褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

豆根管食通口服液对人食管癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：观察中药复方制剂——豆根管食通口服液对体外培养的食管癌Eca－109细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法：随机取Eca－109细胞分为三组：实验组、阳性对照组和空白对照组，采用MTT分析法测定不同浓度的豆根管食通口服液对Eca－109细胞增殖的抑制作用；通过倒置显微镜、HE染色观察凋亡细胞；采用免疫组织化学法测定Eca－109细胞内Bcl－2和Bax蛋白的表达。结果：MTT结果显示。豆根管食通口服液对Eca－109细胞的增殖有明显的抑制作用。倒置显微镜、光学显微镜下可发现药物作用组出现细胞核固缩、核碎裂等。免疫组织化学结果显示药物作用组bcl—2蛋白表达降低，bax蛋白表达增高（P〈0．01）。结论：豆根管食通口服液对人食管癌Eca－109细胞系有抗增殖及诱导凋亡作用，其分子机制可能是下调bcl－2基因表达．上调bax基因表达。     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响

目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P<0.05）。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P<0.05）。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低（P<0.05）。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P<0.05）,透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

冰片与顺铂联用对Eca109/DDP细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果：递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)。单用冰片浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P＞0.05),但与DDP1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞的增殖（P＜0.05）,并促进DDP诱导Eca109(DDPr)细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多（P＜0.05）,S期细胞、G2期细胞明显减少（P＜0.05）;细胞的凋亡率明显增加（P＜0.05）。结论：冰片促进DDP抑制Eca109(DDPr)细胞增殖可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期、增加细胞凋亡有关。     

PI3K/Akt抑制剂对人食管癌EC109细胞的生长抑制及促凋亡作用研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)特异性抑制剂LY294002对人食管癌EC109细胞生长抑制及凋亡的影响。方法通过不同浓度的LY294002作用于人食管癌EC109细胞,MTT法检测EC109细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst荧光染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞形态学变化。结果经LY294002作用后,EC109细胞凋亡率增加,其生长明显受到抑制,经40μmol/L的LY294002作用72h后,荧光染色和相差显微镜观察到EC109细胞呈现典型细胞凋亡改变。且LY294002对食管EC109细胞的抑制率与LY294002的浓度及作用时间呈正相关(r为0.942、0.963,P<0.01),凋亡率亦与LY294002的浓度及作用时间均呈显著正相关(r为0.975、0.938,P<0.01)。结论 LY294002可抑制食管癌EC109细胞生长,并诱导其凋亡。     

stathmin基因反义寡核苷酸对Eca109细胞系生长的抑制作用

目的:研究stathmin基因反义寡核苷酸(ASODN)对Eca109细胞增殖及stathmin基因表达的抑制作用,探讨ASODN用于食管癌基因治疗的可行性.方法:实验设ASODN转染组、SODN转染组和未转染组.分别应用stathmin ASODN、SODN转染食管癌Eca109细胞.倒置显微镜观察转染细胞的形态变化,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖能力,RT-PCR方法检测stathmin基因的表达,采用流式细胞仪分析细胞增殖周期.结果:stathmin ASODN转染Eca109细胞后,胞体凝缩,增殖能力减弱,细胞生长及目的基因表达明显受抑(P<0.05),其抑制作用具有序列特异性.细胞分裂阻滞在分裂期的中期,G2/M期细胞数由(12.2±1.0)%升至(36.5±5.8)%.结论:stathmin基因反义寡核苷酸对Eca109细胞增殖及stathmin基因表达具有明显抑制作用,有望成为食管癌基因治疗药物.     

D-氨基葡萄糖衍生物通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡中的作用及机制.方法:体外培养Eca-109细胞,用COPADG及特异性JNK抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理;Western印迹法检测P-JNK蛋白表达的变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:Western印迹显示随着COPADG作用浓度增加P-JNK蛋白表达逐渐增强,经SP600125预处理后,COPADG诱导Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱(P＜0.01),COPADG诱导的细胞凋亡率明显减低,细胞增殖抑制率显著下降,与COPADG单作用组之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥重要作用,COPADG通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.     

冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

白藜芦醇诱导急性T淋巴母细胞白血病Jurkat细胞凋亡

目的：探讨白藜芦醇抑制急性T淋巴母细胞白血病Jurkat细胞增殖、引发S期阻滞和诱导凋亡的作用。方法：白藜芦醇体外处理培养的Jurkat细胞后,采用MTT法测定细胞活力,Wrigh-Giemsa染色、Hoechest 33258/PI荧光染色和透射电镜观察Jurkat细胞的形态学改变;流式细胞术分析细胞周期。结果：白藜芦醇0.2 mmol·L^-1处理组的抑制Jurkat细胞增殖率达64.01%,并具有剂量和时间依赖性。白藜芦醇处理细胞24 h后可见凋亡形态学改变,Hoechest 33258/PI染色显示白藜芦醇处理组细胞部分细胞核呈亮蓝色,随培养时间延长,亮蓝色荧光染色细胞数量逐渐增多。Wrigh-Giemsa染色和透射电镜观察发现部分细胞体积缩小、染色质浓缩及边集等现象的出现。流式细胞术检测表明,0.05 mmol·L^-1白黎芦醇处理48 h组62.57％的细胞被阻滞于细胞周期S期,亚二倍体细胞数量12.01%,未加药对照组细胞亚二倍体细胞数量2.05%。结论：白藜芦醇可以抑制Jurkat细胞的增殖,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导其发生凋亡     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测，观察白藜芦醇(0．1、0．2、0．5 mmol／L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长，0．1mmol／L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团；流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0．5mmol／L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGc823、sGc7901和HGc27细胞于G0／G1、S、G2／M期，并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡，其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19．3％，远高于其他两株胃癌细胞。结论自藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。     

白藜芦醇影响OVCAR3细胞生长并通过活化caspase-3诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞生长及细胞周期的影响,并研究白藜芦醇诱导卵巢癌细胞凋亡及其途径.方法 MTT比色法检测白藜芦醇对细胞生长的影响,Ho33342染色荧光显微镜观察白藜芦醇对细胞核浓缩及片段化的影响,TUNEL检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响,流式细胞术分析白藜芦醇对细胞周期分布和caspase-3活性的影响.结果 低浓度(＜30 μmol/L)的白藜芦醇促进细胞增殖,而高浓度(＞30μmol/L)抑制细胞增殖;白藜芦醇能够引起S/G2阻滞,并诱导细胞凋亡;白藜芦醇增加caspase-3活性具有时间和浓度效应.结论 白藜芦醇促进或抑制细胞生长具有浓度依赖性;并通过增加caspase-3活性而诱导卵巢癌细胞凋亡.     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodaminel23和TMRE标记细胞线粒体膜电位（△ψ）,并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇（≤25μmoFL）对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇（〉25μmol／L）显著地抑制HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性（F=18．532,P〈0．05）;流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性（P〈0．05）;白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

虎仗提取物白藜芦醇诱导胃癌细胞HGC27凋亡

目的 :观察虎仗提取物白藜芦醇对胃癌细胞HGC2 7细胞周期和增殖的影响及凋亡诱导作用 .方法 :采用MTT法和软琼脂集落形成实验观察白藜芦醇对细胞增殖的影响 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响及诱导凋亡的作用 .结果 :MTT实验发现白藜芦醇作用HGC2 7细胞 2 4h后 ,细胞存活率显著下降 (P <0 .0 1)并呈剂量依赖性 ,软琼脂集落形成实验发现HGC2 7细胞在0 .5mmol/L白藜芦醇作用下无细胞集落的形成 ,Annxin V&PI染色及流式细胞仪检测发现白藜芦醇可引起HGC2 7阻滞于G1期 ,并可诱导HGC2 7发生凋亡 (8.39% ) .结论 :白藜芦醇可抑制胃癌细胞HGC2 7增殖并可诱导细胞发生凋亡 .