刺五加多糖的免疫调节作用研究

目的 研究刺五加多糖(acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)对小鼠腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞体外激活作用.方法 培养小鼠腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞,经不同浓度的ASPS作用48h后,用比色法分析腹腔巨噬细胞吞噬中性红细胞的能力;Griess法测定培养液中一氧化氮合酶含量;反转录聚合酶链反应检测脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平.结果 ASPS能够明显提高巨噬细胞吞噬活性.能够显著增加一氧化氮(nitric oxide,NO)的生成量.反转录聚合酶链反应检测结果显示,经ASPS处理后,小鼠腹腔巨噬细胞IL-1、TNF-α mRNA的表达高于对照组;而小鼠脾淋巴细胞IL-2 、TNF-α mRNA的表达高于对照组.结论 ASPS对小鼠腹腔巨噬细胞具有激活作用,并能促进腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞产生细胞因子.     

皮质酮对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的 进一步明确天然糖皮质激素对巨噬细胞免疫功能的影响及其时效和量效关系.方法 收集大鼠腹腔巨噬细胞,分别用10～1 000 ng/ml的皮质酮(corticosterone,CORT)刺激,检测细胞的黏附、趋化和吞噬功能;使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量.结果 50 ng/ml的皮质酮显著增强巨噬细胞的黏附功能(P＜0.05),10 ng/ml和50 ng/ml的皮质酮刺激细胞后,其趋化功能均显著增加(P＜0.05).同时,50 ng/ml的皮质酮还可显著增强巨噬细胞的吞噬功能(P＜0.05)和促进巨噬细胞分泌TNF-α(P＜0.01),而使用高浓度皮质酮(500 ng/ml和1 000 ng/ml)处理时,巨噬细胞的上述功能增强趋势减弱或无增强;在0.5～5 h范围内,皮质酮处理1 h时细胞的吞噬功能和分泌TNF-α的功能增强最明显,刺激更长时间后其功能的增强趋势逐渐减弱.结论 一定剂量的天然糖皮质激素急性刺激可明显增强免疫功能.     

核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及其在人牙周膜成纤维细胞中的表达和意义

目的 构建含人核心结合因子α1(CBFα1)基因的过表达慢病毒载体,并观察在重组慢病毒感染的人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)中CBFα1基因的表达情况.方法 采用PCR 技术体外扩增人CBFα1,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1,并进行酶切及测序鉴定.利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1、pHelper1.0和pHelper2.0的3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒.将PDLFs分为未感染组(未感染任何病毒)、阴性对照病毒感染组(加阴性对照病毒感染)、CBFα1重组慢病毒感染组(加CBFα1重组慢病毒感染),应用免疫细胞化学方法检测目的 基因CBFα1在PDLFs中的表达.结果 重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1基因序列完全一致.包装慢病毒后检测病毒滴度为2.00×109 TU/ml.免疫细胞化学检测证实了CBFα1在PDLFs中的有效表达.结论 成功构建了携带hCBFα1基因的重组慢病毒,并能有效感染PDLFs,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础.     

慢病毒介导APP695基因RNAi对体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元β淀粉样蛋白分泌的影响

目的 探讨慢病毒介导RNA干扰(RNAi)抑制APP695基因表达对体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元细胞分泌β淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法 构建靶向APP695基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达质粒(pFU-GW-iRNA),进行酶切和测序鉴定.慢病毒表达质粒与包装质粒(pHelper 1.0和Helper 2.0)共转染293T细胞,获得病毒浓缩液并测定滴度.使用APP695-shRNA慢病毒载体感染体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元,设定为慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组,另设阴性对照病毒感染(NC)组、未经病毒感染(CON)组.采用实时荧光定量PCR检测APP695基因mRNA的表达,Western印迹检测APP695蛋白的表达,采用Elisa检测Aβ40和Aβ42的生成.结果 PCR扩增和测序结果证实,APP695 shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为5×108 TU/ml.使用慢病毒载体感染体外培养的APP695转基因小鼠皮质神经元,实时荧光定量PCR检测APP695-RNAi组APP695基因mRNA的抑制率为76.70%,与NC组和CON组相比差异有统计学意义(P＜0.001).Western印迹结果显示蛋白水平表达下降与定量PCR一致.Elisa检测干扰72 h后APP695-RNAi组、NC组、CON组Aβ40的分泌分别为(184±15)ng/L、(647±30)ng/L、(656±40)ng/L.APP695-RNAi组与NC组和CON比较差异均有统计学意义(均为P＜0.001);APP695-RNAi组、NC组、CON组Aβ42的分泌分别为(19.2±1.9)ng/L、(67.6±6.0)ng/L、(68.6±7.0)ng/L.APP695-RNAi组与NC组和CON比较差异均有统计学意义(均为P＜0.001).结论 慢病毒载体介导的APP695基因RNA干扰可以有效抑制痴呆小鼠皮质神经元细胞Aβ40和Aβ42的分泌.     

木蹄层孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响

目的 初步探讨木蹄层孔菌多糖(FFP)的免疫调节作用.方法 MTT法检测免疫细胞的代谢活力, ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的含量,鸡红细胞吞噬法检测巨噬细胞的吞噬功能,绵羊红细胞免疫法检测小鼠体液免疫功能.结果 发现FFP(100,50,25 ?滋g/ml)可以明显促进小鼠脾细胞代谢活力,促进脾细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2;显著增强腹腔渗出细胞代谢活力,促进腹腔渗出细胞分泌TNF-α.FFP(100、50、25 mg/kg)显著增强绵羊红细胞(SRBC)所致小鼠特异性抗体生成.FFP(100、50 mg/kg)可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞(CRBC)的吞噬率和吞噬指数.结论 木蹄多糖可促进小鼠免疫细胞分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2和增强小鼠的体液免疫功能及巨噬细胞的吞噬功能.     

己酮可可碱对呼吸道合胞病毒所致的TNF-α基因表达水平的影响

观察己酮可可碱(PTX)对呼吸道合胞病毒(RSV)所诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)含量及TNFαmRNA表达水平的影响。收集Balb／c小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成三组①对照组(NOR组);②感染组(RSV组)培养基中含有106pfu的RSV;③已酮可可碱组(PTX组)用RSV(106pfu)感染后,培养基中加入PTX(1mg／ml);每组于RSV感染巨噬细胞20h后,用ELISA法测定培养细胞上清中TNF-α含量的变化,同时用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组巨噬细胞TNF-αmRNA表达水平。结果表明感染组中TNF-αmRNA表达水平与对照组相比明显增多。PTX组TNF-αmRNA的表达和感染组相比明显降低。TNF-α的含量也有相应的变化与对照组比较,感染组明显升高(P<0．01);而PTX组与感染组比较明显下降(P<0．01)。认为PTX能抑制RSV所诱导的巨噬细胞TNF-α的基因表达,并减少TNF-α的产生。     

RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α的影响

[目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图像TNF-α/β-actin灰度值比可以看出干扰组TNF-αmRNA的水平0.18±0.03较阳性对照组0.91±0.05及阴性对照组0.85±0.10明显降低（P〈0.05）。干扰组TNF-α分泌量（21.87±1.20）pg/mL较阳性对照组（28.02±1.03）pg/mL及阴性对照组（27.64±1.92）pg/mL均明显降低（P〈0.05）。[结论]RNA干扰可以有效地抑制原代培养小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA水平及其蛋白分泌。     

黔产棘茎楤木提取物调节小鼠腹腔巨噬细胞活性的研究

目的:观察黔产棘茎楤木提取物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能以及分泌肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)活性的影响。方法:将黔产棘茎楤木不同溶剂提取物加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,以中性红法检测巨噬细胞的吞噬功能,以ELISA法检测培养上清液中TNF-ɑ的含量。结果:黔产棘茎楤木乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物均可明显促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及有效地抑制在LPS刺激下巨噬细胞分泌的TNF-ɑ的量。结论:黔产棘茎楤木提取物有很好的抗炎和免疫调节的作用。     

基因芯片初步探讨乳腺癌转移相关蛋白Nucleobindin-2介导的信号通路

目的 探讨核结合蛋白2(NUCB2)介导的下游信号分子和通路,为阐明NUCB2在乳腺癌中的功能提供依据.方法 构建NUCB2-RNAi慢病毒载体,感染MDA-MB-231细胞株.然后将MDA-MB-231分为阴性对照病毒感染细胞组(NC组)、感染NUCB2基因shRNA病毒细胞组(KD组),用Affymetrix基因表...     

内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响

目的 探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响.方法 制备搪尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT) C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子( GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达.分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5 μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8 μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达.结果 糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P ＜0.001).经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P＜0.05).结论 糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高.体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufml的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程.     

人FAM172A基因慢病毒载体的构建及其在巨噬细胞中的表达

目的 构建人FAM172A基因慢病毒载体,并包装慢病毒FAM172A感染人巨噬细胞予以鉴定.方法 以PDC315-FAM172A为模板扩增FAM172A基因全长序列后,与慢病毒载体pLenti6.3/V5-GFP经酶切、连接转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,行菌液PCR、酶切及测序鉴定.将鉴定正确的FAM172A基因慢病毒载体和病毒包装质粒共转染FT293细胞包装慢病毒FAM172A,测定病毒效价.Western blot和QPCR验证慢病毒FAM172A感染巨噬细胞效果.结果 菌液PCR、酶切及测序结果显示FAM172A基因成功插入到慢病毒载体中.病毒包装后荧光显微镜观察到FT293细胞中有大量绿色荧光,病毒效价为1.2×108TU/ml.Western blot和QPCR结果显示,慢病毒FAM172A侵染靶细胞后可明显增加目的基因FAM172A的表达.结论 成功构建慢病毒FAM172A,为后续FAM172A基因功能研究奠定了基础.     

IRE1α-XBP1通过上调IL-6表达促进黑色素瘤细胞增殖的分子机制

 目的  阐述内质网应激中IRE1α-XBP1信号通路在黑色素瘤细胞增殖中的作用及分子机制。方法  收集61例来自复旦大学附属中山医院的黑色素瘤患者的临床资料并进行分析,病理组织切片行XBP1s免疫组化染色并测定XBP1s的mRNA水平。过表达IRE1α和XBP1s,检测正常黑色素细胞系(HEMn-MP)及黑色素瘤细胞系(Mel-RMu)中IL-6和XBP1s的表达。在黑色素瘤细胞系中过表达IRE1α和XBP1s,联合使用IL-6中和抗体,检测黑色素瘤细胞增殖。结果  人黑色素瘤组织中XBP1s表达显著升高,在正常黑色素细胞系HEMn-MP和黑色素瘤细胞系Mel-RMu中,过表达IRE1α和XBP1s均可上调IL-6表达,且在黑色素瘤细胞系Mel-RMu可促进其增殖,给予IL-6的中和抗体后可部分抵消其促增殖作用。结论 IRE1α-XBP1s-IL-6信号通路通过分泌IL-6介导黑色素瘤细胞的增殖,最终效应由分泌IL-6来实现。     

靶向S1PR3基因shRNA慢病毒表达载体构建及功能鉴定

目的：构建靶向小鼠S1PR3基因的shRNA慢病毒表达载体,并验证其对内皮祖细胞迁移能力的影响。方法依照shRNA设计原则,合成对应的shRNA序列,将其克隆到PHBLV载体中,使用三载体系统进行病毒包装,收集制备成功的病毒,并用荧光显微镜法测定病毒滴度,使用病毒感染EPC后,测定各组细胞中S1PR3蛋白表达情况,选择合适的病毒感染EPC后,测定其对EPC迁移能力的影响。结果成功将shRNA序列克隆到慢病毒表达载体PHBLV-U6-RFP,表达质粒与辅助质粒共转染293细胞后48 h就可以看到细胞中成功表达红色荧光。收集培养成功病毒感染小鼠EPC,可以不同程度干扰细胞中S1PR3蛋白表达,S1PR3蛋白表达受到抑制后,EPC的迁移能力明显减弱。结论我们成功构建了可以有效干扰S1PR3表达的慢病毒载体,并初步观察了其对EPC细胞的迁移能力的影响,为后续进一步调控S1PR3相关的细胞功能的研究奠定了基础。     

腺病毒介导转录因子X盒结合蛋白1转染对神经干细胞增殖及在缺氧环境下凋亡的影响

目的:以重组腺病毒为载体,将X盒结合蛋白1基因转染胚鼠海马神经干细胞,观察其是否可以促进干细胞增殖以及在缺氧环境下的抗凋亡能力。方法:取孕16dSD大鼠胚鼠的海马组织进行神经干细胞的分离、克隆、nestin免疫荧光检测,以及传代和扩增;将重组腺病毒Ad-XBP1-EGFP质粒转染胚鼠海马神经干细胞,得到基因修饰后的胚鼠海马神经干细胞,选取普通神经干细胞标记为对照组,转染后的神经干细胞标记为转染组。通过细胞计数和MTT比色法检测对照组和转染组的增殖情况,连续检测7d,绘制生长曲线;取两组神经干细胞用CoCl2诱导缺氧,流式细胞术检测对照组和转染组的凋亡情况。结果:转染组的胚鼠海马神经干细胞增殖能力明显增强(P<0.05);在缺氧条件下,转染组神经干细胞凋亡程度较缺氧对照组减轻(P<0.05)。结论:利用重组腺病毒作为载体成功可以将X盒结合蛋白1基因导入胚鼠海马神经干细胞中;转染后的神经干细胞增殖能力和在缺血、缺氧条件下抗凋亡能力较普通神经干细胞明显增加。     

CD147基因沉默对亲环素A趋化作用及MMP-9表达的影响

目的探讨CD147在亲环素A（cyelophilinA,CyPA）诱导单核／巨噬细胞趋化过程及MMP-9表达中的作用。方法根据兔源CD147mRNA的序列构建能高效抑制兔外周血单核／巨噬细胞CD147表达的shRNA慢病毒载体,将分离出的兔外周单核／巨噬细胞分为空白对照组、NC对照组、CD147慢病毒组。对NC对照组及CD147慢病毒组分别给予空白慢病毒、CD147．shRNA慢病毒转染,以荧光显微镜观察转染效果。采用流式细胞仪检测膜CD147水平,并检测CD147mRNA及蛋白水平,采用微孔小室趋化实验检测CyPA对单核／巨噬细胞的趋化作用。对三组单核／巨噬细胞分别加人CyPA,孵育12h后ELISA检测上清液中MMP-9含量。结果CD147慢病毒组单核／巨噬细胞CD147表达水平较其他两组明显降低（P〈0．01）,基因沉默CD147降低了CyPA对单核／巨噬细胞的趋化作用（P〈0．05）及CyPA诱导的MMP-9（P〈0．05）产生。结论CyPA对单核／巨噬细胞趋化作用依赖或部分依赖于膜CD147水平,阻断CyPA-CD147相互作用可显著降低单核／巨噬细胞MMP-9表达水平。     

慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80%-90%)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P<0.01)。结论:pWPI-PON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应。     

慢病毒为载体的siRNA抑制肝星状细胞TIMP-1的表达

目的观察以慢病毒为载体,用含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后对TIMP-1表达的抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选2个不同短片段(nt161～181和nt445～463),在体外构建为短发夹siRNA1、siRNA2表达载体后,将其包装为重组Lenti/siRNA1-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA2-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照Lenti/GFP(空载体组),并以滴度MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后3d,用流式细胞仪及荧光显微镜检测病毒的感染效率。分别在感染后7、9d用Western blotting方法检测TIMP-1蛋白表达情况。结果感染HSC-T6后细胞形态和增生速度未发生明显变化。流式细胞仪及荧光显微镜检查证实感染效率分别为:空载体组68.23%,siRNA1感染组57.93%,siRNA2感染组51.2%,与正常细胞相比,感染后7d和9d,siRNA1、siRNA2感染组TIMP-1蛋白表达均有所下降,但只有siRNA1感染组在感染后9d能显著抑制TIMP-1表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的重组Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP可短期有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6TIMP-1蛋白表达。     

IRE1-XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究

目的：分离、培养 LEWIS 大鼠肝脏肝巨噬细胞（KCs），观察肌醇酶1-X 盒连接蛋白1（IRE1-XBP1）通路活性改变对KCs 功能的调控的作用机制。方法（1）采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离 Lewis 大鼠 KCs ；（2）鉴定后的KCs 分为4组：XBP1沉默组（XBP1-shRNA 组）、错义序列沉默对照组（Ctrl-shRNA 组）；Adv-XBP1过表达组（AdV-XBP1组）、错义序列过表达对照组（Ctrl-AdV 组）；（3）实时荧光定量 PCR（RT-PCR）检测各组 KCs 中 XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17转录水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 JAK1、JAK2、STAT1及 STAT3的蛋白表达水平；（4）流式细胞术（FCM ）及激光共聚焦检测各组 KCs 表型的变化情况；（5）分离大鼠脾脏淋巴细胞，尼龙毛柱过滤纯化 T 细胞，与上述各组 KCs 共培养，Brdu 渗入法检测T 细胞增殖情况；（6） Annexin V ／PI 法 FCM 观察 T 淋巴细胞凋亡情况；（7）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中 IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及 IL-10水平。结果（1）RT-PCR 结果显示，XBP1-shRNA 组中 XBP1的表达量较对照组显著降低，而在 Adv-XBP1组则明显上调（P＜0．05）；（2）FCM 发现，XBP1-shRNA 组中 M HC-Ⅱ、CD86、CD40的表达明显低于对照组，而 CD204和CD206的表达则显著高于对照组；而在 Adv-XBP1组，则呈相反趋势；（3）Western blot 检测发现 XBP1-shRNA 组中 JAK1、JAK2、STAT1和 STAT3的蛋白表达及其磷酸化水平均受到抑制，而在 Adv-XBP1组则上述蛋白的表达及磷酸化水平得到显著增强；（4）Brdu 发现抑制 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖受到明显抑制，凋亡增加，促炎细胞因子分泌减少，抗炎细胞因子分泌增加（P＜0．05），而上调 KCs 中 IRE1-XBP1活性后 T 细胞增殖则明显增强，凋亡明显减少，促炎细胞因子分泌增加，抗炎细胞因子分泌减少（P＜0．05）。结论 KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以转化 KCs 的极性状态，并通过调节 JAK-STAT 家族成员表达，调控 KCs 自分泌细胞因子的组成成分；KCs 中 IRE1-XBP1通路活性变化可以影响共培养初始 T 淋巴细胞的增殖分化、凋亡及相关细胞因子的分泌。     

IRE1α和IRE1β在DSS诱导的小鼠慢性结肠炎中的表达及意义

目的 探讨肌醇需求酶1(IRE1)α和IRE1β在葡聚糖硫酸钠(DSS) 诱导的小鼠慢性结肠炎中的表达及意义.方法 选择8~10周龄的C57BL/6雌性小鼠随机分为两组:对照组10只,正常饮水;慢性炎症组10只,先给予1.0% DSS自由饮用7 d,然后正常饮水14 d如此作为一个周期,循环3个周期建立小鼠慢性结肠炎模型.通过疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度测定和HE染色等方法评估肠道炎症程度.采用实时定量PCR技术检测小鼠结肠组织中炎症因子、内质网应激因子IRE1α、IRE1β、非剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1u)、剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1s)和黏蛋白(MUC)2 mRNA表达,免疫组织化学方法检测IRE1α、IRE1β和MUC2表达.结果 对照组小鼠无肠炎表现,而慢性炎症组在3个周期末结肠出现炎症表现.实时定量PCR结果显示白介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA在慢性炎症组高于对照组(P<0.05);XBP1s 和IRE1α mRNA在两组表达无明显差异;XBP1u mRNA在慢性炎症组表达低于对照组(P<0.05).IRE1β和MUC2 mRNA在慢性炎症组表达均低于对照组(P<0.05).IRE1α蛋白主要表达于结肠上皮的刷状缘、浆细胞等细胞的胞质中,其表达量在炎症组高于对照组,IRE1β蛋白和MUC2蛋白主要表达于结肠上皮细胞胞质中,两者表达量在炎症组低于对照组(P<0.05).结论 IRE1α可能通过对XBP1进行剪接来参与肠道炎症反应,并且IRE1α还有可能通过其他机制来调节自身的表达来参与炎症过程;IRE1β和MUC2可能与结肠上皮的功能维持有关,在肠道炎症过程中IRE1β和MUC2表达功能受到抑制而影响炎症的发生和发展.