静脉人工血管桥内膜增生的形态学特征及洛伐他汀的干预作用

目的:探讨静脉人工血管桥内膜增生特点及洛伐他汀可能的干预作用。方法:实验犬12只,随机分为实验组和对照组,建立颈静脉人工血管搭桥模型,以洛伐他汀作为实验干预药物,4周后取出人工血管标本,观察人工血管通畅情况,观察吻合口内膜增生形态、厚度以及新生小血管情况等,并比较两组间的差异。结果:术后4周,实验组与对照组均有3条人工血管完全闭塞,全部吻合口均可见明显内膜增生,实验组近端、远端内膜增生厚度低于对照组(P值分别为0.045,0.040),增生内膜表面可见内皮细胞覆盖,增生内膜中可见新生小血管形成,实验组近、远端内膜中新生小血管的数量均多于对照组(P值分别为0.041,0.031)。结论:4周时,吻合口内膜增生明显,同时伴有新生小血管形成,洛伐他汀可以减少内膜增生的厚度,并能够促进新生小血管的形成。     

缺氧诱导HIF-1α表达与兔血管平滑肌细胞增殖的关系

目的:探讨动静脉血管吻合口处再狭窄的机制,明确缺氧诱导血管平滑肌的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与细胞增殖的关系。方法:52只新西兰大白兔行髂动静脉吻合术,随机分入术后常氧组(21%氧)、术后给氧组(30%氧)和假手术组。ELISA法检测兔血浆血小板源性生长因子B(PDGF-B)表达,Western blotting检测吻合口组织HIF-1α、PDGF-B、ERK1/2、Akt表达。以不同处理组的兔血浆培养兔主动脉平滑肌细胞,BrdU增殖试验检测细胞增殖,Western blotting检测细胞中HIF-1α、PDGF-B、ERK1/2、Akt表达。结果:术后常氧组兔血浆中PDGF-B和吻合口组织HIF1-α、PDGF-B、ERK1/2的表达明显增高。术后常氧组兔血浆培养的平滑肌细胞增生显著,其增生效应可被PDGF受体诺氨酸激酶阻滞剂AG1259阻断,缺氧条件下细胞内HIF1-α、PDGF-B、ERK1/2表达均明显增高。结论:局部缺氧是导致动静脉吻合口组织平滑肌细胞增殖、血管再狭窄发生的重要因素,术后氧疗是降低再狭窄发生的重要方法。     

转染PDGF-B mRNA的反义寡肽核酸抑制狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄

目的探讨PDGF-B mRNA反义寡肽核酸对冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄的影响。方法建立狗冠状动脉搭桥吻合口再狭窄模型;用合成的反义寡PNA以外科涤纶线携带并辅助治疗性超声波转导吻合口局部血管平滑肌细胞;分别用原位分子杂交和LSAB免疫组织化学法检测PDGF-B mRNA和PCNA表达;用形态测量法检测吻合口局部冠状动脉内膜厚度和面积。结果PNA显著抑制术后第4周吻合口局部冠状动脉内膜vSMCs表达PCNA和PDGF-B mRNA,与对照组相比抑制率分别为75.37%和71.64%;显著减少血管内膜厚度和面积。结论合成的反义寡PNA可部分抑制狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄。     

局部缓释紫杉醇抑制犬人工血管移植术后吻合口内膜增生的初步研究

目的 探索预防周围动脉人工血管旁路移植术（VGB）后吻合口内膜增生（IH）性再狭窄的新方法。方法 取大型杂种犬5只,全麻后行双侧髂股动脉VGB,并结扎、切断人工血管桥之间的自体动脉。同一犬随机选取一侧人工血管（VG）及远近端吻合口喷紫杉醇．生物蛋白胶（FG）混合物,另一侧喷FG作为对照。4周后取出两侧包括远近端吻合口在内的VG,对吻合口进行肉眼、病理组织学及电镜检查,测量内膜厚度及内膜面积,并进行免疫组化检查。结果 5只实验犬两侧VG均通畅,远近端吻合口可见新生内膜。实验侧吻合口新生内膜厚度和内膜面积均显著小于对照侧（P〈0．05）。扫描电镜检查示：实验侧吻合口可见覆盖一层完整的内皮细胞（EC）,EC排列规则整齐,其表面有较少血液成分附着。对照侧EC排列不规则,并见大量血液成分附着。吻合口新生内膜透射电镜检查示：对照侧细胞丰富,细胞类型单一,主要为典型的平滑肌细胞（VSMC）;基质为规则密集排列的胶原纤维。实验侧可见多种类型的细胞;基质中胶原纤维稀疏,并可见大量异物颗粒。结论以FG作为载体,在VG吻合口外局部应用小剂量紫杉醇可以起到抑制吻合口IH的作用。紫杉醇能够从吻合口外渗透至吻合口内,并能在内膜中停留至少4周以上。近期安全有效。     

高同型半胱氨酸血症对大鼠血管损伤局部新生内膜形成和炎症因子(ICAM-1、MCP-1)表达的影响

目的:研究高同型半胱氨酸血症(HHCY)对大鼠颈动脉球囊拉伤后新生内膜形成和局部炎症因子(ICAM-1、MCP-1)表达的影响。方法:250~280g Wistar雄性大鼠48只,HHCY组24只,L-甲硫氨酸1g/kg.d灌胃制备HHCY大鼠模型;对照组24只,饮用水灌胃。4wk后行左颈动脉球囊拉伤,3d、7d、14d、28d处死取材,固定、包埋、切片,染色。检测血管损伤后新生内膜增生、平滑肌细胞增殖、内皮覆盖和局部MCP-1、ICAM-1表达情况。结果:HHCY组血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度明显高于对照组(106.19±19.75μmol/L vs4.90±0.10μmol/L)。血管损伤后14d、28d,HHCY组比对照组新生内膜增生面积增加41%、30%。14dHHCY组内膜、中膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性颗粒百分比是对照组的1.7倍和2.3倍。14d、28d血管内皮覆盖率HH-CY组比对照组减少52%和31%。HHCY组血管损伤局部ICAM-1、MCP-1表达增强,ICAM-1主要分布在内皮下和新生内膜,MCP-1主要分布在内膜和中膜,3d、7d明显,持续28d。结论:HHCY使血管损伤局部新生内膜增生显著,促进平滑肌细胞增殖,抑制内皮修复、上调局部炎症因子ICAM-1、MCP-1表达是其致病机制。提示HHCY可能是血管成形术后再狭窄发生的重要的危险因素。     

靶向转染纳米tPA基因预防狗冠脉搭桥术吻合口血栓形成和再狭窄的研究

目的探讨构建的白蛋白纳米组织型纤溶酶原激活物(tPA)基因质粒超声微泡载体靶向转染心肌组织预防冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。方法建立狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄模型,制备tPA基因白蛋白纳米超声微泡,超声波靶向转染心肌并获得tPA表达,观察对吻合口局部血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和PDGF-BmRNA表达以及内膜增生的影响。结果成功靶向心肌转染tPA基因并获得了tPA基因有效表达。显著减少了动脉搭桥吻合口血栓形成,抑制率100%。抑制冠状动脉吻合口处内膜细胞表达PCNA和PDGF-B mRNA。显著减少局部血管内膜厚度、内膜面积,使吻合口狭窄率减少68.29%。结论白蛋白纳米-超声微泡载体靶向转染tPA基因可预防狗冠状动脉搭桥术后吻合口血栓形成和再狭窄,这为人冠状动脉搭桥术吻合口血栓形成和再狭窄的防治提供实验基础。     

纳米tPA基因和PDGF-B小干扰RNA预防兔实验性再狭窄

目的 探讨联合应用纳米组织型纤溶酶原激活物(tPA)基因质粒和血小板衍化生长因子B(PDGF-B)小干扰RNA预防血管再狭窄.方法 建立兔髂动脉再狭窄模型;构建壳聚糖纳米tPA基因载体和PDGF-B siKNA表达载体并在球囊损伤髂动脉同时在超声波的辅助下转染血管壁细胞和血管周围骨骼肌组织.实验分4组.对照组:单纯行内膜剥脱术;实验组A:内膜剥脱术+纳米tPA质粒;实验组B:内膜剥脱术+PDGF-B sigNA质粒;实验组C:内膜剥脱术+纳米tPA质粒+PDGF-B siRNA质粒.采用常规病理、免疫组织化学、原位杂交以及形态测量方法 观察对再狭窄血管血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和PDGF-B mRNA表达以及血管病变的影响.结果 成功转染tPA基因和PDGF-B mRNA小干扰RNA;两种基因单独应用和联合使用均显著抑制血管内膜细胞表达PCNA和PDGF-B mRNA;显著减少内膜厚度、内膜面积;使吻合口狭窄率显著减少实验A组54.12%、B组74.08%和C组79.09%.转染tPA基因组血管内血栓形成显著减少.联合应用两种基因效果优于单独使用.结论 联合应用纳米tPA基因和PDGF-B mRNA小干扰RNA在一定程度上抑制实验性免髂动脉再狭窄.     

静脉移植桥血管内膜PCNA蛋白的表达

目的 :研究PCNA对冠脉动脉旁路移植术再狭窄的作用。方法 :2 5只健康纯种新西兰大耳白兔将按体重随机分五组 ,每组 5只。将颈外静脉间置于同侧颈总动脉 ,分别在术后 6h ,2d ,7d ,14d ,2 8d取材。应用免疫组织化学染色法和形态学分析观察不同时间PCNA阳性细胞数的表达 ,采用计算机图象分析法测量管腔内膜 ,中膜厚度及其比值。结果 :实验过程中无实验动物死亡。吻合口完成时各吻合口均通畅。 7d内膜和中膜厚度较 6h明显增厚 ,有显著性差异 (P <0 .0 1) ;在 14d、2 8d时内膜和中膜厚度较 7d没有明显变化 ,无显著性差异 (P >0 .0 5)。移植后 6h至 7d ,在血管平滑肌细胞 (VSMC)中 ,PCNA蛋白逐渐增多 ,于 7d达高峰 (P <0 .0 1)。移植后 14d ,2 8d在VSMC中PCNA蛋白开始下降 ,与 7d相比差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 :PCNA阳性细胞数在移植后 7d达高峰。与内膜增殖的高峰期相吻合 ,提示PCNA蛋白表达与内膜增殖有密切联系 ,可做为一个早期反应血管损伤后内膜增殖的指标。PCNA蛋白的表达对冠脉动脉旁路移植术再狭窄起着重要作用     

核转录因子NF-κB对血管损伤和新生内膜形成的影响

目的探讨核转录因子NF-κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的作用。方法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和NF-κB蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠126只,随机分为7组,每组分为6个时间点(6 h和1、3、5、7、14 d),每个时间点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子(monoaytes chemotactic protein-1,MCP-1)、NF-κBp65和细胞外信号调节激酶(extra cellular signal regulated kinase 2,ERK2)的表达水平。结果增殖的平滑肌细胞PCNA和NF-κBp65蛋白水平表达增加。增殖的平滑肌细胞质、细胞核内均有NF-κBp65的基因表达。NF-κB p65反义和诱骗寡核苷酸抑制PCNA表达。大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积和内膜／中膜比值显著升高(P<0．05), 7 d后达到高峰。反义组、诱骗组和反义加诱骗组显著降低内膜与中膜比值。RT-PCR显示球囊损伤后6 h, MCP-1 mRNA表达明显增加,1 d后表达减少,3、5、7 d MCP-1 mRNA持续而明显的表达增强,14 d后略为降低。反义组、诱骗组、反义加诱骗组在各时间点均能减少MCP-1 mRNA表达。Western Blot检测显示血管球囊损伤后6 h, NF-x Bp65、ERK2蛋白表达微弱, 1 d后ERK2蛋白表达略增强,NF-κB的蛋白合成明显增强。7 d后p65、ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天, ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义加诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时间点蛋白合成均减弱。结论增殖的平滑肌细胞NF-κBp65基因表达增加,NF-κB调控MCP-1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染NF-κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因的表达。     

ERK信号转导通路与PDGF-B对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和ERK受体阻断剂在PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法健康SD大鼠90只,随机分为5组(正常对照组、单纯损伤组、AG组、PD组、AG+PD组),建立大鼠主动脉球囊损伤模型,利用相应的受体阻断剂Tyrphosin-AG1295和PD98059分别或联合阻断PDGF和ERK受体,于术后7、14及21 d 3个时相点取主动脉进行HE染色,观察PDGF和ERK受体阻滞剂对新生内膜增生的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PDGF-B mRNA和ERK1 mRNA在血管中的表达变化;免疫组化技术检测血管平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;观察各组中PDGF和ERK受体对PCNA表达的影响。结果单纯损伤组及各干预组PDGF-B mRNA在各时相点的表达差异无统计学意义(P>0.05);单纯损伤组血管平滑肌细胞PCNA的表达明显增强,各干预组与单纯损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但各干预组间PCNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF和ERK受体阻断剂能降低大鼠动脉平滑肌细胞增殖,ERK信号转导通路可能参与了PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖。     

Immuohistochemical study on smooth muscle cell proliferation,phenotypic modulation,and extracellular matrix accumulation in venous arterial grafts in rabbits

Objective: To study the kinetics and distribution of smooth muscle cell (SMC) proliferation, phe-notypic modulation, and various extracellular matrix (ECM) components accumulation during vein graft remodeling. Methods: Normal vein and vein graft in carotid arteries were examined on d 4, d 7, d 14, d 60 and d180 after bypass grafting with immunohistochemical markers of cellular proliferation (proliferating cell nuclear antigen, PCNA), cytoskeletal protein production (a-actin SMC), myosin heavy chain (MHO iso-forms, ECM proteins, and histochemistry (hematoxylin eosin and Elastica-van Gieson stain). Results: Normal veins demonstrated an extremely low level of cellular proliferation and expressed as adult phenotype SM-Cs in media. After bypass grafting, medial SMCs in the graft appeared to be damaged and began to proliferate on d 4, and subsequently migrated and formed the neointima on d 7. Thereafter, the neointima thickened throughout the 180-day period of the experiment, although the neointimal SMC prolif     

Molecular basis for the effect of lipid lowering drugs on growth factors after de-endothelialization

Objective To study the mechanism and effect of lipid lowering drugs in arresting the development of arterial restenosis after angioplasty.Methods De-endothelialization injury of rabbit aortae, common iliac and femoral arteries using balloon angioplasty and the expression of growth factors such as platelet derived growth factor-B (PDGF-B), transforming growth factor β-1 (TGFβ-1), and fibroblast growth factos (bFGF) were investigated. Total serum cholesterol (TC) and triglycerides (TG) were analyzed during and after the treatment using either simvastatin combined with gemfibrozil or simvastatin alone for 6 weeks. Results Serum total cholesterol and triglycerides were only slightly to moderately increased after high cholesterol ration intake lasting for 6 weeks in rabbits of two therapeutic groups (simvastatin plus gemfibrozil or only simvastatin). A positive correlation was found between TC and intimal/medial ratio (r=0.5873, P&lt;0.05). PDGF-B detected by immuno-histochemistry and RT-PCR analysis showed that the release of PDGF-B was inhibited by simvastatin and gemfibrozil after de-endothelialization. RT-PCR analysis showed that TGFβ-1 was increased in the neointima in two treatment groups but no definite change was seen in the mRNA of bFGF in the smooth muscle cell (SMC) of the balloon-injured arteries even under lipid lowering drug treatment. Conclusion In addition to the lipid lowering effect, both simvastatin and gemfibrozil also influence the release of PDGF-Band TGF-1 in the neointima after de-endothelialization.     

大鼠自体静脉移植后内膜增生与平滑肌细胞增值

研究大鼠颈外静脉移植入颈总动脉后内膜增生（IH）的发病机制。应用组织切片的特殊染色，单克隆抗PCNA抗体及抗Dm抗体的免疫组化方法观察IH的发生过程。结果：①术后1d移植静脉的内膜消失，术后2d出现IH并逐渐增生，IH中可见大量平滑肌细胞（SMC），术后12周IH的面积与术后18周元显著差异；②IH中SMC的Dm呈阳性；③IH中SMC的PCNA指数于术后2d骤然升高，术后2周达高峰。结论：IH发生在移植术后2d，逐渐增厚至术后12周方停止，术后早期发生的IH是由中膜的SMC移行至内膜并增殖所致。SMC增殖的高峰在术后第2周。     

实验性大鼠肺血栓栓塞单核细胞趋化蛋白-1和血小板源生长因子-B表达的改变与肺血管重建

目的探讨实验性肺血栓栓塞症(PTE)后单核细胞趋化蛋白1(MCP1)和血小板源生长因子B(PDGFB)表达及其在栓塞后肺血管重建中的作用。方法60只雄性SD大鼠随机分为假手术组和肺栓塞组,每组30只,肺栓塞组经颈静脉注入自体血栓制备PTE模型。两组分别于术后第1、4、7、14及28d各处死6只,分别测PaO2、mPAP,HE染色观察栓塞后肺动脉内膜增生情况,免疫组化方法检测MCP1和PDGFB在肺动脉和周围肺组织的表达,半定量观察其动态变化。结果PTE组栓塞后1周内PaO2明显低于假手术组(P<0.05),1周后恢复正常。两组mPAP比较无显著性差异。栓塞后第4d即见肺动脉内膜增生并持续至第28d。MCP1和PDGFB主要由肺动脉平滑肌细胞和巨噬细胞表达,MCP1在栓塞后第1～14d、PDGFB在栓塞后第1～7d持续高表达,之后表达逐渐减弱。结论急性PTE后肺动脉MCP1、PDGFB表达增强,参与了栓塞后肺血管重建过程。