骨保护蛋白在牙周组织再生中的应用

核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)/核因子-κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)是调节破骨细胞分化和成熟以及骨吸收功能的关键因子,在牙周炎发病中起重要的调节作用.OPG可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其程序性死亡.本文就RANKL/OPG调节系统、RANKL/OPG调节系统...     

牙龈蛋白及其对破骨和成骨细胞功能的影响

牙龈卟啉单胞菌分泌的牙龈蛋白作为牙周病的一种重要的毒力因子,一方面通过降解骨保护蛋白（OPG）及促进核因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（RANKL）的释放激活OPG/RANKL/NF-κB受体活化因子信号转导通路,进而诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化,增强破骨细胞功能;另一方面,牙龈蛋白可通过线粒体依赖性内在程序性细胞死亡通路和肿瘤坏死因子受体家族介导的外在程序性细胞死亡通路诱导成骨细胞程序性细胞死亡,抑制成骨细胞功能,最终导致牙槽骨丧失。本文就近年来牙龈蛋白及其对破骨和成骨细胞功能的影响相关研究进展作一综述。     

Notch信号促进核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的体外研究

目的 探讨Notch信号抑制对核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导的小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。方法 建立RANKL诱导的小鼠RAW264.7细胞体外分化模型,实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测Notch信号成分（Notch1、Notch2、Delta1、Jagged1）、下游靶基因Hes1以及破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和Cathepsin K在诱导前后mRNA的表达。在诱导体系中加入不同浓度的γ分泌酶抑制剂（GSI）,抑制Notch受体的表达,TRAP染色检测破骨细胞分化的变化情况。结果 50 ng•mL-1 RANKL诱导小鼠RAW264.7细胞3 d,Notch1、Notch2、Delta1、Jagged1及Hes1的mRNA表达均有不同程度的提高,其中以Notch2、Jagged1增高最明显;破骨细胞标志基因表达显著增高。在RANKL诱导的同时加入不同浓度GSI,抑制Notch的表达,可致Notch下游靶基因Hes1表达下降,同时TRAP阳性细胞计数显著减少,且呈剂量依赖性。结论 Notch信号可促进RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

转化生长因子β对体外破骨细胞分化的影响

目的:研究在核因子κB受体活化因子配基(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用诱导体外骨髓细胞培养系统中,转化生长因子(TGF-β)对破骨细胞分化的影响。方法:选用小鼠M-CSF依赖性非附着性骨髓细胞,在含有25 ng/m l sM-CSF和30 ng/m l sRANKL的α-MEM培养液中进行培养,比较加入和不加入1 ng/m lTGF-β1培养4、9 d后,所形成的抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)阳性多核细胞的数目和骨吸收面积。结果:小鼠骨髓细胞在RANKL和M-CSF共同作用下可形成TRAP阳性多核巨细胞,并具有骨吸收功能。加入TGF-β后,破骨样细胞的数目及骨吸收面积显著增加。结论:TGF-β对RANKL和M-CSF诱导的破骨细胞的分化及其功能的促进作用,可能为炎症状态下发生过度骨吸收的机制之一。     

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧骨改建中的作用

目的：初步探讨在正畸牙移动压力侧核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand，RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的调节作用。方法：建立大鼠正畸牙移动模型，利用免疫组化的方法对压力侧RANKL的表达及其变化进行检测；并进一步观察了RANKL对大鼠骨髓破骨细胞形成的影响。结果：正畸牙移动压力侧组化结果显示，RANKL阳性表达位于牙周膜细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞中，在正畸牙移动第3、5和7天时呈强阳性表达。体外破骨细胞诱导实验结果显示，在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage clone stimulating factor，M-CSF)协同作用下，RANKL呈剂量依赖型诱导TRAP阳性细胞生成。结论：大鼠正畸牙移动中，RANKL在压力侧的表达上调有诱导破骨细胞形成的作用，并导致牙槽骨吸收。     

骨保护素/核因子-κB受体活化因子/核因子κB-受体活化因子配体信号分子调控牙萌出的研究进展

牙萌出是牙胚、牙槽骨以及多种类细胞系及多条通路信号分子相互作用共同调控的、复杂有序的生理过程。牙齿萌出需要在牙胚的方形成萌出通道,穿过牙槽骨和口腔黏膜到达功能位置。这一过程主要由破骨细胞直接执行,而骨保护素/核因子-κB受体活化因子/核因子κB-受体活化因子配体信号分子(OPG/RANK/RANKL)信号分子则可通过调节破骨细胞的分化与成熟来调控牙槽骨的改建,以保证牙萌出时方牙槽骨能被正常吸收。牙萌出的具体调控机制尚不明确,该文就OPG/RANK/RANKL信号分子调控牙萌出的研究现状作一综述。     

高纯度破骨样细胞体外培养及功能表达的研究

目的建立大量高纯度破骨样细胞体外培养的方法,并运用分子生物学技术观察体外诱导培养的破骨样细胞标志酶的基因表达。方法按照巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF） 30 ng/mL、核因子κB受体活化因子配基（RANKL） 50 ng/mL的质量浓度对骨髓单个核细胞诱导培养6 d,利用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、Giemsa染色、骨吸收陷窝检测以及破骨细胞标志酶基因表达的检测,对生成的破骨样细胞进行鉴定。结果实验获得的破骨样细胞中,TRAP阳性的单核破骨样细胞多见、TRAP阳性的多核破骨样细胞数量相对较少,胞核从2个到十几个不等;光镜下牙本质片上可见各种形态的骨吸收陷窝;应用RT-PCR方法证实破骨样细胞表达膜型基质金属酶（MT1-MMP）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、TRAP和组织蛋白酶K（CK）4种标志酶。结论以M-CSF和RANKL作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养可以获得具有典型的破骨细胞形态特征,可以表达特征性标志酶基因,且数量大、纯度高。     

破骨细胞相关因子在骨再建过程中表达的定量分析

目的 研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子-?资B受体激动剂（RANKL）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）在骨再建过程中的表达。方法 用8周龄雄性C57BL/6J小鼠建立骨折模型,用RT-PCR法对骨形成过程中TNF-α、RANKL和TRAP的表达进行时程分析。结果 骨折后TNF-α、RANKL、TRAP的表达均上调, 但峰值在不同的时间点出现。TNF-α在骨折后2 d达峰值, RANKL的峰值出现在骨折5 d后, 而TRAP的表达在骨折后10 d达到峰值。结论 骨的再建也有破骨细胞相关因子的参与, 它有赖于成骨和破骨的精确平衡。     

Notch1蛋白高表达抑制破骨细胞增殖和分化

目的探究体外培养条件下Notch1蛋白高表达对细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）诱导的骨髓源破骨细胞增殖分化的影响。方法体外培养Rosa-notch1转基因小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,采用RANKL和MCSF刺激BMSCs向破骨细胞方向分化。培养至第3天,实验组和对照组分别转染携带Cre重组酶和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒（Ad-Cre-GFP）和携带GFP的重组腺病毒（Ad-GFP）,启动实验组Notch1高表达,采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch信号通路成分（Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Delta1、Delta3、Delta4、Jagged1）、靶基因（Hes1）mRNA表达量以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）在诱导后mRNA的表达量。采用TRAP染色法观察破骨细胞增殖分化情况。结果TRAP染色显示实验组破骨细胞形成数量明显少于对照组（P<0.05）。与对照组相比,实验组Notch1、Notch3、Jagged1、Delta3、Hes1 mRNA表达量明显增高（P<0.05）,TRAP的mRNA表达量明显降低（P<0.05）。结论Notch1高表达抑制RANKL和MCSF诱导的破骨细胞增殖分化。     

骨保护蛋白-核因子-κB受体活化因子配体-核因子-κB受体活化因子系统与牙萌出

牙萌出是一个复杂而且被严密调控的生理现象,需要分化成熟的破骨细胞作用于牙胚方向的牙槽骨使之形成萌出通道,而骨保护蛋白-核因子-κB受体活化因子配体-核因子-κB受体活化因子系统则可通过调节破骨细胞来调节骨的代谢。巨噬细胞集落刺激因子-1和甲状旁腺激素相关蛋白则可使核因子-κB受体活化因子配体蛋白更好地发挥促破骨细胞的分化和激活作用,以保证牙萌出时牙槽骨能被正常吸收。     

核转录因子-κB受体活化因子及其配体和骨保护蛋白系统在骨构建与骨改建中的作用

核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)-核转录因子-κB受体活化因子(RANK)-骨保护蛋白(OPG)系统是近年发现的调节骨吸收的关键信号通路.RANKL与RANK结合在正常骨构建与骨改建中调节破骨细胞生成、活化和存留,在多种病理状况下增加骨吸收.OPG与RANK竞争性地结合RANKL,以防止骨组织的过度吸收.笔者分别就RANKL、RANK和OPG及其在骨构建与骨改建中的作用作一综述.     

抑制核因子-κB受体活化因子及其配体通路治疗牙周炎的研究进展

核因子-κB受体活化因子（RANK）及其配体（RANKL）在牙周炎患者的牙槽骨吸收中具有重要的作用,抑制RANKL／RANK通路,可有效抑制破骨细胞的分化和激活,从而抑制牙槽骨的吸收。骨保护蛋白（OPG）和RANKL结合,干扰RANKL和RANK的结合,从而防止骨组织的过度破坏。本文就RANKL／RANK／OPG轴、RANKL／RANK／OPG与牙周炎、抑制RANKL／RANK通路治疗牙周炎的可行性等研究进展作一综述。     

核因子κB受体活化剂配体对乳牙根吸收的影响

核因子κB受体活化剂配体（RANKL）是新近发现的破骨细胞活化因子，它与核因子κB受体活化剂（RANK）、骨保护素（OPG）组成一个具有调节破骨细胞增殖、分化、融合、激活和凋亡的相关细胞因子系统。与破骨细胞生物学行为相似的破牙质细胞调节乳牙根生理性吸收，表达于该过程中的RANKL对乳牙根吸收起到一定的促进作用，且对乳恒牙替换具有调控作用。本文就RANKL对乳牙根吸收所起的作用作一综述．     

抗RANKL多克隆抗体抑制T细胞介导的破骨细胞形成的体外研究

目的：探讨抗核因子-КB受体活化因子配体（RANKL）多克隆抗体对T细胞介导的破骨细胞形成的影响。方法：制备兔抗鼠RANKL多克隆抗体,使用不同浓度的抗体（1、5及10μg/mL）,观察小鼠重组RANKL诱导的破骨细胞形成,显微镜下计数抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）阳性多核细胞数/孔;体外分离、纯化、扩增大鼠的颈T淋巴细胞,给予不同浓度的兔抗鼠RANKL特异性抗体进行干预,取其上清和T细胞,分别与RAW264.7细胞共同培养,TRAP法测定T细胞介导的破骨细胞形成,显微镜下计数TRAP（＋）多核细胞数/孔;ELISA测定细胞上清中的可溶性RANKL浓度（sRANKL,pg/mL）。实验结果采用SPSS11.5软件包进行统计学分析。结果：兔抗鼠RANKL抗体既可减少RANKL诱导的TRAP（＋）多核细胞数,也可减少T细胞介导的TRAP（＋）多核细胞数,5μg/mL及10μg/mL抗体组差异显著（P〈0.05）,且呈浓度依赖性;上清中检出sRANKL的浓度与不加抗体对照组相比明显降低,具有统计学意义（P〈0.05）。结论：抗RANKL特异性抗体可通过减少sRANKL的表达水平,直接阻断RANKL与核因子-КB受体活化因子（RANK）的结合,降低T细胞介导的破骨样细胞吸收。     

慢性牙周炎中核因子κB受体活化子、护骨素和肿瘤坏死因子-α的蛋白表达

目的　比较慢性牙周炎牙槽骨吸收处肉芽组织中的核因子κB受体活化子 (RANKL)、护骨素 (OPG)和肿瘤坏死因子(TNF) -α的水平 ,研究慢性牙周炎牙槽骨吸收与这些调节因子间的关系。方法　应用鼠抗人单克隆抗体、半定量分析及数字成像技术分析慢性牙周炎组织中RANKL、OPG和TNF α的蛋白表达。结果　慢性牙周炎牙槽骨吸收处肉芽组织中有较高的RANKL和TNF α蛋白表达 ,OPG蛋白表达相对较低 (P <0 .0 5 ) ;非牙周炎组织中显示较强的OPG蛋白表达和较弱的RANKL和TNF -α蛋白水平 (P <0 .0 5 ) ;OPG蛋白表达与牙周组织中内皮细胞相关。结论　RANKL可能与慢性牙周炎牙槽骨吸收相关 ;RANKL和OPG平衡的变化在慢性牙周炎骨吸收的分子机制中起重要调节作用 ;TNF α可能协同参与牙槽骨的吸收     

破骨细胞分化因子及其信号转导通路

破骨细胞负责骨吸收,来源于骨髓单核-巨噬细胞系,其分化需巨噬细胞发育必需集落刺激因子的参与。破骨细胞形成和分化过程中所必须的细胞间信号转导则由骨保护蛋189白(OPG)以及核因子-κB(NF-κB)受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)系统介导。RANKL-RANK-OPG信号转导通路在多种因子共同参与下,通过NF-κB、促丝裂原激活蛋白激酶和磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B等信号转导通路实现信号转导。肿瘤坏死因子-α可刺激成骨细胞产生粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-6等因子,诱使破骨细胞前体分化为破骨细胞。一氧化氮和雌激素影响破骨细胞前体的分化。整联蛋白-αvβ3在破骨细胞诱导酪氨酸磷酸化与富含脯氨酸的酪氨酸激酶2及非受体依赖型蛋白酪氨酸激酶Src家族中的衔接蛋白P130 Crk相关的底物蛋白激活中至关重要,使骨产生吸收作用。在破骨细胞及其前体中,转化生长因子-β受体、类固醇家庭受体、G-蛋白偶联受体、IL-1和非酪氨酸激酶细胞因子等对于破骨细胞功能的影响十分重要。     

核因子-κB受体活化因子配体在大鼠正畸牙压力侧牙周组织中的表达

目的：探讨正畸牙移动中，压力侧牙周组织中核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达在破骨细胞诱导和骨改建中的作用。方法：建立大鼠正畸牙移动模型，对压力侧牙周组织中RANKL蛋白的表达及破骨细胞的生成进行检测。结果：TRAP( )破骨细胞在牙移动第3、5和7天时数量明显增多；免疫组化检测显示牙周成骨细胞、骨衬里细胞、牙周纤维细胞和位于骨陷窝内的破骨细胞，是表达RANKL的主要细胞。与对照组RANKL持续弱阳性表达比较，实验组RANKL在正畸牙移动第3、5和7天时出现强阳性表达，其表达变化与破骨细胞的数量变化较为一致。结论：在大鼠正畸牙移动中，RANKL可能在压力侧牙周组织破骨细胞的形成和骨改建中发挥了重要作用。     

IL-17联合IFN-γ体外诱导RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究白细胞介素-17(IL-17)联合干扰素-γ(IFN-γ)在小鼠破骨前体细胞系RAW264.7分化为成熟破骨细胞过程中,对细胞增殖和凋亡的影响。方法将核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导小鼠破骨前体细胞系RAW264.7建立破骨细胞体外诱导分化研究模型,被诱导的RAW264.7细胞培养24 h后,分为IL-17组、IFN-γ组、IL-17+IFN-γ联合组(IL-17+IFN-γ等量组、IL-17固定+IFN-γ梯度组)进行干预。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对破骨细胞成熟进行鉴定,利用CCK-8细胞增殖试验检测各组细胞增殖情况,AnnexinⅤ细胞凋亡实验评价各组细胞凋亡的差异,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达差异。结果 50 ng/m L IL-17与不同浓度的IFN-γ联合,随着IFN-γ浓度升高,IL-17对RAW264.7细胞生长抑制呈浓度依赖性。IL-17和IFN-γ的联合作用比单独应用IL-17,凋亡率更高;与单独应用IFN-γ相比,凋亡相关基因Fas L表达明显增加。结论试在RAW264.7细胞向破骨细胞的分化过程中,IL-17和IFN-γ联合能抑制破骨前体RAW264.7细胞向破骨细胞的增殖,并促进RAW264.7细胞的凋亡。     

破骨细胞核因子κB受体活化因子配基和骨保护因子在种植体周围软组织及骨组织的表达

目的研究破骨细胞核因子κB受体活化因子配基（RANKL）及其伪受体骨保护因子（OPG）在非负荷期种植体周围软组织和骨组织中的表达变化及时间分布特点。方法选用6只1～2岁龄的雄性Beagle犬建立种植义齿动物模型,分别观测种植体植入后3、7、15、30、60、90 d种植体周围的骨改建情况。取种植体周围软组织进行实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）;取犬下颌骨进行大体标本观察拍摄X线片;取种植体周围骨组织进行免疫组化染色,检测RANKL和OPG随时间的表达变化及分布特点。结果骨改建的最活跃期为种植体植入后的第7天,种植体周围软组织中的RANKL和OPG mRNA及骨组织中的RANKL和OPG均随种植体植入时间的增加而增加,第7天达高峰,而后均逐渐降低。RANKL和OPG在种植体周围软组织及骨组织中的表达变化规律一致。结论OPG和RANKL能在种植体周围软组织中表达,且变化规律与种植体周围骨组织改建过程一致。种植体周围组织可以通过OPG/RANKL系统参与破骨细胞的形成,调节骨质吸收,影响骨组织代谢微环境。     

破骨细胞分化因子诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞的实验研究

目的:探讨破骨细胞分化因子(ODF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用进行体外诱导小鼠骨髓细胞形成破骨细胞(OC)的能力。方法:收集5～6周小鼠骨髓细胞,在含M-CSF(10 ng/ml)的α-MEM全培养液中培养24h,然后将悬浮生长的细胞接种到24孔培养板,并加入不同浓度的ODF和M-CSF。,通过观察抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色的阳性细胞和能否在骨磨片上形成吸收陷窝来鉴定OC形成情况。结果:在只加入ODF或M-CSF一种细胞因子时,未见有TRAP阳性或CTR阳性细胞形成,同时加入ODF和M-CSF,可形成典型的OC。TRAP阳性多核细胞的数目和培养液中钙离子浓度的增加与ODF的浓度呈正相关。结论:小鼠骨髓来源的单核细胞在ODF和M-CSF共同作用下可形成具有骨吸收功能的OC,为体外研究OC的分化发育和功能调节提供了一种新的方法。