鼻咽癌组织放疗前后细胞增殖凋亡的变化

目的 研究鼻咽癌组织放疗前后细胞增殖凋亡的变化。方法 采用TdT酶介导的生物素化dutp制品末端标记技术（terminal oxynucleotidyl transferase mediated dUTP biotion mick end labeling,TUNEL）和免疫组化S－P法,分别检测60例鼻咽癌患者在放疗前、放疗第2周、第4周时细胞凋亡率（apoptosis rate,AR）和增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果 鼻咽癌组织放疗后的AR明显高于放疗前;常规分割放疗组放疗第4周后的AR较放疗第2周时下降,而PCNA增殖指数升高（P＜0．01;加速超分割放疗组放疗第2周和放疗第4周的AR、PCNA增殖指数均无显著差异（P＞0．05）。结论 放射治疗鼻咽癌可以加速癌细胞的凋亡,鼻咽癌自发性细胞凋亡与放疗诱发的凋亡呈正相关。常规分割放疗过程中存在肿瘤细胞加速再增殖和细胞凋亡率下降,而采用超分割放疗可以减少鼻咽癌细胞加速再增殖,提高凋亡率。     

喉癌组织中c-jun蛋白的表达及其对细胞增殖和凋亡作用的研究

背景与目的:c-jun是早期原癌基因,其蛋白产物为AP-1(activatingprotein-1)转录因子的成分之一,参与许多生长因子和细胞因子基因的转录。最近人们发现肿瘤细胞内c-jun蛋白的表达水平和活性异常升高,其起着调控细胞增生、生存和凋亡的作用。本研究通过检测c-jun蛋白在喉癌组织中的表达并计算表达指数,分析其与临床因素的关系,探讨c-jun蛋白对喉癌细胞的调控作用。方法:收集我院耳鼻喉科手术切除的52例喉鳞状细胞癌组织、15例声带息肉组织和10例喉正常组织标本进行免疫组化研究,观察c-jun蛋白在这3种标本中的定位与表达。结果:喉癌组织中c-jun蛋白的表达指数犤(56.41±24.8)%犦不但明显高于声带息肉犤(32.48±17.8)%犦和喉正常组织(无表达),而且与喉癌组织分化程度和颈淋巴结转移密切相关(P均<0.01),但是与临床分期无相关性(P>0.05)。结论:c-jun蛋白在喉癌细胞中表达水平明显增高,其表达指数与喉癌组织分化程度、颈淋巴结有无转移有关。     

癌细胞有丝分裂和凋亡对鼻咽癌生长的影响

目的：检测治疗前鼻咽癌活检中癌细胞的有丝分裂指数和凋亡指数，探讨它们对肿瘤生长的影响，方法：收集治疗前鼻咽癌活检43例，在HE切片上检测癌细胞的有丝分裂指数（MI），在末端标记细胞死亡检测（TUNEL）染色片上计量凋亡指数（AI），结果：各例的MI和AI差异甚大，两个指数之间无相关性，根据这两个指数是高于和／或低均数，构成了反映肿瘤生长的四种可能性组合，MI＞均数和AI＜均数组的肿瘤生长较MI＜均数和AI＞均数组显著快。结论：治疗前各例鼻咽癌的生长快慢很不一样，在鼻咽癌生长进展过程中，存在着引起癌细胞有丝分裂和导致癌细胞凋亡两种事件；而对肿瘤生长起着主导作用的却是引起癌 丝分裂的因素。     

鼻咽癌中p53蛋白积聚对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响

目的：观察疗前鼻咽癌组织中Ｐ５３蛋白的积聚及其对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响。方法随机收集１９９７年疗前鼻咽癌活检标本４３例,采用免疫组化ＬＳＡＢ法ＤＯ－７一抗检测Ｐ５３蛋白的表达。在Ｈ＆Ｅ染色切片上位细胞死亡试剂盒检测瘤细胞凋亡,平均每个高倍视野下的凋亡瘤细胞数为凋亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ,Ｔ１）。比较高于位细胞死亡试剂盒检测瘤细胞凋亡,平均每个高倍视野下的细胞瘤细胞数为凋亡指数（ＴＵＮＥＬ     

姜黄素诱导低分化鼻咽癌细胞株CNE-2Z的凋亡

背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)是我国南方地区的高发肿瘤,发病早期的治疗主要是以放疗为主,而对晚期NPC患者则有必要进行适当的化疗。一些药物可通过诱导肿瘤细胞凋亡来达到治疗肿瘤的目的。本研究拟探讨姜黄素对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外增殖抑制作用及凋亡的影响。方法:不同浓度姜黄素处理CNE-2Z细胞,用噻唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率和IC50;用流式细胞术、Hoechest33258/碘化丙啶(PI)双染、琼脂糖电泳法观察细胞凋亡。结果:姜黄素能抑制CNE-2Z细胞的生长,其效果与姜黄素的浓度和作用时间有关,作用24h、48h、72h的IC50值为(24.05±0.47)、(19.20±0.17)、(7.35±0.50)μmol/L;5、10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,流式细胞术观察到细胞凋亡率分别为(4.9±3.2)%、(10.7±2.7)%和(14.7±0.5)%;10、20μmol/L姜黄素处理细胞24h后,荧光染色可见细胞缩小,染色质固缩,核染色体碎裂等凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带。结论:姜黄素可诱导CNE-2Z细胞凋亡,姜黄素对CNE-2Z细胞具有增殖抑制作用。     

分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响

目的：探讨常规分割放疗和超分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响。方法：采用ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄｕｔｐ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,分别检测６０例鼻咽癌患者在放疗第２周和第４周时细胞凋亡率（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ,ＡＲ）和增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｎｈｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达。结果：常规分割放疗组放疗第４周后的ＡＲ     

鼻咽癌放疗前、放疗中的细胞增殖动力学比较和意义

目的：探讨版画 咽癌放疗中是否存在肿瘤细胞的加速增殖,为鼻咽癌后程加速超分割治疗提供依据。方法：对放疗３￣４周的鼻咽部行鼻咽纤维镜活检,利用自动图象分析仪对病理活检阳性者进行疗前、疗中的细胞增殖动力学参数ＡｇＮＯＲｓ的检测和自身前后计量对照。结果：共得到１４对放疗前、放疗中３￣４周时的ＡｎＧＮＯＲｓ检测自身前后对照计量资料进行配对ｔ检验,结果表明放疗中的各参数大于疗前的各参数,疗前、疗中平均每核Ａ     

BHRF1表达对鼻咽癌细胞凋亡能力的影响

目的 了解ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ）基因ＢＨＲＦ１（ＢａｍＨＩ－ＨｒｉｇｈｔｗａｒｄｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅＩ）表达对鼻咽癌细胞抗凋亡能力的影响。方法 构建表达ＢＨＲＦ１重组载体并转入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞中,以检测癌细胞在＾６０Ｃｏ照射后生物学行为的改变。结果 ＢＨＲＦ１表达可抑制增殖细胞核抗原的表达,促使癌细胞的细胞周期重新分布,癌细胞对辐射的敏感性下降,生存能力增强,结     

透明质酸对鼻咽癌细胞增殖及裸鼠移植瘤生长特性的影响

研究透明质酸对鼻咽癌细胞体内外增殖特性的影响。方法以鼻咽吕ＣＮＥ－２Ｚ细胞为对象,采用增殖实验,裸鼠内成瘤实验,图像分析及免疫组化等方法,观察ＨＡ对癌细胞体内外增殖力的影响。结论ＨＡ对鼻咽癌细胞体外增殖及裸移植瘤的生长有明显促进作用,有助于进一步研究鼻咽癌的侵袭和转移机理。     

鼻咽癌组织中EB病毒LMP1的表达与癌细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨ＥＢ病毒编码的ＬＭＰ１在体内鼻咽癌细胞中,是否可能通过影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡的生物学过程,而在鼻咽癌的发展演进过程中起作用。方法：采用ＴＵＮＥＬ法原位检测癌细胞的凋亡程度,用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＬＭＰ１、ＰＣＮＡ、Ｐ５３和ｂｌｃ－２蛋白表达;分析ＬＭＰ１的表达与癌细胞增殖、凋亡以及与ｐ５３、ｂｃｌ－２表达的相关性。结果：ＬＭＰ１的表达与否,与鼻咽癌细胞增殖活性的差异无显著意义,而与癌     

PNCK对鼻咽癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 研究妊娠上调的非泛素性钙调蛋白激酶(Pregnancy-upregulated nonubiquitous calmodulin kinase,PNCK)在鼻咽癌组织中的表达以及对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测鼻咽癌癌组织和正常组织中PNCK表达水平。构建慢病毒载体干扰PNCK基因表达,并采用Real time PCR和免疫印迹结果证实,采用MTT方法、流式细胞术、Caspase3和Caspase7活性检测鼻咽癌肿瘤细胞增殖和凋亡的变化。结果 免疫组织化学结果显示PNCK蛋白在鼻咽癌癌组织中呈特异性高表达。Real time PCR和免疫印迹结果证实慢病毒成功干扰鼻咽癌CNE-2Z细胞中PNCK表达(PNCK基因在mRNA和蛋白水平表达受到显著抑制)。MTT检测结果显示抑制PNCK表达抑制CNE-2Z细胞增殖。此外,干扰PNCK表达引起CNE-2Z细胞Caspase3和Caspase7活性上升,流式细胞术表明干扰PNCK基因表达可以促进CNE-2Z细胞凋亡。结论 干扰PNCK基因表达抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,可能是治疗鼻咽癌的潜在靶点。     

汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组。采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3%、23.7%、33.4%、40.9%,IC₅₀为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0%、22.0%、36.1%、40.5%,IC₅₀为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4%、20.2%、35.0%、40.9%,IC₅₀为22.81 μmol/L。与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高（t=23.710,P=0.001;t=43.934,P<0.001）。20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升（P<0.05）,Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）。 结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用。     

ROS signaling by NADPH oxidase 5 modulates the proliferation and survival of prostate carcinoma cells

Prostate cancer (PCa) is the most commonly diagnosed cancer and second leading cause of male cancer death in Western nations. Thus, new treatment modalities are urgently needed. Elevated production of reactive oxygen species (ROS) by NADPH oxidase (Nox) enzymes is implicated in tumorigenesis of the prostate and other tissues. However, the identity of the Nox enzyme(s) involved in prostate carcinogenesis remains largely unknown. Analysis of radical prostatectomy tissue samples and benign and malignant prostate epithelial cell lines identified Nox5 as an abundantly expressed Nox isoform. Consistently, immunohistochemical staining of a human PCa tissue microarray revealed distinct Nox5 expression in epithelial cells of benign and malignant prostatic glands. shRNA‐mediated knockdown of Nox5 impaired proliferation of Nox5‐expressing (PC‐3, LNCaP) but not Nox5‐negative (DU145) PCa cell lines. Similar effects were observed upon ROS ablation via the antioxidant N‐acetylcysteine confirming ROS as the mediators. In addition, Nox5 silencing increased apoptosis of PC‐3 cells. Concomitantly, protein kinase C zeta (PKCζ) protein levels and c‐Jun N‐terminal kinase (JNK) phosphorylation were reduced. Moreover, the effect of Nox5 knockdown on PC‐3 cell proliferation could be mimicked by pharmacological inhibition of JNK. Collectively, these data indicate that Nox5 is expressed at functionally relevant levels in the human prostate and clinical PCa. Moreover, findings herein suggest that Nox5‐derived ROS and subsequent depletion of PKCζ and JNK inactivation play a critical role in modulating intracellular signaling cascades involved in the proliferation and survival of PCa cells. © 2014 The Authors. Molecular Carcinogenesis published by Wiley Periodicals, Inc.     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

下调miR-21表达抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖和侵袭

背景与目的：miR-21在人类多种肿瘤中异常高表达。本研究探讨干扰miR-21表达对鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：使用脂质体将miR-21 inhibitor转染CNE2细胞,以无关序列(NC inhibitor)作为阴性对照。采用qRT-PCR技术验证miR-21 inhibitor转染的CNE2细胞中miR-21的表达水平;通过MTS法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察下调miR-21表达对CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞中miR-21的表达明显下调,并且呈浓度依赖性。表明转染miR-21 inhibitor能有效抑制CNE2细胞中miR-21的表达。转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞与对照细胞相比,增殖速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验显示,下调miR-21表达抑制CNE2细胞迁移(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,下调miR-21表达抑制CNE2细胞侵袭(P<0.05)。结论：miR-21能促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,其可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要作用。     

Effect of Celecoxib on Apoptosis of Endometrial Carcinoma Cell

Objective:To investigate the effect of Celecoxib on proliferation and apoptosis of the endometrial carcinoma cell HEC-1B and the effect on the expression of Fas and Survivin mRNA.Methods:The inhibition on the growth of human endometrial carcinoma cell HEC-1B was investigated by cell culture and MTT experiment when treated with different concentrations of Celecoxib.The cell apoptosis was detected by flow cytometry and DNA Ladder Electrophoresis.The change of the expression of Fas and Survivin mRNA after the treatment of Celecoxib was detected With RT-PCR.Results:Celecoxib could effectively inhibit the growth of HEC-1B cells and induce apoptosis.Survivin mRNA expression was decreased and Fas mRNA expression was increased after treating with Celecoxib.Conclusion:Celecoxib could inhibit HEC-1B cell proliferation and induce its apoptosis.     

微小RNA-92a靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-92a（miR-92a）通过靶向PTEN／Akt信号通路对鼻咽癌HONE1细胞增殖与凋亡的调控作用。方法 采用Lipofectamine脂质体法向HONE1细胞转染miR-92a抑制剂（miR-92a组）和阴性对照（NC组）,设不行转染的HONE1细胞为对照组。转染成功后用实时荧光定量PCR（QPCR）检测miR-92a在不同细胞组中的表达情况;MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;Western blotting实验检测PTEN／Akt信号通路中PTEN和p-Akt蛋白的表达量。结果 转染48 h miR-92a组与对照组和NC组相比,miR-92a的表达量明显降低（P＜0.05）,而对照组和NC组的差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-92a组转染24、48、72、96 h的细胞增殖率分别为（84.51±2.74）％、（77.21±3.55）％、（62.07±3.57）％和（49.25±4.15）％,其中72、96 h的细胞增殖率低于对照组和NC组（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h的细胞凋亡率为（46.12±1.79）％,高于对照组的（6.99±0.72）％和NC组的（8.42±0.81）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-92a组转染48 h PTEN和p-Akt蛋白的表达水平分别为0.61±0.12和0.37±0.09,对照组分别为0.41±0.11和0.73±0.14,NC组分别为0.39±0.08和0. 68±0.07,与对照组和NC相比,miR-92a组细胞的PTEN表达升高,p-Akt表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 通过抑制miR-92a的表达来抑制鼻咽癌细胞增殖且促进其凋亡,可能是通过负调控PTEN／Akt信号通路来实现的。     

BRD4抑制剂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂GSK525762A对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法 0、0.1、1、10、100 μmol／L GSK525762A 处理鼻咽癌CNE-2细胞 24、48、72和96 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率变化,同时采用流式细胞术Annexin V-FITC／PI双染法检测不同浓度GSK525762A处理48、96 h后的CNE-2细胞凋亡情况,Transwell法检测不同浓度GSK525762A处理48、96 h后的CNE-2细胞侵袭能力,实时定量PCR检测不同浓度GSK525762A 处理48、96 h后凋亡相关基因的表达情况。结果 GSK525762A对CNE-2细胞增殖有抑制作用,增殖抑制率呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义（P＜0.05）;GSK525762A处理后的细胞早期、晚期及总凋亡率升高,均高于0 μmol／L,凋亡率随浓度升高而增加;穿膜细胞数均少于0 μmol／L,且随浓度升高而降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol／L比较,其余各浓度的Bcl-2 mRNA水平降低,Bax mRNA、Bak mRNA水平均升高,且各浓度间差异均有统计学意义（P＜0.05）;GSK525762A各浓度处理96 h的凋亡率、穿膜细胞数及凋亡相关基因mRNA均优于48 h（P＜0.05）。结论 BRD4抑制剂GSK525762A对鼻咽癌CNE-2细胞增殖有毒性作用,可诱导CNE-2细胞凋亡,恢复凋亡相关基因的表达,并降低细胞的侵袭能力。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对鼻咽癌细胞系的作用

ZDl839是一种喹唑啉类化合物,它是一种口服的选择性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,已被美国食品药品管理局批准用于治疗晚期非小细胞肺癌。鼻咽癌是一种存在表皮生长因子受体表达的上皮源性的恶性肿瘤,ZDl839对其作用如何还未见有报道。本实验通过体外研究初步探讨ZDl839在鼻咽癌治疗中的可能价值。     

EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响

背景与目的:已证实EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein,LMP1)具有转化致瘤作用,在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。LMP1的转化致瘤作用可能与细胞凋亡有关,本实验目的是观察EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生发展中的可能机制。方法:用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的EB病毒LMP1基因真核表达质粒导入CNE1,用荧光显微镜检测报道基因GFP的表达情况;用免疫组化法及Westernblot法检测目的基因LMP1的表达情况;用流式细胞仪、荧光染色及DNA片段分析等方法检测在有地塞米松磷酸钠或无血清饥饿诱导的情况下LMP1对CNE1细胞凋亡的影响。结果:CNE1G细胞(转染空载质粒PAT-GFP的CNE1细胞)及CNE1GL(转染目的基因质粒PAT-GFP-LMP1的CNE1细胞)有绿色荧光蛋白表达,CNE1细胞(未经转染的CNE1细胞)无绿色荧光蛋白表达;CNE1GL细胞LMP1呈阳性表达,而CNE1及CNE1G细胞均为阴性。CNE1、CNE1G及CNE1GL3组细胞分别用地塞米松磷酸钠或无血清1640培养液处理后均有凋亡出现,且两种诱导方法均能使CNE1GL组细胞的凋亡指数(apoptosisindex,AI)较CNE1及CNE1G组明显增高(P<0.05),而CNE1与CNE1G组的凋亡指数无明显差别。3组细胞常规培养下则无凋亡出现。结论:LMP1基因成功导入CNE1细胞