桔梗与氯丙嗪伍用对大鼠脑纹状体多巴胺的影响

目的:研究桔梗与氯丙嗪联合应用对大鼠脑纹状体单胺类神经递质多巴胺的影响,探讨中西药配伍应用后可能发生的药物相互作用与机制.方法:大鼠随机分成4组:生理盐水组、桔梗(生药15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪(20mg·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪与桔梗(20 mg·kg~(-1)·d~(-1)+15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))合并给药组,每组6只,给药10 d后,利用微透析法在大鼠脑纹状体取样,HPLC检测透析液中多巴胺水平.结果:药后140 min(取样点80 min)时,氯丙嗪+桔梗组中多巴胺水平(1.52±0.34)μg-L~(-1)显著高于氯丙嗪组(1.25±0.22)μg·L~(-1)(P<0.05)和生理盐水组(1.06±0.24)μg·L~(-1)(P<0.01).结论:桔梗与氯丙嗪合用后大鼠脑内多巴胺水平升高,治疗时同时给予桔梗,可以减少氯丙嗪的用量,达到保持疗效,降低其不良反应的目的.     

大鼠脑纹状体微透析法研究天王补心方剂中桔梗的应用与抑制性神经递质变化的相关性

目的：研究天王补心丸对大鼠脑内氨基酸类神经递质的影响，来探讨该药的安神作用机制。方法：利用微透析技术从给药大鼠脑纹状体取样，利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法结合荧光检测器测定标准品和样品中抑制性氨基酸(甘氨酸、γ-氨基丁酸)的含量并进行统计分析。结果：全方组、桔梗+酸枣仁组给药后大鼠纹状体区细胞外液中兴奋性氨基酸含量变化不明显，而抑制性氨基酸GABA和Gly含量均有所增加。结论：本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点，适用于脑组织中微量氨基酸类神经递质的测定。桔梗对大鼠脑中抑制性神经递质有明显的影响。     

电针对帕金森病模型大鼠纹状体多巴胺递质的影响

目的探讨针刺治疗帕金森病（PD）具有的神经保护作用机制。方法实验选用PD模型大鼠,随机分为空白组、模型组、美多巴组、电针组和美多巴＋电针组,造模前3天给予干预,各组于造模14d后处死。采用HPLC法测定左侧纹状体匀浆DA及其代谢产物含量。结果模型组DA、DOPAC和HVA均较空白组显著降低（P〈0．01）。其中电针组及美多巴＋电针组的DA／HVA、DA／DOPAC的比值与模型组相比较显著升高（P〈0．05）。结论电针对PD大鼠的治疗作用的机制可能通过保护DA能神经元,从而提高纹状体DA含量为主要机制。     

温胆汤的不同配伍对大鼠纹状体多巴胺受体的影响

目的 探讨温胆汤的不同配伍对大鼠纹状体多巴胺受体的影响.方法 SD大鼠70只,随机分为正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、祛痰+理气组(C组)、祛痰+健脾祛湿组(D组)、理气+健脾祛湿组(E组)、温胆汤全方组(F组)、氯丙嗪对照组(G组).C、D、E、F组灌饲相应药液20 ml/kg,1次/d,连续灌胃21 d;G组于最后3 d腹腔注射氯丙嗪4.5 mg/kg;除A组外,其他组均于最后3 d同时腹腔注射阿朴吗啡(APO) 2 mg/kg诱发大鼠精神分裂症动物模型.分离双侧纹状体,采用放射配基结合分析方法,绘制饱和曲线,以B/F对B作Scatchard图、计算Bmax和KD值.结果 温胆汤全方组、氯丙嗪组脑纹状体D2受体的Bmax及KD值较模型组明显减少(P<0.01),特异结合曲线亦明显低于模型组,说明温胆汤、氯丙嗪均有显著抗精神病作用.氯丙嗪组较温胆汤全方组降低Bmax、KD值有明显差异(P<0.01或P<0.05),说明温胆汤的抗精神病作用弱于氯丙嗪.结论 温胆汤具有抗精神病的药理作用,其作用机制可能是阻断D2受体与DA结合,从而抑制过度亢盛的DA功能.     

微透析法研究冰片对头孢曲松在大鼠脑纹状体中含量的影响

目的:探索芳香开窍中药冰片对西药头孢曲松在大鼠脑纹状体中浓度的影响及其相关性。方法:采用脑微透析技术采集大鼠脑纹状体内的脑脊液(aCSF)样品,利用高效液相色谱仪结合二极管阵列检测器,检测对照品和样品中头孢曲松的含量,进行统计学分析,比较头孢曲松合用冰片组与单用头孢曲松组大鼠脑纹状体中头孢曲松的浓度。结果:头孢曲松合用冰片组的大鼠脑纹状体内头孢曲松质量浓度13.01～4.43mg·L-1明显高于单用头孢曲松组2.41～0.94mg·L-1。结论:冰片能够促进头孢曲松透过血脑屏障,提高其在纹状体aCSF中的浓度。     

益智宁对ADHD大鼠前额叶皮质、纹状体多巴胺的影响

目的:观察中药复方益智宁对ADHD模型动物——自发性高血压大鼠(SHR)额-纹状体环路多巴胺(DA)的影响。方法:将11周龄的雄性SHR分为中药高剂量组、低剂量组和生理盐水对照组,分别予益智宁和生理盐水灌胃,用高效液相色谱-电化学法检测前额叶皮质、纹状体多巴胺的含量。结果:益智宁可明显升高SHR纹状体多巴胺含量,高剂量组、低剂量组与生理盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05),而高低剂量组间无明显差异,但三组间前额叶皮质多巴胺含量比较无明显差异(P>0.05)。结论:益智宁治疗ADHD肾虚肝亢型的作用机制之一可能与调节单胺类神经递质有关,其对额-纹状体环路DA的调控主要在于提高纹状体DA含量,纹状体为作用靶点之一。     

天王补心丸全方及全方缺桔梗对少寐大鼠脑神经递质的影响

目的:为了了解天王补心丸全方的安神作用机制以及桔梗对天王补心丸催眠作用的影响.方法:建立小鼠戊巴比妥钠协同睡眠模型,考察天王补心丸全方及全方缺桔梗对小鼠睡眠的影响;建立少寐大鼠的模型,以睡眠觉醒相关神经递质5-HT,NA及DA为分析指标,通过HPLC-ECD检测,考察桔梗配伍与否对脑内神经递质及其代谢产物的影响.结果:天王补心丸全方能够显著地性增加阈下剂量戊巴比妥钠协同睡眠的入睡率(P<0.05),而天王补心丸全方缺桔梗组只有使睡眠率增加的趋势,而无统计学差异;给药后全方组、全方缺桔梗组均显著性升高了大鼠中缝核单胺类递质5-TH及5-HIAA水平(P<0.05),且全方缺桔梗组与全方组相比有显著性差异;而在海马区与纹状体区只有全方组显著性升高促睡眠递质5-TH水平(P<0.05),且与全方缺桔梗组相比有显著性差异(P<0.05);全方及全方缺桔梗组均显著降低大鼠下丘脑DA水平(P<0.05);全方及全方缺桔梗组均显著地降低纹状体内DA代谢产物DOPAC水平(P<0.05).结论:天王补心丸全方催眠作用机制在于促进了各脑区及核团内5-HT释放,而桔梗将有可能为调节的关键点.     

安神定志灵对ADHD模型大鼠纹状体多巴胺转运体表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)纹状体多巴胺转运体(DAT)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:30只SHR鼠随机分为5组(模型组、利他林组、安神定志灵高、中、低剂量组),每组6只,Wistar-Kyoto(WKY)大鼠6只作为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量34.1,17.1,8.5 g.kg-1 ig;利他林组以2.1 mg.kg-1利他林ig;模型组和正常对照组以10 mL.kg-1生理盐水ig。连续给药2周后处死大鼠,取脑分别用RT-PCR和激光共聚焦显微镜检测各组大鼠纹状体多巴胺转运体(DAT)mRNA和蛋白表达水平。结果:大鼠纹状体中DAT的蛋白表达水平,组间存在差异(P<0.05),SHR模型组大鼠纹状体中DAT的蛋白表达与正常对照组比较显著增高(P<0.01);安神定志灵中、高剂量组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.01),利他林组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),安神定志灵低剂量组和模型组DAT蛋白表达相比无统计学意义。蛋白表达量从高到低依次为安神定志灵低剂量组、利他林组、安神定志灵中、高剂量组。结论:安神定志灵可以降低SHR大鼠纹状体中DAT mRNA及蛋白的表达水平,减少突触前神经元对DA的重摄取,增加突触间隙的DA浓度,改善了中枢DA的神经信号传导功能,起到对ADHD的治疗作用。     

制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响

目的 观察制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响,探讨制首乌对脑保护的作用机理。方法 用脑内微透析造模,水杨酸捕获羟自由基,高效液相电化学检测器测定活体脑内羟自由基所形成的2,3二羟基苯甲酸（2,3-DHBA）和2,5二羟基苯甲酸（2,5-DHBA）。结果 6-OHDA脑内灌流后,模型组大鼠纹状体细胞外液2,3-DHBA和2,5-DHBA均迅速增高,前者在观察全程中一直显著高于对照组（P〈0．01）;后者部分时间点显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）;制首乌组的2,3-DHBA有5个时点显著低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。结论 制首乌对6-OHDA脑内灌流引起的细胞外液羟自由基升高有一定程度的抑制作用,提示其脑保护作用的机理之一与抗氧化有关。     

葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响

 目的研究葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响。方法大脑中动脉栓塞(MCAO)60min建立大鼠局部脑缺血模型。给药组在缺血前30min和再灌注开始时分别腹腔注射Pur(50,100mg·kg^-1,ip)。用脑微透析仪收集缺血前后和再灌注过程纹状体的细胞外液,高效液相色谱分析其兴奋性和抑制性氨基酸水平;缺血再灌注24h取脑用TTC染色法测算脑梗死体积和水肿率。用流式细胞仪结合Annexin-V荧光标记法检测Pur(40,100μmol·L^-1)对体外培养海马神经细胞谷氨酸(0.5mmol·L^-1)诱导细胞凋亡的保护作用。结果缺血开始后,纹状体的天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)水平快速升高,最高时分别达缺血前的8.92,14.15,9.07和4.84倍。再灌注开始后,氨基酸水平迅速下降,120min后接近正常。100mg·kg^-1Pur在减小脑梗死体积和脑水肿的同时,显著降低脑缺血过程纹状体氨基酸水平,其最高值分别比缺血组降低35.7%(Asp)、43.2%(Glu)、28.5%(GABA)和31.8%(Tau)(P<0.01);Glu/GABA比值明显低于缺血大鼠。流式细胞检测结果显示,100μmol·L^-1Pur明显抑制谷氨酸兴奋毒作用,分别使海马神经细胞的凋亡率和坏死率降低33.1%和35%(P<0.01)。结论Pur可有效抑制脑缺血诱导的细胞外氨基酸水平升高和谷氨酸兴奋毒作用,该机制可能与Pur的抗脑缺血作用有关。     

桔梗质量评价的沿革与变迁

桔梗为止咳化痰平喘类常用中药,历代本草非常重视对其质量的评价。该文对历代本草中桔梗的质量评价方法进行研究,发现:桔梗有苦桔梗与甜桔梗、南桔梗与北桔梗之分,分布华东地区习称南桔梗,其味苦;分布华北、东北地区习称北桔梗,其味甜。历代本草认为桔梗以味苦者为佳,即华东产质量优良;桔梗在性状上则以根粗长、色白、质坚实、味苦者质优;此外,桔梗的种质、采收加工也影响其质量。该文通过本草文献梳理了桔梗"辨状论质"观的形成与发展,为桔梗的质量评价提供了本草学依据。     

基于ITS2条形码的桔梗药材遗传多样性研究

目的:利用ITS2条形码探讨不同产地桔梗的遗传多样性。方法:提取桔梗药材DNA,PCR扩增基于进化速率较快的DNA内部转录间隔区2(ITS2)序列并测序,采用Clustal比对分析不同产地桔梗ITS2序列,应用MEGA 5.05软件计算种内Kimura 2-parameter(K2-P)遗传距离,以桔梗科党参属植物党参的ITS2序列为外展值,运用邻接法(neighbor-joining method)构建桔梗系统进化树。结果:试验所用全部样本的K2-P遗传距离为0~0.930,相同地区来源的样本K2-P遗传距离分布于0~0.178,不同地区来源的样本K2-P遗传距离为0.735~0.930;分析结果表明,桔梗种内遗传变异程度巨大,与其地理位置显著相关。结论:ITS2条形码适用于桔梗种内遗传多样性研究,为进一步拓展DNA条形码技术的应用提供了参考。     

不同氮素形态与配比对桔梗生长及桔梗皂苷D含量的影响

研究不同形态氮素处理对桔梗生长和桔梗皂苷D含量的影响,为桔梗氮肥合理施用提供借鉴。采用盆栽方式,对桔梗进行不同氮素形态配比处理,测定桔梗生长相关指标,包括生物量、光合参数及NR,GS活性,硝态氮,铵态氮含量和SOD,POD,CAT活性,桔梗皂苷D含量。结果表明:NH₄⁺-N/NO₃^--N为0 : 100处理,桔梗叶片NR活性、硝态氮含量、净光合速率及生物量达到最大值。叶片中GS活性在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理最大,铵态氮含量在NH₄⁺-N/NO₃^--N为75 : 25处理为最大值。随着NO₃^--N比例的增加,SOD活性先降后升,CAT活性先升后降,MDA含量先降后升,且CAT与MDA呈完全相反变化趋势,均在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理分别达到最大值与最小值。桔梗皂苷D含量也随NO₃^--N比例增加而呈先升后降的趋势,在NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理达到最大值,较酰胺态氮处理升高了25.81%。不同氮素形态及配比对桔梗光和特性、氮素代谢和抗逆调节指标、产量及质量影响显著。NH₄⁺-N/NO₃^--N为25 : 75处理较适宜桔梗生长及桔梗皂苷D含量的累积。     

Ca2+和SA对高温胁迫下桔梗抗逆及光合生理指标影响研究

通过分析不同浓度Ca²⁺与SA对高温胁迫下对桔梗抗逆生理指标及相关光合参数的影响,了解Ca²⁺,SA对桔梗高温胁迫伤害调控的相关性,为缓解桔梗高温胁迫提供依据。该实验以盆栽桔梗为材料,叶面喷施不同浓度CaCl₂,SA溶液,然后置于 35 ℃/25 ℃(昼/夜),光照3 600 lx 的光照培养箱内,进行高温胁迫处理,以常温25 ℃喷施蒸馏水和高温胁迫下喷施蒸馏水处理为对照,测定桔梗叶片相关光合参数,膜透性,脯氨酸,丙二醛,可溶性蛋白,ASA,GSH含量,以及SOD,CAT活性。结果表明,6 mmol·L^-1 CaCl₂,1.5 mmol·L^-1 SA可显著增强桔梗叶片SOD,CAT酶活性,提高叶片游离脯氨酸及可溶性蛋白含量,有效减少高温胁迫对细胞膜的破坏,显著降低相对电导率,同时,处理提高了叶片中叶绿素与类胡萝卜素含量,提高了叶片光合效率,有效增加ASA,GSH的含量,从而抵御高温造成的氧化胁迫,但随着浓度的增大,桔梗叶面抵御高温胁迫的能力则会下降。喷施一定浓度CaCl₂,SA溶液可减轻高温胁迫对桔梗叶片的伤害。     

桔梗同源四倍体诱导及其基因组DNA甲基化差异分析

为探究桔梗同源四倍体与二倍体试管苗外观形态差异的表观遗传变化,先将桔梗二倍体不定芽用不同浓度的秋水仙素(加0.02 g·m L-1二甲亚砜)混合液浸泡后进行组织培养,并通过流式细胞仪和根尖染色体鉴定相结合的方法鉴定倍性。在获得桔梗同源四倍体的基础上,采用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术探究二倍体与四倍体植株之间的DNA甲基化水平及其模式变化。结果表明0.2%的秋水仙素(加0.02 g·m L-1二甲亚砜)混合液处理桔梗不定芽12 h是诱导桔梗同源四倍体的最适条件,其诱导率达到32.0%;四倍体与二倍体植株在外观形态上存在明显差异,经过DNA甲基化差异分析,20对引物扩增的1 586条带中二倍体有764条,四倍体有822条。二倍体总甲基化率、全甲基化率和半甲基化率分别为92.15%,61.52%,30.65%,而四倍体为86.13%,54.38%,31.75%,与二倍体相比,其同源四倍体总甲基化率降低6.02%,全甲基化率降低7.14%,而半甲基化率升高1.6%,说明染色体加倍后其DNA表观遗传模式发生了变化。     

米泔水炮制桔梗过程中微生物变化规律研究

目的：分析米泔水制桔梗（MZJ）浸泡液中的微生物群落组成及丰度变化规律,为基于微生物发酵及成分转化角度阐明MZJ炮制原理提供依据。方法：采用米泔水浸泡桔梗,于28℃浸泡72 h,借助16S rRNA测序技术和生物信息学分析技术分析不同浸泡时间液体中微生物群落结构及丰度变化。结果：MZJ浸泡液中微生物群落组成具有多样性,随着浸泡时间的延长,溶液中特有操作分类单元（OTU）数量、丰度和群落多样性均呈降低趋势。从门水平分析,MZJ炮制前期变形菌门（Proteobacteria）占优势,浸泡12 h时相对丰度最高（89.75%）,随着炮制时间的延长,厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度增加,由10.20%增至68.61%,48 h时趋于稳定。从属水平分析,炮制初期以欧文氏菌属（Erwinia）、肠杆菌属（Enterobacter）、泛菌属（Pantoea）为优势菌属,随着炮制时间延长,乳球菌属（Lactococcus）、魏斯氏菌属（Weissella）、明串珠菌属（Leuconostoc）、葡糖杆菌属（Gluconobacter）等为优势菌属,其中乳球菌属丰度由2.24%增至40.15%,...     

桔梗总皂苷对肺炎支原体感染大鼠肺组织SP-A的影响

目的:通过研究桔梗总皂苷对肺炎支原体(MP)感染大鼠肺部组织中肺表面活性蛋白A(SP-A)表达的影响,探讨其对肺炎支原体感染大鼠肺部组织可能的修复机制。方法:60只Wistar大鼠,雌雄各半,体重80~100 g,随机分为6组,每组10只。分别为空白组、模型组、阳性药(阿奇霉素)组(第1天为45 mg·kg-1,第2~5天为22.5 mg·kg-1)、桔梗总皂苷高、中、低(56,28,14 mg·kg-1)剂量组。采用肺炎支原体滴鼻法造模1次。造模后第2天开始ig给药,阿奇霉素给药5 d,桔梗总皂苷给药10 d后采集大鼠左肺及右肺组织中叶,常规HE染色,显微镜下观察肺组织病理改变,逆转录聚合酶链反应法(RTPCR)检测肺组织中SP-A mRNA的表达水平,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果:病理结果显示:模型组与空白组比较,肺组织可见明显的肺间质炎症(P0.01);与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中、低剂量组的肺组织炎症较模型组明显减轻(P0.05);肺组织中SP-A mRNA的表达水平显示:与空白组比较,模型组的肺组织SP-A mRNA表达明显下调(P0.01),与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中剂量组SP-A mRNA表达上调(P0.05)桔梗总皂苷低剂量组无显著差异。结论:桔梗总皂苷能够改善MP感染大鼠肺部组织的炎症,且对肺部的修复作用可能是通过上调SP-A表达实现的。     

不同产地桔梗皂苷生物合成与土壤元素关系的研究

目的 研究桔梗皂苷积累与土壤元素的关系,从基因表达水平明确不同产地桔梗皂苷含量差异的原因,为桔梗药材的科学种植提供理论依据。方法 利用HPLC法和香草醛-冰醋酸比色法测定不同产地桔梗韧皮部和木质部的桔梗皂苷D和桔梗总皂苷含量,实时荧光定量PCR测定6种关键酶基因的表达量,利用原子吸收法、比色法等方法测定土壤元素含量,用Pearson相关性分析法分析土壤元素与桔梗皂苷及其关键酶基因表达量的关系。结果 河南洛阳产桔梗根中的桔梗皂苷D和桔梗总皂苷含量显著高于其他产地,桔梗韧皮部和木质部的桔梗皂苷含量和关键酶基因表达量存在较大差异;相关性分析表明,土壤中Cu、Ca和Zn含量对桔梗皂苷的合成起主要作用,甲羟戊酸焦P酸脱羧酶基因、法尼基焦P酸合酶基因和异戊烯基焦P酸异构酶基因是桔梗皂苷合成过程中的主要关键酶基因,土壤元素对桔梗关键酶基因具有一定的调控作用。结论 土壤元素通过调控关键酶基因进而影响桔梗皂苷的合成,其中土壤中Zn含量起主要作用。     

不同浸种处理对桔梗种子萌发和幼苗生长的影响

目的 研究不同质量浓度的KNO₃、KMnO₄、H₂O₂、GA₃以及蒸馏水浸种不同时间,对桔梗种子萌发及幼苗生长的影响。方法 采用双层滤纸培养法,在25 ℃恒温,12 h光照的光照培养箱中将浸种后的种子进行培养,观察记录种子的发芽势、发芽率、发芽指数及幼苗的根长和苗高,并对数据进行统计分析。结果 0.150 g/L GA₃浸种24 h是打破桔梗种子休眠、促进桔梗种子萌发和幼苗生长的最佳浸种处理方法;此外,5 mg/mL KNO₃浸种处理12 h也是有效的浸种处理方法。结论 筛选出桔梗种子萌发的最适浸种试剂及浸种时间,对桔梗的种子育苗及人工栽培具有重要指导意义。