利福平和利福布汀对结核分枝杆菌交叉耐药率的初步探讨

目的通过对结核分枝杆菌MIC的测定,初步探讨利福平和利福布汀两药间的交叉耐药率。方法利用Alarmar Blue法(Alamar blue susceptibility test,MABA)检测116株结核分枝杆菌临床分离株对利福平和利福布汀的体外MIC。结果 36株利福平敏感株均对利福布汀敏感;80株利福平耐药株中有58株对利福布汀也同时耐药(对利福布汀的MIC>0.5 ug/ml),利福平与利福布汀间的交叉耐药率为72.5%(58/80);同时对利福平和利福布汀耐药的菌株对两种药物的耐药程度呈现正相关。结论利福布汀较利福平有更好的体外抗菌活性。对于利福平耐药而利福布汀敏感的患者仍可选择利福布汀作为联合化疗的有效药物之一。     

南京地区2013-2014年结核分枝杆菌耐药流行情况调查

目的 了解南京地区胸科医院2013-2014年结核杆菌对药物的耐药情况.方法 使用绝对浓度法对本院2013、2014年获得的2510株抗酸分枝杆菌株进行耐药监测及对比研究;此外统计耐多药患者临床资料,了解耐多药肺结核与糖尿病的合并情况.结果 2013-2014年南京胸科医院RR-TB、Pre-XDR-TB耐二线药物发病率呈增长趋势.Pre-XDR-TB在MDR-TB构成比可达51%,且在Pre-XDR-TB中耐左氧氟沙星明显多于耐二线注射用药.结核菌对丁胺卡那霉素、卡那霉素、卷曲霉素三种药物的敏感、耐药性高度一致,其交叉耐药明显.耐药肺结核患者中糖尿病比例呈增长趋势.结论 南京地区胸科医院结核杆菌耐药率高,应加强抗结核药物耐药性监测、门诊随访、合并症分析,根据药敏试验结果选择科学有效的化疗方案.     

210株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究

目的了解结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286bp的片段进行PCR-SSCP分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌的rpoB基因此扩增区域进行序列测定。结果共对210株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了研究,其中利福平耐药株110株,非利福平耐药株40株,敏感株60株。PCR-SSCP检测显示110株利福平耐药株中有75株有突变存在,经测序分析,77.3%(58/75)的菌株发生rpoB基因的单位点突变,主要集中在456位60.3%(35/58)和451位25.9%(15/58);22.7%(25/110)的菌株发生了联合突变。此外,经PCR-SSCP检测,40株非利福平耐药株中有3株发生突变,60株敏感株中有2株发生突变。经直接测序分析突变涉及位点为436位、451位和460位。结论结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因是rpoB基因耐药决定区发生突变,其中456位丝氨酸和451位组氨酸是最常见的突变位点。     

结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较

目的 调查结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株对临床常用抗结核药物的耐药性差异,并探讨其临床意义。 方法 采用匡氏双相琼脂培养基分离痰结核分枝杆菌并作耐药性和依赖性测定。 结果依赖组菌株对8种药物的耐药率均高于耐药组菌株,2组菌株对链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、对氨基水杨酸 (PAS)、阿米卡星(Am)的耐药率差异有统计学意义(P<0.05),对左氧氟沙星(Lfx)的耐药率差异有统计学意义(P<0.01);100%依赖株和98.6%耐药株为MDR株;依赖株和耐药株中XDR菌株的比例分别为14.6%和5.8%,P=0.05。 结论 结核分枝杆菌利福平依赖株均为MDR株,对一线和二线抗结核药物耐药率高,XDR株比例高,应予高度警惕和关注。     

结核分枝杆菌对利福喷汀与利福平交叉耐药的实验研究

目的 观察利福喷汀对结核分枝杆菌的杀菌效力及其与利福平的交叉耐药性，探讨利福喷汀对结核分枝杆菌的实验室耐药界限，为临床应用利福喷汀治疗结核病，包括治疗对利福平耐药的结核病提供依据。方法 用7H9液体培养基、苏通液体培养基、改良罗氏固体培养基测定利福喷汀和利福平对结核分枝杆菌标准株(H37Rv)及临床分离的利福平敏感株、利福平耐药株的最低抑菌浓度(MIC)。结果 在7H9液体培养基上对临床分离的19株利福平敏感株分别测定利福平和利福喷汀的MIC，有80％利福平敏感株利福平的MIC≥0．32μg／ml，而利福喷汀的MIC多分布在0．02～0．32μg／ml之间(占84％)；无论标准株H37Rv、利福平敏感株(19株)或是利福平耐药株(45株)，利福喷汀对结核分枝杆菌的MIC普遍比利福平低2～4倍；利福喷汀敏感株和耐药株的MIC差别较大，在MIC为5～10μg／ml处能最大限度地区分敏感菌和耐药菌。结论 利福喷汀与利福平存在着交叉耐药，但利福喷汀比利福平有更强的杀菌效力，部分结核分枝杆菌对利福平达到临床耐药时，仍未达到利福喷汀临床耐药，对利福平耐药的部分结核分枝杆菌对利福喷汀仍具有一定程度的敏感性，提示临床上对利福平耐药的结核病患者使用利福喷汀可能有一定效果；实验结果对利福喷汀临界耐药界限进行了初步筛查，为利福喷汀常规药敏试验的开展提供了基本试验数据。     

结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株表观形态及分子生物学差异性分析

目的比较结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株在形态学及分子生物学方面的差异。方法制作利福平浓度梯度培养基,观察利福平依赖株和耐药株结核杆菌在含不同浓度利福平培养基上的菌落生长情况;采用抗酸染色和电镜观察二细菌的形态和超微结构;采用DNA测序技术分析细菌rpoB核心突变区的序列。结果利福平耐药菌株在200μg/ml利福平培养基上不生长,依赖株在700μg/ml药物培养基上生长旺盛。抗酸染色后电镜观察,利福平依赖菌株在含利福平培养基上生长良好,菌体粗大,细胞壁完整;对照培养基上的菌体细小,细胞壁破裂。测序分析二细菌在rpoB核心突变区均发生突变,其中依赖菌株的突变主要发生在531和526位,耐药株5个位点均有突变发生。结论利福平耐药株和依赖株结核分枝杆菌在形态学和超微结构上存在着明显差异,且这种差异可能与rpoB突变位点的不同存在一定相关性。     

新乡地区结核分枝杆菌利福平耐药株基因型研究北大核心CSCD

目的分析新乡地区结核分枝杆菌利福平耐药株基因型,为控制耐药性发展与耐药株传播奠定基础。方法收集患者痰液样本370例,鉴定结核分枝杆菌。对菌株进行耐药性分析及rpoB基因扩增及测序,分析耐药株基因型。结果370例新乡地区患者中分离174株结核分枝杆菌,分离率为47.03%。其中,2016-2018年各分离结核分枝杆菌29、63和82株,分离率为36.25%、45.32%和54.30%。2016年29株结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、链霉素、氧氟沙星的耐药率分别为48.28%、44.83%、34.48%和27.59%;2017年63株结核分枝杆菌耐药率分别为61.90%、47.62%、38.10%、26.98%;2018年82株结核分枝杆菌耐药率分别为70.73%、57.32%、39.02%和35.37%。111株利福平耐药的结核分枝杆菌中,87株发生rpoB基因变异,基因突变率为78.38%。其中Ser→Leu在521位点突变58株(52.25%)和His→Leu在526位点突变22株(19.82%)是主要基因突变类型。此外,有24株(21.62%)未发生变异。结论2016-2018年新乡地区患者结核分枝杆菌分离率逐年增高。结核分枝杆菌对利福平耐药率最高,且逐年增高。利福平耐药株的耐药性产生的主要机制是rpoB基因发生位点突变。     

单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究

目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能。 方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况。提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证。结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株（69.6%）检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株。Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml;而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml、4 μg/ml、2 μg/ml和0.5 μg/ml。在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关。在对照组和转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为 8 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv2936和 pEASY-E1-Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16 μg/ml。结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因。     

经皮肺穿刺组织行结核分枝杆菌/利福平耐药基因快速检测对涂阴肺结核的诊断价值

据WHO估算,2017年全球新发结核病患者约1000万,结核病发病率为133/10万,其中中国的估算结核病新发患者数为88.9万,估算结核病发病率为63/10万[1].结核病的有效控制依赖于准确而快速的诊断及治疗.涂阴肺结核因其诊断较涂阳肺结核困难,尤其当肺部影像学特征不典型时,往往易造成漏诊、误治.临床工作中涂阴肺结...     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平关系的研究

目的 了解结核分枝杆菌rpoB基因突变特征与利福平耐药水平的关系。方法 测定266株(109株利福平耐药株,157株利福平敏感株)结核分枝杆菌利福平MIC值及其rpoB基因序列,分析不同突变特征的菌株其利福平MIC值的差异。结果 109株利福平耐药株rpoB基因皆发生错义突变,常见突变密码子531与526的突变频率分别为69.7%与17.4%。利福平耐药株中单密码子突变株占82.6%,多重密码子突变株占17.4%。531单密码子突变株与526单密码子突变株之间平均利福平MIC值差异无统计学意义(P=0.87),但两独立样本T检验分析显示,多重密码子突变株平均利福平MIC值(115.8 μg/mL)显著高于单密码子突变株平均利福平MIC值(48.4 μg/mL)(t=2.659,P=0.016)。利福平敏感株未发生错义突变。5.5%(6/109)的利福平耐药株仅在rpoB基因起始端发生突变,突变密码子分别是247,251和253。结论 531与526是最常见突变密码子,且以单密码子突变为主;531与526单密码子突变株之间利福平耐药水平差异无统计学意义,但多重密码子突变株利福平耐药水平显著高于单密码子突变株利福平耐药水平;rpoB基因起始端突变可能是除利福平耐药决定区域之外导致利福平耐药的第2个耐药决定区;rpoB基因DNA序列分析有助于结核分枝杆菌利福平耐药表型和耐药水平的预测。     

对利福平敏感的多耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变一例

2011年10月11日,世界卫生组织《2011年全球结核病（TB）控制报告》显示,2010年全球结核病新发患者880万例,死亡145万例。虽较前有所下降,但下降过于缓慢,提醒我们结核病防治的工作仍任重道远。利福平是目前广泛使用的杀菌作用最强的抗结核药物之一,其通过结合依赖DNA的RNA多聚酶β亚单位抑制细菌RNA转录。但利福平自1966年开始应用于结核相关疾病的治疗至今,已有近50年的历史,出现了很多利福平耐药现象,情况已不容忽视。我国2000年全国流行病学抽样调查（简称“流调”）显示,利福平的耐药率达16.6%;2012年3月21日卫生部公布的全国第五次结核病流调结果显示,利福平的耐药率仍不乐观。Mtb对利福平的耐药主要机制为rpoB基因突变导致利福平无法与其结合。目前,国内外已有越来越多的研究者致力于利福平耐药机制的研究,并企图通过检测rpoB基因突变快速鉴定Mtb对利福平的耐药情况。笔者研究中发现了1例结核病病史长达10余年的肺结核患者,其对多种一线及二线药物都产生了耐药,但对利福平仍然敏感,进一步提取菌株DNA并进行基因测序,发现rpoB基因存在突变。目前关于利福平敏感的菌株发现rpoB基因突变的研究较少,故现将该患者临床与实验室资料报告如下。     

应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药基因的研究

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响。利福平(RFP)作为1种主要的抗结核药物,对其耐药常常导致化疗失败。     

结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增检测成本分析

目的 比较固体培养、比例法药敏和结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增（Xpert Mtb/RIF）(简称“Xpert”)检测在中国基层实验室应用的检测成本。 方法 选取4个县（区）级结核病防治机构收集3次固体培养和Xpert检测成本数据,2个省参比实验室收集3次对硝基苯甲酸（PNB）菌群鉴定和比例法利福平药敏试验成本数据。采用要素法计算每种方法单位检测成本,计算每例患者不同检测方法的检测成本。在不同结核病患病率人群中,以固体培养试验为金标准,比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例结核病患者的成本。在不同利福平耐药率的可疑人群中,以传统药敏试验为金标准,比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例利福平耐药结核病患者的成本。调整Xpert检测设备和试剂价格后,分析Xpert检测的单位成本。 结果 固体培养、菌群鉴定、利福平药敏试验和Xpert检测的单位检测成本分别为47.87、46.73、82.86和118.62元。传统方法检测每例结核病患者所需成本（2份培养,1份传代,1份PNB鉴定试验）为172.57元。传统方法检测每例耐药结核病患者的平均成本（2份固体培养,1份传代,1份PNB鉴定及药敏试验）为208.84元。当Xpert检测结核病或利福平耐药特异度为85%时,如果检测敏感度大于70%,在结核病患病率或利福平耐药结核病患病率1%～70%的任何人群中,Xpert检出1例结核病或利福平耐药结核病患者的成本均低于传统方法。试剂价格变化对于检测成本的影响远远大于设备价格变化的影响。 结论Xpert检测是一种比传统方法更经济并快速的检测方法,适合在中国基层实验室推广。     

北京市肺结核病人耐药筛查实施效果的研究

目的 分析北京市利福平耐药结核病(RR-TB)诊断流程实施效果,为进一步完善耐药结核病的快速筛查和治疗提供依据。方法 选取2019年1月至2019年12月在北京市结核病防治机构及定点医院就诊的表型药物敏感性试验为利福平耐药的86例肺结核患者,评价其诊疗过程中北京市耐药筛查工作的开展情况,并分析其临床分离株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、左氧氟沙星(LFX)的表型药敏试验的耐药情况。结果 2019年86例RR-TB中Xpert检出62例利福平耐药,Hain检测补充检出3例,另外3例阳性培养物直接进行了表型药敏试验,通过耐药筛查工作RR-TB患者的发现率为79.07%(68/86),漏诊率为20.93%(18/86)。其中,8例Xpert为利福平敏感而表型药敏为利福平耐药,漏筛率为11.63%(10/86)。RR-TB中准广泛耐药率为23.26%(20/86),初复治在3种不同耐药类型中差异无统计学意义。结论 北京市耐药筛查工作在RR-TB诊断中具有快速高效的特点,存在一定的分子耐药与表型不一致现象,且实施中工作落实有待提高,需进一步加强督促管理。pre-XDR-TB处于较高水平,应...     

杭州市1 731株结核分枝杆菌耐药状况分析

目的 了解杭州市区县范围内耐药结核病的流行状况。方法 采用浓度比例法和PNB/TCH生长实验对2018年1月至2019年12月分离自杭州市周边7个县区的1 975份肺结核病人的培养菌株进行药物敏感性实验和菌种鉴定,并用统计学方法分析耐药谱和耐药率。结果 1 731株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)中, 18.26%(316/1 731)菌株至少对一种受试药物耐药,一线药物、二线药物、单耐药、多耐药、耐多药、广泛耐药、利福平耐药的耐药率分别是14.96%(259/1 731)、4.97%(86/1 731)、11.84%(205/1 731)、3.81%(66/1 731)、2.60%(45/1 731)、0.06%(1/1 731)、3.24%(56/1 731),共28种耐药谱。初治患者耐药率与复治患者耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。比较2011年、2015年、2018-2019年这3个时间段,一线药物的总耐药率、初治患者耐药率、复治患者耐药率以及耐多药的总耐药率和复治耐药率均呈现下降趋势(均P<0.05)。二线药物OFX的总耐药率和初治患者耐药率较2015年升高(P<0.05)。60岁以上的结核病患者占比最大(47.95%)。7个区县的耐药率存在差异。结论 2011-2019年杭州市区县结核病定点医院收治的结核病人的耐药率逐年下降,目前采取的防控措施切实有效。今后要重点关注耐药率较高区县的耐药病人和40~60岁耐药病人的治疗和管控,加强老年人结核病的防控。     

RPA-LFD技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性的应用

目的 基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值.方法 采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测.建立RPA-LFD技术,检测182株菌株中利福平耐药决定区(RRDR)常见突变位点rpoB 531、...     

结核分枝杆菌对利福喷汀与利福平交叉耐药的实验研究

目的 观察利福喷汀对结核分枝杆菌的杀菌效力及其与利福平的交叉耐药性，探讨利福喷汀对结核分枝杆菌的实验室耐药界限，为临床应用利福喷汀治疗结核病，包括治疗对利福平耐药的结核病提供依据。方法 用7H9液体培养基、苏通液体培养基、改良罗氏固体培养基测定利福喷汀和利福平对结核分枝杆菌标准株（H37Rv)及临床分离的利福平敏感株、利福平耐药株的最低抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)。结果 在7H9液体培养基上对临床分离的19株利福平敏感株分别测定利福平和利福喷汀的MIC，有近80%利福平敏感株利福平的MIC≥0．32μg/ml，而利福喷汀的MIC多分布在0．02～0．32μg/ml之间(占84．2％)：无论标准株H37Rv、利福平敏感株(19株)或是利福平耐药株(45株)，利福喷汀对结核分枝杆菌的MIC普遍比利福平低2～4倍：利福喷汀敏感株和耐药株的MIC差别较大,在MIC为5～ 10μg／ml处能最大限度地区分敏感菌和耐药菌。结论 利福喷汀与利福平存在着交叉耐药。但是利福喷汀比利福平有更强的杀菌效力，部分结核分枝杆菌对利福平达到临床耐药时，仍未达到利福喷汀临床耐药。对利福平耐药的部分结核分枝杆菌对利福喷汀仍具有一定程度的敏感性,提示临床上对利福平耐药的结核病患者使用利福喷汀可能有一定效果；实验结果对利福喷汀临界耐药界限进行了初步筛查,为利福喷汀常规药敏试验的开展提供了基本试验数据。     

对利福平耐药的结核分枝杆菌rpoB基因突变与耐药程度关系的探讨

目的　探讨对利福平耐药结核分枝杆菌的rpoB基因的突变位置与耐药程度的关系。方法　 32株对5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R5 0 )、2 2株对 2 5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R2 5 0 )、10株对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株 (R0 )和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株包括核心区域在内的rpoB基因片段进行了DNA序列分析。结果　 (1) 10株 (R0 )对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株未检测到rpoB基因易突变区的改变 ;(2 )耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变 2 5株 (78 1% ) ;耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变 2 1株 (95 5 % ) ,两者差异无显著性 (P =0 170 ) ;(3)耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变点呈散在分布 ;(4 )耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变以 5 31位氨基酸突变为主 (5 7 1% )以及联合突变较多见 (2 3 8% ) ,与R5 0相比两者差异有显著性。结论　大部分对利福平耐药的结核分枝杆菌均有rpoB基因突变。在对利福平低耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,其突变位置呈散在分布。在对利福平高耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,5 31位密码子突变及多个密码子联合突变是其主要突变特征。     

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点.方法 本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本.采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变.结果 135株结核菌中, 60株为利福平耐药菌株,其中 55株（91.7%）rpoB基因的利福平耐药决定区（RRDR）有突变.突变频率依次为密码子531（60.0%）,526（29.1%）和516 （7.3%）.1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子（511,515,518）的多核苷酸突变.75株敏感菌株中, 仅3株（4.0%）有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG（Leu）→ATG（Met）.结论 来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低.     

rpoB基因点突变与结核分枝杆菌对利福平耐药相关性的研究

目的了解浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株对利福平（RFP）的耐药率及该菌rpoB基因点突变与RFP耐药性的关系。方法从浙江地区肺结核病人的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定结核分枝杆菌72株。采用K-B纸片法和E-试验法检测上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP的耐药性。采用PCR检测上述结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因携带率。通过对RFP敏感或耐药各10株结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因T-A克隆后测序，了解该基因氨基酸序列第516、526和531位点突变情况及其与RFP耐药性的关系。结果38．9％（28／72）结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药。所有结核分枝杆菌临床菌株均携带rpoB基因。1株RFP敏感的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变。5株RFP耐药的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变，另5株发生H531D点突变，但均未发现516位氨基酸突变或526和531位氨基酸联合突变。结论浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株有较高的RFP耐药频率。上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药性与rpoB基因氨基酸序列526或531位点突变密切相关。