人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性研究

目的：探索器官纤维化形成中调控Ⅰ型胶原基因高水平转录的启动片段。方法：从人α１（Ⅰ）胶原基因转录起始点上游－２．５ｋｂ￣＋４２ｂｐ的片段中,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的质粒组成６个重组体,脂质体法转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞。ＣＡＴ－ＥＬＩＳＡ测定细胞ＣＡＴ表达水平以比较各重组体的启动子活性。结果：－２４８３￣＋４２ｂｐ,－２６８￣＋４２ｂｐ     

细胞间粘附分子—1反义DNA体外对内皮细胞细胞间粘附分子—1？…

目的：研究细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的 ＤＮＡ对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的抑制作用。方法：构建ＩＣＡＭ－１反义ＤＮＡ载体,用脂质体转染内皮细胞,ＴＮＦα刺激后,流式细胞术检测转染细胞表面ＩＣＡＭ－１蛋白的表达。结果：酶切鉴定证明,１．４ｋｂ的ＩＣＡＭ－１ＤＮＡ片段后向连接到ｐｃＤＮＡ３表达载体,;流式细胞术检测显示,正常细胞加ＴＮＦα刺激后,表面ＩＣＡＭ－１表达明显升高,转洒细胞加ＴＮＦα     

抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达

目的：构建多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）的真核表达载体,将其转入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础．方法：利用ＢａｍＨⅠ与ＥｃｏＲⅠ从ｐＵＣ１９－ｐ１６质粒上切下ＭＴＳ１ｃＤＮＡ片段并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,构建成ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６;利用脂质体（Ｆｕ－ＧＥＮＥＴＭ６）介导的基因导入法将ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６导入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中;采用ＡＢＣ法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测,观察ｐ１６蛋白的表达．结果：成功构建了ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并进行酶切鉴定;转染后经Ｇ４１８筛选２ｗｋ出现阳性克隆８９１０－ｐ１６,并检测到其中有ｐ１６蛋白的稳定表达．结论：成功构建ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并可在人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中得到稳定表达．     

肿瘤坏死因子—α,转化生长因子—β1,血小板源性生长因子,？…

目的 研究支架术后不同时间局部食管组织中相关细胞因子的表达情况,以及与再狭窄形成的关系。方法 采用免疫组化（ＡＢＣ法）检测支架术后１、２、４、８周组织中肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）,转化生长因子－β１（ＴＧＦβ１）、血小析 性生长因子（ＰＤＧＦ）、内皮素１（ＥＴ１）的表达及其变化规律。结果 支架术后１周组织即开始表达ＴＮＦ－α,术后２周ＴＮＦ－α,ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＥＴ１表达均明显增强,术后     

Zf9对TGFβ1的转录激活研究

目的：探讨新发现的转录因子Ｚｆ９对肝纤维化中重要的细胞因子ＴＧＦβ１启动子的转录激活作用。方法：以培养的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞、人成纤维细胞及人ＨｅｐＧ２细胞为靶细胞,共转染Ｚｆ９表达质料ｐＣＩｎｅｏＺｆ９与含ＴＧＦβ１启动子报告基因ＣＡＴ的重组体,测定报告基因ＣＡＴ的表达活性。结果：在３种细胞中的Ｚｆ９对ＴＧＦβ１启动子都有反式激活作用。Ｚｆ９对ＴＧＦβ１的反式激活有明显剂量依赖性。结论：转录因子Ｚ     

阿片受体拮抗剂在TNF－α所致体温升高中的作用

为探索细胞介素ＴＮＦ－α升体温效应与下丘脑前部、视前区（ＰＯＡＨ）中的阿片受体的关系。应用脑神经核团微量注射方法给自由状态下的雄性ＳＤ大鼠ＰＯＡＨ区微量注射ＴＮＦ－α致热源。给药前３０ｍｉｎ分别用通常阿片受体拮抗剂Ｎａｌ（１０～２０μｇ）和特异性阿片受体μ、δ和κ的拮抗剂ＣＴＡＰ（１．０～２．５μｇ）、ＮＴＩ（０．２５～０．５μｇ）和ｎｏｒ－ＢＮＩ（０．１～３μｇ）对ＰＯＡＨ做预处理。结果：单独给ＴＮＦ－α可致剂量相关的体温升高△Ｔ（１℃～１．４℃）；经Ｎａｌ１０μｇ，ＣＴＡＰ１．０μｇ和ＮＴＩ０．５μｇ处理后使ＴＮＦ－α的升体温效应减弱；用Ｎａｌ２０μｇ，ＣＴＡＰ２．５μｇ和ＮＴＩ０．２５μｇ处理后可完全阻断ＴＮＦ－α所致的体温升高；ｎｏｒ－ＢＮＩ（０．１～３μｇ）对ＴＮＦ－α的升体温效应无影响。     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病毒载体

目的：为使外源性 Ｔ Ｎ Ｆ, Ｉ Ｆ Ｎ 基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类（ Ｍ Ｈ ＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效 应,构建在 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子调控、 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ连接下协同表达 Ｔ Ｎ Ｆα和 Ｉ Ｆ Ｎβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果：从ｐ Ｇ Ｌ３ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｆ及ｐ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ中切下 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ和 Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,先后插入ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ （＋ ）, 构建成ｐ Ｂ Ｌ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ。回收 Ｔ Ｎ Ｆα Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｌｉｎｋ１ 中,构建成 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（＋ ）。回收 Ｂ７ｐｒｏ Ｔ Ｎ Ｆ Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ Ｉ Ｆ Ｎβ基因片段,连入缺失 Ｅ１ 和 Ｅ３ 区及启动子的 Ａｄ ＢｇｌⅡ中, 构建成 Ｈ Ｌ Ａ Ｂ７ 启动子驱动表达的 Ａｄ Ｂ７ Ｔ Ｎ Ｉ Ｒ Ｉ Ｆ（－ ）。结论：此两种载体为“正反馈”式放大肿瘤免疫原性提供一条新途径。     

膀胱移行细胞癌P21^WAF1／CIP1蛋白表达与临床病理的相关研究

目的：研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＣＤＫＩ）ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１在膀胱移行细胞癌中表达情况,并探讨ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１表达与膀胱移行细胞癌临床病理指标的相关性。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法检测９１例膀胱移行细胞癌（其中包括ＴａＧ１期膀胱移行细胞癌１５例）ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１蛋白表达情况,并探讨ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１表达与膀胱移行细胞癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、ＴＮＭ分期等的相关性。结果：膀胱移行细胞癌ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性表达率为４８．４％（４４／９１）;其中高、中分化的膀胱移行细胞癌ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性表达率为５８．５％（３８／６５）,低分化为２３．１％（６／２６）,组间差异显著（Ｐ＜０．０５）;ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性表达率ＴａＧ１期膀胱移行细胞癌为９３．３％（１４／１５）,Ｔ１＋Ｔ２期为５２．１％（２５／４８）,Ｔ３＋Ｔ４期为１７．９％（５／２８）,３组间差异显著（Ｐ＜０．０５）;ＴＮＭ分期Ⅰ～Ⅱ期膀胱移行细胞癌ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性表达率为５７．４％（３５／６１）,Ⅲ～Ⅳ期为３０．     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病？…

目的 为使外源性ＴＮＦ,ＩＦＮ基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类ＭＨＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效应,构建在ＨＬＡ－Ｂ７启动子调控、ＩＲＥＳ连接下协同表达ＴＮＦα和ＩＦＮβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果 从ｐＧＬ３Ｂ７ＴＮＦ及ｐＩＲＩＦ中切下Ｂ７ｐｒｏ－ＴＮＦ和ＩＲＥＳ－ＩＦＮβ基因片段,先后插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ（＋）,构建成ｐＢＬＢ７ＴＮＩＲＩＦ。回收ＴＮＦα－ＩＲＥＳ     

矢车菊素－３－葡萄糖苷通过降低ＳＴＡＴ３活化抑制ＴＮＦ－α诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

【目的】 探讨矢车菊素－３－葡萄糖苷（Ｃ３Ｇ）对ＴＮＦ－α诱导的血管平滑肌增殖的影响及可能的机制。【方法】 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ） 购于ＡＴＣＣ,体外培养后以Ｃ３Ｇ对细胞进行预处理后观察ＴＮＦ－α的促细胞增殖作用;Ｄｉｈｙｄｒｏｅｔｈｉｄｉｕｍ （ＤＨＥ）荧光染色检测ＶＳＭＣ在ＴＮＦ－α作用下的活性氧（ＲＯＳ）生成情况;实时定量ＰＣＲ检测细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活化蛋白１（ＮｏｘＡ１）的ｍＲＮＡ水平;蛋白质印迹法检测细胞内ＮｏｘＡ１、信号转导与转录激活因子３ （ＳＴＡＴ３）、磷酸化ＳＴＡＴ３及β－ａｃｔｉｎ的表达水平。统计学方法采用单因素方差分析。【结果】 Ｃ３Ｇ预处理能够抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖,该作用呈现剂量、时间依赖性。联合应用５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｃ３Ｇ及１００ μｍｏｌ／Ｌ ａｐｏｃｙｎｉｎ显著减少ＴＮＦ－α诱导ＲＯＳ的生成。Ｃ３Ｇ联合ａｐｏｃｙｎｉｎ较Ｃ３Ｇ或ａｐｏｃｙｎｉｎ单独孵育更能显著抑制ＴＮＦ－α处理下ＶＳＭＣ内ＮｏｘＡ１基因的表达及ＳＴＡＴ３蛋白的磷酸化。应用ＲＯＳ清除剂触媒（ｃａｔａｌａｓｅ ２ ０００ Ｕ／ｍＬ）能显著抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖及ＳＴＡＴ３蛋白活化。【结论】 Ｃ３Ｇ对抗ＴＮＦ－α诱导ＶＳＭＣ增殖的机制很可能是通过削弱ＮｏｘＡ１导致的ＲＯＳ生成,从而抑制ＳＴＡＴ３蛋白的激活。     

TGF—β1对瘢痕对纤维细胞α—SMA表达的诱导作用

目的 研究转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对瘢痕成肌纤维细胞中α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）表达的诱导作用。方法 以５例增生性瘢痕为标本,３例正常瘢痕为对照,２成纤维细胞二维培养和三维培养体系及ＬＳＡＢ免疫组织化学染色技术,观察了在不同ＴＧＦ－β１浓度条件作用下,来源的于增生性瘢痕和正常瘢痕在成纤维细胞表达α－ＳＭＡ的情况。结果 （１）不同浓度的ＴＧＦ－β１诱导瘢痕成纤维细胞表达α－ＳＭＡ的作用不     

风湿性疾病患者滑膜培养上清液中IL—1,TNF—α及PGE2的…

通过关节镜技术采取膝关节滑膜并进行培养，分别于第１，４，７，１４，２８天收获上清液，测定３３例上清液ＩＬ－１生物活性，共中类风湿关节炎（ＲＡ）１１例：测定３０例ＴＮＦ－α生物活性，ＲＡ９例；测定４４例ＰＧＥ２含量，ＲＡ１１例。结果表明：ＩＬ－１增殖指数（ＧＩ），ＴＮＦ－α杀伤率（ＫＲ），ＲＡ组明显高于非滑膜炎组（对照组），两组比较差异显（Ｐ＜０．０５）；且ＩＬ－１与ＴＮＦ－α高值出现的滑膜炎组（对     

干扰素和卡介苗对肝癌大鼠枯否细胞释放TNF和IL－1的影响

以二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，分别给予正常大鼠和肝癌大鼠干扰素（ＩＦＮα－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用。从各组正常大鼠和肝癌大鼠肝中分离出枯否细胞（ＫＣ），体外与人肝癌细胞联合培养，分别测定培养液中的ＴＮＦ和ＩＬ－１含量。从未用免疫制剂的肝癌大鼠肝中分离出ＫＣ，体外培养给予ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或两者联用，测定ＴＮＦ和ＩＬ－１。结果显示：ＩＦＮα－２ｂ或ＢＯＧ均促进ＫＣ（正常和肝癌大鼠，在体和离体）释放ＴＮＦ和ＩＬ－１，并均以两者联用效果最佳，使ＫＣ释放ＴＮＦ为对照组的２～５倍，ＩＬ－１活力提高５０％～８０％。此结果为联用免疫制剂增强ＫＣ抗肝癌细胞的最佳效果提供了科学依据。     

H—2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

目的 克隆Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ,克隆入双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ,ＰＡ３１７包装出重组病毒后,分别感染ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＯＳ７及ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ分析目的基因表达,ＦＡＣＳ分析Ｈ－２Ｋ＾ｂ在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ介导,分别建立了Ｈ－２Ｋ＾ｂ基因转导细胞：ＮＩＨ３Ｔ     

环孢素A联合雷公藤单体T_4对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成及Ⅳ型胶原α1、转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的探讨环孢素Ａ（ＣsＡ）、雷公藤单体Ｔ４单独或联合使用对肾小球系膜基质合成的影响及可能机制。方法用ＥＬＩＳＡ法测定人系膜细胞培养上清Ⅳ型胶原含量,用ＲＴ－ＰＣＲ法测定人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原α１ｍＲαＮＡ（Ｃｏｌｌα１（Ⅳ）ｍＲＮＡ）、转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ的表达。结果ＣｓＡ可双向调节人系膜细胞Ⅳ型胶原的合成,ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ为促进作用,ＣｓＡ０．０１～０．１ｕｇ／ｍｌ为抑制效应。Ｔ４剂量依赖性促进Ⅳ型胶原产生。两药联合应用具有协同效应,小剂量ＣｓＡ和Ｔ４联合在获得较强免疫抑制作用的同时促胶原生成作用较弱。ＣｓＡ１．０ｕｇ／ｍｌ和Ｔ４１０ｎｇ／ｍｌ均可上调人系膜细胞Ｃｏｌｌβ１（Ⅳ）、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达,两者变化趋势基本一致。结论ＣｓＡ和Ｔ４均参与调节基质合成,两药小剂量联合促胶原生成作用减轻,这一作用可能由ＴＧＦβ１介导发生于转录水平。     

大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

化学合成的转化生长因子α七肽的抗体制备及对BT_（325）细胞增殖的抑制作用

目的：转化生长因子α（ＴＧＦα）抗体可被用于识别和定位细胞产生的ＴＧＦα及抗肿瘤，作者以化学合成的七肽为抗原制备抗体，并观察其生物效应．方法：采用碳化二乙胺为交联剂，将人工化学合成的ＴＧＦα七肽（ＮＨ３－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ａｓｐ－ＣＯＯＨ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联，并以此作抗原免疫家兔制备ＴＧＦα抗体，观察此抗体的生物学效应．结果：ＴＧＦα七肽合成正确；七肽与ＢＳＡ偶联率达１２．５８∶１；免疫动物抗血清先经硫酸铵沉淀分离，再经用连接有ＴＧＦα七肽胃蛋白酶（ｐｅｐｓｉｎ）偶联物的活化ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化，ＴＧＦα七肽抗体得率为０．７ｇ／Ｌ抗血清；免疫细胞化学染色显示该抗体能识别ＢＴ３２５细胞产生的ＴＧＦα；ＴＧＦα七肽抗体具有剂量依赖性抑制肿瘤细胞（ＢＴ３２５细胞）生长的作用．结论：作者制备的ＴＧＦα七肽抗体具有识别、定位细胞产生的ＴＧＦα和抗肿瘤的生物学效应．     

化学合成的转化生长因子α七肽的抗体制备及对BT325细胞增殖…

转化生长因子α（ＴＧＦα）抗体可被用于识别和定位细胞产生的ＴＧＦα及抗肿瘤，作以化学合成的七肽为抗原制备抗体，并观察其生物效应。方法：采用碳化二乙胺为交联剂，将人工化学合成的ＴＧＦα七肽（ＮＨ３－Ｖａｌ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｈｅ－Ａｓｎ－Ａｓｐ－ＣＯＯＨ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联，并以此作抗原免疫家兔制备ＴＧＦα抗体，观察此抗体的生物学效应，结果：ＴＧＦα七肽合成正确，七肽与ＢＳＡ偶联     

雷公藤多甙和IL—10对人DC内IL—12p40和DC—CK1mRNA转录的影响

目的：研究雷公藤多甙和ＩＬ－１０对ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０和ＤＣ－ＣＫ１转录的影响。方法：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体外培养体系,从人外周血单个核细胞中诱导ＤＣ,ＩＬ－１２０ｐ４０和ＤＣ衍生的趋化因子１（ＤＣ－ＣＫ１）转录采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。结果：通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦα体培养体系可以获得成熟功能性ＤＣ,雷公藤多甙和ＩＬ－１０能抑制ＤＣ内ＩＬ－１２ｐ４０     

细胞因子对人绒毛瘤细胞JARβHCG分泌的影响

人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）的分泌调节机制至今仍不详。本文以经绒毛瘤细胞ＪＡＲ作为人滋养层细胞的模型，研究了ＩＦＮα、ＴＮＦ－α、Ｍ－ＣＳＲＦ、ＴＧＦ－β、ＵＫ和ＮＧＦ等细胞因子对β－ＨＣＧ分泌的影响。结果显示，ＩＦＮα和ＴＮＦ－α能显著地促进βＨＣＧ的分泌的并具有剂量依赖性，ＵＫ则能显著地抑制β－ＨＣＧ的分泌，而Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β和ＮＧＦ则无明显作用。细胞活性实验表明，高浓度的ＩＦＮα、ＴＮＦ