降糖益肾方干预胰岛素信号通路改善转基因2型糖尿病MKR鼠肾损伤的研究

目的观察降糖益肾方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR鼠血糖、血胰岛素及肾皮质中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白表达的影响。方法选取MKR鼠40只经鉴定后,随机分为MKR鼠组、MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组。MKR鼠组用基础饲料喂养,MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组用高脂饲料喂养,连续喂养8周后,降糖益肾方组给予降糖益肾方,糖适贝那组给予糖适平加贝那普利,同时MKR鼠组和MKR鼠高脂组分别给予蒸馏水灌胃4周。4周后处死小鼠收集标本,免疫组织化学SABC法检测肾小球中胰岛素受体1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI-3K)的蛋白表达。结果降糖益肾方明显降低高脂饮食MKR鼠肾小球中IRS-1和PI-3K的蛋白表达水平,与MKR鼠高脂组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论降糖益肾方改善糖尿病肾病系膜细胞增殖的机制可能与干预胰岛素信号通路有关。     

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用及基于Rho/ROCK信号通路改善足细胞损伤的影响

【立论依据】 观察左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病(DN)小鼠血糖、血肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白及Rho、ROCK蛋白表达的影响研究左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用及基于Rho/ROCK信号通路改善足细胞损伤的影响。 【设计思路】 MKR转基因2型糖尿病小鼠给予高脂饮食联合右侧肾切除建立糖尿病肾病模型。观察左归降糖益肾方对DN小鼠血糖、肾功能及Rho、ROCK蛋白表达等的影响研究其是否具有保护DN肾脏的作用及是否通过抑制Rho／ROCK信号通路改善足细胞损伤。 【实验内容】 8周龄MKR小鼠50只随机分为5组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN＋左归降糖益肾方组(C组)、DN＋Rho/ROCK信号通路抑制剂Y-27632组(D组)、DN＋糖适平＋贝那普利组(E组)。B、C、D、E组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术后2周开始给药。C组小鼠给予中药提取液灌胃治疗30 d。D组小鼠给予Y-27632腹腔注射15 d(隔天注射)。E组给予糖适平＋贝那普利灌胃治疗30 d。A、B组则以等体积蒸馏水灌胃。30 d后处死小鼠。电化学法检测小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测尿素氮、血肌酐,ELISA法测定尿微量白蛋白,免疫组化及蛋白质印迹法测定肾脏组织Rho、ROCK蛋白表达,光镜观察肾小球形态结构,电镜观观察足细胞形态结构。 【材料】 MKR小鼠、左归降糖益肾方、贝那普利、糖适平、Y-27632、高脂饲料等。 【可行性】 课题组前期研究表明高脂饮食联合右侧肾切除的MKR转基因2型糖尿病小鼠是良好的糖尿病肾病模型;左归降糖益肾方具有改善糖尿病肾病的作用。国内外研究中均表明抑制Rho／ROCK信号通路具有保护糖尿病肾脏的作用。故本实验基于Rho／ROCK信号通路研究左归降糖益肾方对糖尿病肾病的作用机制具有可行性。 【创新性】 (1)MKR转基因2型糖尿病小鼠给予高脂饮食联合右侧肾切除建立糖尿病肾病模型。(2)近年来研究发现Rho／ROCK信号通路在糖尿病肾病发生发展过程中起重要作用。本实验基于Rho／ROCK信号通路探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病足细胞损伤的影响。     

饮酒对高脂饮食家兔肾功能的影响

目的:观察饮酒对高脂饮食新西兰兔肾功能的影响.方法:用灌胃白酒及喂饲高脂饮食的方法,连续观察家兔血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿β2微球蛋白(β2-MG)水平.结果:单纯高脂饮食组和单纯饮酒组家兔尿β2-MG均升高(P＜0.05),BUN和Cr未见显著变化;高脂饮食十不同浓度饮酒使BUN、Cr和β2-MG均升高(P＜0.05),且升高幅度与饮酒浓度和时间成正相关(P＜0.05).结论:长期饮酒和(或)高脂饮食可导致新西兰兔肾功能损伤,高脂饮食基础上饮酒会加重肾损伤的程度.     

左归降糖舒心方对高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响

目的 探讨左归降糖舒心方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响。方法 用左归降糖舒心方干预治疗高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠,采用电化学法测定空腹血糖浓度,采用全自动生化分析仪检测血脂和炎症因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）,采用ELISA法检测血清胰岛素与肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果 高脂饲料喂养的MKR小鼠空腹血糖高于MKR组,但无统计学意义（P＞0.05）;血清胰岛素、血脂（TC、LDL-C、HDL-C）、血清hs-CRP和TNF-α水平高于MKR组（P＜0.01）,而三酰甘油（TG）下降,低于MKR组（P＜0.01）。经左归降糖舒心方或文迪雅干预治疗后,除左归降糖舒心方低剂量组血糖和hs-CRP下降不显著（P＞0.05）,其他各组MKR小鼠血糖、血清胰岛素、TG、血清hs-CRP和TNF-α水平显著下降（P＜0.05、0.01）,TC和LDL-C下降无统计学意义（P＞0.05）;左归降糖舒心方高剂量组HDL-C显著上升（P＜0.01）,而文迪雅组升高不显著（P＞0.05）。左归降糖舒心方作用呈剂量依赖性。结论 左归降糖舒心方能调节高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢、减少炎症因子的产生、保护血管、降低糖尿病并发血管病变的风险。     

β_2-微球蛋白对糖尿病肾病早期诊断的价值

目的:探讨在糖尿病肾病的发病早期,血清β2-微球蛋白(β2-MG)和尿β2-微球蛋白(β2-MG)对其的诊断价值。方法:采用免疫比浊法检测92例糖尿病患者及80例正常人血清β2-MG、尿β2-MG,血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量。结果:糖尿病肾病组的血清和尿β2-MG与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),而Cr、BUN含量与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),且血清β2-MG和尿β2-MG阳性率为63.0%和52.2%,比Cr、BUN阳性率高。结论:检测血清和尿β2-MG对早期诊断糖尿病肾病有良好的诊断价值。     

高脂喂养加单侧肾切除制作小鼠糖尿病肾病模型研究

目的 探讨高脂喂养加单侧肾切除制作糖尿病肾病（DN）模型的可行性.方法 8 周龄的MKR 小鼠（骨骼肌特异性Insulin/IGF-1 双受体缺失的转基因小鼠）60 只,雌雄各半,随机分为3 组,每组20 只.空白组（基础饲料喂养）,高脂组（高脂饲料喂养）,模型组（高脂饲料喂养＋单侧肾切除组）.造模后第1、2、4、6、8 周测体质量、空腹血糖、尿微量白蛋白（UmAlb）.8 周后心脏采血处死各组小鼠留取血标本及肾组织分别进行血肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）的检测及光镜和电镜下观察肾脏病理学改变.结果 与空白组比,8 周时,高脂组、模型组两组血糖明显升高（P〈0.01）,而两组之间比较,血糖无明显变化（P〉0.05）.模型组UmAlb、Cr、BUN 较空白组、高脂组明显升高,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,且肾质量（KW）,肾/体质量（KW/BW）较空白组显著增大,病理变化明显.结论 高脂饲料喂养加单侧肾切除的MKR 小鼠是一个良好的糖尿病肾病模型.     

左归复方对MKR转基因2型糖尿病鼠骨骼肌PPARγ和GLUT-4表达的影响

目的 观察左归复方治疗MKR小鼠后糖代谢及骨骼肌PPAγ和GLUT-4表达的变化.方法 40只MKR小鼠经鉴定后,随机分为MKR模型组、左归复方高、低剂量组、文迪雅组,每组10只.C57野生鼠10只作为空白对照组.各药物组分别以相应剂量连续给药30 d.于给药前、第15天及第30天,分别作空腹血糖测定.末次给药后0.5 h,心脏取血,放射免疫法测血清胰岛素,RT-PCR和免疫组化检测PPARγ和GLUT-4在骨骼肌中的表达.结果 (1)左归复方干预治疗后,其高剂量具有显著的降低MKR小鼠空腹血糖、改善高胰岛素血症的作用,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);(2)MKR小鼠骨骼肌中PPARγ和GLUT-4 mRNA表达下调,与C57野生鼠比较差异具有统计学意义(P＜0.01);左归复方干预治疗后,MKR小鼠骨骼肌中PPARγ和GLUT-4 mRNA表达均上调,左归复方上调PPARγ和GLUT-4 mRNA表达与阳性对照药文迪雅作用相当;(3)MKR小鼠骨骼肌中PPARγ蛋白表达下调,与C57野生鼠比较差异具有统计学意义(P＜0.01);左归复方干预治疗后,PPARγ蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(P＜0.01),并与对照药文迪雅作用相当.结论 左归复方具有显著的改善MKR小鼠糖代谢作用,其机制与上调骨骼肌中PPARγ和GLUT-4表达,增强骨骼肌对胰岛素的敏感性,促进骨骼肌摄取血液中葡萄糖有关.     

糖肾清2号方对2型糖尿病模型小鼠肾功能的影响?

目的观察糖肾清2号方对2型糖尿病模型小鼠肾功能的保护作用。方法采用自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周后,按血糖及体重水平随机分为模型组、缬沙坦组、糖肾清2号方大、中、小剂量组,以C57BL/6J小鼠设为正常组,每组各6只,连续干预治疗12周。分别在0、4、8、12周检测各组小鼠空腹血糖、尿微量白蛋白(Alb)、尿肌酐(Cr)、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)及24 h尿蛋白,药物干预12周后实验结束,留取血清标本,全自动生化分析仪检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清β2微球蛋白(β2-MG)水平变化。结果与正常组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白、ACR、Scr、TG、TC水平显著升高(P0.05,P0.01),BUN、β2-MG及肾重/体重变化不显著(P0.05)。与模型组比较,缬沙坦组及糖肾清2号方大、中、小剂量组小鼠Scr、TG、ACR水平明显下降(P0.05,P0.01);24 h尿蛋白、TC、空腹血糖等指标有不同程度下降。结论糖肾清2号方可明显降低KK-Ay小鼠空腹血糖、Scr、TG水平,减轻糖尿病肾病(DN)肾损害,延缓DN发病进程。     

尿β2-微球蛋白在顺铂所致肾毒性中的早期监控

目的 探讨尿β2-微球蛋白(β2-MG)在顺铂所致肾毒性中的监控价值.方法 将贵州小型猪随机分为对照组和模型组,2组行膀胱造瘘后,模型组给予4 mg/kg顺铂一次性腹腔注射,建立贵州小型猪肾毒性模型,对照组腹腔注射等量生理盐水.测定2组贵州小型猪注射顺铂前1h,注射后1,3,6,24,48,96 h各时间点血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量和尿β2-MG含量.结果 模型组尿β2-MG的变化早于血清BUN和Cr,与对照组同时间点比较,差异有高度统计意义(P＜0.01).结论 尿β2-MG是敏感性高的肾毒性指标.     

左归降糖清脂方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠Visfatin信号分子的影响

目的 探讨左归降糖清脂方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠内脂素（Visfatin）信号分子的影响。方法 8周龄MKR小鼠,按性别、空腹血糖、体质量随机分为空白组、模型组、中药组、阳性药物组;同龄C57/BL/6小鼠作为正常组;每组16只。除正常组、空白组外,其余小鼠高脂饲养8周。中药组予左归降糖清脂方溶液29.6 g/kg,阳性药物组（二甲双胍和辛伐他汀组成,比例为50∶1,给药67.6 mg/kg）,其余组予等体积蒸馏水（体积同中药组）,灌胃治疗8周。心脏采血处死各组小鼠,采用电化学法检测空腹血糖;常规生化法检测肝功能、血脂;电镜及HE染色观察肝组织形态结构及病理变化;实时荧光定量检测肝脏脂肪组织分泌激素类代谢调节因子Visfatin、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein4, RBP4)的mRNA表达水平;酶联免疫法检测血清炎症因子血清可溶性白细胞介素-2受体(soluble interleukin-2 receptor, SIL-2R）、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor2, FGF2)含量的变化。结果 与正...