未致敏小鼠实验性日本血吸虫虫卵肉芽肿中淋巴细胞的动态观察

将日本血吸虫虫卵经尾静脉注入正常小鼠,观察沉积在肺血管床形成的虫卵肉芽肿内淋巴细胞的动态变化。结果表明,注卵后第一天即见淋巴细胞浸润,随后,淋巴细胞均数及其所占反应细胞总数的构成比逐渐增加。酯酶染色结果表明,注卵后10天内酯酶染色阳性细胞高于阴性细胞数,第10天后发生逆转;至第35天时更为明显。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的模拟抗原在成虫,虫卵？…

应用免疫组化和免疫电镜技术观察了日本血吸虫单克隆ａｎｔｉ－ａｎｔｉ－ｉｄ ＮＰ３０的模拟抗原在成虫、虫卵的分布和定位。单克隆ａｎｔｉ－ｉｄＮＰ４１作为第一抗体。实验结果表明，ＮＰ３０的模拟抗原定位于成虫的体膜、消化管上皮、子宫内膜上皮及虫卵的卵膜。提示ＮＰ３０的模拟抗原具有其共同抗原的特性，ＮＰ３０具有作为抗病疫苗候选分子的潜能。     

干扰素对日本血吸虫虫卵肉芽肿小鼠肺模型的免疫调节作用

研究目的探讨干扰素在虫卵肉芽肿病理过程中的作用及血吸虫病的发病机制。方法用纯系NH小鼠感染日本血吸虫虫卵建立小鼠肺部虫卵肉芽肿模型。观察干扰素α对肉芽肿及小鼠免疫反应的影响感染小鼠后分别于第4、8、16、24、32天解剖动物，检测其血清抗体滴度、胸腺T细胞百分比和肉芽肿最大横切面面积。结果干扰素组小鼠抗体滴度、胸腺T细胞百分比在不同时程呈动态变化趋势，其肉芽肿面积在第8天明显增大，以后逐渐缩小。结论干扰素对血吸虫虫卵肉芽肿病变过程具有免疫调节作用。     

宿主免疫因素对血吸虫生长、发育、生殖和虫卵肉芽肿形成影响的研究进展

血吸虫病是一种感染性疾病.血吸虫在宿主体内的发育生殖及其对宿主产生的病理损害,均与宿主对血吸虫感染产生的免疫应答有关.传统观念认为,宿主感染血吸虫后产生的免疫应答可部分杀灭其体内寄生的童虫并限制其再感染.然而,有流行病学资料和实验室研究提示,宿主免疫应答中某些因素可能有助于血吸虫的发育与生殖.本文就宿主免疫因素对血吸虫生长、发育、生殖和虫卵肉芽肿形成影响的研究进展进行简要综述.     

免疫调节剂SCA诱导的抗血吸虫性肝病变及其机制的研究

目的探讨感染日本血吸虫的BALB/c小鼠诱导的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变效应及其分子机制.方法取鼠肝连续切片,HE染色,光镜下测量肉芽肿大小(平均面积和体积);用流式细胞仪测定鼠脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+百分数及二者的比值;用ELISA检测小鼠血清特异性抗体IgG及其亚类IgG1和IgG3水平.结果服用SCA(SCA-1,SCA-2)实验小鼠肝内肉芽肿病变均非常显著地小于感染对照组(均P＜0.01);实验鼠肝内虫卵肉芽肿的平均面积和体积,与对照组比较,减小率达40.71%～53.08%;实验组CD4+/CD8+值(2.72～3.67),显著地高于对照组(1.89)(均P＜0.05);用药组的特异性抗体IgG及其亚类IgG1和IgG3水平,均显者地高于对照组(均P＜0.01或0.05).结论中药合剂SCA是一种新型、高效无毒的免疫调节剂,其抗病免疫的分子机制与细胞免疫和体液免疫应答的增强密切相关.     

碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的实验观察

目的观察碳酸氢铵体外杀灭日本血吸虫虫卵的药效。方法以碳酸氢铵作为实验组,以敌百虫作为阳性对照组,以清水作为空白对照组。在室温下用不同浓度的农用碳酸氢铵,作用于一定数量的含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织。观察不同时间、不同碳酸氢铵浓度下虫卵的孵化情况。结果在室温下农用碳酸氢铵在200mg/L浓度时浸泡含有日本血吸虫虫卵的小鼠粪便和肠道组织,12h、24h日本血吸虫虫卵的孵化率为0。200mg/L的碳酸氢铵体外持效观察7天内均能有效抑制和杀灭虫卵。结论碳酸氢铵体外在200mg/L时有明显抑制和杀灭日本血吸虫虫卵的作用。     

IL-12对日本血吸虫重组SjGST-Sj32免疫小鼠攻击感染后虫卵肉芽肿形成的调节

目的观察白细胞介素-12(IL-12)对重组日本血吸虫谷胱苷肽-S-转移酶-32kD融合蛋白(rSiGST-Si32)蛋白免疫小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。方法BALB/c小鼠36只随机分成IL-12加rSjGST-Sj32组、rSiGST-Si32组和磷酸盐缓冲液(PBS)组，第3次免疫后4周，经腹部贴片感染10条尾蚴，45天后杀鼠取肝组织，常规染色，光镜下进行组织学观察及单个虫卵肉芽肿大小的测量。结果与PBS组和rSjGST-Sj32组相比，IL-12加rSiGST-Sj32组虫卵肉芽肿体积明显减少(P＜0.01)。在形态学上，PBS组和rSjGST-Sj32组肝脏虫卵肉芽肿周围有大量嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润，还有少量的纤维母细胞、类上皮细胞等，有的肉芽肿已有纤维形成。IL-12加rSjGST-Sj32组的肝脏虫卵周围仅有少量的嗜酸性粒细胞聚集，很少见到胶原纤维。结论IL-12能下调rSjGST-Sj32蛋白免疫小鼠肝脏虫卵肉芽肿的应答。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要于３０．８ＫＵ到４９．６ＫＵ之间，其主要反应带为４９．６ＫＵ，３９．７ＫＵ和３３．７ＫＵ。推测４９．６ＫＵ和３３．７ＫＵ这两怕 诱导宿主产生抗卵或熟过程中可能起着重要作用。     

血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化的动态观察

目的:从形态学和血清学角度探讨血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化之间的关系.方法:用血吸虫尾蚴感染新西兰家兔,建立血吸虫病动物模型.采用石蜡切片、HE染色动态观察日本血吸虫病急性期、慢性期、晚期肝脏虫卵肉芽肿大小,放射免疫检测仪测定不同时期的血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量的变化.结果:感染第6周家兔肝脏出现虫卵肉芽肿,第12周肉芽肿缩小,周围发现成纤维细胞,至第21周时虫卵肉芽肿明显缩小,肝脏纤维化程度增高,并有纤维组织增生.同时,血清HA含量检测显示随感染时间延长,体内HA水平逐渐升高.结论:血吸虫病是一个持续进展的过程,包含虫卵肉芽肿与肝脏纤维化两大病理变化,两者间发病机制不同,肝纤维化是虫卵肉芽肿的间接延伸.     

日本血吸虫感染小鼠CD8+T细胞亚群的变化及其与肝脏免疫病理的相关性研究

目的:研究CD8+T细胞中Tc1(CD3+CD8+ IFN-γ+)?Tc2(CD3+CD8+IL-4+)和调节性CD8+T细胞(CD8+CD28-)亚群在日本血吸虫感染导致的小鼠肝脏免疫病理发生发展中可能的作用?方法:取正常小鼠及日本血吸虫感染8周的小鼠脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测Tc1?Tc2和调节性CD8+T细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例及绝对数量,并分析感染血吸虫不同时期的CD8+T细胞亚群与血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿和肝纤维化指标的关系?结果:与正常对照小鼠比较,日本血吸虫感染后小鼠脾脏的单个核细胞绝对数显著增加(P < 0.001);日本血吸虫感染小鼠脾细胞中T细胞(CD3+)和CD8+T细胞(CD3+CD8+)的比例及绝对数均显著增加(P均 < 0.05);此外,感染小鼠脾淋巴细胞中Tc1?Tc2?调节性CD8+T比例均显著增加(P均 < 0.001);与正常小鼠相比,感染小鼠Tc2/Tc1比率显著增加(P < 0.001)?此外,多元线性逐步回归分析显示Tc2和调节性CD8+T细胞是影响血吸虫感染所致肝脏免疫病理的主要影响因素?结论:CD8+T细胞及其Tc1?Tc2?调节性CD8+T细胞亚群在日本血吸虫感染宿主的肝脏肉芽肿和纤维化发生发展中可能发挥重要作用?其中,Tc2和调节性CD8+T细胞可能分别促进/抑制血吸虫感染所致的肝脏免疫病理?     

Schistosoma japonicum: establishment of a mouse model that demonstrates concomitant immunity

Concomitant immunity to schistosome reinfection in vivo is generally thought to be the immune response induced by and relying on living adult worms. However, a few authors have suggested that the mechanism of resistance may be related to the hepatic pathology caused by the primary infection. The vascular pathology might     

日本血吸虫虫卵特异性蛋白的基因克隆及多态性分析

目的日本血吸虫虫卵中可能参与免疫调节的分子的克隆及其多态性分析。方法在NCBI数据库及国家人类基因组南方研究中心（Chinese National HumanGenome Center,CHGC）日本血吸虫基因数据库中筛选出两个类 IPSE（IL-4-inducing principle of S. mansoni eggs）基因（AY812212和AY223149）、一个类蛇毒过敏样蛋白基因（AY812797）和-个类亲环素蛋白基因（AY814078）。用RT—PCR检测表达谱。并从日本血吸虫虫卵cDNA文库中克隆这四个基因。定向克隆入质粒pET28-a,经双酶切鉴定筛选得重组的阳性克隆后测序。所得序列应用生物信息学分析软件VectorNTISuite7．0、Mega4．0和在线软件Rankpep进行初步分析。结果成功构建了4个重组质粒pET28a-223149,pET28a-812212,pET28a-812797和pET28a-814078,并测定和分析了这4个基因。结论日本血吸虫虫卵基因存在基因多态性,可能与免疫逃避有关。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原对B细胞的活化作用及其机制的初步研究

目的:观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)是否能够诱导小鼠B细胞活化及其机制?方法:SEA和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测B细胞表面CD80?CD86及CD40的表达和B细胞细胞周期的改变;用荧光染料CFSE分裂法检测B细胞增殖;用ELISA法检测培养上清中白介素(IL-)10?IL-6?γ干扰素(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的水平?同时利用ERK?JNK?p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞分泌细胞因子水平的变化?结果:SEA与LPS组可以活化小鼠脾脏CD19+B细胞,使其表面高表达CD80?CD86和CD40;同时诱导S/G2期的B细胞比例显著增加,SEA可以诱导B细胞增殖?SEA与LPS能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10?IL-6?分别阻断NF-κB?ERK?JNK和p38MAPK信号转导通路后可以抑制B细胞IL-10和IL-6的分泌?结论:SEA可以上调小鼠脾脏B细胞表面共刺激分子表达?促进其增殖?同时,SEA可以通过NF-κB?ERK?JNK和p38MAPK信号转导通路刺激小鼠B细胞分泌细胞因子?     

The pathogenesis of liver fibrosis in schistosomiasis japonica: Sequential qualitative and quantitative immunohistochemical study of extracellular components in schistosomal egg granulomas in murine Liver

Summary A combined morphological and qualitative and quantitative immunohistochemical study of fibronectin (FN) in schistosomal egg granulomas was carried out to investigate sequential behavior of FN and to define the sequence of events in hepatic fibrosis in schistosomiasis, as well as to verify the factors which initiate and promote the process. The results showed that FN could be demonstrated as early as 4 weeks after infection, reached the highest staining intensity at the 6th week, and decreased gradually as fibrosis progressed. In the early stage, FN might be produced by macrophages and sinusoidal cells, acting as a chemotactant for fibroblasts. In the later stages, FN might be derived primarily from fibroblasts and play an important role in guiding collagen deposition. It can be concluded that FN might be the initiating factor for the fibrogenesis and that the inflammatory infiltrate around granulomas is the origin of FN, which might be attributable to the continuous fibrosis of granulomas, and, finally, to the development of clay pipe-stem fibrosis.     

基因芯片检测日本血吸虫及其现场应用

目的:建立敏感、特异的检测日本血吸虫的基因芯片并对其应用价值进行评价。方法:根据日本血吸虫高度保守的编码免疫原性毛蚴抗原5D基因,筛选、设计聚合酶链反应(PCR)的引物和基因探针,制成日本血吸虫基因芯片。采用基因芯片对江西、湖南和安徽三省现场采集的钉螺进行检测。检测时抽提待测钉螺的DNA,进行PCR扩增及不对称PCR荧光标记,然后与检测芯片杂交,最后进行扫描及分析。结果:建立的基因芯片能特异、敏感地检测出感染性钉螺,江西、湖南感染性钉螺的检出率为100％,安徽省品系的感染性钉螺检出率略低。结论:成功地建立了检测日本血吸虫的基因芯片,具有较高的实际应用价值。     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

日本血吸虫新基因的克隆及分析

目的：克隆并分析日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）新基因,提供有效的疫苗候选分子。方法：用Sj雄虫可溶性抗原免疫家兔血清为探针筛选Sj成虫cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果：共筛选得11个阳性克隆,经分析有2个新基因,分别是Sj-P8（GenBank注册号AF517843）和Sj肌球蛋白cDNA序列（GenBank注册号AY770506）,分别编码含75个氨基酸的跨膜蛋白和含212个氨基酸的蛋白片断。结论：Sj-P8和Sj肌球蛋白cDNA序列可能为日本血吸虫疫苗的研究提供有价值的材料。