人体脂肪基质细胞成肌潜能研究

目的　研究分离的人体脂肪基质细胞经过诱导培养后向骨骼肌细胞分化的潜能。方法　通过脂肪抽吸 术获取健康成人脂肪,机械分割后用Ⅰ型胶原酶消化,得到脂肪基质细胞。将脂肪基质细胞在BGJb培养基中原代 培养10 d,在DMEM/F12培养基中进行成肌诱导培养20 d,获得细胞爬片。细胞爬片经4%多聚甲醛固定后,用甲 苯胺蓝、Mallory磷钨酸苏木素染色观察细胞形态;Myosin单克隆抗体免疫细胞化学染色观察肌球蛋白表达情况。 结果　经过成肌诱导培养的细胞与常规培养的脂肪基质细胞在形态上有明显的差异,表现为细胞体积增大,单个 核的细胞融合形成多核的肌管样结构,胞浆内细胞器发达,肌浆网扩张并形成肌原纤维骨骼肌特异性的Myosin表 达阳性。未经诱导的脂肪基质细胞在相同时间点无此现象。结论　人类脂肪基质细胞中存在着成体干细胞,在成 肌诱导培养条件下具有向骨骼肌细胞分化的潜能。     

人牙周膜体外分离培养及其成骨表型的研究

目的：体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament fibroblasts hPDLFs）,并对其成骨表型特征进行研究。方法：采用胶原酶消化法获得大量成活率高的人牙周膜细胞。在DMEM培养基中进行原代及传代培养,免疫组化方法检测细胞波形丝蛋白及角蛋白的表达,鉴定细胞。使用矿化液诱导,然后应用碱性磷酸酶活性检测、Von Kossa染色等方法观察hPDLFs在矿化液作用下生物学特性的改变。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。矿化诱导5d后,有部分hPDLFS转化为成骨样细胞,碱性磷酸酶活性显著升高,诱导20d后可见矿化结节形成。结论：酶消化法可以快速得到大量hPDLFs,且hPDLFs具有一定的成骨表型特征。     

骨髓基质细胞体外培养成骨的研究进展

骨髓具有成骨潜能的现象在一百年前人们就观察到了。近年来,随着对成骨细胞来源和骨髓成骨潜能研究的深入,通过体内外培养骨髓基质细胞证实了骨髓成骨的细胞学基础是骨髓基质细胞中含有向成骨细胞系转化的骨祖细胞及基质干细胞,为临床研究及应用骨髓或骨髓基质细胞提供...     

流体剪切力对人脂肪基质细胞成骨相关基因表达影响的研究

目的 探讨流体剪切力(FSS)对人脂肪基质细胞(ADSC)成骨相关基因骨钙素(OCN)、转录因子Osterix(Osx)及核心结合因子(Cbf) al/Runt相关转录因子(Runx)2表达的影响.方法 将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行常规培养(A1、A2组)和诱导培养(A3、A4组),然后分别对其加载强度为0.3 Pa的FSS(A1、A3组),未加FSS的为对照组(A2、A4组),通过逆转录-聚合酶链反应检测骨钙素、转录因子Osx及Cbfal/Runx2基因表达的情况.结果 A3、A4组在FSS加载后,其成骨相关基因的表达增强;而A1、A2组未见成骨特异性基因条带.这表明在常规培养条件下,无论是否有FSS的刺激,均无成骨特异性基因表达.结论 脂肪基质细胞在诱导培养条件下,FSS可促使其向成骨细胞分化,可作为骨组织工程的种子细胞.     

人脂肪基质细胞的分离、培养、增殖及传代稳定性

目的:建立人脂肪基质细胞分离、培养及扩增的方法,观察其增殖动力学行为,检测其传代稳定性。方法:通过吸脂术获取人的脂肪组织并分离脂肪基质细胞,在普通培养基中进行培养,观察细胞形态,绘制细胞增殖曲线,用油红O染色显示胞内脂滴生成,并检测其是否向脂肪细胞自动分化。结果:人的脂肪组织中可分离出基质细胞,在体外生长形态类似成纤维细胞;其增殖曲线呈S形。在原代及传代培养中均未见脂肪细胞或胞内脂滴生成。结论:成年人脂肪组织中存在的基质细胞可维持在未分化状态下稳定的增殖和传代。     

不同周龄大鼠骨髓基质干细胞成骨与成脂分化平衡的研究

目的研究不同周龄大鼠骨髓基质干细胞成骨与成脂肪能力。方法不同周龄(幼年组:2周,成年组:3个月,老年组:18个月)大鼠骨髓基质干细胞原代培养,成骨诱导分化,矿化结节染色,计算矿化率。成脂肪诱导分化,显微镜下观察脂肪滴及检测油红-O染色阳性细胞率。结果全骨髓细胞贴壁的方法得到大鼠骨髓基质干细胞,幼年组成骨分化的矿化率最高,老年组最低。成脂肪诱导油红-O染色阳性率老年组最高,幼年组最低。结论随着年龄的增长骨髓基质干细胞成骨能力减弱,成脂肪能力增强。     

脂肪基质细胞骨向诱导分化的研究进展

脂肪基质细胞(ADSCs)是目前骨组织工程的理想种子细胞,诱导其定向成骨分化是该领域的研究热点。脂肪基质细胞定向成骨诱导的方法主要有改变ADSCs所处的微环境、修饰ADSCs内部基因等。本文对脂肪基质细胞骨向诱导分化的研究进展进行综述。     

骨髓基质细胞分化成骨的实验研究

将兔骨髓细胞悬液体外培养，造血细胞死亡或在换液时被清除，吸附于培养瓶壁上的基质细胞迅速增殖。ｌ周时有明显的集落形成，２周时汇合成层。把培养的成纤维样细胞移植到扩散中种植到兔腹腔。经过一段时问可以分化为骨、软骨和纤维结缔组织，从而证实骨髓基质中存在着可以分化成骨细胞和成软骨细胞的成骨前体细胞。     

犬外周血基质细胞的分离培养及其横向分化潜能研究

目的：对犬外周血基质细胞（peripheral blood stromal cells,PBSCs）进行体外分离培养,研究其向成骨、成脂方向诱导分化的潜能。方法：取犬外周血,利用密度梯度离心法分离培养犬外周血基质细胞,免疫组化方法检测CD34和CD105表达情况;并用特定诱导液将分离的细胞向成骨细胞和脂肪细胞定向诱导分化。结果：该细胞表达CD105,不表达CD34;成骨诱导后,矿化结节茜素红染色阳性、OPN表达阳性;成脂诱导后,经油红O染色可见细胞内脂滴的积累。结论：利用密度梯度离心与贴壁培养相结合的方法可分离培养出外周血基质细胞,外周血基质细胞经诱导培养后具有多向分化潜能,有可能成为组织工程的种子细胞。     

脂肪间质干细胞在软骨组织工程中的研究现状

脂肪间质干细胞是新发现的一种可以自我更新,具有向软骨、骨、脂肪、肌肉、神经细胞等分化的成体干细胞。目前已经对它进行了深入的研究。在对其生物学特性研究的基础上,进一步研究了它的应用,认为它可以成为组织工程的种子细胞。构建的组织工程组织中比较成熟的是软骨,有望应用于临床。下面就脂肪间质干细胞生物学特性和成软骨的研究进展进行综述。     

大鼠脂肪源性内皮细胞成脂潜能的研究

目的:研究脂肪源性内皮细胞向脂肪细胞的分化潜力和过程。方法:获取4只雄性SD大鼠鼠蹊部皮下脂肪,通过机械分割和组织消化法获取脂肪基质细胞,在内皮细胞培养液中培养7d后,经免疫细胞化学及透射电镜鉴定证实95%以上细胞已具内皮细胞表型特征,再将这些细胞进行成脂(DMEM/F-12培养基内加入0.5mmol/L1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤,1μmol/L地塞米松,10μmol/L胰岛素,200μmol/L吲哚美星)定向诱导7d,形态学观察和油红O特殊染色鉴定诱导后的细胞。结果:SD大鼠脂肪源性内皮细胞呈典型的铺路石样单层融合贴壁生长;Ⅷ因子、W-P小体阳性;在此基础上经成脂诱导,发现约85%内皮细胞转化为脂肪细胞,油红O染色可见细胞质中有大量脂滴形成。结论:从SD大鼠皮下脂肪获取的脂肪源性内皮细胞经过成脂诱导后可转化为脂肪细胞,这对研究脂肪细胞的来源和形成以及脂肪组织工程研究具有重要的意义。     

来源于脂肪组织的基质细胞向成骨细胞分化

目的：研究来源于脂肪组织的基质细胞体外培养和向成骨细胞分化条件。方法：常规方法培养脂肪组织来源的基质细胞．向成骨细胞分化诱导．应用免疫细胞化学办法对细胞进行鉴定．碱性磷酸酶法对分化的成骨细胞鉴定。结果：从成年人的脂肪组织中分离出基质细胞．在体外生长形态类似成纤维细胞。可以维持在未分化状态稳定增殖，体外可持续扩增和传代。在一定的条件下可诱导分化为成骨细胞．分化的细胞表达碱性磷酸酶和I型胶原．在培养皿中也发现钙化斑。结论：脂肪组织中存在的基质细胞能分化为成骨细胞．这种细胞可以做为组织工程的种子细胞。     

脂肪干细胞和纤维蛋白胶快速构建人工皮肤修复创面的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠脂肪组织来源干细胞(ADSCs)与纤维蛋白胶复合快速成型构建组织工程皮肤替代物修复皮肤缺损的可行性.方法:采用胶原酶消化GFP小鼠脂肪组织,获得GFP小鼠脂肪干细胞(ADSCs),并证明其具有成骨和成脂的多向分化能力,经体外扩增后复合纤维蛋白胶快速成型构建组织工程活性皮肤替代物.15 只C57鼠随机分成3组:ADSCs复合纤维蛋白胶组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯纤维蛋白胶移植组和空白对照组.将各组相应材料分别移植于C57BL小鼠背部皮肤缺损处,比较观察创面修复效果.结果:分离的细胞具有不断的增殖能力,并具有多向分化潜能.同种异体移植后,免疫荧光检测创面有大量GFP小鼠脂肪干细胞存活.ADSCs复合纤维蛋白胶可以缩短创面愈合时间.组织学观察显示,ADSCs复合纤维蛋白胶实验组上皮形成较厚,真皮层胶原纤维排列有序,成纤维细胞数量较单纯纤维蛋白胶移植组和空白对照组明显增多.结论:GFP-ADSCs复合纤维蛋白胶构建的组织工程皮肤替代物移植后可加速小鼠皮肤创面愈合,提示以ADSCs作为种子细胞复合纤维蛋白胶快速成型构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗.     

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目的研究大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)分离培养的方法,并采用药物对其进行成骨诱导,探讨大鼠BMSCs在体外向成骨细胞分化的能力。方法本实验于2010年在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行,采用全骨髓培养法进行大鼠BMSCs的分离与培养,光镜下观察细胞形态,之后细胞传代到所需数量后,随机分为2组,诱导组采用药物法(0.1μmol/L的地塞米松、10mmol/L的β-磷酸甘油钠、0.2mmol/L维生素C)进行成骨诱导,非诱导组未采用任何方法进行成骨诱导。在诱导的第1、3、5天,分别对两组细胞取样,进行细胞活性检测和碱性磷酸酶检测;在诱导的第5天进行扫描电镜观察。比较两组细胞成骨能力。结果光镜下,分离培养的细胞呈圆形、多角形、梭形等成纤维细胞样外观,细胞核浆比例较大,透光度较高,连续培养后呈现束状和漩涡状生长,符合基质干细胞的形态学特征。在成骨诱导的第1天,两组细胞的活性检测差异有统计学意义(P<0.05),碱性磷酸酶表达差异无统计学意义(P>0.05);在诱导的第3、5天,两组细胞的活性检测、碱性磷酸酶表达差异均有统计学意义(P<0.05)。在诱导培养的第5天,扫描电镜下观察可见两组细胞形态不同。结论采用全骨髓培养法可对大鼠BMSCs进行有效的分离培养,分离出的细胞符合基质干细胞特点;通过地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C可对其进行有效的成骨诱导。     

人牙周膜干细胞成骨相诱导后相关基因的表达变化

目的:对人牙周膜干细胞进行筛选纯化,骨向诱导后观察其成骨能力,并对成骨相分化过程中相关基因的表达变化进行检测。方法:用组织块联合磁珠分选法分离纯化人牙周膜干细胞,初步探讨其成骨性能,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色观察其成骨情况,实时定量PCR检测其相关成骨基因的表达变化。利用SPSS12.0软件包对数据进行统计学分析。结果:组织块联合磁珠分选法能成功培养出高纯度的人牙周膜干细胞。体外培养中,PDLSCs具备成脂和成骨的双相分化能力。在成骨诱导过程中,FOXO1和RUNX2的表达先升高再降低,ALP和OCN的基因表达水平持续增高。结论:成骨相关基因 ALP、RUNX2、FOXO1和OCN均参与其向成骨样组织分化的过程,其表达变化具有时间规律性,与成骨过程类似。     

基质细胞衍生因子-1对炎症和正常来源的 人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞（iPDLSCs）和正常来源的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）,比较基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法 采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs 和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流式细胞仪对干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成骨诱导;MTT法检测并比较SDF-1对两种来源的细胞增殖能力的影响;茜素红染色检测SDF-1作用于两种来源的细胞后钙化骨量的表达;碱性磷酸酶法比较SDF-1作用于两者的成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测SDF-1作用于两种牙周膜干细胞前后成骨相关基因表达水平的变化。结果 两种来源的牙周膜细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物。hPDLSCs较iPDLSCs增殖能力高;两种细胞经SDF-1成骨诱导培养后,成骨相关基因的表达水平均较诱导前明显上调（P<0.05）,SDF-1在50、200 ng·mL ^-1时分别对iPDLSCs和hPDLSCs细胞成骨分化作用最明显（P<0.05）。结论 正常来源和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成骨分化能力,SDF-1可增强两种来源的牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

基质细胞衍生因子-1对炎症和正常来源的人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞（iPDLSCs）和正常来源的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）,比较基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法 采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs 和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流式细胞仪对干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成骨诱导;MTT法检测并比较SDF-1对两种来源的细胞增殖能力的影响;茜素红染色检测SDF-1作用于两种来源的细胞后钙化骨量的表达;碱性磷酸酶法比较SDF-1作用于两者的成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测SDF-1作用于两种牙周膜干细胞前后成骨相关基因表达水平的变化。结果 两种来源的牙周膜细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物。hPDLSCs较iPDLSCs增殖能力高;两种细胞经SDF-1成骨诱导培养后,成骨相关基因的表达水平均较诱导前明显上调（P<0.05）,SDF-1在50、200 ng·mL ^-1时分别对iPDLSCs和hPDLSCs细胞成骨分化作用最明显（P<0.05）。结论 正常来源和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成骨分化能力,SDF-1可增强两种来源的牙周膜干细胞的成骨分化能力。