局部应用重组水蛭素对脑出血模型大鼠血肿周边组织损伤的干预作用

目的探讨脑出血后局部应用凝血酶特异抑制剂——重组水蛭素治疗血肿周边组织损伤的价值和治疗时间窗。方法采用自体血注入方法建立大鼠脑出血模型，分别于50μl自体血注入同时、3h后以及9h后血肿内给予10U重组水蛭素干预，术后72h记录大鼠神经功能缺损评分(neurological deficit score，NDS)，检测血肿周边组织髓过氧化物酶(MPO)的活性、脑水含量及TUNEL阳性细胞数量的变化，并通过检测血红蛋白含量评价水蛭素对血肿容量的影响。结果脑出血同时及3h后给予水蛭素可显著减轻大鼠神经功能缺损。降低局部MPO活性、减少脑水含量及TUNEL阳性细胞数量，9h后给予水蛭素仍可减轻局部组织脑水含量。与出血组比较，局部应用水蛭素未导致血肿红蛋白含量增加。结论脑出血后早期(9h内)局部应用水蛭素可减轻血肿周边组织的白细胞浸润、脑水肿和细胞死亡，且无明显再出血副作用，抗凝血酶治疗有可能成为防治出血性脑损伤的有效措施之一。     

局部应用重组水蛭素对大鼠脑出血神经细胞凋亡的干预作用

目的研究局部应用重组水蛭素对大鼠脑出血神经细胞凋亡的干预作用。方法采用自体血二次注入法建立大鼠脑出血模型,应用凝血酶的特异抑制剂重组水蛭素进行干预,并对大鼠神经功能缺损程度进行评分;分别测定同侧皮质和基底节区TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)阳性细胞以及caspase3免疫反应性(IR)细胞的表达。结果水蛭素干预后,大鼠神经功能缺损程度减轻(P<0.01),同侧基底节区和皮质TUNEL阳性细胞、caspase3免疫反应性IR细胞减少(均P<0.01),尤以同侧皮质减少明显(均P<0.001)。结论水蛭素可明显减少大鼠脑出血后的细胞凋亡数量,减轻大鼠神经功能缺损程度;凝血酶释放很可能是脑出血神经细胞凋亡的机制之一。     

重组水蛭素对大鼠脑出血血肿周边组织炎性反应的干预作用

目的 探讨重组水蛭素对大鼠脑出血血肿周边组织炎性反应的干预作用。方法 采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,分别于注血时、注血后6h及12h血肿内给予重组水蛭素干预;分别检测脑出血组、各水蛭素干预组血肿周边组织肿瘤坏死因子（TNF-α）和细胞间黏附分子-1（ICAM—1）表达以及髓过氧化物酶（MPO）的活性,并与对照组比较。结果 脑出血后3d,血肿周围组织TNF-α免疫反应（IR）细胞数、ICAM—1阳性微血管数和MPO活性明显升高（均P〈0．01）;注血同时及注血后6h给予重组水蛭素可显著减少TNF—α、ICAM—1的表达,降低MPO活性（P〈0．01～0．05）,而出血后12h给予重组水蛭素干预对三者的表达无明显影响。结论 凝血酶参与脑出血血肿周围组织的炎性反应,并可能与TNF—α及ICAM—1的表达有关;出血后6h内采取抗凝血酶治疗可减轻局部炎性反应。     

水蛭素对大鼠实验性脑出血神经组织的保护作用

目的通过实验性大鼠脑出血模型研究水蛭素对脑出血后神经组织的保护作用。方法自体动脉血注入法建立实验性脑出血动物模型,而后实验组注入100U水蛭素,对照组注入生理盐水。于术后2d、3d和5d处死动物。分别行HE染色、caspase-3免疫组化染色和TUNEL染色。结果水蛭素干预组与对照组比较,血肿周围的细胞坏死和组织水肿明显减轻。各时间点caspase-3和TUNEL阳性细胞数均明显减少。结论脑出血后局部应用水蛭素可以减轻脑出血后的组织水肿,抑制神经细胞凋亡,对血肿周围的神经组织具有保护作用。     

微创清除血肿和重组水蛭素治疗脑出血后脑水肿的实验研究

目的探讨微创清除血肿和局部应用重组水蛭素对大鼠出血性脑水肿的治疗作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为生理盐水组、脑出血组、微创组、水蛭素组、微创 水蛭素组,治疗时间点统一为出血后3h,以自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型,应用干-湿重法观察脑水肿变化,HE染色观察水肿细胞形态。每组每时相点(12h、24h、48h、72h、7d)6只大鼠。结果脑出血组和各治疗组脑含水量与生理盐水组在12h、24h、48h比,P<0.05;7d时各组间无明显差异(P>0.05);微创组与脑出血组组间比较,P>0.05;微创 水蛭素组与脑出血组组间比较,P<0.05。结论脑出血后早期(<3h)分别予以微创清除血肿、局部应用水蛭素及二者联合治疗可显著改善脑水肿,尤其微创与凝血酶抑制剂联合应用为脑出血治疗开辟新途径。     

水蛭素对抗脑出血后脑水肿作用机制的研究

目的探讨凝血酶在脑出血后脑水肿形成中的作用和水蛭素抗水肿的作用.方法健康wistar大鼠80只,随机分为4组,每组20只.A组生理盐水+生理盐水;B组生理盐水+水蛭素;C组血+生理盐水;D组血+水蛭素.采用立体定向注射方法,用微量注射器在右侧尾状核部位注入自体未凝血(C、D组)或等量生理盐水(A、B组)50μl,留置20min后同部位2次注射10μl生理盐水(A、C组)或等量水蛭素溶液(B、D组,浓度2u/μl).术后第3d断头取脑,测定脑水含量.结果 A、B组比较无明显差异外,其余各组间均有统计学意义(P＜0.05).结论凝血酶可以引起脑出血后脑组织水肿,水蛭素可以抑制凝血酶所引起的脑水肿,且水蛭素本身不对脑组织产生任何负面影响.     

经腹腔应用阿加曲班对脑出血后凝血酶神经毒性的抑制作用

目的:探讨经腹腔应用阿加曲班治疗脑出血（ICH）后凝血酶神经毒性损伤的可能性。方法:①研究阿加曲班对ICH及凝血酶注入后脑水肿、细胞损伤的影响。Wistar大鼠60只,随机分为假手术对照组（只进针不注血）;ICH组（50μL自体尾血注入右尾状核）;ICH+阿加曲班干预组(50μL自体尾血注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量0.6mL);凝血酶组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核);凝血酶+阿加曲班干预组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量为0.6mL)。各组均n=12,术后24h处死各组大鼠,每组中6只用于检测脑组织水含量,6只检测caspase-3免疫反应细胞及TUNEL阳性细胞数。②经腹腔注射阿加曲班对血肿容积的影响:建立胶原酶ICH大鼠模型组:注入Ⅰ型胶原酶+肝素;阿加曲班组:胶原酶ICH模型成功后3及12h分别经腹腔注入阿加曲班溶液0.9mg·kg^-1,每次注入液体量为0.6mL,测定两组大鼠脑组织血肿血红蛋白的含量(测定血红蛋白A₅₅₀值)以评价阿加曲班对血肿容量的影响。结果:自体血ICH及凝血酶模型大鼠在阿加曲班干预后,ICH组及凝血酶组的TUNEL阳性细胞数、caspase-3阳性细胞数明显下降（P<0.01或P<0.05）,脑组织水肿含量百分比明显降低（P<0.05）。胶原酶ICH血红蛋白A值为（0.45±0.12）,阿加曲班干预组为（0.46±0.09）,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:ICH后3～12h经腹腔注入阿加曲班可减轻ICH后的脑水肿及细胞凋亡性损伤,且没有血肿增大的不良反应。     

凝血酶与神经细胞凋亡的实验观察

目的 观察凝血酶与脑细胞凋亡的关系及使用凝血酶抑制剂(如水蛭素)及钙离子拮抗剂(尼莫地平),能否减轻凝血酶对脑细胞的毒性损伤、存在治疗的有效时间。方法 分别以不同剂量的凝血酶注入SD大鼠尾状核,建立SD大鼠模型,在普通光镜(采用HE染色,TUNEL法)及电镜下观察脑细胞凋亡。SD大鼠随机分为6组。1组:生理盐水组;2组:小剂量凝血酶组;3组:大剂量凝血酶组;4组:小剂量凝血酶与小剂量水蛭素同时注入组;5组:大剂量凝血酶与大剂量水蛭素同时注入组;6组:尼莫地平组。每组每时相(4h、24h、48h、3d、7d)各5只SD大鼠)。结果 建立动物模型后各时相点大剂量凝血酶组凋亡细胞数与其余各组比PO.05。结论 大剂量凝血酶可导致神经细胞凋亡.早期(4h)即出现,其高峰时间在24～48h,可持续1周以上,水蛭素能特异性抑制凝血酶的作用,而钙离子拮抗剂可减少或延迟凋亡细胞的出现。脑出血后血肿释放的凝血酶是早期诱导细胞凋亡的重要因素,如能尽早抗凝血酶治疗或抗凋亡治疗(本实验提示最好在48h内),将为脑出血治疗提供新的途径。     

凝血酶对大鼠脑内MMP-9、MMP-2表达的影响

目的探讨凝血酶对大鼠脑内MMP-9、MMP-2表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组及实验组。实验组脑内注入凝血酶,在不同时间点采用干湿重法测脑水含量,免疫组化方法检测脑内MMP-9、MMP-2的表达。假手术组注入等量生理盐水。结果脑组织水含量在凝血酶注入后6h开始增加,3d达高峰。MMP-9阳性细胞在注射凝血酶后6h即开始表达增加,与对照组相比差异显著(P<0.01),3d达高峰,随后持续下降。阳性微血管数也有相似的变化趋势。MMP-2阳性细胞在注射凝血酶后1d才开始有少量表达,后持续增多,5d达高峰,随后有所下降,但14d仍有明显表达,与对照组相比差异显著(P<0.01)。阳性微血管数也有相似的变化趋势。结论凝血酶在脑出血后脑水肿及脑组织损伤中起了关键的作用,MMP-9、MMP-2参与了急性期脑水肿、炎症反应等过程,MMP-2在损伤修复中可能有重要作用。     

盐源山蛭注射液治疗实验性脑内血肿的研究

目的 探索纯化盐源山蛭注射液脑内血肿吸收作用及其可能机制。方法 采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型,观察山蛭注射液对大鼠脑血肿容积、神经功能缺失评分、血肿周围脑组织水含量及组织病理变化的影响。脑水含量采用称重法,用微血管灌注法观察脑局部微血管。结果 盐源山蛭注射液能使治疗后6天、10天的大鼠脑内血肿较对照组明显缩小（P＜0．05）;脑水肿减轻,神经功能缺损体征,加快脑出血后的病理组织修复。结论 盐源山蛭注射液对大鼠脑出血后脑内肿有治疗作用。     

水蛭素和重组链激酶联合应用于脑出血血肿腔中的实验研究

目的研究水蛭素和重组链激酶联合应用于脑内出血(ICH)血肿腔中对血肿周围脑组织的影响.方法 72只SD雄性大鼠制成ICH模型,随机分为对照组、重组链激酶组、水蛭素 重组链激酶组(联合组),各组分别在ICH后8 h、16 h、24 h、48 h向血肿腔中注入生理盐水、重组链激酶、或重组链激酶加水蛭素.ICH后72 h处死大鼠,观察脑组织中的含水量、Na 、K 以及血脑屏障通透性的变化.结果在ICH后8 h、16 h、24 h、48 h应用重组链激酶,可引起脑组织含水量增加以及Na 、K 的变化(P<0.05),在ICH后8 h重组链激酶组,脑组织中伊文思蓝(Evans blue,EB)含量明显升高(P<0.05).联合组与重组链激酶组比较脑组织的含水量在8 h、16 h、24 h、48 h明显降低(P<0.05),脑组织中EB含量在8 h、16 h、24 h、48 h也明显降低(P<0.05).结论 ICH血肿腔内单独应用重组链激酶可加重ICH血肿周围脑组织的损伤,联合应用水蛭素不但可防治重组链激酶溶化血块时对脑组织的损伤,而且还可降低血肿本身所释放的毒性物质所引起的脑水肿及血脑屏障的破坏.     

脑出血大鼠脑组织IGF-1的表达及其对细胞凋亡的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在实验性大鼠脑出血（ICH）后脑组织中的表达及其对细胞凋亡的影响。方法应用立体定向技术，将自体未抗凝血注入大鼠基底节区以制备ICH模型；将动物分为正常对照组、ICH组及干预组，分别在不同时间断头取脑以制作标本，连续切片分别作IGF-1免疫组化染色及TUNEL染色。结果ICH后2h血肿周围脑组织表达IGF-1，24h达表达高峰，7d时恢复正常；TUNEL染色阳性细胞于ICH后8h开始出现，3d时达高峰，7d时仍有表达；给予外源性IGF-1后，凋亡细胞显著减少，与同时点ICH组相比差别有显著性。结论ICH后IGF-1可抑制细胞凋亡的发生，从而减轻ICH后继发性脑损伤。     

法舒地尔对脑出血大鼠神经功能的影响

目的 探讨法舒地尔对脑出血大鼠神经功能的保护作用及机制。方法 将60只SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、低剂量法舒地尔组（低剂量组）和高剂量法舒地尔组（高剂量组）;每组15只。通过注射自体脑内动脉血制作脑出血模型,假手术组只暴露硬脑膜,不注射动脉血。低剂量组腹腔注射1 mg/（kg·d）法舒地尔,高剂剂量组腹腔注射10 mg/（kg·d）法舒地尔。模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。药物干预4周后,使用Y-迷宫法评价大鼠学习记忆功能,记录大鼠错误反应次数;使用Longa法评价大鼠神经功能。干湿重法测定脑组织含水量,使用硝酸溶解法测定Na+、K+含量,TUNEL染色分析神经细胞凋亡率,免疫印迹法分析凋亡相关蛋白表达（Bax、Bcl-2和Caspase-3）。结果 相比假手术组,模型组大鼠逃离错误次数、Longa神经功能评分、脑组织含水量、脑组织Na+离子水平、神经细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,脑组织K+离子水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。相比模型组,法舒地尔模型逆转大鼠脑出血后上述变化（P<0.01）,而且高剂量法舒地尔明显优于低剂量法舒地尔（P<0.01）。结论 大鼠脑出血后,法舒地尔可以调节神经细胞Na+、K+离子平衡并减少脑组织水肿、抑制神经细胞凋亡,保护大鼠神经功能     

黄芪注射液对脑出血大鼠细胞凋亡影响的研究

目的 研究脑出血大鼠细胞凋亡的规律及黄芪注射液对出血后脑组织含水量和血肿周围区细胞凋亡的影响.方法 采用肝素化Ⅶ型胶原酶脑内注入法制作大鼠(160只)脑出血模型.制模后根据药物干预的时间随机分成4个治疗组(手术同时组,术后6 h组、12 h组、24 h组,每组32只)和出血对照组(共32只).各治疗组每日经腹腔给予黄芪注射液1次,各组分别于第4 d及第7 d处死.再从上述5组中各选取12只大鼠用于脑组织含水量测定(干湿法),观察不同时间开始治疗对大鼠脑组织含水量、血肿周围区细胞凋亡(脑组织切片TUNEL荧光染色)的影响.结果 治疗组[出血同时组(第4 d)、6 h组(第4 d、7 d)、12 h组(第4 d)]脑组织含水量较出血对照组明显减少(均P<0.01);脑出血后6 h血肿周围凋亡细胞开始出现,3 d达高峰,7 d后明显减少;各治疗组血肿周围细胞凋亡均明显降低,出血同时治疗组和6 h治疗组比24 h治疗组细胞凋亡率明显降低(均P<0.01);脑出血后存在血管内皮细胞凋亡.结论 脑出血后血肿周围神经细胞凋亡是脑出血后继发性神经损伤机制之一;黄芪注射液治疗脑出血,具有减轻脑水肿和神经细胞凋亡作用,以早期用药疗效更好.     

脑出血后脑水肿经时变化机制的探讨

目的 研究脑出血(mtracerebral hemorrhage，ICH)后血肿周围脑水肿与血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)随时间变化的机制，从而为预防脑水肿提供依据。方法90只大耳白兔随机分为3组。1组：在立体定向仪下将300μl生理盐水注入兔左侧基底节；2组：注入200μl自身动脉血与100μl生理盐水；3组：注入200μl自身动脉血与100μl水蛭素。每组每时相(6h、12h、24h、48h、72h)各6只兔。脑组织含水量采用干湿重法测量，血脑屏障的通透性测定采用伊文思兰法。结果动脉血组及水蛭素干预组血肿周围脑组织含水量均在48h达到高峰．此后逐步降低。动脉血组伊文思兰(EB)于24h到达高峰，水蛭素干预组伊文思兰(EB)于48h达高峰。结论脑出血后脑水肿是多种因素综合作用的结果。早期可能和血块凝缩、流体静力压有关；至中期时凝血酶是主导因素；后期则主要由于红细胞裂解物的损害。     

丹参酮ⅡA对脑出血大鼠脑组织HIF-1α和VEGF表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对脑出血大鼠的干预作用以及对HIF-1α和VEGF表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、脑出血组、丹参酮ⅡA干预I组和II组,除假手术组外,其余大鼠均通过注射胶原酶的方法建立脑出血模型,丹参酮IIA干预Ⅰ组和Ⅱ组分别腹腔注射丹参酮IIA30 mg/kg,每天一次和30 mg/kg,每天两次,共给药15 d。给药完成后,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,称重法计算脑组织的含水量,免疫组化法与实时荧光定量PCR检测脑组织中HIF-1α和VEGF的蛋白表达与mRNA表达。结果与脑出血组相比,丹参酮IIA干预组大鼠的神经功能缺损评分显著升高,脑组织含水量显著下降,脑组织中HIF-1α和VEGF的蛋白表达与mRNA表达显著升高。结论丹参酮IIA对脑出血大鼠脑组织具有保护作用,其作用机制可能与HIF-1α和VEGF因子的表达有关。