SLE患者T细胞TCR/CD3复合物介导的信号转导研究

为证明SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号转导异常有关。用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相交联刺激T细胞并用Thapsigargin和EGTA干预后 ,用分别粘附细胞仪连续观察 10minT细胞 [Ca2 + ]i的变化 ,并评价 [Ca2 + ]i反应与CD3分子、InsP3 生成量和患者临床特征的相关性。结果显示 :正常人和SLE患者T细胞 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 10 5 ) ;SLE患者高峰值、平台值T细胞的 [Ca2 + ]i反应明显高于正常对照 (P <0 0 0 1,P <0 0 0 1) ;加入Thapsigargin后二者 [Ca2 + ]i反应无显著差异 ,而加入EGTA后二者 [Ca2 + ]i反应有显著差异 ;二者的T细胞CD3阳性率和InsP3 生成量无差异 (P =0 6 6 5 ,P =0 5 37) ;且 [Ca2 + ]i异常反应与患者的疾病活动性无关。这些结果提示 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的信号转导途径存在异常 ;SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致。     

TNF-α通过miR-125a-5p/JAK2/STAT3通路参与亚急性甲状腺炎发病的机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺滤泡细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法 选择50例亚急性甲状腺炎患者（观察组），其中男性23例，女性27例；年龄29～57岁，平均年龄46.02岁。50例健康体检人群（正常对照组），其中男性24例，女性26例；年龄28～56岁，平均年龄45.86岁。用质量浓度10、50、100 ng/mL TNF-α处理甲状腺滤泡上皮FRTL-5细胞。FRTL-5细胞分别转染miR-125a-5p mimcs(miR-125a-5p组)、阴性对照miR-NC(miR-NC组)，无任何处理的细胞作为Contol组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞增殖能力，流式细胞术、TUNEL染色检测细胞凋亡，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清TNF-α、细胞上清液白细胞介素6(IL-6)含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测细胞miR-125a-5p、IL-6水平，Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平。结果观察组患者外周血TNF-α、IL-6、miR-125a-5p含量高于正常对照组，差异有...     

围手术期急性阑尾炎患者甲状腺激素及TSH测定的意义

急性阑尾炎是最常见的急腹症之一,有关本病血清皮质醇、儿茶酚胺、胰岛素等激素水平的变化研究较多[1],但急性阑尾炎围手术期甲状腺激素及TSH水平的变化,国内外报道甚少.为此,作者对52例急性阑尾炎患者进行围手术期血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、反T3(rT3)、促甲状腺激素(TSH)测定,以期探讨本病患者血清甲状腺激素及TSH水平的变化规律及其临床意义.     

2.129 TNFα对结肠平滑肌细胞动力的影响及机制研究

目的近来的研究发现TNFαIL-1β等细胞因子可能参与胃肠动力障碍的发生.但在细胞水平,观测细胞因子对胃肠平滑肌细胞运动、细胞内钙水平影响,并探讨其作用机制的研究还鲜见报道.本工作旨在研究TNFα对结肠平滑肌细胞舒缩功能和细胞内钙水平的影响并探讨其发挥作用的可能的信号转导途径.方法分离游离家兔结肠环形平滑肌细胞,采用平滑肌细胞长度测定和激光扫描共聚焦显微镜钙测定技术观察1.不同浓度(1,5,10,50ng/mL)TNFα对平滑肌细胞长度和[Ca2+]i的影响,2. 10ng/mL TNFα与平滑肌细胞预先孵育30min后,观测平滑肌细胞对不同浓度KCl、乙酰胆碱作用后的反应,3.使用PD-98059(ERK MAPK抑制剂) 、manoalide(磷脂酶A2抑制剂)与平滑肌细胞孵育30min,再加入10ng/mL TNFα继续孵育30m in,观测平滑肌细胞对不同浓度KCl、乙酰胆碱作用后的反应.结果 TNFα不能直接收缩或舒张平滑肌细胞,对[Ca2+]i也没有影响.有无TNFα作用,KCl引起平滑肌细胞收缩和细胞内[Ca2+]i升高的差别无显著性(P＞0.05);乙酰胆碱引起的细胞内[Ca2+]i升高差别无显著性(P ＞0.05),但TNFα作用后,乙酰胆碱引起的平滑肌细胞收缩剂量-反应曲线左移,且浓度＞10-6mmol/L引起的平滑肌细胞收缩增加,差别具有显著性(P＜0.05).使用 PD-98059、manoalide后,TNFα引起的乙酰胆碱剂量-反应曲线左移被部分抑制.结论虽然TNFα对平滑肌细胞的收缩和[Ca2+]i没有直接影响, 但TNFα可增强G蛋白偶联的钙敏感性调节,促进平滑肌细胞的收缩.可能的信号转导途径是通过ERK MAPK激活磷脂酶A2,产生花生四烯酸,进而激活ROK,抑制肌球蛋白轻链磷酸酶 .     

老年患者患病时与病愈后甲状腺激素水平的变化分析

目的 探讨老年患者患病时与病愈后甲状腺激素水平的变化及临床意义.方法 选择因非甲状腺疾病就诊的老年患者97例,于入院第二天晨起和病愈出院2～3个月后分别抽取空腹静脉血,检测三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(n3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH),同时检测入院第二天晨起的血糖和血脂水平.结果 97例老年患者,患病时与病愈后T3、T4、FT3、FT4四种激素水平差异有统计学意义,TSH水平差异无统计学意义.结论 本研究表明,老年患者患病时甲状腺激素水平明显低于病愈后的甲状腺激素水平.     

IL-12有助于化疗药物处理后肿瘤患者及小鼠的细胞免疫功能重建

目的探讨白细胞介素12(IL-12)是否能够恢复化疗药物对肿瘤患者和小鼠细胞的免疫抑制作用。方法分离顺铂化疗前后肿瘤患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC),在抗CD3抗体和抗CD28抗体共刺激条件下,加或不加IL-12。培养后,ELISA检测上清中γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,流式细胞术检测不同亚群T细胞IFN-γ的水平。建立顺铂毒性小鼠模型,采用以上方法检测IFN-γ、TNF-α水平。结果肿瘤患者产生的IFN-γ和TNF-α显著低于正常人;与化疗前患者相比,化疗后患者IFN-γ和TNF-α的产生明显减少,IL-12可以显著增强IFN-γ和TNF-α的产生;T细胞亚群分析的结果表明,IL-12可以恢复化疗后CD4~+T细胞和CD8~+T细胞中IFN-γ的水平。小鼠体内实验证明,化疗药物抑制小鼠T细胞的免疫功能,IL-12能完全恢复T细胞免疫功能。结论化疗药物抑制肿瘤患者和小鼠细胞的免疫应答,而IL-12能够恢复化疗药物对细胞因子的抑制作用,从而对肿瘤化疗患者重建免疫功能起到非常重要的作用。     

不同孕周及产后初期妇女尿碘含量及甲状腺功能指标变化

目的:检测分析湖北省十堰地区不同孕周及产后初期妇女尿碘及甲状腺功能指标变化。方法:收集孕0～41周及产后3～6天妇女尿液标本2529例,测孕碘含量,并从中选择90例缺碘孕妇取血液标本检测甲状腺功能指标。采用过氧乙酸四甲基联苯胺氧化显色法检测尿碘含量,采用化学发光法测定血清促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离T3(FT3)及游离T4(FT4)水平。结果:2529例不同孕期及产后初期妇女尿碘测值中位数为161μg/L,150～300μg/L者占52.79%,<150μg/L占46.82%,>300μg/L占0.40%;不同孕周组及产后3～6天组的中位数分别为161μg/L、156μg/L、118μg/L、119μg/L、170μg/L、232μg/L;统计学结果显示,根据尿碘<150μg/L和≥150μg/L分为缺碘组和对照组。检测孕妇血清TSH、T3、T4、FT3、FT4水平,缺碘患者血清TSH水平显著高于对照组孕妇(P<0.05)。结论:尿碘检测方法简便、快速,可以及时发现碘摄入不足,有利于临床对缺碘治疗及预后观察。     

SLE 患者T细胞TCR/CD3介导[Ca2+]I反应与InsP3生成量的相关性

目的 :研究SLE患者T细胞功能异常是否与TCR/CD3复合物介导的生物化学信号传导异常有关 ,以及这种信号转导异常与InsP3 生成量的相关性。方法 :用尼龙柱分离肝素化的静脉血得到T细胞并制备其悬液 ,用流式细胞术测定CD3+细胞的阳性率。将抗CD3单抗与羊抗鼠IgG相交联刺激T细胞后 ,用粘附细胞仪连续观察 10min ,观察T细胞胞内游离Ca2 + 的变化。用流式细胞术 ,检测正常人和SLE患者T细胞上CD3+ 表达的阳性率是否有差异。用InsP3 放射受体试剂盒检测InsP3 的生成量。结果 :①用尼龙柱吸附除去B细胞得到T细胞悬液 ,用流式细胞术检测CD3+ 细胞的阳性率占90 %以上。②正常人和SLE患者T细胞的 [Ca2 + ]i反应的基准值相似 (P =0 .10 5 ) ,SLE患者T细胞的 [Ca2 + ]i反应的高峰值、平台值明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1)。③正常人和SLE患者T细胞上CD3+ 表达的阳性率没有差异 (P =0 .6 6 5 )。④二者InsP3 的生成量无差异 (P =0 .5 37)。结论 :SLE患者T细胞TCR/CD3介导的 [Ca2 + ]i反应存在异常 ,这种异常与InsP3 的生成量无关     

抑制内质网钙离子释放在诱导巨噬细胞自噬及逆转LPS耐受中的作用

目的观察LPS耐受巨噬细胞自噬水平以及抑制内质网Ca2+释放是否具有上调自噬水平和逆转LPS耐受的作用。方法分离Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞,LPS 5 ng/ml诱导耐受4 h,随后给予LPS 100 ng/ml刺激,ELISA检测TNF-α和IL-6水平,Western blot和免疫荧光检测自噬蛋白(Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ)表达水平,Fluo-4 AM探针检测胞内Ca~(2+)浓度;在LPS刺激的同时给予胞内Ca~(2+)螯合剂(BAPTA)或内质网IP3通道阻断剂(2-APB)或CaMKⅡ抑制剂(KN-93),检测对自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ表达以及TNF-α释放的影响。结果 LPS耐受细胞经LPS再次刺激后,TNF-α、IL-6释放明显减少,自噬水平也显著下降,同时胞内Ca2+水平异常增高;给予BAPTA或2-APB或KN-93能够降低胞内Ca~(2+)水平,上调LC3-Ⅱ/Ⅰ表达,增加TNF-α释放。结论 LPS耐受的巨噬细胞自噬水平显著降低,抑制内质网Ca2+通路是上调自噬水平并逆转LPS耐受的有效途径。     

窒息新生儿甲状腺激素测定及临床意义

为观察窒息对新生儿甲状腺功能的影响及其临床意义,本文对21例窒息后新生儿血清促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺素(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)进行了测定,现报告如下.     

新生儿高胆红素血症甲状腺功能改变及意义

目的探讨新生儿高胆红素血症(简称高胆)对甲状腺功能的影响。方法对162例高胆新生儿采用竞争性放射免疫法进行血清甲状腺功能即三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)测定,对照组参照文献结果。按黄疸程度分为轻度、中度、重度三组比较。结果轻、中度高胆组T4、FT3低于对照组(P<0.01),T3、FT4、TSH与对照组比较差异无显著性(P>0.05);重度组FT3、FT4、TSH低于对照组(P<0.05～0.01),T3、T4与对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。高胆新生儿甲状腺功能T3、T4、FT3、FT4、TSH与TSB水平无明显相关性(P均>0.05)。结论新生儿高胆可引起甲状腺功能降低,T4和FT3降低可能是高胆新生儿甲状腺损害的敏感指标,FT4降低对预警病情严重有意义。     

贫铀通过内质网应激诱导甲状腺损伤

目的 探究贫铀(DU)诱导甲状腺损伤的机制,并探索其防治方法。方法 将大鼠甲状腺细胞FRTL-5分别用500μmol/L的贫铀溶液作用不同时间,用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞暴露于不同浓度的贫铀,用Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况,用Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,用免疫荧光染色法检测转录激活因子6(ATF6)的表达。将FRTL-5细胞暴露于500μmol/L的4-苯基丁酸(4-PBA),用CCK-8法检测细胞活力。将FRTL-5细胞分为对照组、DU组和4-PBA+DU组,分别进行相应的处理后,用CCK-8法检测细胞活力。结果 贫铀导致了FRTL-5细胞活力下降和细胞凋亡;贫轴诱导FRTL-5细胞GRP78和ATF6表达增加;500μmol/L的4-PBA对FRTL-5细胞的活力没有影响;4-PBA预处理缓解了贫轴诱导的细胞活力的下降。结论 贫铀通过内质网应激诱导甲状腺细胞损伤,靶向内质网应激的治疗可能具有缓解贫铀导致的甲状腺损伤的作用。     

酶免疫荧光法检测血清TSH、T3和T4的水平在诊断甲亢、甲减中的应用

正常情况下，由垂体细胞分泌的促甲状腺刺激激素(TSH)刺激和调节甲状腺的功能。在TSH的刺激下，可释放出与甲状腺球蛋白相结合的甲状腺激素T3和T4，并通过细胞基膜进入血液。TSH又受TSH释放激素(TRH)的调节。血清T3、T4 的含量过高时，也可直接抑制甲状腺内的腺苷酸环化酶，阻滞甲状腺对TSH的反应性[1]。因此，测定血中TSH、T3和T4的含量可反映甲状腺的功能。我们采用法国梅里埃公司的试剂，进行酶免疫荧光(ELFA)染色法，测定了血中TSH、T3和T4的含量，并与国内常用的酶联免疫吸附法(ELISA)进行了比较。1 材料和方法1.…     

压力型抑郁症的患者血清rT3和Cortisol的变化研究

目的 研究探讨反-三碘甲状腺原氨酸(rT3)和皮质醇(Cortisol)在由于压力引发抑郁症患者中的临床应用.方法 本研究纳入39例由于压力引发的抑郁症患者(研究组),以及40例正常体检者(对照组),使用化学发光免疫分析法检测甲状腺功能以及肾上腺功能激素,包括促甲状腺素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)、反-三碘甲状腺原氨酸(rT3)以及皮质醇(Cortisol)含量,并进行比较分析;同时根据病程对研究组进行分组比较.结果 研究组血清rT3以及Cortisol水平显著高于正常对照组(P＜0.01),而根据病程的不同,其T3、rT3水平也存在显著差异(P＜0.05).结论 压力型抑郁症会导致患者甲状腺以及肾上腺功能异常.     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血中CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的表达、功能及意义.方法 采用流式细胞术检测78例AS患者和50例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg、细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)和NK细胞,采用ELISA法检测血清中β型转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平.从患者外周血单个核细胞中磁珠分选出CD4+CD25+ Treg细胞,混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture, MLC)分析其免疫抑制功能.结果 AS活动期患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+ T淋巴细胞的百分比为(4.36±1.21)%,MLC中CD4+CD25+ Treg抑制同种异体T淋巴细胞增殖功能低下,与其Treg分泌TGF-β减少相关,CD4+ Treg含量及功能均低于健康志愿者(P<0.05).AS患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg水平与TGF-β呈正相关,与TNF-α呈负相关.结论 AS患者外周血中Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,可能参与AS免疫发病.     

姜黄素对放线菌素D/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的影响

目的: 探讨姜黄素对放线菌素D(ActD)/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法: 将PC12细胞分为以下6组:对照组、TNF-α组、ActD组、姜黄素组、ActD/TNF-α组和姜黄素+ActD/TNF-α组。各组细胞培养24 h后进行下列处理:倒置荧光显微镜普通光观察各组细胞的形态变化;Annexin V/PI染色流式细胞术检测各组PC12细胞凋亡率; Fluo-3 AM染色流式细胞术测定细胞内Ca²⁺浓度。制备离体大鼠海马脑片,分组处理同PC12细胞,细胞外微电极记录技术观察各组海马脑片CA1区长时程增强(long-term potentiation,LTP)的变化情况。结果: 10 μg/L ActD和50 μg/L TNF-α协同处理可导致PC12细胞明显损伤,而5 μmol/L姜黄素则可以减轻这种损伤作用(P<0.05);ActD/TNF-α可诱导PC12细胞内Ca²⁺浓度升高,姜黄素可以通过降低胞内Ca²⁺浓度而减少ActD/TNF-α引起的细胞凋亡(P<0.05)。此外,LTP实验也证实ActD/TNF-α可以显著抑制大鼠海马脑片LTP的诱发,而姜黄素可以拮抗这种抑制作用,改善神经元突触可塑性(P<0.05)。结论: 姜黄素可以改善ActD/TNF-α引起的神经元损伤,其机制可能是通过降低细胞内Ca²⁺浓度,维持胞内钙稳态而发挥作用。     

促甲状腺素及白细胞介素-6对大鼠甲状腺细胞钙离子的作用

本文利用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）对促甲状腺素（TSH）及白细胞介素-6（IL6）诱导的FRTL－5细胞内Ca2 变化进行了研究。方法：培养的FRTL－5细胞以FLuo－3染色,用LSCM在488nm扫描并加入不同浓度的TSH及IL－6检测细胞内Ca2 的变化。结果：TSH（1－5U／L）可使细胞内Ca2 的水平上升,且与TSH的浓度有一定关系。IL－6（1～100μg／L）对FRTL－5细胞内基础Ca 浓度无直接作用。     

大黄灵仙方对LPS诱导的肝内胆管组织损伤大鼠炎症反应及Wnt5a-Ca;-PKC信号转导通路的影响

目的:探讨大黄灵仙方对LPS诱导的肝内胆管组织损伤大鼠Wnt5a-钙离子(Ca;)-活化蛋白激酶C(PKC)信号转导通路及炎症反应的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、大黄灵仙方组(320 mg/kg)、炎症信号阻断剂组(PDTC+SB203580,120 mg/kg+10 mg/kg)、大黄灵仙方+信号阻断剂组(320 mg/kg+120 mg/kg+10 mg/kg),每组12只。采用胆总管注射内毒素LPS构建肝内胆管组织损伤模型,分别于造模前和造模后连续给药3 d,2次/d。末次给药12 h后,ELISA检测血清总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)及肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6水平;截取胆管周围组织,HE染色观察组织病理变化;荧光免疫法检测胆管组织细胞内Ca;水平;RT-qPCR和Western blot检测胆管组织Wnt5a、骨桥蛋白(OPN)、PKC mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清TBIL、TBA、TNF-α、IL-6水平、胆管组织细胞内Ca;水平、胆管组织Wnt5a、OPN、PKC mRNA及蛋白、IL-6蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,炎症信号阻断剂组及大黄灵仙方组大鼠TBIL、TBA、TNF-α、IL-6水平、细胞内Ca;水平、Wnt5a、OPN、PKC mRNA及蛋白、IL-6蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与炎症信号阻断剂组及大黄灵仙方组相比,大黄灵仙方+信号阻断剂组上述指标进一步降低(P<0.05)。结论:大黄灵仙方可能通过抑制Wnt5a-Ca;-PKC信号通路活化降低肝内胆管组织损伤大鼠炎症反应。     

幼年特发性关节炎患儿外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例降低且与细胞因子水平负相关

目的 探讨幼年特发性关节炎(JIA)患儿外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺调节性T细胞与白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平及临床意义。方法 采用流式细胞术检测58例JIA患儿及40例体检健康儿童外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺调节性T细胞比例,收集每例患儿对应的血清,化学发光法检测JIA患儿血清中IL-6、 TNF-α水平。Pearson相关性分析JIA患儿外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺调节性T细胞比例与血清IL-6、 TNF-α水平的关系。在58例JIA患儿中收集到18例JIA全身型患儿对应的托珠单抗(tocilizumab)治疗后的全血及血清样本,采用以上方法检测托珠单抗治疗前后外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺调节性T细胞与血清IL-6、 TNF-α水平。结果 与健康对照组相比,...     

木犀草素对肥大细胞脱颗粒影响及机制的研究

目的:探讨木犀草素(Luteolin)的抗I 型变态反应的作用机制。方法:通过建立DNP-BSA-IgE 激发致敏的大鼠RBL-2H3 细胞模型,分别采用MTT 法检测不同浓度(5、15、25 mol/ L)Luteolin 对RBL-2H3 肥大细胞活性的影响;ELISA 法检测不同浓度Luteolin 对RBL-2H3 细胞分泌 hexosa minidase( HEX)及细胞因子TNF 影响;Flou-4AM 荧光探针检测细胞内Ca2+浓度变化;Western blot 检测AKT,P-AKT 的表达。结果:成功建立致敏的细胞模型,低浓度的Luteolin 对RBL-2H3 细胞活性无明显影响;不同浓度Luteolin 刺激RBL-2H3 细胞后,对 HEX 和TNF鄄琢的释放抑制作用呈线性相关,且细胞内Ca2+ 明显减少;Western blot 结果显示随着Luteolin 浓度的增加AKT 磷酸化水平明显下降。结论:Luteolin 呈剂量依赖性抑制RBL鄄2H3 肥大细胞脱颗粒,且通过调节细胞内Ca2+浓度与AKT 活性参与其中。