寒冷胁迫可降低秀丽隐杆线虫的寿命和活动能力：通过介导脂代谢紊乱和应激反应异常

目的 探究秀丽隐杆线虫成虫在低温环境下的脂代谢、应激反应变化。方法 将同步化后的野生型及基因修饰型秀丽隐杆线虫成虫随机分为对照组和实验组,分别在20℃适宜条件和4℃低温暴露培养,观察其生存率、活动能力,评估非冷冻性极端低温对秀丽隐杆线虫成虫的寿命和活动能力影响;通过油红O染色和脂代谢相关基因表达检测,评价低温状态下秀丽隐杆线虫成虫脂代谢变化;通过线粒体荧光染色,应激相关基因、蛋白,抗氧化相关基因、蛋白的表达水平变化评估低温对秀丽隐杆线虫应激水平的影响。结果 4℃低温环境显著降低秀丽隐杆线虫成虫寿命（P<0.0001）和活动能力（P<0.0001）;同时,降低虫体脂质累积（P<0.05）,降低脂肪酸合成和代谢相关基因fat-5,fat-6,fat-7,fasn-1,nhr-49,acs-2,aco-1表达(P<0.01）;低温增强了热休克蛋白hsp-70,hsp-16.2表达(P<0.05）,但是降低了线虫线粒体数目（P<0.0001）和线粒体未折叠蛋白反应相关蛋白atfs-1的表达(P<0.05）,降低了抗氧化酶sod-2,sod-3,gpx-...     

Derlin⁃1对非酒精性脂肪肝形成的影响

目的：探讨内质网相关降解蛋白1（endoplasmic reticulum correlative protein 1,Derlin?1）在非酒精性脂肪肝组织中的表达情况及其通过对蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R?like ER kinase,PERK）,即内质网应激中未折叠蛋白反应感受蛋白的影响,抑制非酒精性脂肪肝（non?alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的发生机制。方法：通过免疫组织化学染色及Western bolt技术检测NAFLD小鼠肝脏组织中Derlin?1的表达;在HepG2细胞中利用质粒过表达Derlin?1,以Western blot技术检测其对内质网应激信号通路PERK的影响。结果：Derlin1在NAFLD肝组织中表达明显高于正常肝脏组织;过表达Derlin?1能抑制内质网应激信号通路的激活。结论：Derlin1在NAFLD肝组织的高表达提示其可能通过抑制内质网应激中未折叠蛋白反应感受蛋白PERK,减少内质网应激,阻止肝脏细胞脂肪变。     

ERp29在肿瘤中的研究进展

内质网在动植物中分布广泛,功能多样,它既是所有生物膜的来源;又是细胞钙离子的存储库,对细胞内钙信号起调节作用。它对分泌蛋白的质量进行严格的控制,新生蛋白只有经过信号肽切除、N糖基化、二硫键的正确连接才能形成正确的空间结构,在此过程中分子伴侣发挥了重要作用[1]。当未折叠或错误折叠蛋白质在内质网中累积,或细胞内钙稳态失衡时,     

Drp1缺失通过ABCB10激活线粒体未折叠蛋白反应

目的：在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中探讨动力相关蛋白1(dynamin related protein 1, Drp1)基因缺失激活线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,mtUPR)的分子机制。方法：采用不同浓度 (0、2.5、5.0、10.0mmol/L)3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)处理Drp1敲除或敲低的MEF细胞、Drp1抑制剂Mdivi-1或选择性阻断Drp1与下游蛋白相互作用的小分子多肽P110处理的MEF细胞以及相应对照,随后进行Western blot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、ATP 结合盒 B 亚家族成员 10(ATP binding cassette subfamily B member 10,ABCB10)、Lon肽酶1(Lon peptidase 1,LONP1)以及热休克蛋白60(heat shock protein 60,Hsp60) 的表达。RT-qPCR 检测Drp1敲低或Mdivi-1处理后MEF细胞的ABCB10的mRNA水平。同时敲低Drp1和ABCB10,Western blot检测CHOP蛋白的表达,试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,流式细胞术检测线粒体活性氧和线粒体膜电位水平。结果：3-NP处理后,Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中CHOP表达呈现倍数上调。Drp1敲除或敲低的MEF细胞以及Mdivi-1或P110处理的MEF细胞中ABCB10蛋白表达上调,mtUPR效应蛋白LONP1和 Hsp60表达上调。Drp1敲低的MEF细胞和Mdivi-1处理的MEF细胞中ABCB10 mRNA水平上调。同时敲低Drp1和ABCB10后, 与Drp1敲低组相比,CHOP表达下调,LDH含量降低,线粒体活性氧水平降低,线粒体膜电位水平增加。结论：在MEF细胞中, Drp1表达下调可引起ABCB10表达量增加,导致mtUPR关键蛋白CHOP、LONP1和Hsp60蛋白表达上调,进而激活mtUPR。     

WFS1基因在糖尿病发病机制中的研究进展

Wolfram syndrome 1(WFS1)基因编码内质网的跨膜糖蛋白Wolframin,该蛋白在膜的运输、分泌、加工及调控内质网钙稳态等方面有重要的生理功能。Wolfram综合征是由WFS1基因突变引起的常染色体隐性遗传病,以青少年糖尿病和视神经萎缩为主要症状。除特殊类型糖尿病外,WFS1基因的单核苷酸多态性还与1型和2型糖尿病发病相关。WFS1基因很可能是通过影响未折叠蛋白反应、内质网钙稳态等内质网应激相关通路以及胰岛素分泌颗粒等多种途径而影响糖尿病的发生。     

钙调蛋白介导内质网应激相关自噬促进肌修复

摘要:目的 探究钙调蛋白在骨骼肌损伤内质网应激相关性自噬中的作用及机制。方法 制备小鼠肌损伤内质网 应激(ERS)模型,采用钙调蛋白激动剂/拮抗剂干扰该信号;同时体外以衣霉素化学诱导 C2C12细胞分化的肌管发生 ERS,继而添加钙调蛋白干扰剂刺激。检测未折叠蛋白反应(UPR)标志物 mRNA 和 UPR通路关键分子蛋白表达水平, 以及 ERS诱导自噬相关蛋白的表达。结果 肌损伤后,肌内 UPR标志物(BiP、XBP1-S和 ATF6)mRNA 显著上调(P< 0.05),ERS激活的 UPR关键通路分子eIF2α、IRE1α和 ATF6蛋白活性显著上调(均 P<0.05),自噬标志物 LC3Ⅱ/Ⅰ 增加,采用钙调蛋白激动剂 CALP1可增强此反应。结论 钙调蛋白参与了未折叠蛋白反应,并可能通过调节 ERS相关 性自噬促进骨骼肌损伤修复过程。     

创伤后应激障碍大鼠海马神经元分子伴侣钙网蛋白表达的变化

目的检测分子伴侣钙网蛋白(CRT)在创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元中表达的变化,探讨CRT对PTSD大鼠海马神经元内Ca2+信号的调节,为研究PTSD海马记忆异常的发病机制提供依据。方法采用单一延长应激(SPS)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,成年健康雄性Wistar大鼠随机分为SPS1 d、4 d、7 d组和正常对照组。采用免疫组织化学、免疫印迹和逆转录聚合酶链反应检测大鼠海马神经元CRT的表达变化;用荧光探针标记法检测大鼠海马神经细胞内游离Ca2+浓度变化。结果 SPS刺激后大鼠海马神经元CRT的表达于刺激后7 d最多;细胞内游离Ca2+浓度于1 d增至顶峰,之后逐渐下降。结论PTSD致内质网应激、海马神经元钙超载、内质网分子伴侣CRT表达上调、激活未折叠蛋白反应,可导致细胞凋亡,这可能是PTSD大鼠海马记忆异常的病理生理基础。     

Sigma-1受体在脑神经细胞保护中的研究进展

<正>Sigma-1受体(σ1R)是一种定位于内质网膜、线粒体膜相关区域的多功能受体蛋白。作为一种受体型分子伴侣,近年来由于其独特的药理学性质和对细胞的保护作用被广泛研究。σ1R具有调节离子通道、谷氨酸受体、神经递质等作用,对于维持细胞兴奋性具有重要作用。近期研究发现,σ1R的这些作用与神经细胞保护及神经退行性疾病相关。σ1R可通过调节细胞内钙离子稳态、内质网应激反应、兴奋性氨基酸毒性作用来保护神经细胞,     

SEL1L分子及内质网相关降解途径在肿瘤进展中的作用

lin-12-like抑制/增强子(suppressor /enhancer of lin-12-like, SEL1L)分子可以参与调控多种肿瘤进展;同时,其作为内质网相关降解途径(endoplasmic reticulum -associated degradation,ERAD)的重要组成,还参与调控蛋白质合成,与内质网应激(ER stress)及其引起的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)密切相关。在肿瘤微环境中,ERAD不仅参与调控肿瘤细胞的生物学行为,对肿瘤进展发挥重要作用;其还参与对免疫细胞增殖分化、功能以及代谢途径的调节,影响免疫细胞发挥抗肿瘤免疫作用。因此,深入了解探索肿瘤微环境中SEL1L分子及ERAD的潜在机制,可为肿瘤发生、发展及免疫治疗提供新理论和新靶点。本文就SEL1L分子及其参与的内质网相关降解途径在肿瘤进展与免疫调节中的作用进行简要综述。     

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的：探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道（mitochondrial permeability transition pore,mPTP）开放的调控机制。方法：在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白（voltage dependent anion channel,VDAC）结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果：缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放（P<0.05）。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytoc...     

内质网应激中ATF-6调控细胞凋亡及相关疾病

许多异常反应都会引起内质网应激,进而激活未折叠蛋白反应。当未折叠反应仍不能缓解内质网蛋白负荷时,就会通过多条途径引起细胞凋亡,并引起相关疾病,如糖尿病,躁郁症,神经退行性疾病和创伤后应激反应PTSD等。该文主要论述活化转录因子6在ER应激中调控细胞凋亡的机制以及引起的相关疾病。     

Mitofusin2参与石棉肺发生机制研究

[目的]以新的切入点探讨石棉引起肺泡上皮细胞凋亡的分子机制.[方法]石棉暴露下,应用免疫荧光染色免疫法和免疫印迹法观察Mitofusin 2(MFN2)的变化;分别用衣霉素(TN)、钙离子阻滞剂和MFN2RNAi处理A549细胞,观察内质网与线粒体空间距离的变化.[结果]石棉可使MFN2表达上调;与正常对照组比较,TN组、钙离子阻滞组和MFN2RNAi组内质网与线粒体间的间隙均明显缩短.[结论]MFN2在石棉肺的发生发展过程中起一定的作用.     

心力衰竭中内质网应激相关诱导因子的研究进展

内质网合成及加工蛋白的功能异常可引起未折叠蛋白的聚集,从而引起内质网应激(ERS)和未折叠蛋白反应。适度的ERS使心肌细胞发生代偿性肥大,但过强和持续的ERS可使心肌细胞由代偿转向凋亡,从而致心力衰竭。该文综述了各种ERS诱导因子在心力衰竭发生、发展中的作用,阐明ERS在心力衰竭病理形成过程中发挥着重要的作用,也为心力衰竭的治疗开启了新思路。     

海南蒲桃提取物对L6细胞砷中毒缓解作用的体外实验

目的：研究海南蒲桃提取物对砷酸盐引起的L6骨骼肌细胞葡萄糖内稳态破坏及线粒体功能异常的缓解作用。方法：通过测量多个指标如丙酮酸激酶活性、葡糖激酶、线粒体膜电位等衡量细胞内葡萄糖水平及线粒体功能,并测量相关标志物的蛋白质及mRNA表达情况,如葡萄糖转运体4、胰岛素受体基质1、胰岛素受体基质2、葡糖激酶等以分析可能有关的信号通路。结果：海南蒲桃提取物能够通过葡萄糖转运体4通路改善砷中毒的L6细胞内诸多标志物的表达,使其正常化,与模型组相比差异有统计学意义。结论：海南蒲桃提取物对细胞砷中毒有明显的缓解作用,未来可考虑将其用于治疗砷中毒相关疾病如高血糖症等。     

内质网应激PERK-eIF2α-ATF4信号通路在延缓APP/PS1小鼠移植瘤生长中的作用

探讨内质网应激（ERS）及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白（APP）/早老素1（PS1）小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）-真核翻译起始因子2α（eIF2α）-活化转录因子4（ATF4）通路在其抑制作用中的可能机制。     

伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证大鼠模型性腺轴调节作用的形态学研究

目的：研究伊木萨克片对异常黏液质阳痿病证大鼠性腺轴形态学的影响,探寻其对生殖激素调节作用的形态学基础。方法取90只性功能正常雄性 SD 大鼠,其中10只为正常对照组,余80只为造模组,采用芫荽实＋菠菜实＋湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型,20 w 后从证候模型中筛出阳痿病证模型,并将其分为病证模型组、药物干预组,干预2 w 后,观察下丘脑、垂体和睾丸形态学变化。结果（1）下丘脑：正常组组织结构与细胞形态完好。病证模型组基质疏松,呈网状结构,轻度水肿;超微结构可见,神经胶质细胞基质密度下降,核周隙增宽,线粒体水肿呈空泡样病变,内质网扩张,神经元核膜界线不清,线粒体基质密度下降,粗面内质网扩张。药物干预组得到一定程度修复。（2）垂体：正常组结构完好。病证模型组基质疏松,轻度水肿;超微结构可见,内质网明显扩张,线粒体普遍空泡样变。药物干预组细胞排列紧密,粗面内质网扩张减少,有一定修复。（3）睾丸：正常组结构完好。病证模型组可见生精小管明显变形,各级生精细胞数量明显减少,间质减少;超微结构显示,生精细胞数量减少且排列紊乱,可见有精原细胞、精母细胞核固缩,精子细胞界限模糊不清。药物干预组生精细胞数量明显增多,支持细胞增加,管腔内可见一定数量的精子。结论异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴形态学可发生明显改变,维药伊木萨克片有促进其修复的作用。     

糖尿病大鼠胃黏膜内质网应激及大黄素调控

目的：探讨内质网应激是否参与糖尿病大鼠胃黏膜损伤以及大黄素对其调节。方法：SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组与大黄素组,成模10周后,免疫组化法检测各组胃黏膜细胞GRP78,Caspase12蛋白表达情况。结果：①与对照组相比,糖尿病组与大黄素组大鼠于造模后均出现多尿、多饮、多食症状,成模10周时,体重减轻（P〈0．05）;血糖浓度显著增高（P〈0．05）。②与对照组相比,糖尿病组大鼠胃黏膜GRP78、Caspase12蛋白阳性表达细胞显著增多（P〈0．05）;与糖尿病组相比,大黄素组GRP78、Caspase12蛋白阳性表达的胃黏膜细胞显著减少（P〈0．05）。结论：内质网应激途径可能介导了糖尿病大鼠胃黏膜损伤,大黄素可降低糖尿病大鼠胃黏膜细胞的内质网应激反应,从而实现对胃黏膜的修复。     

枸杞多糖减轻长波紫外线辐射致人皮肤成纤维细胞损伤的超微结构观察

目的观察枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides,LBP）对长波紫外线（UVA）辐射损伤体外培养人皮肤成纤维细胞超微结构的影响。方法以体外培养的原代人皮肤成纤维细胞为实验材料,采用总剂量为2.4 J/cm2的UVA照射细胞,实验分为对照组、紫外线照射模型组和三个不同浓度LBP保护组（0.2mg.mL-1LBP＋UVA,0.4mg.mL-1 LBP＋UVA,UVA＋0.8mg.mL-1 LBP＋UVA）,应用透射电镜观察各组细胞超微结构的变化。结果 UVA辐照后细胞超微结构发生明显的变化,主要表现为核膜不连续,核内出现团块状染色质,胞浆内线粒体肿胀,空化明显,嵴断裂、溶解,粗面内质网扩张。枸杞多糖预处理可以减轻对线粒体,内质网等细胞器的损伤;且随LBP剂量的升高,辐射损伤程度逐渐减轻。结论 UVA照射可使体外培养的人皮肤成纤维细胞超微结构改变,LBP可以减轻UVA所致人皮肤成纤维细胞的损伤。     

Poly I∶C刺激对裸鼹鼠体内自噬水平的影响

目的 研究多聚肌苷-多聚胞苷酸钠盐（Poly I∶C）对裸鼹鼠自噬水平的影响.方法 成年裸鼹鼠以及C57BL/6小鼠分别随机分成Poly I∶C给药组和对照组,分别腹腔注射Poly I∶C和生理盐水.Poly I∶C给药12h后,组织切片HE染色观察小肠组织的病理变化,电镜观察细胞结构的变化,实时定量PCR检测小肠组织中炎症相关因子IL-1、ATG5的mRNA表达情况,蛋白印迹检测小肠组织中自噬相关蛋白LC3B、Beclin 1表达情况.结果 Poly I∶C给药后,裸鼹鼠小肠组织未出现显著的病理变化,但C57BL/6小鼠小肠组织腺体部出现广泛性出血;电镜观察发现,裸鼹鼠小肠组织细胞中线粒体增多、变长,自噬体数量显著增加,而小鼠组织细胞线粒体有大量的空泡化,滑面内质网扩张;实时定量PCR检测未发现组织中IL-1、ATG5 mRNA表达有显著变化;蛋白印迹检测发现,给药后裸鼹鼠组织中LC3B蛋白表达显著上调（P＜0.05）,而C57BL/6小鼠则下调（P＜0.05）.结论 Poly I∶C给药引起裸鼹鼠自噬水平上调,同时,裸鼹鼠自噬水平的上调亦可以提高机体的适应能力,进而起到抵抗Poly I∶C损伤的作用.