整合素αvβ3、组织因子及血管内皮细胞生长因子在实验性脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨整合素αvβ3、组织因子(tissue factor, TF)及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）组织中的表达。方法：随机选取成年雄性棕色挪威大鼠25只,一眼为实验组,经氩激光（波长532 nm）光凝诱导CNV形成,另一眼为正常对照。分别于光凝后第3,7,14,21及28天随机取5只大鼠,行眼底照相、眼底荧光血管造影（fluorescence fundus angiography, FFA）检查,并取出视网膜,通过免疫组织化学方法检测整合素αvβ3,TF及VEGF在CNV中的表达及相互关系。结果：正常对照组无新生血管生成,无整合素αvβ3和TF的表达,但视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜及脉络膜血管内皮细胞中均有少量VEGF的表达。光凝7 d后, FFA检查发现实验眼光凝区有圆盘状荧光渗漏,表明有新生血管生成。光凝后3 d,光凝区视网膜神经节细胞层、内核层、外核层缺损区、视网膜及脉络膜血管内皮细胞均表达少量的VEGF、整合素αvβ3及TF,随着时间的延长,CNV逐渐形成,VEGF、整合素αvβ3及TF表达水平也逐渐增加(P<0.01),其中整合素αvβ3的表达于第7天达高峰;VEGF的表达于第14天达高峰;TF的表达于第21天达高峰。结论：整合素αvβ3,VEGF及TF分别表达于实验性大鼠CNV形成初期、中期及晚期,其在CNV中表达的顺序对临床选择抗新生血管药物的治疗时间具有十分重要的意义。     

色素上皮衍生因子抑制脉络膜新生血管的实验研究

目的：观察重组人色素上皮衍生因子（recombinant human Pigment Epithelium—Derired Factor．rhPEDF）对氩激光诱导的棕色挪威（brown Norway,BN）大鼠脉络膜新生血管的抑制作用。方法：对2组10只BN大鼠单眼行氩激光视网膜光凝,建立脉络膜新生血管模型。光凝后1周,一组动物玻璃体内注射2ug rhPEDF／10uL PBS;另一组动物玻璃体内注射10uL的PBS作为对照组。光凝后2周,对2组动物进行眼底荧光血管造影（fundus fluorescence vascular imaging,FFA）、组织病理学检查及光镜下测量脉络膜新生血管（choroidal neovasculanzation,CNV）厚度并对FFA结果及CNV厚度进行图像及统计学分析,以评估rhPEDF对脉络膜新生血管的抑制效果。结果：视网膜光凝后2周,FFA检查对照组与rhPEDF组相比,荧光素渗漏明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;CNV厚度检测结果,rhPEDF组光凝区CNV厚度低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：对氩激光诱导形成CNV的BN大鼠玻璃体腔内注射rhPEDF,可以抑制CNV的增殖。     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P<0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P<0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

血管内皮生长因子在氩激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在氩激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中的表达及其意义。方法:BN大鼠18只,随机分成3组,每组6只,单眼视网膜氩激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球,应用免疫组织化学技术对光凝区进行因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的检测以观测CNV形成,并检测CNV形成过程中VEGF蛋白的表达,分析其变化趋势。结果:FⅧR:Ag免疫组织化学检查结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3周达到高峰。正常BN大鼠视网膜中,VEGF在视网膜神经节细胞层、内核层、色素上皮层、视网膜和脉络膜血管内皮细胞表达。视网膜光凝后,除上述部位外,VEGF在外核层和脉络膜的光凝损伤区阳性表达。光凝后1周~3周,光斑区内FⅧR:Ag、VEGF阳性染色密度逐渐增加(P&lt;0.05),FⅧR:Ag与VEGF阳性染色密度正相关(r=0.83,P&lt;0.05)。结论:CNV形成与VEGF表达正相关,VEGF表达增多可能是CNV形成和增殖的主要原因之一。     

奥曲肽抑制人肝癌细胞血管内皮生长因子的表达与合成

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响.方法利用酶联免疫吸附法、流式细胞仪、逆转录-聚合酶链反应检测不同剂量的奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L的VEGF合成与分泌及VEGF mRNA表达的影响.结果奥曲肽(10-5～10-10 mol/L)可以抑制人肝癌细胞株 MHCC97-L中VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,呈剂量依赖性,可见饱和现象.结论奥曲肽能够抑制人肝癌细胞株MHCC97-L中VEGF的表达、合成和分泌,可能是奥曲肽抗血管新生的作用机制之一.     

BN大鼠脉络膜新生血管动物模型的制作

目的:脉络膜新生血管(CNV)是许多眼病致盲原因,目前无理想治疗方法,深入研究其发病机理及探索其治疗新方法成为必要.制作CNV动物模型是该研究的基础.方法:本研究拟用氩激光诱导BN大鼠CNV动物模型,并用组织病理切片及眼底荧光血管造影进行观察.结果:光凝后7d新生血管形成,21d达高峰,光凝区出现圆盘状的荧光素渗漏.结论:氩激光光凝可以成功制作BN大鼠CNV动物模型,为CNV防治的研究奠定了基础.     

RT-PCR测定大鼠脉络膜新生血管色素上皮衍生因子研究

目的建立氪激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型,建立RT-PCR方法检测大鼠视网膜及相关组织色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA性。研究PEDF mRNA与CNV生长的关系,从而探讨在CNV生长中的作用。方法对6组24只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)实验眼视网膜进行光凝,功率360mW、光斑直径50μm、曝光时间0.05s,围绕视盘等距光凝8个点,创建CNV模型。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PEDF mRNA在大鼠视网膜中的表达水平的变化。结果FFA光凝斑盘状荧光素渗漏,证实CNV形成。视网膜中PEDF mRNA表达水平呈先升高后降低的变化。结论氪激光诱导BN大鼠产生CNV模型,病理结构稳定,RT-PCR方法适合做大鼠动物模型PEDF mRNA的半定量检测,PEDF的变化与新生血管的发送更有关。     

半导体激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型的实验研究

目的：评价532nm半导体激光诱导棕色挪威(brown norway,BN)大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovasularization,CNV）模型的可行性。方法：使用半导体激光（功率150mW,光斑直径75μm,曝光时间0.1s）对10只BN大鼠建立CNV模型。分别于光凝后7、14、21和28?d随机选取5只行眼底荧光素血管造影术（fundus fluorescein angiogrphy,FFA）和光学相干断层成像术（optical coherence tomography,OCT）检查,比较FFA早期（<2min）和晚期（>10min）荧光渗漏斑数/平均渗漏面积（mm²）的变化,并行统计学分析。结果：光凝后FFA检查经组间两两比较,14、21和28d的早期荧光渗漏斑数/渗漏面积差异无统计学意义(P>0.05),14、21和28d与7d相比差异有统计学意义(P<0.05);7、14、21和28d早期和晚期荧光渗漏斑数差异无统计学意义(P>0.05)。激光斑视网膜的平均厚度与平均荧光渗漏面积有相关性（r=0.73,P<0.05）。结论：半导体激光诱导BN大鼠的CNV模型是可行的。FFA联合OCT可有效检测CNV的形成和变化。     

奥曲肽抑制胃癌侵袭和转移的实验研究

目的　通过体外及体内实验 ,研究生长抑素类似物奥曲肽对胃癌侵袭和转移的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法　选用改良的BoydenChamber膜侵袭系统 ,观察奥曲肽对胃癌细胞迁移和侵袭的影响 ;建立裸鼠人胃癌原位移植瘤模型 ,给予奥曲肽皮下注射治疗 8周后 ,观察胃癌转移情况 ;免疫细胞化学染色检测奥曲肽对胃癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 ;用明胶酶法及RT PCR法了解奥曲肽是否下调胃癌细胞MMP 2表达及MMP 2mRNA的表达。结果　经奥曲肽作用后 ,体外培养的胃癌细胞的趋化细胞数 (5 0± 4 )或侵袭细胞数 (30± 3)均明显低于对照组 (10 7± 11,5 6± 5 ,均P <0 0 1)。奥曲肽明显降低裸鼠人胃癌移植瘤的转移 ,其肿瘤血管的形成数亦明显低于对照组。此外 ,奥曲肽降低胃癌细胞VEGF的表达 ,明显下调MMP 2mRNA的表达 ,导致MMP 2的合成减少。结论　奥曲肽能有效抑制胃癌侵袭和转移。其作用机制可能与降低胃癌细胞运动能力、抑制MMP 2表达及肿瘤血管形成有关     

脂质体介导endostatin基因转染抑制脉络膜新生血管的实验研究

目的探讨脂质体介导endostatin基因体内转染对脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)模型的抑制效应.方法激光光凝方式建立brown norway 大鼠CNV模型,随机分为endostatin组,空质粒组,对照组;脂质体介导法分别导入重组endostatin基因真核表达载体pSecTagA-hEndostatin或空载质粒pSecTagA.原位杂交、免疫组化和ELISA法检测endostatin基因mRNA转录及其蛋白表达;脉络膜血管平铺、FFA、CD105免疫组化观察对CNV的抑制效应.结果 Endostatin基因可有效转染视网膜、RPE及脉络膜并得到表达.转基因后7、14 d眼组织匀浆endostatin蛋白表达量为(50.14±3.43)ng /眼和(31.5±2.21)ng/眼;Endostatin组CNV面积、荧光渗漏程度、CD105阳性细胞表达量与空质粒组及对照组差别显著.结论脂质体介导endostatin基因体内转染可以有效抑制CNV的形成.     

视瞻昏渺发病机理与VEGF、bFGF、PEDF表达

目的：观察脉络膜新生血管（CNV）动物模型视网膜色素上皮至脉络膜之间细胞因子VEGF、bFGF、PEDF表达的变化。方法：用半导体激光光凝建立CNV动物模型，于造模后1W，2W，3W，4W，8W分别行免疫荧光检查（FFA）；于造模后8W处死动物行HE染色观察视网膜和脉络膜的病理组织学变化，免疫组化法检测VEGF、bFGF、PEDF表达。结果：HE染色可见脉络膜新生血管形成。造模后模型组VEGF、bFGF上调，VEGF／PEDF值升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；PEDF值轻度上调，与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：半导体激光可诱导CNV动物模型，该模型可做为视瞻昏渺的动物模型进行实验研究。     

内皮抑素抑制脉络膜新生血管及VEGF和bFGF表达的研究

目的 研究内皮抑素对实验性脉络膜新生血管的抑制作用。方法 50只雄性BN大鼠，40只为实验组，10只为空白对照组。用半导体激光光凝实验组BN大鼠的视网膜，随机分为4组，内皮抑素Ⅱ组、内皮抑素Ⅰ组、生理盐水组和激光损伤组，每组10只；由光凝后当天开始，至光凝后13d，每天分别给予腹腔注射内皮抑素20mg／kg、10mg／kg和生理盐水1.2mL，激光损伤组光凝后不做任何处理。空白对照组为未行激光光凝和给药处理的BN大鼠。于光凝后第7天及第14天行眼底血管荧光素造影检查、组织病理学检查、VEGF免疫组化检测和bFGF mRNA的原住杂交检测。结果随着内皮抑素剂量增加，荧光素渗漏率和渗漏强度减弱；激光光凝后7d，内皮抑素Ⅱ组与其他组相比，渗漏强度的差异有显著性；光凝后14d，两个内皮抑素组与生理盐水组和激光损伤组比较，荧光素渗漏强度差异均有显著性；生理盐水组和激光损伤组差异无显著性。激光光凝后7dVEGF和bFGFmRNA表达达高峰，光凝后14d下降，内皮抑素组vEGF和bFGFmRNA表达较激光损伤组减弱，并呈剂量依赖性趋势。结论 内皮抑素可以有效地抑制实验性CNV的形成。下调VEGF和bFGF的表扶可能是肉皮抑素抑制CNV的作用机制之一．     

经瞳孔温热疗法治疗年龄相关性黄斑变性的脉络膜新生血管的疗效观察

目的观察经瞳孔温热疗法（transpupillary thermotherapy，TTT）治疗年龄相关性黄斑变性（age—related macular degeneration，ARMD）的脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）的疗效。方法12例12眼ARMD患者行TTT治疗，根据CNV的大小选择不同的光斑大小和能量，照射时间为1min。结果12眼ARMD经TTT治疗后，视力无明显提高，但黄斑出血、渗出、水肿减轻或吸收，眼底血管荧光素造形（FFA）显示大多数CNV渗漏减少或停止，原CNV瘢痕化。结论TTT治疗ARMD的脉络膜新生血管有效，但还需要更多的病例来评价治疗效果。     

实验性兔脉络膜新生血管模型研究

目的:探讨氩激光创建有色家兔脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的可行性,初步探讨CNV的有关发生机制,为其进一步防治研究奠定基础.方法:健康有色家免20只(40只限),每只兔一眼为实验眼,另眼为对照眼.以波长514.5 nm的氩绿激光(光斑直径50um,功率0.7W,时间0.1s),在距视盘2～3个视盘直径的颢侧髓线上下视网膜处密集照射20个点.分别于光凝后3,7,14,21,30天进行眼底荧光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)及脉络膜造影(indocyanine green angiography,ICGA).检查后处死动物(4只/次),摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片.常规HE染色及用免疫组化(S-P法)检测血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜的表达.结果:光凝后7天出现CNV,兔CNV发生率尚(63.8%),眼底造影和光镜下均有相应改变,FFA表现为视网膜血管无关的荧光素渗漏,ICGA见CNV充盈;光镜下可见到CNV结构;光凝后2周开始VEGF在视网膜神经节细胞以及内核层有表达.结论:氩激光诱导有色家免CNV模型成模时间短,成模率较高;VEGF参与了CNV的形成进程.     

经瞳孔温热疗法治疗渗出性老年性黄斑变性的疗效观察

目的观察经瞳孔温热疗法(TTT)治疗渗出性老年性黄斑变性(AMD)时对脉络膜新生血管(CNV)的封闭效果及对视力的影响。方法采用随机、自身对照、回顾性分析的方法,对41例临床诊断为老年性黄斑变性中的脉络膜新生血管患者进行治疗。治疗效果用国际标准视力表和荧光眼底血管造影(FFA)进行评估。结果随访6~15个月,视力提高或不变为45眼,占98%(45/46);视力下降为1眼,占2%(1/46)。CNV膜完全或部分封闭率为84%(31/37),保持不变为15%(6/37)。结论TTT是治疗渗出性AMD的一种有效方法,它能够封闭大部分CNV,维持或提高患者的视功能。     

经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德治疗兔脉络膜新生血管的实验研究

目的观察经瞳孔温热疗法(transpupillary thermatherapy,TTT)联合玻璃体腔注射曲安奈德治疗兔脉络膜新生血管的有效性、安全性。方法用倍频532 nm激光建立兔脉络膜新生血管模型,然后对造模成功的8眼脉络膜新生血管的兔采用经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德进行治疗,定期观察眼压与眼底情况。结果联合治疗后3个月,眼压有2眼轻度升高,吲哚青绿造影示6眼渗漏完全消失。结论经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德可以有效、安全地治疗脉络膜新生血管。