectrometry (SIMS) boron imaging revealed equivalent tumor boron concentrations following l-DOPA pre-loading. In vivo studies in B16 melanoma bearing mice showed equivalent tumor boron values in treated and untreated mice, suggesting that the effects of l-DOPA pre-loading may depend both on the histologic type of tumor and its anatomic site.     

反义STAT3寡核苷酸对B16细胞辐射敏感性的研究

目的 探讨反义STAT3转染鼠恶性黑色素瘤B16细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化。方法 利用反义寡核苷酸转染B16细胞后,以不同剂量γ射线照射。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察。用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化。结果 反义STAT3转染后加以γ射线照射,B16细胞的增殖相比于两者单独作用组受到明显抑制,细胞凋亡水平也增加。结论 反义STAT3寡核苷酸联合γ射线对B16细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了鼠黑色素瘤B16细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

人巨细胞病毒包膜糖蛋白B线性B细胞抗原表位的预测

目的：通过生物信息学方法分析人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus ,HCMV）包膜糖蛋白B （ glycopro－tein B,gB）的结构及理化特性,预测gB的线性B细胞抗原表位。方法基于HCMV gB的序列,利用两种在线B细胞表位预测程序及DNAstar软件对gB进行预测;利用SWISS－MODEL服务器同源构建gB三级结构模型,进行进一步验证。结果与结论综合多项分析,预测得到HCMVgB的多个线性B细胞表位,为后续验证其优势中和表位,建立富含高效价中和抗体的原料血浆的筛选方法奠定了基础。     

MTS1/p16基因产物在非小细胞肺癌中的表达及其意义

为研究p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与非小细胞肺癌发生发展的关系,应用SP法对52例非小细胞肺癌石蜡标本进行p16蛋白的检测。结果发现44例(84.6％)p16蛋白表达阳性,p16蛋白在良、恶性细胞中均有表达,肿瘤细胞中p16表达呈现异质性;各肿瘤类型中鳞癌和大细胞癌阳性率高于腺癌,但无显著差异,高分化腺癌阳性率高于低分化腺癌(户<0.05);伴淋巴结转移者阳性率低于非转移者(P<0.01),且p16蛋白表达阳性率与肿瘤大小相关。表明p16基因表达缺失参予了非小细胞肺癌的发生发展过程,且与肿瘤分化、转移有关。     

5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究

目的：探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法：采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果：除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化：纯合缺失（EC18）,纯合型甲基化（EC18,EC109）,杂合型甲基化（TE1,TE10）,且纯合缺失的发生率较低（20%）,甲基化的发生率较高（80%）,经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论：不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.     

LRP16基因抗紫外线DNA损伤作用的研究

目的根据基因编码序列推测其氨基酸序列，预测LRP16基因编码蛋白的功能并通过实验加以证实。方法利用GeneBank数据库获取LRP16基因序列，然后推测出该基因编码蛋白质的一级结构，对该序列蛋白结构域的同源性进行搜索；将LRP16基因ORF插入pcDNA3．1，构建LRP16基因的真核表达质粒，采用Superfect稳定转染急性粒细胞白血病细胞系HL-60，筛选稳定表达LRP16基因的细胞；以紫外灯照射筛选后有HL-60稳定过表达的HL-60细胞和对照细胞；采用单细胞凝胶电泳技术检测有LRPl6过表达对HL-60细胞增殖及DNA损伤后修复的影响。结果在LRPl6基因理论蛋白序列的第148至315氨基酸残基之间具有与人类组蛋白H2A1C末端相类似的同源序列hismacro、COG2110和A1PP，同源性高达80％以上。LRP16基因的过表达具有抗紫外线引起HL-60细胞DNA损伤和增强损伤后的修复作用。结论LRP16基因编码蛋白可能具有抗紫外线的DNA损伤作用。