天花粉多糖对人外周血单个核细胞的免疫活性作用

目的:建立天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)淋巴细胞增殖的方法,了解天花粉多糖对淋巴细胞增殖、活化作用,对T淋巴细胞亚群分群的影响和诱导产生TNF-α,IL-6水平的差异。方法:制备天花粉多糖提纯液。健康人PBMC作为药物筛选的靶细胞;采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0 mmol.L-1)的促人PBMC淋巴细胞增殖作用;采用流式细胞术和ELISA法分别检测药物作用后人PBMC中T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+T细胞)的表达和诱导人PBMC分泌产生TNF-α,IL-6水平。结果:1.0~50.0 mmol.L-1天花粉多糖对人PBMC具有明显促增殖作用(P0.05);经5.0,10.0 mmol.L-1天花粉多糖刺激后的人PBMC中,CD3+,CD4+,CD8+T细胞的含量明显高于对照组(P0.05),1.0,5.0,10.0 mmol.L-1天花粉多糖刺激人PBMC 8 h后,TNF-α,IL-6水平显著升高(P0.05)。结论:天花粉多糖对人PBMC有明显促增殖和活化作用,不同程度地上调T淋巴细胞亚群中CD3+,CD4+,CD8+T细胞的含量,并可诱导人PBMC高水平分泌产生TNF-α,IL-6,为阐明天花粉多糖的免疫活性和作用机制奠定基础。     

不同浓度芦荟多糖对外周血单个核细胞和HepG2 生长的影响

目的:为芦荟多糖的抗肿瘤作用研究提供实验用细胞模犁,筛选最佳干预药物及其浓度.方法:采用人淋巴细胞分离液,Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),Alamar Blue法观察芦荟多糖对PBMc生长的影响,四唑氮蓝(Methylthiazolctrazolium,MTT)法观察芦荟多糖对HepG2生长的影响.结果:密度梯度离心法成功分离PBMC.芦荟多糖AP11在200μg·mL-1时已较明显促进和维持PBMc的生长(P<0.01).各不同浓度芦荟多糖对HepG2的生长无显著影响(P>0.05).结论:芦荟多糖AP11(200μg·mL-1)可作为开展抗肿瘤作用机理的理想实验用药.     

自体外周血单个核细胞对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖对其干预作用

目的 观察、探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖AP11的干预作用.方法 以手术切除肝癌组织为标本,胰酶短暂消化加吹打、单细胞悬液培养法原代培养肝癌细胞.通过倒置显微镜观察其形态学特征.于分离培养第2天,加芦荟多糖AP11、芦荟多糖AP11干预及未干预的PBMC于癌细胞中,倒置显微镜观察其对癌细胞形态的影响,MTT法观察其对癌细胞生长的影响.结果 采用胰酶短暂消化加吹打分离、单细胞悬液原代培养的方法,可成功获取原代肝癌细胞;与空白对照组相比,芦荟多糖组癌细胞在形态上无明显差别,MTT实验结果表明其对癌细胞的生长无明显影响;与空白对照组相比,芦荟多糖AP11干预与未干预PBMC组癌细胞形态均有较大变化,MTT实验结果表明,其对癌细胞的生长有显著抑制作用.结论 芦荟多糖AP11无直接体外抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性可能是通过与PBMC的相互作用,通过调节机体的免疫系统而达到的.     

金银花与山银花对致敏大鼠外周血单个核细胞的影响

目的免疫豚鼠获取抗血清,观察金银花与山银花中间体等对豚鼠的致敏性及其对大鼠外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响。方法金银花和山银花各中间体等免疫豚鼠并观察豚鼠致敏情况,收集致敏后豚鼠血清,将其与大鼠PBMC细胞共孵育24 h,建立致敏细胞模型。金银花与山银花各中间体等与致敏细胞共培养24 h,CCK-8法检测大鼠PBMC的增殖情况。结果金银花中间体1、2发生豚鼠过敏反应;山银花中间体1、2发生豚鼠类过敏和过敏反应;金银花与山银花中间体等均抑制体外培养的大鼠PBMC的增殖,但两者相比金银花抑制率偏低。结论参照热毒宁注射液单味模拟药物的制备工艺,金银花对豚鼠的致敏性、对大鼠PBMC的抑制率低于山银花。     

超抗原SEA对人外周血单个核细胞杀伤乳腺癌细胞效力的诱导作用

[目的]研究超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)对外周血单个核细胞(PBMC)杀伤人乳腺癌细胞(MCF-7)效力的增强作用.[方法]淋巴细胞分离液梯度离心法从人外周血中分离出PBMC,在其中加入终浓度分别为0.01、0.1、1、10mg/L的SEA,与MCF-7在96孔板中共同培养.24、48、72h后用酶标仪检测吸光度值.计算杀伤率.[结果]SEA的促杀伤作用随着时间的增加而增强.SEA与PBMC相互作用72 h后,SEA浓度10 mg/L时,可达到最大杀伤效率.[结论]SEA能够提高PBMC对癌细胞的杀伤作用.     

桑黄增强人外周血单个核细胞产生γ-干扰素的研究

目的　研究桑黄对人外周血单个核细胞 (PMNCs)产生 γ-干扰素 (IFN- γ)的影响作用。方法　体外分离 PMNCs,与不同浓度的植物血凝素 (PHA- M)和桑黄水提取液培养 ,检测 IFN- γ生成量。结果　 10 0 μg/m l PHA- M对 PMNCs生成 IFN- γ的刺激效应最强 ;在此基础上 ,桑黄可进一步增强 PMNCs产生 IFN- γ,在0～ 2 0 0 μg/ ml范围内 ,随桑黄浓度升高而促进效应增强。结论　桑黄具有诱生 IFN- γ的能力 ,有利于其发挥调节机体免疫力、抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

桑黄增强人外周血单个核细胞产生γ—干扰素的研究

目的 研究桑黄对人外周血单个核细胞（PMNCs)产生γ干扰素（IFN－γ）的影响作用。方法 体外分离PMNCs，与不同浓度的植物血凝素（PHA－M）和桑黄水提取液培养，检测IFN－γ生成量。结果 100μg/ml PHA-M对PMNCs生成IFN-γ的刺激效应最强；在此基础上，桑黄可进一步增强PMNCs产生IFN－γ，在0－200μg/ml范围内，随桑黄浓度升高而促进效应增强。结论 桑黄具有诱生IFN－γ的能力，有利于其发挥调节机体免疫力，抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

当归多糖对树突状细胞成熟和功能的影响

目的:探讨当归多糖对外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外分化、成熟和功能的影响。方法:以外周血单个核细胞为来源,联合应用 GM-CSF、IL-4及 TNF-α,在体外诱导培养 DC。采用 MTT 法测定 DC 诱导的混合淋巴细胞反应分析 APS-3对 DC 刺激淋巴细胞增殖功能的影响;采用流式细胞术检测细胞表面标志 CD1a,HLA-DR,CD86的表达,来评价 APS-3对 DC 分化的作用;RT-PCR 技术研究 DC IL-12p40mRNA 的表达,探讨 APS-3对 DC 分泌 Th1型细胞因子 IL-12的影响。结果:人 PBMC 在体外可诱导培养出具有典型形态、表型及免疫活性的 DC。采用不同浓度APS-3(0.1、0.3、1.0μg/mL)处理培养的 DC 表面标志 CD1a、CD86、HLA-DR 及 IL-12mRNA 表达量均呈上升趋势。经不同浓度 APS-3处理的 DC 诱导的 MLR,在小剂量范围(0.01-1μg/mL)是剂量依赖性的增强作用,在高剂量范围(30-100μg/mL)表现为抑制效应;常规培养8天生成的 DC 与淋巴细胞共培养后,加入不同浓度 APS...     

肺癌患者外周血单个核细胞白细胞介素18的表达研究

目的 :探讨外周血单个核细胞 (PBMC)分泌白细胞介素 18(IL- 18)水平在肺癌中的意义。方法 :采用 EL ISA法测定 2 0例正常人和 6 2例肺癌患者的 PBMC经植物血凝素 (PHA)刺激后 IL - 18在上清液中的表达水平。结果 :正常及患者组 PBMC上清液中 IL- 18有低水平的活性表达 ,经 PHA刺激后其活性明显升高 (与未刺激组比较 ,P<0 .0 1) ;正常及患者组 PBMC经 PHA刺激后 ,患者组 IL - 18水平显著低于正常对照组 (P<0 .0 1) ;患者肺癌转移组 IL - 18水平降低较明显 (P<0 .0 5 ) ,肺癌及术后、放疗后组 IL - 18水平则无明显变化 ;患者 、 及 期 IL - 18水平无明显差异。结论 :PBMC能表达 IL- 18,肺癌的发生、发展及预后可能与 PBMC分泌 IL- 18活性降低有关。     

芦荟多糖干预的PBMC对肝癌细胞生长的影响

目的:研究芦荟多糖(AP)干预的外周血单个核细胞(PBMC)对体外肝癌细胞(HepG2)生长的影响,从免疫学角度探讨AP的抗肿瘤机理。方法:Alamar Blue法检测AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2对体外培养的PBMC生长的影响;以各组干预后的PBMC为效应细胞,HepG2为靶细胞,MTT法观察各组效应细胞对靶细胞杀伤活性的影响;流式细胞术PI单染法检测各组效应细胞对靶细胞细胞周期及凋亡率的影响。结果:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可显著促进PBMC的增殖;各组效应细胞可显著抑制靶细胞的生长,降低S期比例,提高G1比例和凋亡率。其中AP联合Anti-CD3mAb与rhIL-2干预的PBMC对靶细胞生长的抑制率可达46.30%,靶细胞S期比例,G1期比例和凋亡率明分别为24.37%,75.63%和30.37%。结论:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可提高PBMC抑制肝癌细胞生长的活性。     

梁金菇多糖促脐血单个核细胞增值活化的分子机制研究

目的:研究梁金菇多糖(liangjin mushroom polysaccha-ride,LJPS)对人脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)增殖活化的机制,为我国开发LJPS的药用价值提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测法方法观察了LJPS对CBMC作用后对CD33+细胞(髓系干细胞)的增殖作用,并采用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从mRNA水平对其增值活化的机理进行了探讨。结果:LJPS本身不能促进粒-单系祖细胞(CFU-GM)的生成,最佳浓度的LJPS刺激的CBMC上清液对CD33+细胞具有增殖作用,增殖高峰为第7天,其CD33+细胞数为培养前的6.9倍。LJPS可诱导CBMC表达粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA,从第6小时即开始表达,表达高峰为第24小时,其mRNA的量为对照组的23.9倍。结论:LJPS具有促造血的功能,其本身虽无GM-CSF活性,但其可通过刺激CBMC增殖活化,诱导细胞表达GM-CSFmRNA,间接促进CFU-GM的形成和髓系干细胞(CD33+细胞)的增殖从而调节造血功能。     

红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响。方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性。结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg.mL-1和0.625mg.mL-1剂量组促增殖作用明显(P0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P0.05)。结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能。     

黄芪对Graves病患者外周血IL-1β、TNF-α和单个核细胞抗原表达的影响

目的 探讨黄芪对Graves病患者外周血白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)表面抗原表达的影响,以了解黄芪对Graves病的治疗机制.方法 将80例初诊Graves病患者分为甲巯咪唑组(MMI组)和MMI加黄芪组(联合组),每组40例,治疗1个月后观察两组症状和甲状腺功能改善情况,放射免疫测定外周血IL-1β、TNF-α水平,流式细胞仪检测PBMC表面抗原CD80、CD54及HLA-DR表达水平的变化.结果 两组甲状腺功能改善程度相似,两组治疗前后甲状腺自身抗体TGAb、TPOAb均无明显变化.联合组怕热多汗和心悸等症状改善较单用MMI组更明显(P＜0.05),两组治疗后外周血IL-1β、TNF-α及CD80均较治疗前有所改善(P ＜0.05,＜0.01),但联合组IL-1β、TNF-α较MMI组降低更显著(P＜0.05),且CD54也较治疗前明显下降(P＜0.01),与MMI组同期比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 黄芪可以显著改善Graves病患者多汗心悸等症状,并调节Graves病的免疫机能,可以在Graves病的辅助治疗中起一定作用.     

梁金菇多糖对人脐血单个核细胞生成白介素-2的影响

[目的]研究梁金菇多糖(LJPS)对脐血单个核细胞(CBMC)分泌白细胞介素-2(IL-2)和IL-2mRNA表达的影响,探讨梁金菇多糖的增强免疫和抗肿瘤活性,为中国栽培的梁金菇药用价值的开发提供实验依据。[方法]采用放射性免疫法检测LJPS对CBMC分泌IL-2的影响,并应用RT-PCR法检测LJPS对CBMCIL-2mRNA表达的影响。[结果]LJPS单独或与植物血凝素(PHA)联合应用均能够促进CBMC分泌内源性IL-2(P<0.05和P<0.01),分泌高峰为48h左右,并且两者均能促进CBMCIL-2mRNA的表达,表达高峰为24h左右。[结论]梁金菇多糖能够促进CBMC内源性IL-2的分泌及IL-2mRNA的表达。     

异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的研究异乌药内酯对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法体外培养MCF-7细胞,分为对照组及不同浓度异乌药内酯处理组。采用MTT实验检测异乌药内酯对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术和TUNEL染色法检测异乌药内酯对MCF-7细胞周期、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响;采用Western blotting法检测与细胞凋亡密切相关的蛋白表达情况。结果异乌药内酯以时间和剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖、促进细胞凋亡;能够将MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,诱导线粒体膜电位去极化;上调cleaved Caspase-3和促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导MCF-7细胞的凋亡。结论异乌药内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

藏药秦艽醇提物对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞体外培养条件下细胞增殖影响的研究

目的:研究藏药秦艽醇提物对人类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养条件下细胞增殖的影响,以探讨其抗风湿活性。方法:应用醇提法将藏药秦艽提取分离,应用高效液相色谱法(HPLC)测定藏药秦艽醇提物中龙胆苦苷含量,四氮唑蓝(MTT)法检测秦艽醇提物对人RA患者外周血单个核细胞体外培养条件下细胞增殖情况的影响。结果:高效液相色谱法测定藏药秦艽醇提物中龙胆苦苷含量为6.08%,MTT法检测结果显示,秦艽醇提物对RA患者外周血单个核细胞有明显的抑制作用,用浓度为10 mg/mL、50 mg/mL秦艽醇提物处理后细胞生长抑制率(分别为81.46±7.03%、87.6±16.67%),分别与浓度为1 mg/mL、2 mg/mL秦艽醇提物处理后细胞生长抑制率(分别为48.96±8.59%、55.38±32.57%)相比均有升高,差异有统计学意义(P<0.05);结论:藏药秦艽醇提物抑制人RA患者外周血单个核细胞体外培养条件下细胞的增殖,不同浓度的秦艽醇提物对人RA患者外周血单个核细胞体外培养条件下细胞的增殖抑制作用有差异,提示秦艽抗风湿的部分机理可能是由于其有效成分龙胆苦苷抑制了淋巴细胞、单核细胞增殖而起的作用。     

梁金菇多糖对脐血单个核细胞增殖活化的研究

姬松茸Agaricus blazei系菌类植物的地上菌丝体,属于担子菌纲,原产于巴西,又名梁金菇。日本的姬松茸多糖具有抗肿瘤、抗突变、促进免疫、促进造血,保护肝脏[1]等功能。为了进一步探讨移植国内后的梁金菇多糖对造血功能的影响,本实验采用从脐带采集的脐血,其中含有丰富的干细胞和祖细胞,研究了梁金菇多糖对脐血单个核细胞的增殖活化作用。1材料1·1药物制备梁金菇(LJPS)由福州华胜食品有限公司提供,经中国科学院植物研究所梁峥研....     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

四君子汤对脾虚患者外周血单个核细胞白细胞介素—6mRNA表达 …

近来白细胞介素 6(ＩＬ 6)这一淋巴因子在免疫性疾病的发病中研究颇多 ,为了探讨ＩＬ 6ｍＲＮＡ在脾虚患者体内表达水平是否正常 ,检测了脾虚证患者血清中ＩＬ 6受体 (ｓＩＬ 6Ｒ)和ＩＬ 6的水平 ,并与健康人比较 ,现报告于下。资料和方法1　临床资料　脾虚组 18例 ,为本院中医科门诊与住院患者 ,男 10例 ,女 8例 ,年龄 39～ 62岁 ,平均( 50 5± 8 3)岁 ,其中慢性胃炎 6例 ,慢性肠炎 5例 ,混合性贫血 3例 ,特发性血小板减少 4例。具备有脾虚证辨证参考标准( 1) 中的每一项即纳差、乏力 ,食后或午后腹胀 ,便溏 ,消瘦 ,面色不华 ,舌淡苔白 ,…