金叶败毒制剂对人巨细胞病毒感染细胞病变及细胞周期的影响

目的 探讨中药金叶败毒制剂(简称中药)对人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HEL)细胞病变及细胞周期的影响.方法 用HCMV AD169感染人胚肺成纤维细胞,分别用金叶败毒制剂和更昔洛韦(简称GCV)干预后,用倒置相差显微镜观察不同感染时间细胞病变,并采用流式细胞技术检测HCMV感染及药物干预后宿主细胞周期.结果 金叶败毒制剂能明显抑制HCMV感染HEL细胞病变.中药干预组在病毒感染48 h后,HEL细胞处于G2/M期的细胞明显增多,在HCMV感染72 h后,药物干预组 HEL细胞均表现为S期细胞明显减少,G2/M期和G0/G1期细胞明显增多.结论金叶败毒制剂可能通过延缓HCMV感染细胞病变,促进细胞周期进程而发挥抗病毒作用.     

髓清丸对HEL细胞系作用的血清药理学研究

目的 :研究中药复方髓清丸对白血病细胞的作用。方法 :采用血清药理学方法体外培养观察人红白血病细胞系 (HEL)的增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态等细胞学指标。结果 :活细胞百分率各含药血清组均较对照组低 ,MTT法测定髓清丸中剂量组和高剂量组OD值明显低于对照组 (p<0 0 1) ,中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于 2 0 %,高剂量含药血清组G1期DNA含量明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,中剂量组凋亡细胞百分率较高 (P <0 0 5 )。结论 :髓清丸能抑制HEL细胞的增殖 ,并有一定的诱导HEL细胞分化、凋亡的作用。     

白花蛇舌草对人喉癌细胞凋亡及增殖的影响

[目的]研究中药白花蛇舌草(Hedyotis diffusa HD)对人喉癌Hep-2细胞凋亡、周期及增殖的影响,以探讨其在喉癌肿瘤治疗方面的作用机制。[方法]分别用不同浓度的HD作用于体外培养的Hep-2细胞,MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。[结果]HD浓度为80mg/mL时,MTT 48h和72h细胞抑制率分别为43.80%和55.00%,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);细胞周期结果显示随着药物浓度增加和作用时间延长,G0/G1期细胞减少,S期细胞显著性增加,细胞阻滞在S期;细胞早期凋亡率明显增加,48h和72h凋亡率分别为7.10%和19.47%,与对照组1.49%和2.75%比较结果有显著性差异(P<0.01)。[结论]HD浓度为80mg/mL时对体外培养的Hep-2细胞具有明显增殖抑制作用,使细胞阻滞在S期,并诱导细胞发生凋亡。     

中药金叶败毒颗粒抑制人巨细胞病毒感染丝裂素活化蛋白激酶p38信号通路的研究

目的：研究金叶败毒颗粒（简称中药）对人巨细胞病毒（HCMV）感染丝裂素活化蛋白激酶（MPAK）p38信号通路的抑制作用,并探讨其治疗PCMV感染的分子机制。方法：应用原位杂和免疫组化方法分别检测中药和更昔洛韦（GCV）干扰HCMV感染的细胞p38mRNA及pRb蛋白表达水平,观察两药物对HCMV感染人胚胎成纤维细胞（HEL）的影响。结果：两种药物均可抑制HCMV在HEL中的增殖,但中药能明显抑制p38mRNA的水平,并使其磷酸化底物pRb蛋白表达低,而GCV无此作用,结论：中药可能通过调节MAPK通路而抑制HCMV基因的表达和复制。     

热毒清药液抗SARS病毒细胞模型的实验研究

目的:观察中药热毒清药液(RDQ)抵抗SARS病毒感染细胞的作用.方法:不同稀释浓度RDS分别加入SARS病毒感染的细胞,记录CPE,进行抗SARS病毒活性作用的计算和评价.结果:100μg/ml浓度的RDS有保护被感染细胞的活性作用.结论:在初步体外筛选模型中,热毒清有一定的抗冠状病毒作用.     

新疆紫草提取物对GLC-82人肺腺癌细胞的体外作用

目的:研究不同浓度的紫草提取物(SE)对体外培养的GLC-82人肺腺癌细胞(简称"GLC-82细胞")的作用。方法:荧光显微镜观察细胞形态的变化;MTT法检测不同浓度SE培养细胞后细胞的存活率;划痕试验检测不同浓度的SE对细胞迁移力的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果:SE诱导细胞凋亡程度与用药剂量呈正相关,较高剂量的药物能引起GLC-82细胞亚结构发生变化,如呈现边界不清,体积缩小,核固缩,染色质凝集、边缘化,甚至细胞发生破碎,凋亡小体形成;随着SE浓度的增高GLC-82细胞向划痕区的愈合速度不断减慢;SE的浓度≥3mg/mL时,细胞周期主要表现为G1期比例的上升伴随S期比例的下降。结论:高剂量SE能够诱导GLC-82细胞凋亡及周期的改变,为临床上用药剂量提供一定的依据。     

姜黄素体外抗人巨细胞病毒活性的研究

目的 研究姜黄素体外抗人巨细胞病毒(HCMV)的作用和安全性.方法 以更昔洛韦为对照药物,采用细胞病变效应(Cytopathologic effects,CPE)和四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价姜黄素体外抗HCMV AD169活性.结果 更昔洛韦和姜黄素的最大无毒浓度(TC0)分别为50.00,6.44 μg/mL;最小有效浓度分别为8.90,0.12μg/mL;治疗指数分别为16.57和102.42.结论 姜黄素在体外具有显著的抗人巨细胞病毒的活性.     

复方肠泰抑制人结肠癌SW480细胞增殖的实验研究

目的:考察复方肠泰(人参、薏苡仁、莪术等)对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝比色法测定不同浓度复方肠泰在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:复方肠泰可在G0/G1期以及G2/M期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖,使S期细胞比率降低。结论:复方肠泰在3.51～7.81mg/mL范围内呈现明显的量效关系。     

芦荟大黄素对人结肠癌细胞SW480增殖周期及凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素对人结肠癌细胞SW480细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响.方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度芦荟大黄素在不同作用时间内对在体外培养SW480细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化.结果:芦荟大黄素可在G0/G1期阻滞人结肠癌细胞SW480的增殖,使S期细胞比率降低;在一定范围内,芦荟大黄素的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高.结论:芦荟大黄素能抑制人结肠癌细胞SW480细胞生长,并诱导细胞凋亡而阻断细胞周期.     

黑木耳多糖对人红白血病K562细胞周期和凋亡的影响

目的:观察黑木耳多糖(Auricularia auricula polysaccharide,AAP)体外对人红白血病K562细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法:将K562细胞与AAP以及AAP作用于体外培养人外周血单个核细胞(PBMCs)的上清液培养,用MTT法检测K562细胞增殖和流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果:AAP对K562细胞没有显示直接的细胞毒作用,但AAP作用的PBMC上清液能显著抑制K562细胞的增殖,抑制率最大可达49.68%;AAP作用的PBMCs上清液能使G0/G1期细胞显著增加(P0.05,P0.01);200μg/mL到800μg/mL浓度AAP刺激的PBMCs上清液能显著诱导K562细胞凋亡(P0.05,P0.01),其凋亡率可达24.70%。结论:AAP通过激活免疫细胞抑制肿瘤细胞生长,诱导其凋亡并使细胞阻滞于G0/G1期。     

菲索伴侣体外抑制人巨细胞病毒的实验研究

目的 :研究FESOL MATE体外抑制人巨细胞病毒 (HCMV)的作用效果。方法 :以病毒唑 (RBV)作阳性对照药 ,从光镜细胞病变 (CPE)观察和电镜细胞超微结构观察两方面研究FESOL MATE体外抗人巨细胞病毒(HCMV)的作用。结果 :CPE观察 ,FESOL MATE半数抑制病毒剂量 (IC50 )为 0 0 0 8倍原液浓度 ,治疗指数TI为31 2 5 ;RBV的IC50 为 0 0 36mg/ml,TI为 5 2 5 0。与阳性药RBV比较 ,FESOL MATE对HCMV有较明显的抑制作用。超微结构观察 ,与病毒对照组相比 ,FESOL MATE组病毒颗粒仅存在于细胞核中 ,胞浆中未见病毒颗粒 ,表明FESOL MATE能有效抑制HCMV。结论 :FESOL MATE在细胞水平能明显地抑制HCMV。     

苦参碱对人食管癌细胞株Eca-109增殖和凋亡的影响

目的探讨中药提取物苦参碱单体(Matrine)对人食管癌细胞株Eca-109的诱导凋亡和抑制增殖作用。方法体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的苦参碱对体外培养的Eca-109细胞株进行干预。以MTT比色法、Hoechst33342染色法以及流式细胞术测定苦参碱对Eca-109细胞株的诱导凋亡及抑制增殖的作用。结果 MTT实验显示苦参碱可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖,流式细胞术检测细胞周期显示G2期细胞明显增多,S期细胞显著减少。结论苦参碱能明显抑制Eca-109细胞株的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与细胞周期阻滞于G2期有关。     

双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞凋亡机制的研究

目的探讨双吲哚马来酰亚胺衍生物L6诱导白血病细胞的凋亡作用及其分子机制。方法采用MTT比色法检测L6对白血病细胞HEL、K562、KG1a的杀伤作用。流式细胞术检测L6对HEL细胞凋亡、周期和分化的影响。Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。通过体内实验研究L6治疗小鼠白血病的作用效果。结果 MTT比色法结果显示L6对HEL、K562、KG1a细胞具有比阳性对照米哚妥林(PKC412)更显著的抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为(0.05±0.03)、(0.32±0.01)、(0.19±0.10)μmol/L。L6可以诱导HEL细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,诱导HEL细胞向巨核细胞方向分化,且呈剂量效应。Western blotting检测结果表明L6主要通过激活Caspase-3执行细胞凋亡。小鼠肝组织苏木精-伊红(HE)染色显示肝组织内HEL细胞浸润有所减轻,但L6组减轻的效果更明显,表明其可延缓白血病细胞的转移,且效果优于米哚妥林。结论双吲哚马来酰亚胺衍生物L6有较强的抗白血病活性,为新型白血病药物的研发提供参考。     

鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响

目的观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制。方法在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况。结果形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多。MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性。FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞。48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群。结论鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系。可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡。     

解毒胶囊对人巨细胞病毒抑制作用的体外实验研究

目的　探讨中药解毒胶囊对人巨细胞病毒 (HCMV)的抑制作用。方法　在人胚肺成纤维细胞培养 2 4h后 ,加入HCMVAD169毒株 ,作用 2h后加入不同浓度解毒胶囊观察其对该病毒的抑制作用。结果　解毒胶囊的最大无毒浓度为 15 6mg/L ,最小有效浓度为 39mg/L ,治疗指数为 4。结论　解毒胶囊在体外具有良好的抑制HCMV作用 ,随药物浓度增高作用增强 ,是治疗HCMV感染 (孕妇婴幼儿除外 )安全、有效的药物。     

补肾宁心方药物血清对鼠成骨细胞的增殖周期与凋亡的影响

目的:探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞(osteob last,OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法:颅骨酶解法培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分别予以5%~30%系列浓度的对照鼠血清或中药血清培养,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果:DNA含量分析显示与相应对照组相比,10%~20%药物血清组的S期和G2/M期细胞百分比明显增加,G0/G1期细胞百分比明显下降,细胞增殖指数(PI)显著增加(分别为P<0.05和P<0.01);10%~20%的药物血清还具有显著的抗凋亡作用(分别为P<0.05和P<0.01);透射电镜可见经20%药物血清诱导后的OB细胞出现典型的细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论:补肾宁心方药物血清在体外可有效地促进鼠OB的增殖周期,从而促进OB增殖并抑制其凋亡。     

荷叶、葛根和鱼腥草提取物体外抗肝癌及抗HBV活性研究

目的:研究荷叶、葛根和鱼腥草提取物的体外抗肝癌及抗HBV活性。方法:以HepG2.2.15细胞为模型,MTT法检测三种中药对细胞增殖的影响;光学显微镜观察药物对细胞形态的影响;流式检测细胞的凋亡情况;ELISA法检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量。结果:三种中药给药浓度为2000μg/m L时,对细胞的增殖具有抑制作用;三种中药浓度达1000μg/m L时,可使细胞形态发生病理性改变,显著促进Hep G2.2.15细胞的凋亡;在125~1000μg/m L浓度范围内,三种中药提取物均可显著降低细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量。结论:荷叶、葛根和鱼腥草提取物均具有体外抗肝癌和抗HBV活性。     

护肾固精方对大鼠系膜细胞增殖周期的影响

目的探讨中药复方护肾固精方对大鼠系膜细胞(MC)生物学行为的影响。方法采用体外培养大鼠MC和血清药理学方法,分为护肾固精方血清组、脂多糖(LPS)病理组及正常对照组,将不同浓度的作用物加入MC共同培养,培养后的MC制成单细胞悬液,经流式细胞仪检测后,计算出细胞周期中的G0/G1期、S期、G2/M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞PI。结果不同浓度的作用物对MC增殖周期有不同影响。LPS血清能明显刺激MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比减以及S期细胞增加;细胞的S期抑制百分比明显下降,而细胞的PI则显著增高;中、高浓度的中药血清明显抑制MC增殖,表现为G0/G1期细胞百分比增加及S期细胞减以,细胞的S期抑制百分比明显增加,而细胞的PI则显著降低。并且使大量MC阻滞在G0/G1期,能诱导MC发生凋亡。结论护肾固精方治疗系膜增殖性肾炎等肾小球疾病的作用机理之一,可能与抑制MC增殖和促其细胞凋亡有关。     

连翘及其主要有效成分槲皮素体外抗人巨细胞病毒的实验研究

目的:研究连翘及其主要有效成分槲皮素体外抗人巨细胞病毒作用和细胞毒性。方法:用细胞病变法和MTT法,检测连翘、槲皮素抗人巨细胞病毒的最大无毒浓度、最小有效浓度和治疗指数,并与更昔洛韦进行比较。结果:更昔洛韦、连翘及槲皮素的最大无毒浓度分别为10,30,30 mg.L-1,最小有效浓度分别为10,30,0.3 mg.L-1,治疗指数分别为1,1,100。结论:槲皮素抗HCMV效果大大高于更昔洛韦和连翘,细胞毒性与连翘相同、比更昔洛韦低。连翘尤其是槲皮素具有良好的体外抗人巨细胞病毒(HCMV)效果,有望成为临床抗HCMV的药物,值得进一步深入研究。     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。