内源性一氧化碳对肺动脉平滑肌细胞增殖基因表达谱的影响

目的 运用芯片技术研究内源性一氧化碳（CO）刺激下血管平滑肌细胞内增殖相关基凼表达谮的变化。方法 取SD大鼠肺动脉平滑肌细胞进行离体培养,用血小板源性生长因子（PDGF,20ng／m1）和Hemin（20μmol／L）进行刺激后,用Affymetrix表达基因谱芯片检测其基因表达谱变化。结果 Hemin刺激与PDGF刺激相比差异表达基因366条,与增殖相关的差异表达基因21条,上调11条,下调10条。其中原来在PDGF刺激下上调表达的一些基因（Map2k3、cyclinD1、PDGFA、mybL1、a．nape10、MMP14等）在经内源性CO刺激后其表达则显著下调。结论 内源性CO很可能是通过作用于MAPK途径来抑制PDGF的促增殖功能,同时伴有cyclinD1、cyclinG1、P21等的参与。     

外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞的转分化和胶原合成效应

目的：大量研究表明内源性结缔组织生长因子(CTGF)在肾小管间质纤维化(TIF)进程中发挥了重要作用,为进一步阐明外源性CTGF的作用机制,该实验探讨了重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)刺激对人肾小管上皮细胞(HK2)转分化和胶原合成的作用。方法：rhCTGF 5 ng/mL刺激HK2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,同时在刺激后0,3,6,12,24,48 h各点收集细胞,RT-PCR检测上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Iα1(Col Iα1)和胶原IVα1(Col IVα1)mRNA表达变化。结果：rhCTGF 5 ng/mL刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E-cadherin mRNA表达,上调-αSMA mRNA表达,但对Col Iα1和Col IVα1mRNA表达没有影响。结论：外源性CTGF能导致HK2细胞转分化,但不能促进其胶原合成。     

儿童微小病变型肾病综合征致病相关基因筛查

目的比较微小病变型肾病综合征(MCNS)患儿与正常健康儿童外周血单个核细胞(PBMC)的基因表达谱变化,筛查MCNS相关致病基因,为揭示MCNS的发病分子机制和临床治疗提供线索。方法原发性MCNS患儿7例,正常同年龄对照组7例,Trizol法抽提PBMC总RNA;采用人类基因组表达谱芯片检测MCNS及正常健康儿童PBMC基因mRNA水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR检测部分基因转录水平,鉴定芯片相关检测结果。结果在33 000个基因转录本中,有969个转录本在MCNS患儿PBMC中存在表达差异,其中表达上调552个,表达下调417个。RT-PCR和荧光定量PCR检测结果与基因芯片较为一致。结论采用人类基因组表达谱芯片可快速有效地检测MCNS患儿PBMC中基因表达谱的变化,进而证实MCNS的发生、发展是涉及多基因改变的复杂过程。     

高氧对新生大鼠肺caspase-3和p53基因表达及肺细胞凋亡的影响

目的探讨高氧对新生大鼠肺caspase3和p53基因表达及肺细胞凋亡的影响。方法采用SpraqueDawley新生大鼠95%氧气暴露建立高氧肺损伤模型。应用RTPCR技术检测肺组织caspase3mRNA和p53mRNA水平,凝胶电泳条带用成像系统照相分析结果。计算目的基因PCR产物条带与内参照βactin条带光密度值的比值,作为p53基因的相对表达量,结果以x±s标记,而caspase3mRNA表达量则以阳性表达或阴性表达为标记。应用脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)原位检测细胞凋亡。光镜下随机计算5个视野中500个肺细胞中的阳性细胞数,结果以x±s标记。结果新生大鼠暴露于95%氧浓度环境中24h后肺组织中p53mRNA表达中度增加(q=3.2305,P>0.05),48h后表达显著增加,与空气对照组相比差异有统计学意义(q=7.2941,P<0.05)。新生鼠高氧处理72h、96h后,肺组织p53mRNA表达又恢复到正常水平。在各空气对照组和各高氧处理组中个别新生鼠肺的caspase3mRNA有微量表达,绝大多数新生鼠肺的caspase3mRNA没有表达,差异无统计学意义。95%氧暴露7天的新生鼠肺细胞凋亡水平明显高于空气暴露组新生鼠肺细胞凋亡水平,两者比较差异有极显著的统计学意义(F=100,P<0.001)。结论在高浓度供氧下,肺组织通过暂时上调p53基因的表达,介导细胞周期停滞,阻止G0/G1期细胞进入S期,抑制细胞分裂、增殖,同时p53促进细胞凋亡,从而导致肺生长发育受阻和肺损伤。新生鼠暴露于95%氧环境中,肺组织caspase3基因基本上不表达,因此推测高氧肺细胞凋亡可能存在不经过caspase3的凋亡途径。     

MYCN基因表达抑制促TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的神经母细胞瘤(NB)为小儿常见恶性肿瘤。MYCN基因高扩增NB细胞对TRAIL诱导凋亡多有抵抗。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株为研究对象,抑制其MYCN基因的表达,探讨其对TRAIL诱导凋亡有无增强作用。方法构建MYCN siRNA,转染NB细胞株SK-N-BE(2),抑制MYCN基因表达后,Western-blot法检测SK-N-BE(2)细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bid、DR4、DR5表达的变化,ELISA法检测细胞凋亡。结果转染MYCN siRNA的SK-N-BE(2)细胞中MY-CN基因表达显著降低(P<0.05)。MYCN基因表达抑制后,SK-N-BE(2)细胞DR5、Bid表达增高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL表达降低(P<0.05),DR4表达无变化(P>0.05),TRAIL诱导细胞凋亡显著增强(P<0.05)。结论 MYCN基因表达抑制后,可调控Bcl家族中相关蛋白、DR5的表达,促进TRAIL诱导NB细胞凋亡。     

体外头孢曲松对人肾小管上皮细胞凋亡基因的影响

目的探讨头孢曲松对人肾小管上皮细胞凋亡基因的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞,以不同浓度头孢曲松刺激后,倒置显微镜观察人肾小管上皮细胞形态,荧光定量PCR法检测不同浓度头孢曲松作用下人肾小管上皮细胞中凋亡相关基因p53、bcl-2及c-Myc的相对表达量。结果以不同浓度的头孢曲松(0、20、40、80 mg/L)体外刺激人肾小管上皮细胞,光镜下细胞形态未见明显改变。p53、c-Myc和bcl-2三个基因相对表达量在不同浓度头孢曲松的组间差异有统计学意义(P均0.01)。与另外三组相比,80 mg/L组p53及c-Myc基因相对表达量升高,bcl-2基因相对表达量降低,差异有统计学意义(P均0.01);而0、20、40 mg/L三组间3个基因相对表达量的差异无统计学意义(P均0.05)。结论头孢曲松在较高血药浓度下导致人肾小管上皮细胞促凋亡基因的表达增加,抑制凋亡基因的表达降低,这可能是临床头孢曲松引起肾损伤的机制之一。     

神经母细胞瘤SK—N—SH细胞在氯化钴模拟缺氧后侧群细胞基因表达谱的变化北大核心CSCD

目的探讨SK—N—SH神经母细胞瘤株在氯化钴模拟缺氧条件下侧群（sidepopulation,SP）细胞比例的变化及SP细胞基因表达谱的改变。方法采用二氯化钴模拟缺氧条件,然后利用Hoechst33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光检测分选功能分选出缺氧及常氧SK—N—SH细胞中的SP细胞,利用Agilent8×60K人（Human）G3表达谱芯片进行检测,并对基因芯片结果进行分析,以荧光定量PCR验证芯片结果。结果SK—N—SH细胞株的SP细胞比例约为8．65％,缺氧后降至约2．08％;缺氧SP细胞和常氧SP细胞mRNA及lincRNA的表达谱存在明显差异。差异〉2倍的基因有5077mRNA、1383lincRNA、其中上调的有2550mRNA、572lincRNA,下调的有2527mRNA、811lincRNA。差异表达的基因主要涉及细胞周期、DNA复制、p53及MAPK信号通路等生物学过程。荧光定量PCR基因结果与芯片差异基因结果表达趋势一致。结论缺氧使SP细胞比例下降,并使SP细胞mRNA和lincRNA的表达谱均发生显著改变,提示mRNA和lincRNA共同参与调节神经母细胞瘤SP细胞在缺氧环境中的生物学行为。     

低氧性肺动脉高压发病中的硫化氢的变化及意义

本文综述了关于低氧性肺动脉高压(HPH)发病中的硫化氢(H2S)变化及其意义,研究H2S对HPH及肺血管结构重建及对一氧化碳/一氧化氮(CO/HO)体系的调节作用、H2S对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用。以上研究表明H2S与内源性NO和CO相似,在低HPH发病过程起重要作用。     

地塞米松对脑缺氧缺血大鼠bid基因表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后bid基因表达及细胞凋亡的变化，地塞米松（DEX）对其的调控作用，从而阐明DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。方法 7d龄SD大鼠24只。随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX和NS组在缺血缺氧前12h腹腔内分别注射DEX、等量NS。通过建立新生大鼠HIBD动物模型，取实验侧大脑半球，采用RT-PCR技术检测脑bid基因表达，采用Tunel法检测凋亡细胞。结果 正常组无bid基因表达，HIBD组bid基因表达明显上调，凋亡细胞数明显增加（P〈0．01）；与HIBD组比较，DEX组bid基因表达明显下调，而凋亡细胞数明显减少（P〈0．01）。结论 脑缺氧缺血引起神经细胞凋亡可能与bid基因表达明显上调有关。DEX能通过下调bid基因表达，从而抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

Smac基因的克隆及其对Burkitt''''s淋巴瘤细胞的促凋亡作用

目的克隆人促凋亡基因(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用.方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞;用Western blot测定外源基因的表达;Hoechest 33 258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase-3酶活性.结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h,可显著诱导Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h,可显著诱导Raji细胞中caspase-3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P <0.05.结论转染并表达外源性Smac基因,可显著诱导人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡.其机制可能与caspase-3酶活性上调有关.     

Endothelin-1 inhibits apoptosis of pulmonary arterial smooth muscle in the neonatal rat

Vascular wall remodeling in pulmonary hypertension is contributed to by an aberration in the normal balance between proliferation and apoptosis of smooth muscle. We observed that endothelin (ET)-1 is a critical mediator of vascular remodeling in neonatal rats chronically exposed to 60% O(2), but has no direct proliferative effects on cultured neonatal rat pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs). These findings led us to hypothesize that ET-1 may modulate remodeling by inhibiting apoptosis of smooth muscle. ET-1 (0.1 microM) was found to significantly attenuate both Paclitaxel- and serum deprivation-induced PASMC apoptosis, likely through stimulation of the ET(A) receptor (ET(A)R). ET-1 also prevented Paclitaxel-induced up-regulation of pro-apoptotic Bax and cleaved (activated) caspase-3. In rat pups exposed from birth to 60% O(2) for 7 d, arterial wall expression of Bax was decreased and expression of both ET(A)R and anti-apoptotic Bcl-xL were increased. Furthermore, increased numbers of TUNEL-positive cells were evident in the walls of pulmonary arteries from 60% O(2)-exposed animals treated with a combined ET receptor antagonist, SB217242, relative to air-exposed and vehicle-treated groups. Together, these findings suggest that ET-1 mediates remodeling of neonatal rat pulmonary arteries by inhibiting smooth muscle apoptosis.     

米贝地尔对血小板衍生生长因子诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨新型钙通道拮抗剂米贝地尔(mibefradil,Mib)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖的影响。方法体外培养HPASMCs,随机分为对照组、PDGF刺激组、Mib干预组、PDGF+Mib组,PDGF刺激组细胞用25 ng/ml PDGF刺激,Mib干预组细胞加入10μmol/L的Mib干预,PDGF+Mib组细胞予PDGF和Mib联合干预。通过MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色法观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率的差异均具有统计学意义(P0.05),并以72 h时的差异更明显;其中PDGF组均为最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测各组G0/G1期及S期细胞比例差异均有统计学意义(P0.05);其中PDGF刺激组G0/G1期细胞比例最低、S期细胞比例最高,与其余3组比较差异均有统计学意义(P0.05);PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化染色结果表明各组间PCNA表达差异有统计学意义(P0.05);其中PDGF组的PCNA表达最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。结论 Mib组能显著抑制PDGF诱导的HPASMC增殖,抑制PDGF促进的细胞周期进程,对PCNA的表达具有明显的抑制作用。     

血小板源生长因子α亚基受体结构域切除对血管平滑肌凋亡和c-sis基因表达的影响

目的 探讨从血小板源生长因子α(platelet-derived growth factor,PDGF-α)受体水平阻断对肺血管平滑肌细胞凋亡和c-sis基因表达的影响。方法 采用两种方法干预肺动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),一种是在培养液中分别给予不同剂量的受体结构域切除的PDGF—α受体腺病毒重组体Ad5CMV-PaRtr(ACP),另一种是加入固定的中浓度ACP液后再分别加入不同浓度的血小板源生长因子BB(PDGF-BB),对不同组细胞的细胞周期、凋亡细胞百分率和c-sis原癌基因表达进行测定。结果 中、大浓度ACP对细胞增殖有明显的抑制作用,且使凋亡细胞百分率明显升高。在中浓度ACP的作用下,加入PDGF-BB不能促进VSMC的增殖,亦不改变细胞的凋亡水平。不同浓度的ACP可使c—sis mRNA的表达上调。在中浓度ACP的作用下,加入PDGF-BB可下调c—sis mRNA的表达。结论 ACP作为细胞增殖的抑制剂,能在中、大剂量下明显增加Go／G1期细胞的数量,抑制肺VSMC的增殖,增加细胞的凋亡率,同时使c-sis mRNA的表达上调。     

Fibroblast growth factor-2 expression is altered in lambs with increased pulmonary blood flow and pulmonary hypertension

A lamb model of pulmonary hypertension, developed by inserting an aortopulmonary vascular graft (shunt), displays vascular remodeling and increased pulmonary blood flow characteristic of children with congenital heart disease. The purpose of this study was to determine whether expression of fibroblast growth factor-2 (FGF-2), a smooth muscle cell mitogen, is altered in shunt lambs. FGF-2 mRNA and protein levels were increased in lung tissue extracts from shunt lambs at 4 wk of age relative to age-matched controls (p < 0.05). FGF-2 protein levels were also increased in the pulmonary arteries and serum of shunt lambs (p < 0.05). Pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMC) and endothelial cells (PAEC) were isolated from 4 wk-old lambs and subjected to cyclic stretch and laminar shear stress to mimic increased pulmonary blood flow. Stretch and shear increased FGF-2 promoter activity, and intracellular and extracellular FGF-2 protein levels in both cell types (p < 0.05). Exogenous FGF-2 stimulated PASMC proliferation at levels detected in the extracellular medium of sheared cells (p < 0.05). Elevated FGF-2 signaling by PASMC and PAEC exposed to increased pulmonary blood flow may play a role in the pulmonary vascular remodeling associated with the shunt model of pulmonary hypertension secondary to congenital heart disease.     

Role of nitric oxide in regulating neonatal porcine pulmonary artery smooth muscle cell proliferation.

Nitric oxide (NO), which is known to inhibit systemic vascular smooth muscle cell proliferation, is used in the management of neonatal pulmonary hypertension. Our objectives were to determine: (1) if endogenous NO production by neonatal porcine pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) varied with oxygen tension in vitro, and (2) the effect of exogenous NO and inducible NO synthase (iNOS) stimulators and inhibitors on PASMC proliferation and apoptosis. PASMCs were exposed to different conditions (varying PO(2), NO donors and scavengers, iNOS stimulators and inhibitors) and proliferation, apoptosis, and cyclic guanosine 5(')-monophosphate (cGMP) assessed. PASMCs proliferated best between 5 and 10% O(2) but cGMP levels were similar at all oxygen levels. NO donors (S-nitroso-N-acetyl-penicillamine, NOC-12, NOC-18) inhibited PASMC proliferation in a dose-dependent manner with associated cGMP increases, while NO scavengers (carboxy-PTIO), iNOS stimulators (interleukin-1beta, lipopolysaccharide), and iNOS inhibitors (aminoethylisothiourea) did not affect proliferation or cGMP. No changes in apoptosis were found at the concentrations of NO donors or iNOS stimulators used. These results suggest that while exogenous NO inhibits PASMC proliferation, endogenous NO may not regulate proliferation during changes in oxygen tension or cytokine levels. Endothelial derived and inhaled NO may attenuate smooth muscle hyperplasia and vascular remodeling. Inducible NOS in porcine PASMCs appears resistant to stimulation with interleukin-1beta or lipopolysaccharide. The mechanisms underlying hypoxia-mediated changes in PASMC proliferation require investigation.     

顺铂诱导体外培养儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡机制研究

目的 探讨P53、Bcl-2在顺铂诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞凋亡发生过程中的作用.方法 通过原代培养儿童睾丸卵黄囊瘤细胞获取实验对象,再用顺铂进行凋亡的诱导,丫啶橙(AO)和溴乙啶(EB)双重染色观察细胞形态变化,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫细胞化学方法检测P53、Bcl-2表达的变化.结果 在顺铂作用下,细胞发生圆缩脱壁,凋亡小体形成.凋亡指数随着作用时间延长而增加(P<0.01),P53的表达在早期(12 h)即达到高峰,此后未见持续增强,而Bcl-2的表达却随时间延长而下降(P<0.01),并有表达位置的转移,形成环绕胞核的分布.结论 顺铂诱导儿童睾丸卵黄囊瘤细胞的凋亡,而P53表达的增强以及Bcl-2表达的减弱、转位可能是其重要的环节.     

内源性一氧化碳/血红素氧合酶体系在缺氧性肺动脉高压形成中的作用

目的 研究内源性一氧化碳／血红素氧合酶（CO／HO）体系在慢性低氧环境中的变化规律，探讨CO／HO体系在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。方法 将第1批大鼠随机分为对照组、低氧1d组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组；第2批大鼠随机分为对照组、低氧组、低氧＋锌原卟啉（ZnPP）均。均以右心导管法测定肺动脉压力；称量并计算右心室与左心室加室间隔的比例；应用双波长分光光度法间接测定大鼠血浆及肺组织匀浆中CO含量；应用免疫组织化学技术对第一批大鼠肺内HO－1蛋白表达进行定位及半定量分析。结果 大鼠低氧7－14d开始形成稳定的肺动脉高压，伴右心室肥大；血浆及肺组织心浆中CO含量分别于低氧1d和低氧14d时两次明显增高（P＜0．01）；低氧1－3d肺泡及肺泡间质巨噬细胞和炎性细胞（F＝8．72，P＜0．001）；低氧＋ZnPP组大鼠肺动脉平均压明显高于对照组及低氧组，血浆及肺组织匀浆中CO含量明显 于氏氧组（P均＜0．01）。结论 内源性CO／HO体系在慢性低氧刺激下明显增高，且呈时间依赖性的双峰现象，其中第2次代偿性增高与肺动脉压力的变化密切相关，HO－1抑制剂的干预研究进一步表明，内源性CO／HO体系对缺氧性肺动脉高压形成具有积极的调节作用。     

多重基因转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖和免疫原性的影响

目的 观察多重基因转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、凋亡及免疫原性的影响.方法 以空病毒质粒(SH/Ad组)、携带肿瘤抑制基因人野生型p53(wt-p53)的腺病毒质粒(SH/p53组)及携带wt-D53、免疫相关基因B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(CM-CSF)基因的腺病毒质粒(SH/BB-102组)转染SH-SY5Y细胞,并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(SH组).分别采用免疫印迹法、流式细胞术和酶联免疫吸附法检测p53蛋白、B-1分子和GM-CSF的表达.观察转染前后细胞生长及凋亡情况.用混合淋巴细胞培养法检测瘤苗对T细胞增殖和细胞因子分泌的诱导作用.结果 腺病毒转染SH-SY5Y细胞后,目的基因得到了高效表达.与SH和SH/Ad组相比,SH/p63和SH/BB-102组细胞生长速度减慢,凋亡增加(P<0.05).SH/BB-102组与其他组比较,能够促进T细胞增殖,增加γ干扰素和白细胞介素-2的分泌(P<0.05).结论 wt-p53、E7-1和GM-CSF基因联合转染可以抑制SH-SY5Y细胞的生长、诱导细胞凋亡,并且可以增强肿瘤细胞的免疫原性.     

MiR-34a-5p在MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老中的作用机制

目的 研究小分子AURKA抑制剂MLN8237诱导神经母细胞瘤细胞衰老的作用机制.方法 利用细胞转染的方法改变SK-N-SH细胞中miR-34a-5p的表达水平,通过SA-β-gal染色方法及流式细胞术检测细胞衰老及细胞周期情况.运用CCK8检测不同处理下细胞增殖的变化情况.RT-PCR及蛋白质免疫印迹(Western...     

Expression of cell cycle-related gene products in Langerhans cell histiocytosis

BACKGROUND The pathogenesis of Langerhans cell histiocytosis (LCH), a disease characterized by an abnormal accumulation of the dendritic Langerhans cells, is still unknown. Based on the monoclonality of the CD1a+ cell and reports of familial clustering, it is hypothesized that a genetic alteration at a cellular level may be causative. This genetic change may have an effect on the cellular mechanisms controlling proliferation and apoptosis.MATERIALS AND METHODS LCH-lesions were studied for the expression of Ki-67, present in the nucleus of proliferating cells. Furthermore, the expression of cell cycle-related gene products TGF-beta receptor I and II, MDM2, p53, p21, p16, Rb, and Bcl2 were studied. The TGF-betaR genes play a role in tumor suppression, whereas Bcl2 inhibits apoptosis. The remaining genes are part of either the p53-p21 and/or p16-Rb pathways, which induce cell cycle arrest or apoptosis in response to DNA damage.RESULTS In 30 biopsies the diagnosis of LCH could be confirmed on the basis of CD1a positivity (27 bone and 3 skin). All cases showed scattered nuclear-positive staining for the proliferation marker Ki-67. In more than 90% (n >/=27) of these cases, expression of TGFbeta receptor I and II, MDM2, p53, p21, p16, Rb, and Bcl2 was detected in lesional LCH cells. The overexpression was in general heterogeneous, ranging from limited focal staining of scattered cells within the lesion to strong diffuse staining.CONCLUSIONS These findings suggest that the cellular mechanisms that sense and respond to DNA-damage, namely the p53-p21 pathway and the p16-Rb pathway, are activated. The expression of Ki-67 indicates that the cells in LCH are proliferating. The observed overexpression of Bcl2 may play a role in the activation of p53 and p16 and/or the arrest of apoptosis.