二氨基肉豆蔻酸活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氨基肉豆蔻酸(D-82)诱导HL-60细胞凋亡的作用及与线粒体途径活化的关系。方法 D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,或D-826mg·L-1处理细胞6,12及24h后,锥虫蓝染色法检测细胞存活率;AO-EB染色分析凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA损伤;罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9活性;Western印迹法检测胞浆和线粒体细胞色素c(Cytc)及细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 D-82的浓度和作用时间与HL-60细胞存活率密切相关,相关系数分别为0.938(P<0.01)和0.809(P<0.05)。D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,细胞存活率分别为(81±11)%,(70±9)%和(56±11)%;D-826mg·L-1作用HL-60细胞12和24h,存活率降至(36±7)%和(24±9)%。D-821.5,3和6mg·L-1诱导HL-60细胞出现凋亡形态学改变及DNA阶梯状条带,凋亡率从正常对照组的(2±2)%上升至(18±4)%,(40±11)%和(75±11)%(n=3,P<0.05)。D-823和6mg·L-1组,罗丹明平均荧光强度由正常对照组的24±5降至20±5及12±4(n=3,P<0.05),说明线粒体膜电位降低;D-823和6mg·L-1组胱天蛋白酶3活性分别增加39%和125%,胱天蛋白酶9活性分别增加61%和145%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比,D-823和6mg·L-1组线粒体Cytc表达分别降低22%和38%(P<0.05,P<0.01),胞浆中Cytc表达分别升高22%和65%(P<0.05);Bax表达分别增加45%和116%(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达分别减少27%和40%(P<0.01)。结论 D-82通过活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡。     

四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果:ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力,10 ng.ml-1ZGDHu-1作用HL-60细胞24~72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率分别为(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%和(21.3±1.2)%,均显著高于对照组(P<0.01);48 h、72 h的IC50分别为180、180 ng.ml-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;出现典型的细胞形态改变,DNA片端化,经50~1 000 ng.ml-1的ZGDHu-1作用后,SubG1由(3.2±1.6)%上升至(67.7±5.9)%,与对照组(0.7±0.5)%比较,具有显著性差异(P<0.05),Annexin-V/PI标记升高,TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10~100 ng.ml-1ZGDHu-1作用3 d后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas表达增强,而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加,ΔΨm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论:ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力,低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化,高浓度时促进细胞凋亡,其机制可能与Bax表达上调,线粒体膜电位下降等有关。     

孕酮对Aβ_(25-35)诱导的阿尔采末病模型神经元凋亡的影响

目的研究神经甾体孕酮(PROG)对Aβ25-35诱导的AD模型神经元凋亡的影响。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、模型组及3个浓度PROG处理组。采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞存活率,Hoechest 33342核染色法检测神经元凋亡,Western blot检测胞质caspase-3蛋白表达水平。结果与模型组比较,PROG能剂量依赖地对抗Aβ25-35引起的大鼠神经元存活率的降低;且细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均降低,细胞凋亡率分别为(53.0±4.2)%(P>0.05)、(31.8±2.1)%(P<0.01)和(11.8±1.2)%(P<0.01),caspase-3表达水平分别为(5.80±0.27)(P>0.05)、(4.98±0.48)(P<0.01)和(3.58±0.21)(P<0.01);其中0.1μmol.L-1 PROG处理组的细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PROG能通过抑制神经元凋亡对抗Aβ诱导的神经元损伤,产生保护作用。     

远志皂苷对β淀粉样蛋白片段1-40诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨远志皂苷抑制β淀粉样蛋白片段1-40(Aβ1-40)诱导的PC12细胞凋亡的作用机制。方法采用聚集状的Aβ1-40 25μmol·L-1诱导PC12细胞凋亡,然后将处理后的PC12细胞分为Aβ1-40模型组和远志皂苷50,100和200μmol·L-1组,同时设正常细胞对照组。采用MTT比色法检测细胞存活率;膜联蛋白-Ⅴ和PI双染法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞凋亡基因Bcl-2和Bax及细胞色素c(Cyt c)表达阳性的细胞百分率;Western印迹法检测PC12细胞中Cyt c的表达水平。结果与正常对照组比较,Aβ1-40模型组PC12细胞的存活率明显降低(P<0.01),为(31±7)%;Bcl-2阳性表达细胞率降低(P<0.01),为(23.9±1.9)%;Bax和Cyt c阳性表达细胞率升高(P<0.01),分别为(79.0±3.7)%和(49.2±3.6)%,Bcl-2/Bax阳性表达细胞比值为0.30。与模型对照组比较,远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率分别升高至(51±13)%,(64±7)%和(84±10)%(P<0.01);Bcl-2阳性率升高至(38.7±0.9)%,(53.7±1.6)%和(60.3±0.8)%(P<0.01),Bax阳性率分别降低为(60.8±1.9)%,(41.5±2.2)%和(32.7±1.4)%(P<0.01),Bcl-2/Bax比值亦分别上升为0.64,1.29和1.84;Cyt c阳性率分别降低至(45.4±3.4)%,(30.2±2.2)%和(27.5±1.0)%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率和Cyt c蛋白表达水平亦明显升高(P<0.01);远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24h,PC12细胞凋亡率和Cyt c表达水平较模型组均降低(P<0.01)。结论远志皂苷对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是抑制Bax和Cyt c表达,增加Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路。     

p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的作用机制

目的探讨p53非依赖性细胞信号通路在依托泊苷诱导的细胞凋亡中的相关作用机制。方法常规培养HL-60细胞(p53基因缺失),采用0(溶剂对照组)、25、50、100和200μmol/L的依托泊苷处理处于对数生长期的HL-60细胞。通过MTT比色法检测HL-60细胞的增殖率变化,流式细胞术分析HL-60细胞凋亡率变化情况,Elisa方法检测Caspase 3和Caspase 9活力,胞浆Cytochrome c水平,western blotting方法检测HL-60细胞中TAp73、DNp73、p-JNK、p-P38、Bax和Bcl-2的蛋白水平变化。结果在依托泊苷处理中,HL-60细胞增殖率显著下降(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);Caspase 3和Caspase 9活力明显增强,胞浆Cytochrome c水平显著升高(P<0.01);同时,尽管TAp73和DNp73无明显表达,但p-JNK、p-P38和Bax表达量则显著增多(P<0.05),Bcl-2表达量则无变化。结论 JNK和P38通过p53非依赖性的细胞信号通路参与调控了依托泊苷诱导的线粒体依赖性的细胞凋亡过程。     

腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制

目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24～72 h或腺苷0.5～4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P<0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P<0.01)。腺苷0.5～4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P<0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P<0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法采用透射电镜,hoechst染色和流式细胞仪(FCM)观察PC12细胞凋亡,间接免疫荧光流式细胞术检测PC12细胞bcl2的表达。结果PC12细胞自然凋亡率为(15±01)%,05mmol·L-1、1mmol·L-1和2mmol·L-1MPP+作用24h后,PC12细胞凋亡率分别为(441±38)%、(549±21)%和(822±26)%;20μmol·L-1和40μmol·L-1姜黄素对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可分别使05mmol·L-1MPP+处理组细胞凋亡率由(441±38)%下降到(341±38)%和(179±15)%(P<001);PC12细胞经20μmol·L-1姜黄素处理24h后,其bcl2表达率由正常对照的(3643±790)%增加到(7673±860)%(P<001)。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与促进bcl2的表达有关。     

地西他滨联合丙戊酸增强HL-60细胞hPer3基因的表达

目的探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸(VPA)联用对白血病细胞株HL-60的作用及对human peri-od3基因(hPer3)的表达调控的影响。方法 DCA 1.0及4.0μmol·L-1,VPA 2.0 mmol·L-1,VPA 2.0 mmol·L-1+DCA 1.0μmol·L-1,VPA 2.0 mmo.L-1+DCA 4.0μmol·L-1作用HL-60细胞48 h。MTT法检测细胞存活,FITC-AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡,甲基化聚合酶链反应和实时荧光定量PCR检测hPer3基因启动子甲基化状态和mRNA表达,流式细胞术检测CD14表达率。结果 VPA 2.0+DCA 1.0联合用药组生长抑制率为(49.6±5.2)%,VPA 2.0+DCA 4.0联合用药组为(66.3±7.3)%,均高于其相应单药组,差异具有统计学意义(P<0.01)。VPA 2.0+DCA 1.0联合用药组〔早期:(167±3)%,晚期:(32±4)%〕和VPA 2.0+DCA 4.0联合用药组〔早期:(37±5)%,晚期:(36±5)%〕凋亡率均高于其相应单药组,差异具有统计学意义(P<0.01)。VPA 2.0+DCA 1.0联合用药组和VPA 2.0+DCA 4.0联合用药组hPer3启动子甲基化状态均明显低于其相应单药组。VPA2.0+DCA 1.0联合用药组和VPA 2.0+DCA 4.0联合用药组hPer3 mRNA表达分别为1.75±0.33和3.02±0.36,均明显高于其相应单药组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。VPA 2.0+DCA 1.0联合用药组和VPA 2.0+DCA 4.0联合用药组CD14表达率分别为(16.39±1.68)%和(14.82±0.94)%,均明显高于其相应单药组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 DCA联合VPA能显著加强抗白血病效应,作用机制可能与上调hPer3基因的表达相关。     

姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与凋亡诱导的影响

目的研究姜黄素对人原髓细胞白血病HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,探讨其诱导细胞凋亡的机理。方法应用MTT比色法、细胞荧光染色法和Western blotting检测姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制、凋亡诱导以及对HL-60细胞表达Bcl-2、Caspase9和c-myc的影响。结果姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与剂量相关(P<0.05);经姜黄素作用后HL-60细胞的形态差异明显,表现凋亡的特征性变化,而且姜黄素作用后HL-60细胞的Bcl-2和原癌基因c-myc的表达量低于对照组(P<0.05),而Caspase9的表达量则明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制体外培养的HL-60细胞增殖,其诱导HL-60细胞凋亡的途径可能通过线粒体介导。     

抗生素骨水泥填充技术联合自体富血小板血浆对慢性创面修复效果及病人生活质量的影响

目的探讨抗生素骨水泥填充技术(Masquelet)联合自体富血小板血浆(PRP)对慢性创面修复效果及病人生活质量影响。方法选择2018年1月至2018年10月安康市中医医院创伤整形科收治的慢性创面病人60例,按照治疗方法不同分为观察组30例及对照组30例;对照组病人创面清创后以PRP外敷治疗,观察组病人创面清创后先行Masquelet技术,后行PRP治疗。比较两组慢性创面病理切片中真皮细胞DNA含量、创面缩小率、细菌清除率、肉芽组织覆盖率、肉芽组织厚度以及治疗后生活质量(SF-36)评分。结果治疗后,观察组的创面病理切片中真皮细胞DNA含量为(27.56±1.23),明显多于对照组(24.26±0.53),P<0.05;观察组创面缩小率明显大于对照组［(82.25±9.68)%比(55.58±7.53)%,t=12.01,P<0.01］;观察组细菌清除率明显高于对照组［(86.23±8.58)%比(76.01±7.56)%,t=11.24,P<0.01］;观察组肉芽组织覆盖率明显高于对照组［(88.56±9.78)%比(66.58±6.54)%,t=10.33,P<0.01］;观察组肉芽组织生长厚度明显厚于对照组［(6.58±0.21)mm 比(4.19±0.37)%,t=19.26,P<0.01］;治疗3个月后观察组SF-36评分高于对照组［(81.20±4.01)分比(71.50±5.19)%,t=5.66,P<0.01］。结论Masquelet技术联合PRP治疗慢性创面,可促进创面愈合,改善病人生活质量,可临床推广。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时caspase-3，8，9蛋白活性与mRNA的动态变化

目的:研究辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中caspase-3,8,9活性与mRNA的动态变化,探讨其凋亡通路。方法:20μmol.L-1辛伐他汀处理K562细胞,48 h观察细胞形态学;24,48和72 h流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3,8和9活性;半定量RT-PCR检测caspase-3,8,9的mRNA变化。结果:20μmol.L-1辛伐他汀作用K562细胞48 h后细胞出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;24,48和72 h辛伐他汀处理组细胞凋亡率较对照组的增加值分别为(6.10±0.35)%,(14.15±0.42)%和(30.70±0.65)%,差异均具有显著性(P<0.01);不同时间辛伐他汀处理组的caspase-3,8,9活性与mRNA表达量均比对照组明显升高(P<0.01)。结论:caspase-3,8,9蛋白活性与mRNA上调是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的重要原因和机制。     

雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究

目的:体外研究中药雄黄主要成分As4S4对子宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以As4S4不同浓度(7.5、15、30、60mg/L),分12h,24h,36h,48h,60h处理Hela细胞,用光镜观察细胞变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;用DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生。结果:不同浓度(7.5、15、306、0 mg/L)的As4S4处理的Hela细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系,差异有非常显著性(P<0.01);As4S4诱导Hela细胞的凋亡率为(8.13±1.13)%~(62.36±4.42)%,与对照组比较(2.84±1.88)%,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性;DNA ladder呈梯状条带。结论:雄黄体外对宫颈癌细胞株Hela细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用。     

槲皮素对热应激后神经胶质瘤细胞凋亡及热激蛋白表达的影响

目的探讨槲皮素对神经胶质瘤细胞(C6细胞)凋亡的影响及作用机制。方法 C6细胞加入槲皮素0~200μmol·L-1培养1 h后,于42℃水浴加热1 h,再正常培养12 h。MTT法检测C6细胞存活率,Hoechst/PI双染法,annexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,Western印迹法检测热激蛋白70(HSP70)表达。结果与正常对照组相比,加热组细胞存活率和细胞凋亡率均无明显改变,但加热组HSP70表达水平从正常对照组的0.22±0.01升高到0.36±0.02(P<0.01)。槲皮素能明显抑制C6细胞增殖,槲皮素50,100,150和200μmol·L-1细胞存活率分别为103%,86%,77%和75%,呈浓度依赖性(r=0.94,P<0.05)。槲皮素50,100和200μmol·L-1显著诱导C6细胞凋亡(P<0.05)。与加热组相比,随着槲皮素浓度的增加,C6细胞早期和晚期凋亡率均明显增加,最高细胞凋亡率为59%,槲皮素200μmol·L-1处理后明显降低了加热导致的HSP70表达增加,降低了53%(P<0.01)。结论槲皮素可以抑制HSP70表达并诱导神经胶质瘤细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯联合5-氟尿嘧啶抗人肝癌细胞增殖作用的研究

目的观察维生素E琥珀酸酯(VES)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)抗人肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用。方法体外培养的SMMC-7721细胞以VES联合5-FU分别作用24和48h,MTT法测定细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率以及Fas的表达。结果MTT检测显示,VES6μg/mL作用细胞24h后抑制率为(2.78±0.05)%,随药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制率显著增加(P<0.01);相同条件下,VES与5-FU合用较两药单用抑制作用显著增加(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,SMMC-7721细胞自然凋亡率为(0.86±0.20)%,VES24μg/mL,5-FU30μg/mL及两者合用作用细胞24h后凋亡率分别为(30.08±2.32)%,(18.23±1.58)%和(63.68±2.88)%(P<0.01),细胞表面Fas表达增加。结论VES联合5-FU通过阻滞细胞周期于G0/G1期、促进细胞表面Fas的表达协同抑制肝癌细胞增殖。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

单用Acivicin和联用顺铂诱导HepG_2细胞凋亡的实验研究

目的 :观察Acivicin单用及联用顺铂后对HepG2 细胞凋亡及相关基因Bcl -2、c -myc、p53表达的影响。方法 :Acivicin和顺铂分别或联用处理HepG2 细胞 ,采用MTT法测定细胞毒性 ;采用细胞凋亡原位检测法检测细胞凋亡率 ;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl -2、c -myc、p53 的表达。结果 :Acivicin为0 28、0 56、0 84、1 12、1 40mmol/L时 ,HepG2 细胞的凋亡率分别为(3±1 25) %、(3 7±2 0) %、(10±1 25) %、(17 4±4 5) %、(16 9±3 5) %。Acivicin(1 40mmol/L)在24、48、72h致HepG2 细胞的凋亡率分别为 (16 9±3 5) %、(27 9±4 3) %、(47 2±3 0) %,与对照组相比差异显著 (P<0 05) ;顺铂 (67μmol/L)致HepG2细胞 (24h)的凋亡率为 (73 4±1 5) %;Acivicin(1 40mmol/L)联用顺铂 (67μmol/L)致HepG2 细胞 (24h)的凋亡率为 (94 7±0 5) %,较两者单用显著增加 (P<0 01)。Bcl-2、c -myc、p53 检测结果显示 ,各组Bcl -2、c -myc、p53 的表达比对照组均有增加。结论 :Acivicin诱导HepG2 细胞凋亡呈剂量/时间依赖性 ;Acivicin与顺铂联用后可增强顺铂致HepG2 细胞凋亡的作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鱼藤酮诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将培养的大鼠PC12细胞分别加入EGCG1,5和10μmol.L-1预处理30 min后加入鱼藤酮250 nmol.L-1继续作用24 h。MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,JC-1染色检测线粒体膜电位变化。结果与鱼藤酮模型组存活率(77.0±1.3)%相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组细胞存活率显著增加(P<0.05),分别为(79.8±2.3)%,(82.4±2.2)%和(88.3±2.0)%。Hoechst33258染色发现,EGCG组细胞核形态明显改善。与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加8.2倍;与鱼藤酮模型组比较,EGCG组细胞凋亡率分别下降46%,25%和63%,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测鱼藤酮组凋亡率为33.8%,EGCG 1,5和10μmo.lL-1组的凋亡率下降至30.6%,14%和15.7%。与模型组相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组线粒体膜分别增高了2.48,3.96和4.04倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 EGCG具有抑制鱼藤酮诱导的细胞凋亡作用,其机制可能与其稳定线粒体膜电位有关。     

二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制

目的　观察长春瑞滨 (VRB)诱导人肺癌Calu 3细胞凋亡时Bcl 2和半胱天冬酶 3的表达有无变化。方法　以不同浓度的VRB( 2 0 ,40和 60 μmol·L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu 3细胞 2 4h后 ,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白表达水平 ;以半胱天冬酶 3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶 3活性。结果　VRB( 2 0 ,40和60 μmol·L-1)处理细胞 2 4h ,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为 ( 3 .1±0 .6) % ,( 7.8± 1 .2 ) %和( 1 9.6± 4.3 ) % ,较对照组 (凋亡率为 0 )显著增高且呈剂量依赖性 (P <0 .0 1 ) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率分别为 ( 3 7.6±6.9) % ,( 2 5 .4±6.2 ) %和( 8.4±2 .5 ) % ,较对照组 ( 4 8.3±7.1 ) %显著降低且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ;肺癌细胞半胱天冬酶 3活性分别为 ( 3 3 2± 1 6) ,( 4 1 7± 1 1 )和 ( 63 1± 2 7)μmol·L-1·h-1,较对照组 ( 1 95±1 2 ) μmol·L-1·h-1显著增高且呈剂量依赖性(P <0 .0 1 )。结论　VRB可以诱导肺癌细胞凋亡 ,抑制Bcl 2表达及增强半胱天冬酶 3活性