糖尿病糖脂代谢紊乱与足细胞损害的实验研究

目的　观察糖脂代谢紊乱对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞的影响 ,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法　采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型 ,喂养 5周后 ,测定血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总胆固醇、血肌酐、尿素氮和尿白蛋白排泄率 ,应用免疫组化检测肾小球足细胞损伤标志蛋白 -desmin的表达 ,同时利用透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构。结果　糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,肾小球内desmin蛋白表达上调 ,足细胞部分足突融合 ;同时 ,两组间血甘油三酯水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　糖脂代谢紊乱可导致糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞明显损害 ,尿白蛋白排泄率增加 ,这可能是糖尿病肾脏损害、蛋白尿出现的机制之一     

前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的 观察前列腺素E1 (PGE1)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏细胞凋亡的影响. 方法 雄性Wistar大鼠65只,单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型.将造模成功的46只大鼠随机分为4组,PGE1组12只:前列地尔注射液(凯时)10 μg/d,静脉推注,10 d;血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)组12只:盐酸贝那普利片(洛汀新)10 mg/d,灌胃,8w;联合用药组11只:给予PGE1和ACEI联合治疗,剂量及时间同上;肾病对照组11只:仅给予相同体积生理盐水;另设正常对照组10只,处理同肾病对照组.治疗8 w后处死所有动物并测定24 h尿微量白蛋白、血尿素和血肌酐;HE染色观察肾脏病理和原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡. 结果 治疗后8w,ACE1组、PGE1组、联合用药组24 h尿白蛋白水平均低于肾病对照组[(374.6±54.1)μg,(570.0±72.5)μg,(253.1±28.9)μg 比(1123.4±106.2 )μg,P＜0.01或P＜0.05];血尿素[(9.3±2.6)mmol/L,(11.0±3.5)mmol/L.(8.4±2.2)mmol/L比(15.1±4.0)mmol/L]和血肌酐[(74.5±19.2)μmol/L,(83.5±15.8) μmol/L,(64.6±17.3)μ mol/L比(117.7±33.0)μmol/L]水平均低于肾病对照组(P＜0.01或P＜0.05);与肾病对照组比较,各用药组肾脏组织病理改变减轻,联合用药组病理形态最佳.细胞凋亡在肾小球区域不明显.各组间差异无统计学意义(P＞0.05);除正常对照组外,各组肾小管细胞凋亡数显著多于肾小球. 结论 PGE1减少尿白蛋白的机制与肾小球细胞凋亡无明显相关,可能与肾小管细胞凋亡有关.     

黄芪当归合剂对肾病综合征鼠肾组织损伤的影响

为了探讨黄芪当归合剂对肾病综合征鼠肾组织损伤的影响,采用嘌呤霉素致肾病综合征大鼠模型,随机分正常组、肾病对照组、中药治疗组三组。光学显微镜下分别观察肾小球、肾小管间质损伤指数,并进行半定量比较。三组之间肾小球、肾小管间质损伤指数存在统计学差异,中药治疗组两指数明显低于肾病对照组。证明黄芪当归合剂明显减轻肾小球、肾小管间质损伤指数,具有减轻肾损伤,保护肾功能的作用。     

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾组织结构及足细胞nephrin蛋白表达的影响

目的 探讨雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病大鼠尿蛋白、足细胞损伤及肾皮质nephrin 蛋白表达的影响.方法 建立高脂饮食联合链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型,随机分为糖尿病肾病模型组、小剂量TWP(6 mg·kg-1·d-1)治疗组及大剂量TWP(12 mg·kg-1·d-1)治疗组,并以正常大鼠为对照,每组12只.干预12周后检测大鼠24 h尿蛋白量、血肌酐及尿素氮水平,并以苏木素-伊红染色(HE)、过碘酸希夫染色(PAS)、Masson染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫组化检测肾皮质nephrin蛋白表达.结果 与正常大鼠相比,2型糖尿病大鼠尿蛋白明显增加[( 3.28±0.26) mg/24 h vs.(27.60±0.24) mg/24 h],而小剂量及大剂量TWP治疗后大鼠尿蛋白均明显改善[分别为(12.63 ±0.21)及(10.50±0.15) mg/24 h,P＜0.05)],大剂量TWP治疗组尿蛋白低于小剂量TWP治疗组,但差异末达统计学意义.病理分析显示糖尿病肾病模型组表现为肾小球硬化、基底膜增厚,肾小管变形、上皮细胞空泡变性,间质纤维化,足细胞足突增宽、融合、细胞减少,TWP治疗组大鼠肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻.同时免疫组化结果显示TWP治疗使肾脏皮质nephrin蛋白表达增加,且大剂量TWP治疗组高于小剂量TWP治疗组.结论 TWP可能通过增加nephrin的表达,发挥其对糖尿病肾病足细胞功能的保护作用.     

他克莫司通过减少肾小球足细胞凋亡降低2型糖尿病大鼠尿白蛋白

目的探讨他克莫司降低2型糖尿病(T2DM)大鼠尿白蛋白的可能机制。方法高脂高糖饲料喂养8周联合低剂量链脲佐菌素腹腔注射构建T2DM大鼠模型,随机选取后分为糖尿病模型组(DM组,n=10)和他克莫司(FK506)治疗组(FK组,n=10),另设正常对照组(n=10)。FK组给予FK506灌胃干预8周,DM组、正常对照组给予等量枸橼酸缓冲液灌胃8周。干预前后测定各组大鼠肾肥大指数(肾质量/体质量,KM/BM)、收缩压、24h尿白蛋白/尿肌酐,空腹血糖、内生肌酐清除率(CCr),总胆固醇、三酰甘油、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和血白细胞;光镜、电镜观察肾脏病理改变;免疫组织化学方法测定nephrin蛋白表达;TUNEL法检测足细胞凋亡;Western blot法测定cleaved-caspase-3的表达和bax/bcl-2。结果与正常对照组相比,DM大鼠KM/BM、收缩压、空腹血糖、CCr、总胆固醇、三酰甘油及24h尿白蛋白/尿肌酐明显升高(均P0.05),经FK506干预后大鼠KM/BM、24h尿白蛋白/尿肌酐明显降低(均P0.05),而对收缩压、空腹血糖、CCr、ALT、AST和血白细胞的影响无统计学意义;光镜下,DM大鼠肾小球体积增大,系膜细胞增生,基底膜增厚;FK506干预后病理改变明显减轻;电镜下,DM组肾小球基底膜显著增厚,足突紊乱、融合率明显升高[(73.50±3.60)%比(4.20±1.91)%,P0.05];经FK506干预后上述病变有所减轻,足突融合率下降[(33.80±1.93)%比(73.50±3.60)%,P0.05];免疫组化结果显示,DM组肾组织nephrin蛋白表达较正常对照组下降,而FK506干预后nephrin蛋白表达明显恢复(P0.05);TUNEL法检测发现DM大鼠足细胞凋亡明显增多(P0.05),而FK506干预后足细胞凋亡明显减少(P0.05);Western blot结果显示:DM组肾组织cleaved-caspase-3蛋白表达和bax/bcl-2较正常对照组上升(P0.05),而FK组cleaved-caspase-3蛋白表达和bax/bcl-2明显降低(P0.05)。结论他克莫司可以通过减少糖尿病肾病大鼠足细胞的凋亡而发挥降低24h尿白蛋白,延缓肾功能减退的作用。     

阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾脏的保护作用

目的：探讨阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾脏的保护作用。方法通过尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型小鼠24只,随机分为阿霉素肾病组、阿利吉仑组、缬沙坦组及阿利吉仑＋缬沙坦组各6只,另取同龄BALB/c小鼠6只作为正常对照组。比较各组阿霉素注射后第2、6周24 h尿蛋白定量及肾功能的差异;处死小鼠后,取各组肾组织石蜡包埋,切片行PAS、HE和Masson染色,观察肾小球硬化程度和肾小管损害程度。结果阿霉素肾病小鼠表现为蛋白尿、低蛋白血症并伴有进行性肾功能下降,出现肾小球硬化及小管间质损害。与阿霉素肾病组比较,阿利吉仑组、缬沙坦组及阿利吉仑＋缬沙坦组24 h尿蛋白均有显著改善,血清白蛋白明显上升（P均＜0．05）。与阿霉素肾病组比较,阿利吉仑组、缬沙坦组及阿利吉仑＋缬沙坦组均可明显减轻肾小球硬化和肾小管间质损害（P均＜0．05）,但阿利吉仑＋缬沙坦组可明显改善肾间质纤维化（P均＜0．05）。结论阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠具有肾脏保护作用,与缬沙坦联合应用可明显改善肾间质纤维化程度。     

醛固酮及醛固酮拮抗剂依普利酮对自发性高血压大鼠足细胞CD2AP 表达的影响

目的观察自发性高血压大鼠肾损害早期血浆与组织醛固酮水平和醛固酮受体拮抗剂对肾足细胞损伤和CD2AP表达的影响。方法 20只8周龄雄性自发性高血压大鼠（SHRs）,随机分成干预组和未干预组,每组10只,10只同龄Wistar-Kyoto大鼠为对照组。每天给予干预组依普利酮悬浊液灌胃（50mg/kg,溶于2ml过滤水）,未干预组和对照组用同体积过滤水灌胃。测量大鼠尾动脉收缩压、尿微量白蛋白、血浆醛固酮和肾组织醛固酮。RT-PCR和Western印迹法检测肾小球CD2AP基因和蛋白表达。透射电镜检测大鼠肾足细胞形态学变化。结果 SHRs收缩压明显高于对照组（P〈0.01）;未干预组的尿微量白蛋白水平高于对照组和干预组（P〈0.01）;未干预组血浆和肾组织醛固酮水平高于对照组（P〈0.05）。透射电镜显示未干预组上皮足突节段融合,肾小管上皮细胞溶酶体中度增多,肾间质毛细血管扩张。未干预组CD2AP基因和蛋白表达水平低于对照组和干预组（P〈0.01）。尿微量白蛋白水平与肾小球CD2AP蛋白表达水平呈中度负相关（r=-0.587,P〈0.01）。肾小球CD2AP蛋白表达水平与血浆和肾组织醛固酮水平呈中度负相关（r=-0.552和r=-0.577,P〈0.01）。结论自发性高血压大鼠肾损害早期的足细胞损伤与血浆和肾组织高醛固酮水平有关。依普利酮可以减轻足细胞损伤,改善CD2AP的表达。     

不同饮食结构建立的2型糖尿病肾病大鼠模型比较

目的探讨饮食对于2型糖尿病肾病大鼠模型血压、生化指标、肾脏病理的影响。方法将36只大鼠随机分为高盐高脂组(A组),高糖高脂组(B组),正常对照组(C组),各12只,适应性饲养1 w后均摘除左肾。然后分别按上述饮食喂养4 w,测空腹血糖及空腹胰岛素后,A、B两组给予3次小剂量链脲佐菌素造模,C组仅给予柠檬酸造模后继续按上述饮食喂养,每4 w测血压,继续上述饮食16 w后留取24 h尿进行尿微量白蛋白定量后,取血测各项生化指标,摘取右肾分别进行HE、Masson及电镜病理检测。结果 A组血压及24 h尿微量白蛋白明显高于B组及C组。A组肾小动脉改变较B组明显,电镜下A、B组均表现为足突部分融合或消失,基底膜增厚,系膜细胞增生及基质增宽。A、B组肾小球硬化指数及肾小管间质损伤指数均明显高于C组。结论高盐高脂饮食导致了糖尿病肾病大鼠更为明显的高血压和更加严重的微量白蛋白尿,且更易导致肾小球硬化,病理损害相对较重,因而更接近于人类2型糖尿病肾病。     

二甲苯诱导大鼠肾损伤模型的建立

目的:建立二甲苯诱导肾损伤的大鼠模型,观察吸入二甲苯对大鼠肾脏损伤的病理特点。方法:选择雄性SD大鼠,吸入二甲苯2次/d,3h/次。分别收集吸入二甲苯4、6、8、10、12周各个时间点大鼠的尿液、血清和肾组织,检测24h尿蛋白、生化指标和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)/肌酐;行肾组织光镜和电镜观察肾小管和肾小球病变,免疫荧光染色观察足细胞裂孔膜蛋白podocin和骨架蛋白synaptopodin表达和分布变化。结果:(1)大鼠吸入二甲苯3周开始出现蛋白尿,8~9周尿中蛋白量达到最高(34.78±2.91 mg/24h),此后蛋白尿维持在一个相对恒定的水平;(2)实验大鼠尿NAG酶在吸入二甲苯2周后开始升高,第4周增高最为显著,并且达最高水平[25.03±4.88 U/(g·cr)]。(3)吸入二甲苯的大鼠总蛋白、白蛋白、肌酐和谷丙转氨酶与正常对照组相比没有显著差异,大鼠谷草转氨酶较正常对照组明显升高;吸入二甲苯12周,血清尿素氮与正常对照组相比增高。(4)光镜下观察可见肾小管上皮细胞空泡变性,肾小管细胞刷状缘脱落、扁平,部分小管上皮细胞崩解,脱落至管腔中。肾小球未见明显异常。超微结构观察可见多处肾小管上皮细胞刷状缘脱落,上皮细胞崩解,线粒体肿胀,基质电子密度降低,嵴移向周围,变短及数量减少。肾小球足细胞节段足突融合。(5)大鼠吸入二甲苯肾组织免疫荧光染色,可见肾小球足细胞裂孔膜蛋白podocin和骨架蛋白synaptopodin荧光强度减弱,表达呈现不连续颗粒样分布。结论:成功建立了大鼠吸入二甲苯的肾损害模型,初步证实吸入二甲苯能够导致肾脏损伤,大鼠出现蛋白尿,肾小管上皮细胞损伤明显,肾小球足细胞节段损伤,肾小管损伤程度明显重于肾小球。     

甘油三酯肾毒性及其加重大鼠阿霉素肾病的初步研究

目的 探讨甘油三酯(TG)是否具有肾毒性以及外源性TG对阿霉素肾病大鼠的影响。方法 雄性SD大鼠40只，分为5组，即C组：正常对照组，F组：果糖饲喂组，A组：ADR肾病组，FA组：ADR肾病 果糖饲喂组，FAB组：ADR肾病 果糖饲喂组 非诺贝特治疗组(n=10)。实验周期为16周。在实验前、实验后第2、8和16周分别抽空腹血查肾功能、白蛋白、血脂。抽血次日留24h尿测尿蛋白定量。实验结束时采血留尿后宰杀动物，留取肾组织行光镜下观察HE、油红O染色病理学改变，测定肾脏内纤维连接蛋白(FN)和转化生长因子β(TGF-β)的含量。结果 饲喂果糖可造成大鼠食饵性高TG血症，但肾脏基本无病变，肾脏内少见脂质沉积；而饲喂果糖可显著升高阿霉素肾病大鼠的血TG水平，尿蛋白排泄量显著增多，肾脏病理改变加重，肾小球和肾小管内脂质沉积增加，肾皮质FN和TGF-β的含量均较食饵性高甘油三酯血症大鼠显著增加或增强；而以吉非罗齐降低大鼠血浆甘油三酯水平后大鼠尿蛋白排泄量减少以及肾脏病理减轻，肾脏内脂质沉积明显减少，肾皮质内FN和TGF-β的含量下降。结论 高TG血症对SD大鼠肾脏具毒性作用，并可加重阿霉素肾病大鼠病情和肾脏病理，提示临床重视和治疗高TG血症的必要性和紧迫性。