结核分枝杆菌katG和inhA基因突变的研究

为了解结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列的突变情况，探讨其在ＩＮＨ耐药性中的可能作用。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）方法对６２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列进行分析。ＰＣＲ分析结果显示：ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列的敏感性为１～１０ｐｇＤＮＡ；其引物ＰＣＲ扩增都具有较高的特异性。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，１３株敏感株中，１２株ｋａｔＧ基因扩增产物ＳＳＣＰ泳动正常，１株ｋａｔＧ异常；２４株耐非ＩＮＨ抗结核药物株中，８株ｋａｔＧＳＳＣＰ异常；上述２７株的ｉｎｈＡ调节序列ＳＳＣＰ均泳动正常。２５株耐ＩＮＨ株中，３株ｋａｔＧ基因ＰＣＲ扩增阴性，２２株ｋａｔＧ扩增阳性，其中１６株ＳＳＣＰ泳动异常；４株ｉｎｈＡ调节序列ＳＳＣＰ泳动异常，其ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ也异常。结果表明，某些结核分枝杆菌ＩＮＨ耐药性可能是由于其ｋａｔＧ基因完全缺失、ｋａｔＧ基因或ｉｎｈＡ调节序列突变所致，但某些菌株也可能与其无关，是其它耐药基因所致或存在多种机制，尚需进一步探讨。     

几种英文缩写的中英文全称介绍

ＳＤＡ :ＳｔｏｔｅＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　国家药品监督管理局ＳＯＰ :ＳｔａｎｄａｒｄＯｐｅｒａｔｉｎｇＰｒｏｃｅｄｕｒｅ　标准操作程序ＧＭＰ :ＧｏｏｄＭａｎｕｆａｃｔｕｒｅＰｒａｃｔｉｃｅ　药品生产质量管理规范ＯＴＣ :ＯｖｅｒｔｈｅＣｏｕｎｔｅｒ　非处方药ＧＳＰ :ＧｏｏｄＳｕｐｐｌｙＰｒａｃｔｉｃｅ　药品经营质量管理规范ＡＤＲ :ＡｄｖｅｒｓｅＤｒｕｇＲｅａｃｔｉｏｎ　药品不良反应ＧＬＰ :ＧｏｏｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒａｃｔｉｃｅ　药品非临床实验质量管理规范ＱＵＭ :ＱｕａｌｉｔｙＭ…     

司氟沙星合成路线图解

司氟沙星合成路线图解戚建军，郭惠元（中国医学科学院医药生物技术研究所，北京１０００５０）ＧＲＡＰＨＩＣＡＬＳＹＮＴＨＥＴＩＣＲＯＵＴＥＳＯＦＳＰＡＲＦＬＯＸＡＣＩＮ￥ＱＩＪｉａｎ－Ｊｕｎ；ＧＵＯＨｕｉ－Ｙｕａｎ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎａ...     

氟伐他丁钠合成路线图解

氟伐他丁钠合成路线图解杜娟，康宏杰（汕头滨化学药业总公司，广东５１５０４１）ＧＲＡＰＨＩＣＡＬＳＹＮＴＨＥＴＩＣＲＯＵＴＥＳＯＦＦＬＵＶＡＳＴＡＴＩＮＳＯＤＩＵＭ￥ＤＵＪｕａｎ；ＫＡＮＧＨｏｎｇ－Ｊｉｅ（ＴｕｏｂｉｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ＆Ｐｈａｒｍａｃ...     

THE CHEMISTRY AND DISTRIBUTION OF TAXANE DITERPENOIDS AND ALK

ＴＨＥＣＨＥＭＩＳＴＲＹＡＮＤＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯＦＴＡＸＡＮＥＤＩＴＥＲＰＥＮＯＩＤＳＡＮＤＡＬＫＡＬＯＩＤＳＦＲＯＭＧＥＮＵＳＴＡＸＵＳＪＺＺｈａｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉ...     

羧甲基纤维素钠胶浆制备方法的比较

羧甲基纤维素钠胶浆制备方法的比较印嘉骏（江苏武进中医院，江苏２１３１６１）ＣＯＭＰＡＲＩＳＯＮＯＦＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＣＡＲＢＯＸＹＭＥＴＨＹＬＣＥＬＬＵＬＯＳＥＳＯＤＩＵＭＭＵＣＩＬＡＧＥ￥ＹＩＮＪｉａ－Ｊｕｎ（ＷｕｊｉｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆ...     

绞股蓝总皂苷对内毒素、氧自由基介导血管内皮细胞表达c-sis基因和调节平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究绞股蓝总皂苷（ Ｇｙｐ） 对血管平滑肌细胞增殖的调节与内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达和一氧化氮（ Ｎ Ｏ） 合成／ 释放的关系。方法　采用原位杂交法检测内皮细胞ｃ ｓｉｓｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,用 Ｇｒｉｅｓｓ 法测定内皮细胞 Ｎ Ｏ 释放量,用 Ｍ Ｔ Ｔ快速比色法检测平滑肌细胞（ Ｓ Ｍ Ｃ） 增殖。结果　内毒素（ Ｌ Ｐ Ｓ）１６ ｍｇ· Ｌ－ １ 促进牛主动脉内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,明显降低内皮细胞培养液中一氧化氮含量,刺激 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖;黄嘌呤－ 黄嘌呤氧化酶（ Ｘ Ｘ Ｏ） 系统产生的氧自由基（ Ｏ Ｆ Ｒ） 具有与 Ｌ Ｐ Ｓ 相似的作用。绞股蓝总皂苷对 Ｌ Ｐ Ｓ诱导的内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达具有明显抑制作用,并能对抗 Ｏ Ｆ Ｒ 诱导的 Ｅ Ｃ 损伤,保护内皮细胞释放 Ｎ Ｏ 的能力,抑制 Ｌ Ｐ Ｓ 和 Ｏ Ｆ Ｒ通过 Ｅ Ｃ 介导的 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖。 Ｇｙｐ 的效应可被 Ｎ Ｏ 合成酶抑制剂硝基 左旋精氨酸部分取消。结论　绞股蓝总皂苷通过抑制内皮细胞ｃ ｓｉｓ 基因表达,促进内皮细胞合成（ 释放） Ｎ Ｏ抑制平滑肌细胞增殖     

脒基硫脲的合成

脒基硫脲的合成徐建明，李东方（第二军医大学化学教研室上海２００４３３）ＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦＧＵＡＮＹＬＴＨＩＯＵＲＥＡ￥ＸＵＪｉａｎ－Ｍｉｎｇ；ＬＩＤｏｎｇ－Ｆａｎｇ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎ...     

从甘草酸粗品制取甘草酸单钾盐

从甘草酸粗品制取甘草酸单钾盐邓国斌（兰州二七六五化工厂，甘肃７３００２０）ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＭＯＮＯＰＯＴＡＳＳＩＵＭＧＬＹＣＹＲＲＨＩＺＩＮＡＴＥＦＲＯＭＣＲＵＤＥＧＬＹＣＹＲＲＨＩＺＩＣＡＣＩＤ￥ＤｅｎｇＧｕｏ－Ｂｉｎ（ＴｈｅＣｈｅｍｉｃ...     

甲磺酸培氟沙星合成工艺改进

甲磺酸培氟沙星合成工艺改进马明华，纪秀贞（昆山制药总厂，江苏２１５３１５）ＩＭＰＲＯＶＥＤＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦＰＥＦＬＯＸＡＣＩＮＭＥＳＹＬＡＴＥ￥ＭＡＭｉｎｇ－Ｈｕａ；ＪＩＸｉｕ－Ｚｈｅｎ（ＫｕｎｓｈａｎＧｅｎｅｒａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ...     

用分子生物学技术快速检测耐多药结核分枝杆菌

目的：用PCR—SSCP技术检测耐INH、RFP、SM结核分枝杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变，评价其在快速检测结核分枝杆菌耐药性方面的临床价值。方法：以结核分枝杆菌H；vRv为对照，20株耐多药菌株和20株敏感株，分别用PCR—SSCP方法检测KatG、rpoB、rpsL基因突变，并将SSCP结果与药敏试验结果作对照分析。结果：PCR—SSCP方法检测20株敏感株SSCP带语均与H37RV标准株相同，而20株耐多药结核分枝杆菌KatG、rpoB、rpsL基因突变的阳性率分别为70％，100％和75％。发现20株耐多药菌株中有11株(55％)共INH、RFP、SM3种耐药遗传标志均发生突变，7株(35％)有2种耐药遗传标志突变，2株(10％)只有RFP耐药标志突变。结论：PCR—SSCP方法敏感、特异，可快速检测结核分枝杆菌KatG、rpoB、rpsL耐药基因突变，有利于耐多药结核分枝杆菌耐药性的快速检测。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG点突变的快速检测

目的：探讨快速检测结核分枝杆菌异烟肼（INH）耐药基因型的分子药敏方法。方法：用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测了30株INH敏感菌株及30株耐药株的katG基因，随后用SSCP方法鉴定扩增产物有无突变，以结核分枝杆菌H37Rv作对照。结果：所有INH敏感株均观察到katG基因扩增产物，30株INH耐药株中28株观察到katG基因扩增产物。以H37Rv标准株为对照，30株敏感株SSCP带谱与对照相同；28株INH耐药株中13株与对照相同，15株有不同程度的差异。与药敏试验比较，PCR－SSCP检测INH耐药结核菌的敏感性为57%，特异性为100％。结论：多数结核分枝杆菌耐INH是由于katG基因突变所致，用PCR－SSCP筛选突变株可达到快速检测结核分枝杆菌INH耐药基因型的目的。     

结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定

目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法，以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照，11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同；限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示，11株耐EMB分离株中4株(36．4％)不被NlaⅡ消化；46例结核病痰标本中10例(21．7％)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。     

1034例利福平耐药结核杆菌对其它一线抗结核药物耐药性分布特征

目的了解广州市近17年来,结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药情况及对其它一线抗结核药物的敏感性分布特征。方法回顾性分析广州市胸科医院1992年2月-2008年7月期间门诊结核病人一线抗结核药物敏感性试验结果。结果10167例结核分支杆菌分离株中,耐R菌株1034例,耐H菌株2214例,耐S菌株1073例,耐E菌株622例,总体耐药率为25．80％;在1034例R耐药株中,H、R共同耐药者927例,占R耐药株总数的89．65％,却只占2214例H耐药株的41．87％;而R、S共同耐药者502例,R、E共同耐药者237例,分别占耐R株总数的48．55％及22．92％,明显少于R、H共同耐药者。结论耐RFP菌株绝大部分同时对INH耐药,但反之不然,现有的耐药机制难以解释此种现象,结核杆菌是否存在其它耐药机制有待进一步研究。     

铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系研究

目的:研究铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系,并对聚合酶联反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)-DNA单链构象多态性(SSCP)分析铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变的可行性进行评估。方法:以铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因序列为靶序列,用PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、DNA测序等方法对铜绿假单胞菌ATCC27853及16株临床分离株gyrA基因突变进行对比研究。结果:在8株耐环丙沙星铜绿假单胞菌中,有6株gyrA基因的83位表现出单点突变,其突变方式全为ACC→ATC,导致氨基酸苏氨酸→异亮氨酸的改变;gyrA基因的PCR扩增产物SacⅡ酶切片段与测序结果一致;SSCP分析结果显示,16株细菌中仅2株gyrA带型与ATCC27853相同,其它菌株gyrA带型与ATCC27853均不同。结论:临床分离的铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制主要表现为gyrA基因83位氨基酸密码子突变,应用PCR-RFLP-SSCP系统可快速、准确地检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中碱基的变异。     

结核分支杆菌临床分离株的基因检测研究

目的 检测结核分支杆菌临床分离株的IS986和embB基因序列,了解结核分支杆菌及其药物敏感性的基因检测同Bactec-460自动检测系统的相关性。方法 用Bactec-460检测系统对获自肺结核患者的8株临床分离菌和1株质控菌进行菌种及EMB药物敏感性的鉴定,采用PCR和PCR—DS技术对菌株进行IS986和embB基因检测和序列分析。结果 8株临床分离菌经Bactac-460自动检测系统鉴定为结核分支杆菌,其中7株对EMB敏感、1株耐药,质控株耐药。各分离菌株及质控株PCR检测出IS986和embB基因序列,符合率100％。1株临床分离耐药株embB基因的第306位密码子发生突变,1株敏感株embB基因的第278位和279位密码子有突变,其余6株敏感菌及质控株未发现序列改变,符合率77．8％。结论 PCR扩增是一种快速、敏感、特异性的结核分支杆菌鉴定方法,鉴定结果同Bactec～460 TB捡测系统一致。结核分支杆菌对EMB耐药性的形成同embB基因突变有关。Bactec-460TB系统检测药物敏感性可发生漏诊或误诊,可能造成药敏结果与临床治疗效果不一致的情况。     

Contribution of AGC to ACC and other mutations at codon 315 of the katG gene in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from the Middle East

The presence of ACC and other mutations at codon 315 in the katG gene was detected by PCR amplification followed by restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) generated with restriction enzymes Msp I and MspA1 I in 37 isoniazid-resistant and 22-susceptible Mycobacterium tuberculosis isolates from Kuwait obtained in 2001. The mutation AGC to ACC was detected in 22 (60%) isolates while any mutation at codon 315 of the katG gene was present in 24 (65%) of 37 isoniazid-resistant isolates. The typing studies showed that majority of the isolates carrying mutations at codon 315 exhibited unique DNA banding patterns. The results were extended by additional analysis of 67, 28 and 17 isoniazid-resistant and 18, seven and six-susceptible M. tuberculosis isolates from Kuwait, Dubai and Beirut, respectively, that were analyzed previously for ACC mutation alone. These studies showed that one of 21, one of 10 and two of 11 isolates (all recovered from patients of Middle Eastern origin) with no AGC to ACC mutation from Kuwait, Dubai and Beirut, respectively, contained other mutations at codon 315 of the katG gene. None of the susceptible strains contained any mutation at codon 315. The PCR-RFLP with MspA1 I that detects all mutations at codon 315, compared with Msp I that detects only ACC mutation, identified more isoniazid-resistant strains with mutations at codon 315 in the katG gene. The data also showed that mutations other than AGC to ACC at codon 315 in the katG gene occur frequently in M. tuberculosis isolates recovered from Middle Eastern patients and should be incorporated in a rapid screen for the detection of mutations for isoniazid-resistance in the katG gene from this ethnic group.     

结核分支杆菌耐药基因检测结果分析

目的 分析肺结核患者结核分支杆菌获得性耐药情况,比较两种耐药性检测方法的检测效果.方法 用药敏试验(绝对浓度法)检测结核分支杆菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)的耐药情况,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分支杆菌耐药rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变.结果:400例肺结核耐药患者常规药敏试验耐药316例(79.8%);耐药基因检测耐药株288株,突变率72.0%.RFP耐药例数和耐药率明显高于SM、PZA和EMB(耐药例数:F=2.45,2.56,2.69,P＜0.05;耐药率:F=2.55,2.66,2.79,P＜0.05),rpoB突变株和突变率明显高于katG、rpsL、pncA和embB(突变株:F=2.28,2.46,3.19,3.33,P＜0.05～0.01;突变率:F=2.36,2.61,3.25,3.45,P＜0.05～0.01),高浓度药物耐药菌株的突变株和突变率显著高于低浓度药物耐药菌株,随着不规律用药时间的延长,耐药率和突变率均逐渐上升(耐药率:F=2.77,2.88,P＜0.05;突变率:F=2.72,2.85,P＜0.05).结论 PCR-SSCP是一种快速检测结核杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变敏感、特异的方法.     

Molecular analysis of isoniazid-resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from India

The presence of mutations in specific regions of katG, inhA, oxyR-ahpC and kasA associated with isoniazid (INH)-resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from India were analysed by DNA sequencing. Point mutations in the katG gene at codon 315 and a mutation at codon 138 were detected in 64.3% (45/70) and 4% (1/25) of isolates, respectively. Polymorphisms at codon 463 of the katG gene were found both in resistant and sensitive isolates. Mutation at the inhA and oxyR-ahpC promoter regions occurred in 11.4% (8/70) and 35.0% (14/40) of the isolates, respectively. No mutation was found to occur in kasA and inhA structural gene regions. Of the 70 resistant isolates studied, 55 (78.6%) showed mutation in the regions sequenced. This is the first comprehensive molecular analysis of INH resistance in India, which suggests that point mutation rather than deletion and insertion is the major cause of INH resistance.