黏着斑激酶与结直肠癌的关系

近年来,对于肿瘤细胞的粘附、增值、迁移、分化等分子机制的研究逐步深入。人们认识到肿瘤的侵袭、转移是一个复杂的、多步骤的过程,其幕后的细胞信号转导机制起着决定性作用。     

慢病毒载体靶向沉默原代大鼠海马神经元黏着斑激酶表达siRNA的筛选

目的制备针对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的siRNA慢病毒载体,转染入原代培养的大鼠海马神经元细胞,筛选最佳的感染条件和沉默靶点序列。方法根据siRNA原理设计、构建、酶切、转化、PCR鉴定、阳性克隆测序并病毒包装3种靶向大鼠FAK的siRNA(T1,T2,T3),并转染至原代培养的大鼠海马神经元细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测神经元细胞FAK基因表达,Western blot检测FAK蛋白表达。结果成功制备3种FAK siRNA慢病毒载体,并成功转染到神经元细胞中,在感染复数(MOI)为10并加入5μg/mL polybrene条件下转染率达到90%以上。T1、T2、T3均可抑制FAK基因及蛋白的表达,但T1沉默效果最好,敲除效率达到65%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出最佳的转染条件及最佳沉默靶向性序列T1,为后续研究整合素在阿尔茨海默病发病中的机制奠定了实验基础。     

抑制黏着斑激酶经Akt/NF-κB信号通路逆转结肠癌多细胞耐药

目的 探讨抑制黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在结肠癌HT29细胞中的表达能否逆转结肠癌多细胞耐药.方法 采用免疫细胞化学和Western blot检测单层细胞中FAK、FAKp的抑制情况,用MTT法检测单层细胞和多细胞球对5-Fu敏感性的变化,采用流式细胞术检测抑制FAK对多细胞球5-Fu诱导凋亡和自然凋亡的影响,免疫细胞化学检测单层细胞、Western blot检测多细胞球中FAK shRNA干扰对Akt、NF-KB、Bcl-2、Caspase-3的影响.结果 靶向干扰FAK能显著抑制单层细胞FAK、FAKp蛋白表达.MTT结果显示,FAK shRNA干扰增强了单层细胞和多细胞球对5-Fu的敏感性,特别是后者,且二者差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示,FAK shRNA干扰能够使多细胞球的自发凋亡率和5-Fu诱导凋亡率显著增加(P=0.001,P=0.000),且两者之间筹异显著(P=0.003).在单层和多细胞球细胞中,FAK shRNA干扰后,Akt、NF-KB、Bcl-2的水平明显下调,而Caspase-3水平上调.结论 抑制FAK表达能增强结肠癌多细胞球细胞对5-FU的敏感性,逆转其多细胞耐药性,其分子机制是通过FAK/Akt/NF-KB信号通路实现的.     

黏着斑激酶的研究进展

<正>黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体酪氨酸激酶,作为多种信号通路的枢纽,不仅在细胞、胚胎、器官发育中有重要生物学功能,还与肿瘤的发生、发展及转移有密切的关系。本文就FAK的结构、功能、激活途径、信号传导、在肿瘤中的异常表达及其在肿瘤治疗中的应用前景作一综述。     

RNA干扰黏着斑激酶抑制人肝癌细胞sk-hep-1生长的实验研究

目的 通过运用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),干扰人肝癌细胞系sk-hep-1的黏着斑激酶(FAK)的表达,初步探讨干扰效果.方法 在体外,用转染试剂FugeneHD将靶向FAK基因的小发夹RNA质粒(pshFAK)转染至sk-hep-1细胞中,通过流式细胞术、RT-PCR和Western...     

黏着斑激酶信号转导及生物学效应

黏着斑激酶(FAK)是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶,起介导细胞外信号由整合素向细胞内转导的作用,FAK的磷酸化激活以及由此所产生的一系列下游蛋白质的磷酸化,是细胞外基质与细胞相互作用并产生一系列生物学效应的关键环节,参与细胞增殖、迁移与凋亡的调节过程。研究显示,黏着斑激酶表达及活化与肿瘤、心血管疾病密切相关,已成为生物学领域研究的热点及治疗的新靶点。     

长链非编码RNA-ROR对结直肠癌SW620细胞增殖的影响

目的了解长链非编码RNA-ROR（LncRNA-ROR）在结直肠癌SW620细胞增殖中的作用。方法选择40例结直肠癌组织及相应正常组织（距肿瘤切缘5cm以外）,首先采用qRT-PCR技术检测LncRNA-ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并分析其表达与病人临床病理因素的相关性。构建慢病毒载体LV5-ROR、LV5-Vector转染到结直肠癌细胞SW620中,验证LncRNA-ROR的表达,分析LncRNA-ROR过表达对结直肠癌细胞CCK-8功能及SW620平板克隆形成的影响。结果与正常组织比较,LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达（P < 0.01）,其表达水平与TNM分期具有相关性（P < 0.05）。经转染筛选后,qRT-PCR检测证实SW620中的LncRNA-ROR表达增加,其高表达导致SW620增殖能力的下降（P < 0.01）。结论LncRNA-ROR的过表达抑制了结直肠癌细胞SW620的增殖。     

黏着斑激酶在结直肠癌中的表达与侵袭、转移的相关性研究

目的 探讨黏着斑激酶(FAK)在结直肠癌中的表达水平与侵袭、转移及分化的关系.方法 应用免疫组织化学S-P方法检测63例结直肠癌及对应的癌旁组织中FAK的表达.结果 正常结直肠黏膜、结直肠癌与癌旁组织中FAK表达率分别为16%(4/25)、84.13%(53/63)、34.92%(22/63),有显著性差异(P＜0.01).癌旁组织中FAK表达率在分化程度(P=0.015)、浸润深度(P=0.005)和淋巴结转移(P=0.008)中有显著性差异,在有无远处淋巴结转移中无差异(P=0.912).结论 结直肠癌中FAK的表达水平与分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关.故检测结直肠癌黏膜及癌组织中FAK表达水平有助于进一步了解结直肠癌生物学行为,有利于预后判断.     

黏着斑激酶在肾脏疾病中的研究进展

黏着斑激酶(FAK)是一种蛋白质酪氨酸激酶,广泛分布于体内多种细胞的胞质中,是介导多种细胞功能的支架蛋白,也是细胞内多条信号转导通路的交汇点,在细胞的黏附、运动、增殖、迁移和存活中发挥重要的调节作用.随着对FAK在糖尿病肾病、急性肾损伤及肾脏肿瘤等肾脏疾病中作用机制的研究进一步加深,其在肾脏疾病中所起作用也逐渐明确.     

小分子干扰RNA沉默黏着斑激酶基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默黏着斑激酶(FAK)基因对人宫颈癌Hela细胞生物学特征的影响。方法培养人宫颈癌Hela细胞,根据转染物的不同分为siRNA-FAK组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,实时荧光定量聚合酶链反应技术检测细胞中FAK基因表达,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中FAK、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸激酶-1(Raf-1)、磷酸化-Raf-1(p-Raf-1)、丝裂原活化蛋白激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化-MEF1/2(p-MEK1/2)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化-ERK(p-ERK)蛋白表达。结果空白对照组、siRNA-阴性对照组、siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞凋亡率、细胞迁移细胞数、侵袭细胞数、FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白相对表达量及细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与siRNA-阴性对照组细胞中FAK mRNA的相对表达量、细胞增殖能力、细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、Raf-1、p-Raf-1、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK和p-ERK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);siRNA-FAK组细胞中FAK mRNA相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数以及FAK、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK蛋白相对表达量均显著低于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05),细胞凋亡率及Raf-1、MEK1/2和ERK蛋白相对表达量均显著高于空白对照组和siRNA-阴性对照组(P<0.05)。结论特异性抑制人宫颈癌Hela细胞中FAK基因可减少细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制Raf/MEK/ERK信号通路有关。     

苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW620细胞凋亡的实验研究

目的 观察苦参碱(MT)诱导结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制.方法 采用MTT法检测MT对SW620细胞的增殖抑制作用.应用流式细胞仪检测MT对SW620胞生长周期的影响,光学显微镜、荧光显微镜、电镜下观察细胞形态学变化.Annexin V-FITC法检测MT对SW620细胞凋亡的影响.结果 MT抑制SW620细胞增殖和诱导SW620细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,其48 h IC50=0.934 mg/ml.与对照组相比,苦参碱处理后的SW620细胞G0/G12期百分比明显增高,S期细胞比例下降.细胞爬片HE染色以及透射电镜可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,凋亡小体形成以及所谓的"印戒"细胞.结论 MT在体外能抑制SW620细胞的增殖.诱导细胞凋亡,其诱导作用具有明显的量效和时效关系.     

HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响

目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。     

人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析

目的 分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系。方法 利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质。结果 MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI4~7、相对分子质量20000~70000范围内最多。两种细胞株25个差异蛋白点(SW62014个、SW48011个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个。在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为。结论 人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果。     

结肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的代谢组学研究

目的：分析不同转移潜能结肠癌细胞株的代谢模式,筛选并探讨差异代谢物与结肠癌转移的关系。方法：利用1H NMR技术,采用PLS-DA模型分析高转移潜能SW620和低转移潜能SW480细胞株的代谢模式,并定量差异表达代谢物。利用Seahorse能量代谢仪分析,进一步探讨代谢能力。结果：不同转移潜能的2株结肠癌细胞的代谢模式能够在第一主成分上明显分开。与原发灶结肠癌细胞SW480相比,具有高转移潜能的SW620细胞中乳酸、琥珀酸、异亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸水平较高（P＜0.05）,乙酸、氧化磷酸胆碱、ATP、肌苷和牛磺酸水平较低（P＜0.05）。转移潜能高的SW620细胞具有更高的糖酵解水平、TCA循环活性、细胞外酸化率和线粒体耗氧率水平。结论：不同转移潜能结肠癌细胞株SW480/SW620的代谢模式具有显著差异,与SW480细胞相比,SW620具有较高的代谢基础潜能,提示其高转移能力的能量需要,也能更快适应其所在微环境,证明转移过程的发生与代谢密切相关。     

精脒对SW620细胞增殖及糖酵解的影响

目的 探讨精脒对人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的影响.方法 以SW620细胞为研究对象,用0.625～2.5 μmoL/L精脒(SPD)作用于细胞,细胞密度以104个/mL接种于96孔培养板,分别培养24 h后,MTT法检测细胞增殖情况;同时,取6孔板培养24 h的细胞上清液,用试剂盒检测SW620细胞葡萄糖消耗及乳酸水平;细胞密度以1.2× 105个/mL接种于6孔培养板中,培养24 h后加入不同浓度SPD,继续培养24 h后,Western blot检测缺氧诱导因子(HIF-1)、乳酸脱氢酶(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的变化.结果 与对照组比较,精脒各浓度组均能促进SW620细胞的增殖(P＜0.01),且促进作用呈剂量依赖性;精脒各浓度组作用后SW620细胞内葡萄糖的消耗及乳酸含量明显增多(P＜0.01),呈剂量依赖性;与对照组比较,LDHA、HIF-1及GLUT1蛋白表达水平随着精脒浓度的升高而增加(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论 精脒具有促进人结肠癌SW620细胞增殖及糖酵解的作用.     

靶向抑制存活素基因对大肠癌细胞SW80侵袭和转移的实验研究

目的 构建靶向存活素(survivin)基因的短发夹干扰RNA(shRNA)表达载体,导入人大肠癌细胞SW480中,研究靶向抑制survivin基因对SW480细胞侵袭和转移的影响.方法 根据siRNA设计原则,在survivin序列中选取设计含19个核苷酸(19 nt)的靶序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成shRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制survivin基因的sihNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin;采用Lipofectamine 2000TM转染试剂将干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入到大肠癌细胞SW480中;用Western blotting从蛋白水平检测干扰效果;分别采用肿瘤侵袭粘附实验和明胶酶谱分析法检测pRNAT-U6.1/Neo-survivin对SW480细胞的侵袭和转移潜能的影响.结果 Survivin基因的蛋白表达均得到显著抑制;沉默SW480的survivin基因可以显著抑制SW480细胞的侵袭和转移潜能,而且survivin基因表达被抑制后,SW480细胞分泌基质金属蛋白酶明显减少.结论 Survivin基因可能在SW480的侵袭和转移潜能中起重要作用,沉默SW480的survivin基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶分泌,因而survivin影响SW480的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.     

黏着斑激酶在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 研究结直肠癌相关黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)在不同结直肠黏膜中的表达及其与结直肠癌各种临床病理因素之间的关系.方法 标本来源于癌组织手术切除标本.免疫组织化学染色法检测FAK,比较分析FAK在不同结直肠癌组织中的表达.结果 随着结直肠癌浸润深度加深,FAK阳性率升高;淋巴结转移组阳性率高于非淋巴结转移组.结论 FAK表达可能参与结直肠癌的发生.并与结直肠癌浸润转移有密切关系.     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.