三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS、NF-κB和C-IAP2的变化

背景与目的:探讨As2O3(arsenic trioxide,ATO)对HL-60细胞凋亡过程中细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、NF-κB(nuclear factor kappa B),及C-IAP2(cellular inhibitor of apoptosis proteins 2)的影响。材料与方法:以7.5μmol/L As2O3单独应用及与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)联合作用于HL-60细胞12、24 h后,流式细胞术检测HL-60细胞ROS的产生量;Western blot法检测NF-κB P65核蛋白的变化情况;半定量RT-PCR法检测C-IAP2的相对表达量。结果:7.5μmol/L的As2O3作用HL-60细胞12、24 h后细胞内ROS的生成增加,与阴性对照比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。NF-κBP65核蛋白的相对含量分别为49.3%±4.4%和23.1%±2.1%,C-IAP2的相对表达分别为72.9%±5.8%和59.3%±4.4%,较对照组均明显降低(P<0.05)。500μmol/L NAC和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞12、24 h后细胞ROS生成量相对减少,与AS2O3单独作用组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-κB P65核蛋白的相对含量分别为65.4%±4.9%和37.1%±3.4%,C-IAP2的相对表达量分别为81.1%±5.8%和73.7%±4.9%。较AS2O3单独作用组均明显增加(P<0.05)。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中,细胞内ROS生成增加,抑制NF-κB活性,同时下调其靶基因C-IAP2等的表达;NAC能阻断As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中ROS的生成,部分阻断了NF-κB活性的抑制。     

三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及Survivin和Caspase-3表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞凋亡过程中Survivin基因表达以及Caspase-3蛋白变化情况。方法:采用7.5μmol/L As2O3和20μmol/LAc-devd-cho单独或联合作用于HL-60细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA、免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的变化,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡率。结果:7.5μmol/LAs2O3作用HL-60细胞24h和48h后,其凋亡率分别为(31.93±0.34)%和(55.91±0.52)%,Survivin mRNA比值分别为51.42%和22.37%,Caspase-3蛋白激活逐渐增加;20μmol/L Ac-devd-cho对HL-60细胞凋亡和Survivin mRNA表达均无影响;20μmol/L Ac-devd-cho和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞24h和48h,细胞凋亡率分别为(9.61±0.21)%和(13.05±0.35)%,分别与As2O3单独作用组相比有显著性差异(P<0.05),Survivin mRNA比值分别为52.14%和21.08%,分别与As2O3单独作用组相比无显著性差异(P>0.05),Caspase-3蛋白激活被阻断。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡与抑制Survivin基因表达、激活Caspase-3蛋白的活性有关。     

As2O3诱导白血病细胞凋亡过程中Ca2+的变化及其调节

目的研究Ca2 在As2O3诱导白血病细胞系NB4、K562、HL-60凋亡中的作用,及抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Cae 清除剂Quin 2对As2O3引起的Ca2 变化的调控作用.方法细胞内Ca2 用Fluo-3AM标记,并用流式细胞仪检测.结果0.6 μmol/L As2O3作用72 h能诱导NB4发生44.9%的凋亡,提高其浓度至2.7和8.1 μmol/L,也能诱导K562和HL-60分别发生58.3%和62.3%凋亡.As2O3能不同程度降低NB4和HL-60细胞内Ca2 水平,对K562细胞内Ca2 水平影响不大.抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Ca2 清除剂Quin 2对As2O3引起的NB4细胞Ca2 水平下降显示出抑制作用,对HL-60细胞内Ca2 水平下降无明显抑制作用.结论Ca2 水平下降在As2O3诱导的不同白血病细胞凋亡作用过程起着不同的作用.抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Ca2 清除剂Quin 2可不同程度地抑制As2O3诱导的NB4细胞凋亡时细胞内Ca2 水平下降.     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的:初步探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)促进HL-60细胞凋亡及其可能机制.方法:不同浓度的As2O3(0、2.5、5、10 μmol/L)作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA的表达.结果:As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性 (P<0.05);As2O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达(P>0.05).结论:As2O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2O3抑制HL-60细胞ERK活性有关.     

活性氧改变在PIG11高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species, ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用.方法:本研究采用2', 7'-二氯氢化荧光素二脂(2', 7'-dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌细胞株pLXSN-PIG11-HepG_2细胞内 ROS,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystine, NAC)清除细胞内ROS后,FCM检测细胞内ROS水平的变化以及细胞凋亡率.结果:FCM测定结果显示,pLXSN-PIG11-HepG_2细胞内ROS水平(15.60±0.92)明显高于pLXSN-HepG_2细胞(4.90±0.70)和HepG2细胞(5.37±1.17),差异有统计学意义(P<0.01).NAC(10 mmol/L)清除细胞内ROS后,FCM检测显示pLXSN-PIG11-HepG_2细胞凋亡率较未清除前明显降低(P<0.01).结论:PIG11高表达诱导细胞凋亡的机制可能与细胞内ROS水平升高有关.     

PML-RARα表达对细胞凋亡诱导剂敏感性差异的分子机制研究

目的 研究PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导细胞凋亡敏感性差异的分子机制.方法 经As2O3作用人急性早幼粒细胞白血病HL-60和NB4细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡水平的变化,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas等基因在mRNA水平的表达变化.结果 As2O3可诱导NIM细胞出现明显的凋亡现象,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),Bcl-2基因表达明显下调(P<0.05),但Bax、Fas基因表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05).而对于PML-RARa表达阴性的HL-60细胞,经小剂量As2O3作用后,对细胞的增殖抑制作用不明显(P>0.05),未出现明显凋亡现象,Bcl-2、Bax、Fas或Bcl-2/Bax表达水平及比值变化不明显(P>0.05).结论 Bcl-2/Bax表达比值变化与否,可能是小剂量As2O3诱导PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞发生凋亡差异的分子机制.     

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺诱导人白血病K562/ADM细胞凋亡

目的 观察三氧化二砷(As2O3)联合丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对肿瘤多药耐药细胞K562/ADM的诱导凋亡效应,探讨谷胱甘肽(GSH)的含量变化对As2O3作用效果的影响.方法 以0.5、2.0、5.0 μmol/L As2O3单独及联合100 μmol/L BSO作用于K562/ADM细胞,应用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性,Annexin V/PI标记法观察细胞的凋亡效应,分光光度法检测细胞内GSH含量的变化.结果 K562/ADM细胞内GSH含量为(81.13±3.91)mg/g prot,明显高于K562细胞(P＜0.01).BSO单独或联合As2O3作用下,随作用时间的延长,K562/ADM细胞内GSH含量逐渐降低.临床剂量(0.5、2.0 μmol/L)As2O3联合BSO作用下,抑制作用逐步增强,72 h两组的细胞增殖抑制率分别为(90.63±5.95)%和(86.12±6.11)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P＜0.01);凋亡效应逐步增强,72 h两组的细胞凋亡率分别为(82.15±9.28)%和(92.72±9.41)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P＜0.01).结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关,As2O3联合BSO可有效诱导K562/ADM细胞发生凋亡.     

三氧化二砷诱导A375细胞凋亡过程中的信号传导途径研究

背景与目的： 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide, As2O3)在诱导人黑素瘤A375细胞凋亡中,对NF-κB、C-IAP2以及Caspase-3信号传导途径的影响。 材料与方法： 将As2O3和Caspase-3 抑制剂Ac-devd-cho单独或联合作用A375细胞后,采用Western blot 法检测NF-κB p65和Caspase-3表达水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR法检测C-IAP2 mRNA表达。 结果： 5.0 μmol/L As2O3单独处理A375细胞12 h和24 h以及As2O3联合Ac-devd-cho处理24 h组,随着As2O3作用时间的延长,Caspase-3激活蛋白增多、NF-κB p65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达下降,Ac-devd-cho能够阻断Caspase-3蛋白的活化,而对NF-κBp 65核蛋白和C-IAP2 mRNA表达无明显影响;免疫组织化学法也显示,Caspase-3激活型蛋白随着As2O3作用时间的延长而增高,但能被Ac-devd-cho阻断。 结论： As2O3可诱导A375细胞凋亡,能抑制A375细胞NF-κB、C-IAP2基因的表达,且不被Ac-devd-cho所阻断; As2O3能活化Caspase-3蛋白表达,而此效应可被Ac-devd-cho阻断。推测NF-κB-C-IAP2-Caspase-3通路可能是As2O3诱导A375细胞凋亡的途径之一。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的：初步探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）促进HL-60细胞凋亡及其可能机制。方法：不同浓度的As2O3（0、2.5、5、10μmol/L）作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1mRNA的表达。结果：As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性（P〈0.05）;As2 O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达（P〉0.05）。结论：As2 O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2 O3抑制HL-60细胞ERK活性有关。     

c-Myc和Fas在三氧化二砷体外诱导HL-60细胞凋亡中的变化与作用的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外诱导急性早幼粒白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)细胞HL-60凋亡的分子机制。方法:采用MTT方法检测As2O3对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和Fas蛋白表达,RT-PCR检测c-Myc和Fas的mRNA表达。结果:4.0μmol/L的As2O3作用96h可抑制70%的HL-60细胞,并使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡,P&lt;0.01;Fas蛋白表达升高,作用72h后阳性率由对照组的9.63%增加为32.84%,P&lt;0.01;Fas mRNA表达升高,c-Myc的mRNA表达降低,P&lt;0.01。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Fas蛋白及mRNA表达,下调c-Myc的mRNA表达。     

Urological applications of N.O.T.E.S.

While adrenal and kidney urological surgery has been performed in animal models mainly by transvesical accesses, to date, NOTES in humans remains in an investigational and developmental phase. Despite great experimental interest, no specific devices are currently available for urological indications in humans and therefore several instruments, taken from different specialist fields, have been used to access through the different natural orifices (including transgastric, transcolonic, transvaginal and transvesical approaches). Furthermore, the accumulating experience with the transvesical approach to the peritoneum suggests it presents new challenges for urologists in terms of technical demands. For these reasons, given their competition with the success of laparoscopy and minimally invasive techniques, NOTES applications in urology risk being underevaluated. In our opinion, after the initial enthusiastic phase, NOTES will cover only specific indications for urological conditions. The transvesical approach to the peritoneum however seems to be one of the best approaches for NOTES overall and certainly the most promising for urologists.     

F. N. A. C. of salivary glands

During a period of 12 years, 874 salivary gland lesions were aspirated of which 740 (86.85%) were from parotid gland. Cystic, inflammatory & neoplastic lesions were 25.25%. 54.45% & 20.30%, respectively. Plcomorphic adenoma was the commonest benign & adenoid cystic carcinoma was the most frequent malignant tumors. On cytohistologic correlation, sensilitvity of cytology for diagnosing cystic, inflammatory, neoplastic lesions proved to be 93.3%. 95.7% & 100% respectively. Overall accuracy for cytodiagnosis of malignant salivary gland lesions in our study was 96.07%.     

Combination chemotherapy of multiple myeloma--BCNU.cyclophosphamide.procarbazine.prednisolone and MCNU.cyclophosphamide.procarbazine.prednisolone therapy

Forty-four patients with progressive symptomatic multiple myeloma were treated with a protocol combining cyclophosphamide (10 mg/kg weekly), procarbazine (2 mg/kg daily), prednisolone (20 mg daily), and either BCNU (1 mg/kg weekly) (BCPP protocol) or MCNU (0.8-1 mg/kg) (MCPP protocol). Of these, 34 patients were treated with the former, and 10 patients with the latter. With BCPP protocol, 12 achieved a complete response, 11 evidenced a 75% response, and 7 displayed a 50% response. With MCPP protocol, on the other hand 2 achieved a complete response, 6 showed a 75% response, and 1 exhibited a 50% response. The median tumor halving time in both groups was 77 days and 57 days respectively. The 5-yr disease-free survival of patients treated with BCPP protocol was 62.0 +/- 10.8%. In MCPP group, 8 of 10 patients are alive with more than 49-87 weeks survival. Although myelotoxicity was moderate, other toxicities were moderate. Toxicity requiring dose modification and discontinuation of the scheduled therapy was observed.