兔膀胱脱细胞基质负载大鼠毛囊干细胞的体外培养

背景：组织工程学的兴起为泌尿系组织或器官的修复和重建开辟了新的途径,膀胱脱细胞基质是较好的泌尿系组织工程修复的替代材料。目的：构建毛囊干细胞与异种膀胱脱细胞基质为支架的细胞支架复合物,体外培养观察细胞在支架上的生长状态。方法：制备新西兰兔膀胱脱细胞基质,通过扫描电镜和Masson染色检测材料脱细胞效果,采用二次沉淀法将第3代毛囊干细胞静态接种于膀胱脱细胞基质表面,倒置显微镜下观察细胞生长状态,并绘制细胞生长曲线,组织学检测和扫描电镜观察细胞在材料表面的生长状况。结果与结论：制备的膀胱脱细胞基质为白色半透明膜状,扫描电镜下观察为纤维网状结构,未见细胞残留。Masson染色提示膀胱脱细胞基质为胶原结构,无明显细胞残留。细胞材料体外复合培养48 h后倒置显微镜下观察膀胱脱细胞基质周围毛囊干细胞生长状态良好,1周后扫描电镜下观察毛囊干细胞伸展、黏附于支架表面。结果可见毛囊干细胞与膀胱脱细胞基质体外培养具有良好的生物相容性。     

兔骨髓间充质干细胞与异体脱细胞耳软骨支架的体外复合

背景：耳软骨作为脱细胞基质可选择的支架,进行脱细胞处理可去除了软骨细胞的抗原性,从而与种子细胞具有良好的相容性。目的：体外提取、培养兔骨髓基质干细胞,并与异体脱细胞耳软骨支架复合,观察其生物相容性。方法：提取兔骨髓间充质干细胞行体外培养,诱导为软骨细胞,以胰蛋白酶-曲拉通联合法获得脱细胞软骨支架,将两者于体外复合,10d后复合支架固定行组织学染色及扫描电镜观察。结果与结论：兔骨髓间充质干细胞体外诱导14d可形成软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学示胞浆呈棕黄色;兔耳软骨脱细胞基质呈乳白色,组织学染色及扫描电镜观察示经脱细胞后支架孔隙均匀,结构完整,仍保存大量酸性黏多糖及胶原成分。其孔径长度（33.70±4.33）μm,孔隙率（65.23±7.35）%。复合支架组织学染色及扫描电镜示两者黏附良好,并伴有多量基质分泌。说明兔骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞与异体脱细胞耳软骨有良好的生物相容性。     

新型组织工程椎间盘纤维环支架的制备与性能检测

背景：以组织工程技术修复退变椎间盘,目前的研究多集中在如何修复摘除的髓核组织,然而髓核组织工程方法无法完整重建椎间盘的结构和功能,所以相应的纤维环组织工程被认为是组织工程椎间盘治疗策略的主要限制因素之一。目的：制备天然猪脱细胞脱钙骨基质明胶,并验证其作为组织工程椎间盘纤维支架的可行性。方法：取猪股骨近端松质骨,用环钻钻取直径10mm、内径5mm、厚3mm的中空环状骨,高压水枪冲洗,进行脱脂、脱钙、脱细胞等相关处理,制成环状的支架材料。对材料进行大体、组织学、光镜、扫描电镜观察,并对支架的吸水率、孔隙率、生物力学参数等进行检测。分离培养犬骨髓间充质干细胞,采用MTT法分析支架浸提液毒性。结果与结论：支架为乳白色,中空环状,质地柔软的多孔结构。苏木精-伊红染色示组织无细胞结构残留。光镜及扫描电镜示支架孔隙均匀,孔隙相通,平均孔径为（401.4±13.1）μm,孔隙率为（62.12±1.52）%,吸水率为（409.77±11.34）%。生物力学结果示支架的弹性模量为（47.75±6.32）kPa。MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DMEM培养液吸光度值比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,支架无细胞毒性。提示猪脱细胞脱钙骨基质明胶去细胞彻底,具有良好的孔径、孔隙率及生物力学强度,并且无毒,具备良好的生物相容性,可作为组织工程椎间盘纤维环支架材料。     

猪小肠黏膜下层基质支架材料复合脂肪基质干细胞的生物相容性

背景:小肠黏膜下层具有良好的细胞、组织相容性和降解性,是一种理想的组织工程支架材料,将脂肪基质干细胞与小肠黏膜下层复合后进行定向诱导,可构建靶组织,具有一定的临床应用潜能.目的:制备脱细胞猪小肠黏膜下层基质,并检验其与家兔脂肪基质干细胞的生物相容性.方法:使用酶消化-高盐水脱细胞法处理猪小肠黏膜下层,石蜡切片检测脱细胞效果,扫描电镜观察小肠黏膜下层表面结构.体外分离培养家兔脂肪基质干细胞,分别将第3代脂肪基质干细胞单面复合和双面复合至小肠黏膜下层培养1周观察材料上下表面细胞复合情况.结果与结论:小肠黏膜下层材料为白色半透明膜状物,石蜡切片显示细胞去除彻底,扫描电镜显示小肠黏膜下层黏膜结构紧密,浆膜面纤维结构松散.脂肪基质干细胞与材料复合后,通过相差显微镜观察到细胞在小肠黏膜下层上附着生长,扫描电镜检测提示单面复合脂肪基质干细胞的小肠黏膜下层,仅在上表面有大量细胞生长,下表面无细胞或仅有少量细胞生长,双面复合脂肪基质干细胞的小肠黏膜下层上下表面均可见大量细胞融合生长,石蜡切片可见细胞贴附于材料表面生长.提示酶消化-高渗盐水法可彻底去除小肠黏膜下层表面细胞成分,小肠黏膜下层对脂肪基质干细胞的生长具有良好的支持作用.     

新型组织工程椎间盘纤维环支架的制备与性能检测

背景:以组织工程技术修复退变椎间盘,目前的研究多集中在如何修复摘除的髓核组织,然而髓核组织工程方法无法完整重建椎间盘的结构和功能,所以相应的纤维环组织工程被认为是组织工程椎间盘治疗策略的主要限制因素之一.目的:制备天然猪脱细胞脱钙骨基质明胶,并验证其作为组织工程椎间盘纤维支架的可行性. 方法:取猪股骨近端松质骨,用环钻钻取直径10 mm、内径5 mm、厚3 mm的中空环状骨,高压水枪冲洗,进行脱脂、脱钙、脱细胞等相关处理,制成环状的支架材料.对材料进行大体、组织学、光镜、扫描电镜观察,并对支架的吸水率、孔隙率、生物力学参数等进行检测.分离培养犬骨髓间充质干细胞,采用MTT法分析支架浸提液毒性.结果与结论:支架为乳白色,中空环状,质地柔软的多孔结构.苏木精-伊红染色示组织无细胞结构残留.光镜及扫描电镜示支架孔隙均匀,孔隙相通,平均孔径为(401.4±13.1) μm,孔隙率为(62.12±1.52)%,吸水率为(409.77±11.34)%.生物力学结果示支架的弹性模量为(47.75±6.32) kPa.MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照 DMEM 培养液吸光度值比较,差异无显著性意义(P ＞ 0.05),支架无细胞毒性.提示猪脱细胞脱钙骨基质明胶去细胞彻底,具有良好的孔径、孔隙率及生物力学强度,并且无毒,具备良好的生物相容性,可作为组织工程椎间盘纤维环支架材料.     

纳米仿生复合支架的生物相容性

背景：纳米材料构建具有生物活性的组织工程骨,可以很好的模仿体内细胞外基质的结构,有利于细胞黏附、生长。目的：评价新型仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架与SD大鼠骨髓基质干细胞的体外相容性。方法：分离培养SD大鼠骨髓基质干细胞,流式细胞分析法对细胞表面抗原进行检测;相差显微镜观察细胞形态。聚电解质共凝聚技术制作仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架,取生长良好的P3代,与仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架体外联合诱导培养,通过细胞贴壁率、生长曲线、细胞活力、周期、细胞Ⅰ型胶原染色、扫描电镜观察综合评价材料与细胞的相容性。结果与结论：骨髓基质干细胞可在体外分离扩增,表达CD29、CD44和CD106,不表达CD34和CD45,细胞形态为长梭形,仿生壳聚糖/胶原纳米纤维平均孔径为150μm,与骨髓基质干细胞有较好的黏附性。提示骨髓基质干细胞可在体外长期、稳定培养;是理想的组织工程种子细胞;仿生壳聚糖/胶原纳米纤维与骨髓基质干细胞有良好的相容性,可用来做组织工程生物材料。     

免软骨基质支架与脂肪干细胞的生物相容性

背景:软骨基质主要为II型胶原和葡萄糖胺聚糖,它是软骨细胞分化和发育的先天环境,能促进干细胞向软骨细胞分化.目的:观察兔软骨基质支架与同种异体脂肪干细胞在体外的生物相容性.设计、时间及地点:观察实验.于2007-12/2008-05在遵义医学院珠海校区中心实验室完成.材料:取兔新鲜耳郭软骨组织在蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟的保护下利用低渗透压和Triton X-100脱去细胞成分制备软骨基质.脂肪干细胞由新西兰大白兔颈部脂肪组织经剪碎、I型胶原酶消化并离心后获得.方法:将2×107L-1的脂肪干细胞悬液0.2mL滴在软骨基质支架表面,置于37℃、体积分数为0.05CO2饱和湿度的培养箱中静置4 h后加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液培养.主要观察指标:采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附、生长及增殖情况,同时计算细胞黏附率,并采用二甲氧唑黄比色法榆测细胞增殖趋势.结果:扫描电镜和倒置显微镜观察到脂肪干细胞在软骨基质支架上黏附和变形,其黏附率为93.7%;苏木精～伊红染色见细胞向支架深层生长:二甲氧唑黄比色法测定细胞生长曲线表明细胞在支架上有增殖的趋势.结论:兔软骨脱细胞基质与同种异体脂肪干细胞在体外具有良好的生物相容性.     

兔软骨基质支架与脂肪干细胞的生物相容性

背景:软骨基质主要为Ⅱ型胶原和葡萄糖胺聚糖,它是软骨细胞分化和发育的先天环境,能促进干细胞向软骨细胞分化。目的:观察兔软骨基质支架与同种异体脂肪干细胞在体外的生物相容性。设计、时间及地点:观察实验,于2007-12/2008-05在遵义医学院珠海校区中心实验室完成。材料:取兔新鲜耳郭软骨组织在蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟的保护下利用低渗透压和TritonX-100脱去细胞成分制备软骨基质。脂肪干细胞由新西兰大白兔颈部脂肪组织经剪碎、Ⅰ型胶原酶消化并离心后获得。方法:将2×l07L-1的脂肪干细胞悬液0.2mL滴在软骨基质支架表面,置于37℃、体积分数为0.05CO2饱和湿度的培养箱中静置4h后加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液培养。主要观察指标:采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附、生长及增殖情况,同时计算细胞黏附率,并采用二甲氧唑黄比色法检测细胞增殖趋势。结果:扫描电镜和倒置显微镜观察到脂肪干细胞在软骨基质支架上黏附和变形,其黏附率为93.7%;苏木精-伊红染色见细胞向支架深层生长;二甲氧唑黄比色法测定细胞生长曲线表明细胞在支架上有增殖的趋势。结论:兔软骨脱细胞基质与同种异体脂肪干细胞在体外具有良好的生物相容性。     

猪小肠黏膜下层与兔骨髓间充质干细胞的体外复合培养

背景：小肠黏膜下层细胞外基质材料免疫原性低,具有良好生物相容性,是构建单一结构工程化组织的较好支架材料。目的：观察体外兔骨髓问充质干细胞与猪小肠黏膜下层复合培养的生物相容性。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁法分离纯化培养兔骨髓间充质干细胞,在其接种前用红色免疫荧光标记,然后将第2代已标记的兔骨髓间充质干细胞接种在猪小肠黏膜下层上。结果与结论：①组织学观察：骨髓间充质干细胞与小肠黏膜下层上复合培养1周时细胞旱单层生长,荧光显微镜下观察标记的骨髓间充质干细胞显示均匀红色荧光,复合培养2周细胞呈多层生长,并显示更密集的红色荧光。②扫描电镜观察：复合培养2d,骨髓间充质干细胞黏附于材料表面并伸展：复合培养1周,小肠黏膜下层被骨髓间充质干细胞分泌的胶原覆盖;2周后细胞在材料上已大量增殖形成融合,细胞连接紧密,细胞分泌大量基质,并分层。表明小肠黏膜下层与骨髓间充质千细胞具有良好的相容性。     

纳米仿生复合支架的生物相容性

背景:纳米材料构建具有生物活性的组织工程骨,可以很好的模仿体内细胞外基质的结构,有利于细胞黏附、生长。目的:评价新型仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架与SD大鼠骨髓基质干细胞的体外相容性。方法:分离培养SD大鼠骨髓基质干细胞,流式细胞分析法对细胞表面抗原进行检测;相差显微镜观察细胞形态。聚电解质共凝聚技术制作仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架,取生长良好的P3代,与仿生壳聚糖/胶原纳米纤维支架体外联合诱导培养,通过细胞贴壁率、生长曲线、细胞活力、周期、细胞Ⅰ型胶原染色、扫描电镜观察综合评价材料与细胞的相容性。结果与结论:骨髓基质干细胞可在体外分离扩增,表达CD29、CD44和CD106,不表达CD34和CD45,细胞形态为长梭形,仿生壳聚糖/胶原纳米纤维平均孔径为150μm,与骨髓基质干细胞有较好的黏附性。提示骨髓基质干细胞可在体外长期、稳定培养;是理想的组织工程种子细胞;仿生壳聚糖/胶原纳米纤维与骨髓基质干细胞有良好的相容性,可用来做组织工程生物材料。     

Mitral annulus calcification

A 67-year-old woman had aortic and mitral annulus calcification resulting in severe stenosis and incompetence of the valves. Mitral annulus calcification produces specific echocardiographic abnormalities which may forewarn of technical difficulties during surgery.     

Mitral annulus calcification

A 67-year-old woman had aortic and mitral annulus calcification resulting in severe stenosis and incompetence of the valves. Mitral annulus calcification produces specific echocardiographic abnormalities which may forewarn of technical difficulties during surgery.     

Comparison between aortic annulus motion and mitral annulus motion obtained using echocardiography

Earlier studies have shown that the aortic root, in analogy with the mitral annulus, moves towards the left ventricular apex during systole. However, there are no earlier studies comparing the amplitude of the aortic annulus motion (AAM) with that of the mitral annulus (MAM), which was the main aim of the study. Another aim was to study the intra- and interobserver reproducibility (IIOR) of measuring AAM with M-mode and 2-D echocardiography as it is not obvious which of the methods that should be used. Twenty-one healthy subjects were examined by echocardiography. AAM and MAM were measured at different sites. IIOR was measured in 10 of the subjects. There was no significant difference between average AAM (15.3 +/- 1.5 mm) and average MAM (15.6 +/- 1.5 mm) and there was a rather good agreement between the variables. There was also no significant difference between AAM at the septal site (16.3 +/- 2 mm) and average MAM, but a significant difference between AAM at the lateral site (14.2 +/- 1.6 mm) and average MAM (P<0.001) and between the both sites of measuring AAM (P<0.001). The significant difference between the two sites of measuring AAM may have anatomical reasons but may also depend on difficulties in measuring AAM at the septal site where it has lower reproducibility than at the lateral site. IIOR of measuring AAM was good when using M-mode but poor when using 2-D echocardiography and AAM should preferably be measured using M-mode and not using 2-D echocardiography.     

Liquefaction necrosis of mitral annulus calcification

Liquefaction necrosis of the mitral annulus is a rare form of peri‐annular calcification that the cardiologist must be able to differentiate from other cardiac masses. It classically looks like a round or semilunar hyperdense mass with a denser peripheral rim, located mainly in the posterior mitral annulus. The case we report here was diagnosed in a 78‐year‐old female patient who presented with an embolic cerebral vascular accident, which raises the question of its etiopathogenic responsibility. © 2014 Wiley Periodicals, Inc. J Clin Ultrasound 42 :382–383, 2014     

芍药苷促椎间盘纤维环细胞增殖的作用

背景:芍药在颈椎病治疗中使用频率超过30%,其主要单体之一芍药苷具有抗炎、抗凋亡等作用,芍药苷对椎间盘纤维环细胞是否有保护作用,国内外未见报道。目的:探讨芍药苷对椎间盘纤维环细胞的增殖和保护作用。方法:采用酶消化法体外培养椎间盘纤维环细胞。取第3代纤维环细胞,培养过程中加入20μg/LFas配体诱导建立纤维环细胞凋亡模型,通过MTT法测定芍药苷干预纤维环细胞的最适宜浓度,AnnexinV/FITC-PI法观察芍药苷对椎间盘纤维环细胞的保护作用。结果与结论:芍药苷浓度20.8和2.08μmol/L对椎间盘纤维环细胞具有明显的促增殖作用。20μg/LFas配体能诱导细胞凋亡,20.8μmol/L芍药苷对Fas配体诱导椎间盘纤维环细胞有保护作用。     

芍药苷促椎间盘纤维环细胞增殖的作用

背景：芍药在颈椎病治疗中使用频率超过30%,其主要单体之一芍药苷具有抗炎、抗凋亡等作用,芍药苷对椎间盘纤维环细胞是否有保护作用,国内外未见报道。目的：探讨芍药苷对椎间盘纤维环细胞的增殖和保护作用。方法：采用酶消化法体外培养椎间盘纤维环细胞。取第3代纤维环细胞,培养过程中加入20μg/LFas配体诱导建立纤维环细胞凋亡模型,通过MTT法测定芍药苷干预纤维环细胞的最适宜浓度,AnnexinV/FITC-PI法观察芍药苷对椎间盘纤维环细胞的保护作用。结果与结论：芍药苷浓度20.8和2.08μmol/L对椎间盘纤维环细胞具有明显的促增殖作用。20μg/LFas配体能诱导细胞凋亡,20.8μmol/L芍药苷对Fas配体诱导椎间盘纤维环细胞有保护作用。     

包皮除去环在环切包皮术中的应用研究

治疗包皮过长传统的方法是行包皮环切[1,2]。这种术式创伤大,出血多,术后包皮水肿、疼痛明显、切口感染粘连,缝线反应硬结,拆线痛苦等,影响生活质量。近年来,我们用一次性包皮除去环行包皮环切,效果满意,现报道如下。资料与方法一、一般资料2003年1月-2005年1月,将因包皮过长来     

改进的解剖M型超声评价二尖瓣环运动速度的初步探讨

目的 探讨改进的解剖M型(AMM)超声与组织多普勒成像(TDI)对二尖瓣环峰值运动速度测量结果的差异性.方法 随机选取31例正常人及30例心力衰竭患者,先采用TDI的定量组织速度成像模式(QTVI)行心尖四腔心切面扫查,测量二尖瓣环间隔及侧壁的收缩期、舒张早期及舒张晚期的峰值速度,然后将上述二维图像输入经改进的、具有检测局部心肌运动速度的AMM进行后处理,检测二尖瓣环峰值运动速度,比较两种技术在测量相同部位及相同时相峰值速度的差异及相关性.结果 改进的AMM多数测值略高于TDI测值,但非常接近.一致性检验结果显示,在正常组二尖瓣环间隔和侧壁收缩期及舒张早期两种技术测值差异有统计学意义(P＜0.05),其他部位及时相的测值差异无统计学意义(P＞0.05).在心力衰竭组二尖瓣环侧壁两种方法数据差异有统计学意义(P＜0.05),在后间隔各时期两种技术测值差异无统计学意义(P＞0.05).但相关性分析显示TDI及AMM检测结果的相关性良好,在正常组两种技术测值相关系数0.58～0.87,心力衰竭组相关系数为0.69～0.92.结论 改进的AMM是一种有潜力和有待开发完善的用于评价心肌局部运动的新技术.     

脱矿脱细胞骨基质环孔隙度作为组织工程椎间盘纤维环细胞支架材料的可行性

目的：观察脱矿脱细胞骨基质环孔隙度是否适合作为组织工程椎间盘纤维环细胞支架：方法：实验于2005—08／2006-01在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。①选用成年健康新西兰兔10只，按随机抽签法分为2组：实验组和对照组，每组5只。实验组取兔股骨近端骨制成环状，改进一般制备脱矿骨基质的方法，删除明胶化步骤，并进行脱细胞处理。使骨组织保留多孔结构，制成支架材料；对照组取兔股骨近端骨制成环状，不进行脱矿脱细胞处理。②两组均使用Zhang氏液体置换法测定材料的孔隙度。结果：新西兰兔10只均进入结果分析。实验组支架材料孔隙率为82．5％～91．1％，平均（87．8&;#177;2.8）％；对照组孔隙率为81.3％-88.4％，平均（85．5&;#177;2.2）％：两组标本孔隙度比较，差异不明显（P〉0．05）。结论：经改进的方法制备的脱矿脱细胞骨基质环保持了骨的多孔结构，孔隙度指标达到作为支架材料的基本要求。