电针对脑梗塞大鼠皮质缺血半影区内TGF-β1免疫阳性细胞的形态学影响

目的观察电针对脑梗塞大鼠皮质缺血半影区内转化生长因子免疫阳性细胞形态学的影响,为探讨胶质细胞参与针刺治病机理提供实验依据。方法线栓法建立大鼠脑梗塞模型,用免疫细胞化学方法显示针刺对大鼠皮质缺血半影区内转化生长因子阳性细胞的形态、分布及数量与非针刺组、假手术组和对照组的比较,寻找电针对TGF-β1阳性细胞的形态学影响。结果①大鼠脑皮质内转化生长因子阳性细胞的形态学观察对照组大鼠脑额叶皮质内可见散在圆形和椭圆形的转化生长因子阳性细胞。呈棕色TGF-β1免疫反应产物沉积在细胞膜。假手术组大鼠额叶皮质内TGF-β1免疫反应阳性细胞的分布和形态与对照组的未见明显组间差异。非电针组大鼠缺血半影区内可见大量肿胀、免疫反应增强的TGF-β1免疫阳性神经元。但其分布与对照组的比未见明显差异。电针组大鼠缺血半影区内TGF-β1免疫阳性细胞的肿胀程度比非电针组的明显减轻,细胞体积变小。在免疫反应程度上比非电针组得明显增强,免疫产物除沉积在细胞膜外,细胞质内亦可见。②大鼠皮质区内转化生长因子阳性细胞的数量统计对照组大鼠额叶皮质TGF-β1阳性细胞数量与假手术组的差异无统计学意义。非电针组的比对照组的明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。电针组大鼠缺血半影区内TGF-β1阳性神经元的数量比非电针组的明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1～2mA强度的电刺激"曲池"和"足三里"穴位能上调大鼠额叶皮质缺血半影区内TGF-β1的表达,上调的TGF-β1可能参与对缺血性神经元损伤的保护过程。     

苯丙胺对大鼠学习能力和海马结构GFAP阳性细胞结构的影响

目的观察苯丙胺对大鼠学习能力、GFAP免疫阳性细胞结构和亚细胞结构的影响。方法苯丙胺腹腔注射SD大鼠,用水迷宫检测其空间辨别性学习能力,用免疫组织化学方法观察海马结构胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫阳性细胞的形态变化;用电镜方法检测GFAP免疫阳性细胞超微结构变化。结果学习能力检测发现,在14d以前,苯丙胺组大鼠较生理盐水组的平均运行时间和平均潜伏期缩短(P0.05);在15～28d,苯丙胺组大鼠较生理盐水组正确率降低(P0.05);在29～42d,苯丙胺组大鼠较生理盐水组正确率降低、平均运行时间延长(P0.05)。GFAP阳性细胞形态学观察发现,正常对照组大鼠海马结构星形胶质细胞主要分布在海马以及齿状回的多形层和分子层;生理盐水组大鼠海马结构星形胶质细胞分布与游水组相似,但细胞突起变长及增粗,分支增多,且各亚区比正常对照组相应亚区的星形胶质细胞数量增多(P0.05);苯丙胺组大鼠海马星形胶质细胞分布与正常对照组相似,但细胞突起变长、增粗和分支增多更明显,各亚区的星形胶质细胞比正常对照组和生理盐水组相应亚区增多(P0.05);电镜观察发现苯丙胺组大鼠脑内星形胶质细胞增生肥大,亦可见退变星形胶质细胞。结论在本实验条件下,苯丙胺导致大鼠空间辨别性学习记忆能力下降,引起大鼠海马结构星形胶质细胞增生和损害。     

栓塞大鼠大脑中动脉对海马结构内星形胶质细胞的形态学影响

目的:探讨栓塞大鼠大脑中动脉是否可以引致海马结构内星形胶质细胞的形态学改变。方法:用免疫组织化学方法显示栓塞大脑中动脉大鼠、假手术大鼠和对照大鼠海马结构内的GFAP阳性的星形胶质细胞的形态和数量以及GFAP表达,对比组间差异,寻找梗塞对远离缺血中心区的海马结构内星形胶质细胞的影响。结果:栓塞大鼠大脑中动脉可以引致远离缺血中心区的海马结构内星形胶质细胞数量增多、体积增大和GFAP表达增加。结论:脑缺血损伤引起的胶质细胞激活不仅限于缺血中心区和边缘区,远离缺血中心区的脑区也可以出现神经胶质细胞形态学改变,即胶质细胞激活现象。     

电针对脑梗塞大鼠缺血半影区星形胶质细胞形态的影响

目的： 观察电针对脑梗塞大鼠缺血半影区星形胶质细胞形态学的影响，为探讨针刺治病疗效和机制提供实验依据。方法： 线栓法建立大鼠脑梗塞动物模型，用免疫组织化学方法显示胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫阳性细胞，对比观察电针对模型大鼠脑皮质缺血半影区星形胶质细胞的形态影响。结果： 免疫组织化学方法显示电针对脑梗塞缺血半影区星形胶质细胞的数量、细胞面积比与对照组相比差异无显著意义。结论： 频率5-10 Hz和强度2 mA的电针穴位刺激没有影响缺血半影区内星形胶质细胞的形态,但是对GFAP的表达有上调的影响。     

CTGF siRNA联合电针治疗对大鼠损伤脊髓星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的:探讨抗CTGF小干扰RNA(small interferon RNA,siRNA)局部注射联合电针治疗对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、CTGF siR-NA干扰(CTGF)组、CTGF siRNA干扰联合电针(EA+CTGF)组。制作大鼠SCI模型,将含有CTGF siRNA/Invivo-fectamine复合物溶液的明胶海绵移植入CTGF组和EA+CTGF组大鼠的脊髓(T10)损伤断端,SCI组用Invivo-fectamine转染试剂代替。EA+CTGF组在模型制备后每天的固定时间给予电针治疗。各组在3 d、7 d、14 d后分别取材,应用免疫荧光组织化学、Western Blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察星形胶质细胞的形态、数量和GFAP、GFAP mRNA表达变化。结果:SCI组星形胶质细胞反应性增生、胞体肥大,损伤边缘区形成GFAP强表达的胶质界膜;CTGF siRNA干预后,GFAP表达减弱,胞体减小,GFAP阳性细胞数减少;EA+CTGF组GFAP免疫反应表达明显降低,损伤边缘区GFAP荧光强度与脊髓其它区域基本相同。Western Blot结果显示:与SCI组相比,CTGF组与EA+CTGF组的GFAP均减少,有统计学意义(P<0.05),与CTGF组相比,EA+CTGF组的GFAP减少,有统计学意义(P<0.05);RT-PCR电泳结果表明损伤早期EA+CTGF组GFAP mRNA表达明显低于损伤组并有显著性差异(P<0.01),变化与Western Blot结果是一致的。结论:SCI后,CTGF siRNA联合电针治疗能有效阻止GFAP表达,使胶质反应减轻,有助于神经功能恢复。     

空间辨别性学习记忆活动与大鼠海马结构基质细胞衍生因子 1表达的关系

目的 探讨大鼠空间辨别性学习记忆活动与趋化因子基质细胞衍生因子.1(SDF-1)的关系. 方法用免疫组织化学方法、免疫印迹法和RT-PCR方法对获得空间辨别性学习记忆大鼠海马结构内SDF-1表达进行研究,并与游水组和对照组比较.结果 1.免疫组织化学方法显示,对照组大鼠海马结构内趋化因子SDF-1阳性细胞分布在海马结构各亚区和各层.阳性细胞的形态以圆形为主,少见锥体形和梭形.阳性产物主要分布在细胞膜上;游水组大鼠海马结构内SDF-1阳性细胞的形态和分布与对照组相比未见组间差异;训练组大鼠海马结构内SDF-1免疫阳性细胞的数量比对照组增多(P<0.01).阳性细胞的形态以锥体形和三角形居多,在分布上有向齿状回聚集的趋势.2.免疫印迹方法检测训练组大鼠海马结构内SDF-1蛋白质的表达明显高于对照组(P<0.01).而且在训练组内则随着训练时间的延长表达量随之增加.3.RT-PCR方法检测训练组大鼠海马结构内SDF-1mRNA的量明显高于对照组(P<0.01),且随着训练时间的延长表达增加.在水盆中漫游的游水组大鼠,不论是免疫组织化学方法,还是免疫印迹法以及RT-PCR方法获得的结果与对照组相比均未见组间差异. 结论 经水迷宫训练使大鼠获得空间辨别性学习记忆功能,致使海马结构内细胞导向因子SDF-1表达上调,上调的SDF-1蛋白质可能与所获功能需要的形态基础.神经微环路的形成有关.     

拟痴呆大鼠海马结构MAP2与GFAP的变化

目的观察拟痴呆大鼠海马结构MAP2与GFAP的变化,探讨痴呆病理机制。方法应用共聚焦激光扫描显微镜等技术,观察MAP2和GFAP在海马结构的分布和平均荧光强度的变化。结果①假手术对照组和拟痴呆组大鼠平均逃避潜伏期分别为(9.14±2.81)s和(22.88±3.27)s(P<0.05)。②拟痴呆组大鼠海马结构MAP2阳性反应物减少,分布不均,其平均荧光强度低于假手术对照组(P<0.01)。③拟痴呆组GFAP阳性反应物增多,阳性细胞突起增粗,较多突起围绕于锥体细胞或颗粒细胞周围,CA1、CA3和齿状回GFAP阳性反应物平均荧光强度高于假手术对照组(P<0.01)。结论①永久性结扎双侧颈总动脉可建立拟痴呆模型;②海马神经细胞骨架结构发生破坏是导致痴呆原因之一;③星形胶质细胞参与痴呆发生与发展进程。     

地塞米松对苯丙胺致小鼠海马CA3区星形胶质细胞激活及结构损伤的影响

目的观察地塞米松对苯丙胺致小鼠海马CA3区星形胶质细胞激活及结构损伤的影响。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分对照组、生理盐水组、苯丙胺组和地塞米松+苯丙胺组。用行为学方法观察动物行为,用免疫组织化学和电镜方法对小鼠海马结构星形胶质细胞的形态和亚细胞形态进行观察。结果 1.正常组和生理盐水组小鼠未出现行为活动异常。苯丙胺组和地塞米松+苯丙胺组小鼠与正常对照组小鼠相比出现明显异常行为活动。2.苯丙胺组小鼠海马结构内GFAP免疫阳性细胞的形态与对照组相比,突起变长、增粗和分支增多(P0.05),但细胞的数量无明显增多(P0.05)。地塞米松+苯丙胺组小鼠海马结构内GFAP免疫阳性细胞的形态与苯丙胺组组相比突起变长、增粗和分支增多(P0.05),但细胞的数量相比无增多(P0.05)。3.苯丙胺14d和地塞米松+苯丙胺14d组小鼠海马CA3区超微影像结构示星形胶质细胞增生肥大,线粒体肿胀,髓鞘出现松散分离样变。结论苯丙胺导致小鼠出现神经毒性行为学反应,并导致海马结构星形胶质细胞激活以及细胞和亚细胞结构的损伤;地塞米松没有减轻或抑制苯丙胺致星形胶质细胞的激活和损伤。     

托吡酯对急性癫痫大鼠海马星形胶质细胞的影响

目的研究急性癫痫大鼠海马结构内星形胶质细胞的激活情况及托吡酯对其的影响。方法采用免疫组织化学法观察马桑内酯急性癫痫大鼠及应用托吡酯治疗后海马结构内胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）免疫细胞化学反应（immunoreactivity，IR）的变化。结果①与对照组相比，模型组和治疗组大鼠GFAP-IR阳性细胞数及积分光密度值均显著增J]I（P〈0.05）；②治疗组较模型组其GFAP-IR阳性细胞数和积分光密度值显著降低（P〈0.05）。结论星形胶质细胞在癫痫病理过程中起着重要作用，托吡酯可能通过直接和间接两方面的作用减轻星形胶质细胞的激活。     

电针上调脑梗塞大鼠皮质缺血半影区Bcl-2蛋白质的表达

目的观察电针对脑缺血大鼠皮质缺血半影区Bcl-2蛋白质表达的影响,为探讨电针治疗脑梗塞的机理提供实验依据。方法线栓雄性SD大鼠大脑中动脉建立脑梗塞动物模型,随机分为电针组和非电针组。用免疫组化的方法显示大脑皮质缺血半影区Bcl-2阳性细胞并观察细胞形态和分布,计数阳性细胞数量;用Western-blot方法定量皮质缺血半影区Bcl-2蛋白表达的变化。结果①对照组和假手术组大鼠脑皮质未显示出Bcl-2免疫阳性细胞。非电针组的大鼠皮质缺血半影区在缺血6h即在皮质中间带见圆形,偶见椭圆形和梭形Bcl-2免疫阳性细胞分布。阳性细胞的数量在缺血1d最多,3d呈减少的趋势。电针组的阳性细胞形态与分布与非电针组比未见明显差异,在数量上亦随电针的时间增加而增多。②Western-blot方法未在对照组和假手术组大鼠额叶皮质检出Bcl-2蛋白质。电针组大鼠皮质缺血半影区的Bcl-2的表达比非电针组的呈上调的趋势。结论电针刺激内关和足三里穴位可以上调脑梗塞大鼠皮质缺血半影区内Bcl-2蛋白质的表达,参与脑缺血性细胞凋亡的病理过程。     

针药对反复脑缺血再灌注大鼠空间学习记忆及海马神经元突触可塑性的影响

目的:观察针药对反复脑缺血再灌注大鼠空间学习记忆及神经元突触可塑性的影响,进而探讨其作用机制。方法:将健康成年的SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、药物组和针药混合组,每组均为10只。利用夹闭双侧颈总动脉的方法构建反复脑缺血再灌注大鼠的模型。电针组在"百会"和"水沟"两个穴位给予电针治疗,药物组采用补气化瘀药物进行灌胃治疗,针药混合组利用电针和补气化瘀药物相结合的联合疗法。用药结束后,观察并分析各组大鼠的空间学习记忆情况、群体峰包位(population spike,PS)增幅情况、海马神经元的形态学改变及突触可塑性的变化。结果:在学习记忆方面:与假手术组比较,模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长(P0.01)、在平台所在象限内游泳的时间百分比和穿越平台的次数明显减少(P0.01);与模型组比较,电针组与药物组大鼠的平均逃避潜伏期均缩短(P0.05)、在平台所在象限内游泳的时间百分比和穿越平台的次数均增多(P0.05);与电针组和药物组比较,针药混合组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短(P0.01)、在平台所在象限内游泳的时间百分比和穿越平台的次数明显增多(P0.01)。高频刺激后PS增幅情况:模型组大鼠PS增幅较假手术组明显减小(P0.01),但电针组与药物组PS增幅均较模型组增大(P0.05),针药混合组PS增幅又均较电针组和药物组增大(P0.01)。在形态学方面:电针组与药物组海马神经细胞的病理改变较模型组已有所改善,但针药混着组病理变化的改善更为明显。结论:电针与药物的联合应用更有利于保护海马神经元的正常形态结构和数量,改善其突触的可塑性,从而进一步提高反复脑缺血再灌注大鼠的空间学习记忆能力。     

不同年龄脑出血大鼠海马齿状回神经干细胞增殖与分化差异的比较

BACKGROUND:Cerebral hemorrhage can activate the proliferation and differentiation of neural stem cells in the dentate gyrus of the hippocampus. Through continuous differentiation and proliferation, endogenous neural stem cells can gradually replace aging and damaged neurons, thus protecting the brain structure. OBJECTIVE:To compare the difference of the proliferation and differentiation of neural stem cells in the dentate gyrus of the hippocampus of rats with different ages. METHODS:Ninety-six adult rats and 96 aged rats were randomly divided into normal group (n=18 per group), sham operation group (n=12 per group) and cerebral hemorrhage group (model group, n=66 per group), respectively. Cerebral hemorrhage models were made in the two model groups in which, the rats were subjected to cerebral hemorrhage for 6, 24, 48, 72 hours and 7 days, respectively. Then, brain tissues were collected to measure brain water content. BrdU/NeuN and BrdU/GFAP double staining were performed at 3, 7, 14, 21, 28 days after surgery to calculate the number of positive cells. RESULTS AND CONCLUSION:For both adult and aged rats, the brain water content was significantly higher than that in the normal group and sham operation group (P < 0.05), while in the normal and sham operation groups, the brain water content was significantly lower in the aged rats than the adult rats (P  < 0.05). The number of bilateral BrdU-positive cells in the adult and aged model groups was significantly higher than that in the corresponding normal and sham operation groups (P  < 0.05), and moreover, the positive cell number at the hemorrhage side was significantly higher than that at the opposite side (P < 0.05). In addition, the number of BrdU-positive cells at the hemorrhage side in the adult rats was significantly higher than that in the aged rats at different time after cerebral hemorrhage (P  < 0.05). Results from immunohistochemical double staining showed that the BrdU/NeuN and BrdU/GFAP expression in the hippocampal dentate gyrus of adult rats with cerebral hemorrhage was significantly higher than that of normal adult rats. All these experimental results show that there are a few neural stem cells proliferating in the hippocampal dentate gyrus of normal rats, and the proliferation ability is stronger in the adult rats than the aged rats. Cerebral hemorrhage can significantly strengthen the proliferation of neural stem cells in the dentate gyrus in the adult rats compared with the aged rats.     

骨髓间充质干细胞移植急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠星形胶质细胞及髓鞘的变化

背景：国内有关一氧化碳中毒迟发性脑病治疗的报道,多采用药物治疗和高压氧治疗,但存在治疗疗程长,见效慢,花费较高等问题。 目的：首次观察骨髓间充质干细胞移植治疗一氧化碳中毒迟发性脑病前后星形胶质细胞及神经髓鞘的变化。 方法：以随机抽签方法将SD大鼠分为3组：对照组、假手术组及干细胞移植组。采用腹腔注入一氧化碳方法制作一氧化碳中毒迟发性脑病模型,干细胞移植组在注射后第0,3,6,12,24,72小时及1周时将同种异体骨髓间充质干细胞经左侧颈动脉植入到大鼠脑内;假手术组扎闭颈外动脉,用PBS代替细胞悬液;对照组不进行细胞移植。移植后1,2,3,4周采用免疫组织化学的方法检测胶质纤维酸性蛋白和固绿-FCF染色法观察髓鞘着色情况。 结果与结论：造模后6,12,24 h干细胞移植组大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白表达明显高于对照组及假手术组(P < 0.05),干细胞移植组移植后1~4周大鼠脑内胶质纤维酸性蛋白表达差异无显著性意义(P > 0.05)。造模后6,12,24 h干细胞移植组大鼠脑内髓鞘平均吸光度明显高于对照组及假手术组(P< 0.05),且细胞移植后第2周明显高于第1,3,4周(P < 0.05)。 提示经左侧颈动脉在一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠体内移植骨髓间充质干细胞可以增加星形胶质细胞反应性,促进髓鞘再生,移植的最佳时机为发病后6~24 h,细胞移植后的积极作用在一两周最明显。     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后GFAP表达和脑组织水肿的影响

探讨川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞表达胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)以及对脑组织含水量的影响。将70只SD大鼠随机分为3组:脑缺血后1、3、5、7、10d模型组(n=30,每个时间点用6只)、川芎嗪预处理组(n=30,每个时间点用6只)和假手术组(n=10,每个时间点用2只)。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),应用免疫组化法观察星形胶质细胞GFAP的表达,干湿重法测定脑组织的含水量。结果显示:川芎嗪预处理组大鼠各时间点海马CA1区的GFAP阳性细胞数量显著增多,与缺血模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。缺血再灌注后脑组织含水量持续性增加,到3d达到最高峰,5d时仍较高,以后逐渐降低;川芎嗪组各时间点的脑组织含水量均低于缺血模型组(P<0.05)。上述研究结果提示川芎嗪可引起星形胶质细胞活化、保护神经元、减轻脑水肿,具有防治脑缺血再灌注损伤的作用。     

脑缺血再灌注后脑梗塞周围区生长相关蛋白-GAP43表达的变化及外源性神经生长因子的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的变化规律及外源性神经生长因子(NGF)的影响.方法成年健康雌性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、自然恢复组、人工脑脊液组和NGF治疗组.采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)动物模型,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后GAP-43的表达.结果(1)脑缺血再灌注6 h后,缺血周围区GAP-43表达逐渐增高,第7天达高峰,以后逐渐降低,第21天仍有表达.(2)应用外源性NGF后,GAP-43表达较对照组有所增高,但无显著性差异(P＞0.05).结论提示中枢神经系统损伤后,神经元具有再生和修复的可塑性,外源性NGF对GAP-43的调节有待于进-步研究.     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内CREB mRNA表达的影响

探讨外源性神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内的cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的影响。用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,运用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质内CREBmRNA的表达。结果显示:缺血再灌注组缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREBmRNA阳性反应产物平均光密度(OD)比假手术组减少(P<0.05),NGF组CA1区和顶叶皮质内的CREBmRNA阳性产物平均光密度高于缺血再灌注组(P<0.05)。本研究结果提示NGF可以上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质缺血神经元CREBmRNA的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。     

巴曲酶对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区的影响

目的 通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时段，巴曲酶对海马CAl神经元及星形胶质细胞数目、形态等方面的影响，从而探讨巴曲酶对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、不同再灌注时间段(3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d)的大鼠短暂局灶性脑缺血(transient focal cerebral isehemia)模型，随机设立巴曲酶组(Bat)、生理盐水对照组(N．S)、假手术组(sham-operated)，通过HE染色及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异核抗原(NeuN)的免疫组化染色，观测CAl区神经元和星形胶质细胞的形态、数目的动态变化。结果巴曲酶能显提高再灌注早期(6～24h)CAl区GFAP阳性细胞的数目，再灌注7d组存活锥体细胞的数量较盐水对照组有明显提高，提示局灶性脑缺血后早期反应性星形胶质细胞的增多对维持神经元的存活有积极意义，巴曲酶对短暂局灶性脑缺血再灌注引起的海马CAl区延迟性神经元坏死(DND)有一定的抑制作用。