大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法 采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果 大黄素（5～80 μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用。P＜0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P＜0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G₀/G₁期。结论 大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。     

大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法 采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果 大黄素（5～80 μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用。P＜0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P＜0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G₀/G₁期。结论 大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响

目的研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响。方法倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达。结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象。CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用。FCM检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强。Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变。结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡。     

不同浓度的盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞的抑制作用实验研究

目的研究探讨不同浓度盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞CNE-1/CNE-2和5-8F的抑制作用。方法选用鼻咽癌高分化鳞癌细胞株CNE-1和鼻咽癌低分化鳞癌细胞株CNE-2、5-8F作为实验组,人脐静脉内皮细胞株EVC-304为正常细胞对照组,利用MTT法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的增殖影响;利用Hoechst 33342染色法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的凋亡影响;利用流式细胞术检测盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的细胞周期影响。结果不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞有量效相关的抑制增殖作用,EC50分别为9.924μg/ml(CNE-1),7.068μg/ml(CNE-2),9.905μg/ml(5-8F),浓度为50μg/ml时抑制率达到95%以上,与对照组正常细胞相比差异均有统计学意义(P<0.01);不同浓度的盐酸千金藤碱3种鼻咽癌细胞有量效相关的诱导凋亡的作用,到12.5μg/ml时,处理组肿瘤细胞与阴性组相比染色质浓缩成斑块状,差异显著(P<0.05);同时,12.5μg/ml终浓度的盐酸千金藤碱处理不同的鼻咽癌细胞48 h后,与阴性对照组相比,可见实验组G0/G1期鼻咽癌细胞显著增多,S期及G2/M期明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明盐酸千金藤碱能抑制其DNA合成,改变细胞周期。结论盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞均有抑制作用,可能机制包括诱导其凋亡并且改变其细胞周期。     

环孢素A对人胃癌MGC80-3细胞周期影响以及诱导其凋亡相关机制的研究

目的 探讨环孢素A(CsA)对人胃癌MGC80-3细胞周期影响以及诱导其凋亡相关机制的研究.方法 采用流式细胞仪检测不同浓度CsA作用MGC80-3细胞后,细胞生长周期的变化以及细胞内活性氧(ROS)产生;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色于荧光显微镜观察CsA处理后细胞凋亡形态学的改变;Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达变化.结果 流式细胞仪检测结果显示CsA可浓度依耐性阻滞细胞周期在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(F=48.21,P<0.05,P<0.01);能显著增加细胞内ROS含量(F=90.24,P<0.01).AO/EB染色后细胞发生肿胀、缩小甚至碎裂等典型凋亡形态学改变.Western blot分析结果表明CsA可激活细胞内Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 CsA可能通过阻滞细胞生长周期抑制MGC80-3细胞增殖,其诱导细胞凋亡的作用机制可能与细胞内ROS大量生成以及Caspase-3蛋白高水平的表达有关.     

EGCG诱导人胃癌细胞G1期阻滞

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯epigallocatechin- 3- gallate(EGCG)对人胃癌MGC -80 3细胞株增殖的影响及其分子机制。方法:采用MTT法测定EGCG对胃癌细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析经EGCG处理4 8h后MGC - 80 3细胞周期改变;运用免疫细胞化学和免疫印迹技术分别检测CyclineE和磷酸化Rb蛋白表达改变。结果:EGCG对MGC - 80 3细胞增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性。EGCG诱导MGC - 80 3细胞G1期阻滞。EGCG处理后免疫细胞化学检测CyclineE的表达下调.免疫印迹检测磷酸化Rb蛋白表达下调。结论:EGCG通过诱导G1期阻滞,抑制MGC -80 3细胞增殖,其诱导细胞周期阻滞作用与调节CyclineE、磷酸化Rb表达相关。     

木黄酮对白血病K562细胞增殖的影响

目的:探讨木黄酮(genistein)抑制白血病K562细胞增殖的机制.方法:用噻唑蓝染色法检测genistein对K562细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪进行细胞周期解析,通过细胞形态学观察细胞分裂;应用RT-PCR方法检测白血病细胞WT1 mRNA表达.结果:Genistein浓度分别为2～30μg/ml作用K562细胞72 h,细胞增殖呈浓度依赖性受抑,与对照组相比差异显著(P＜0.01),IC50=11.4μg/ml;细胞周期解析发现,浓度为30μg/ml的genistein作用K562细胞12 h,引起了明显的G2/M期阻滞,24 h后G2/M期细胞增至93%;细胞分裂指数与对照组比没有明显差别;30μg/ml genistein作用K562细胞24 h,3 h起WT1 mRNA表达开始降低,24 h时降至对照的30%.结论:genistein抑制K562细胞增殖,诱导G2期或M早期阻滞及下调WT1的表达.     

瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响,评价其体外抗肿瘤活性。方法制备不同终浓度(200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL)小钻80%乙醇提取物及顺铂。取对数生长期人乳腺癌细胞MCF-7、人结直肠癌细胞LOVO、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16,采用四甲基噻唑蓝法检测不同浓度小钻乙醇提取物及顺铂作用48 h后4种肿瘤细胞的增殖情况,计算增殖抑制率及半数抑制浓度(IC₅₀)。结果各浓度小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖均有一定抑制作用,抑制率随浓度的增加而升高(均P<0.05),但终浓度最高为200μg/mL时抑制率<80%。小钻乙醇提取物对4种细胞的IC₅₀值均>20μg/mL,而顺铂的IC₅₀值均<10μg/mL,小钻乙醇提取物对4种细胞的抑制作用均低于顺铂(均P<0.05)。结论小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞的体外增殖有一定的抑制作用,但其致死作用不明显,活性低于顺铂。     

斑蝥素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的:研究斑蝥素(CTD)对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CTD对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析Hela细胞周期及CTD对细胞周期的影响。结果:CTD对Hela细胞24、48和72h的IC50值分别为3.2、2.5和1.4μg/ml。CTD浓度为3.2μg/ml时,细胞周期滞留在G2期。结论:CTD对Hela细胞的增殖有抑制作用;流式细胞仪显示细胞周期出现明显的G2/M期阻滞。     

黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌CNE-2Z生长的抑制作用

目的观察黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖和细胞周期的作用。方法MTT法、凋亡检测试剂盒检测不同浓度黄连以及小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长抑制作用以及凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的改变;裸鼠实验进行进一步的体内实验。结果黄连及其小檗碱能够抑制CNE-2Z细胞增殖,且随药物浓度增加抑制效应增强,呈现浓度依赖性,不同浓度的黄连和小檗碱分别处理细胞24,48,72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50黄连分别为(13.70±2.46)μg/ml,(10.02±3.41)μg/ml、(8.94±2.45)μg/ml,小檗碱分别为(3.59±1.24)μg/ml,(2.84±1.02)μg/ml,(1.47±0.45)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性(P<0.01)。不同浓度黄连和小檗碱作用细胞24h后,G0/G1期细胞明显下降,S期细胞明显升高(P<0.05,P<0.01)。两者对CNE-2Z细胞周期具有阻滞作用,可以阻滞在S期。动物实验显示肿瘤体积减小,差异有显著性。结论黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的黄连和小檗碱可能通过阻滞CNE-2Z于S期而抑制其增殖;对鼻咽癌细胞接种的裸鼠肿瘤体积有抑制作用。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

内毒素对睾丸功能影响的研究进展

众所周知生殖道感染、炎症和其他疾病可抑制雄性生殖功能,但对系统性炎症和疾病引起男性不育的具体机制却所知甚少。内毒素是一种高效炎症激活物,可诱导炎症感染、内毒素血症、败血症休克及多组织器官损伤等,虽然内毒素广泛用于其他系统的炎症研究,但对其在生殖系统炎症的研究较少,因而深入了解内毒素对睾丸功能的影响,有助于进一步理解内毒素所致疾病对雄性生殖功能的影响。本文就内毒素的结构和生物学功能及其对睾丸生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞功能的影响进行了相关研究。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

免疫性肝损伤大鼠枯否细胞对肝星状细胞增殖的影响及芍药苷的作用

目的探讨芍药苷(Pae)通过免疫性肝损伤大鼠枯否细胞(KC)影响肝星状细胞(HSC)的增殖能力。方法用卡介苗加脂多糖诱导大鼠肝损伤模型,肝脏原位灌流分离大鼠KC和HSC,观察共培养的形态学改变,观察Pae作用后的KC培养上清对HSC增殖的影响。结果免疫性肝损伤大鼠KC能明显促进HSC的增殖,在Pae作用后,KC培养上清能抑制HSC的增殖。结论KC是Pae发挥作用的靶细胞之一,Pae可通过作用于KC抑制HSC的增殖。