类风湿关节炎患者血浆sHLA-G表达及其与Treg细胞的相关性研究

目的探讨类风湿关节炎（rheumatoidarthritis,RA）患者血浆sHLA-G表达水平及其与Treg细胞水平和RA临床特征的相关性。方法选择40例RA患者和40例健康对照者,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血浆sHLA-G表达水平,流式细胞术检测外周血CD3＋HLA-G＋T细胞、Treg细胞（CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞）含量。结果RA患者血浆sHLA-G水平显著低于健康对照组（P〈0．001）;RA患者外周血CD3＋HLA-G＋T细胞百分比明显低于健康对照组（P〈0．001）;Treg细胞百分比也较对照组明显降低（P〈0．01）。相关性分析显示,RA患者Treg细胞百分比与sHLA-G水平存在明显正相关性（P〈0．01）,而与CD3＋HLA-G＋T细胞百分比无显著相关（P〉0．05）;RA患者sHLA-G水平及CD3＋HLA-G＋T细胞百分比均与患者DAS28评分显著负相关（P〈0．05）,而与患者RF、ESR、CRP、抗CCP抗体和ANA水平等均无明显相关性（P〉0．05）。结论RA患者血浆sHLA-G表达异常降低,其可能参与了RA的发生和疾病进展;血浆sHLA-G水平与外周血Treg细胞百分比呈明显正相关,二者之间可能存在相互诱导和调节的信号途径,在诱导和维持机体自身免疫耐受中起着重要的协同作用。     

人正常肝细胞LO2感染HBV后表达CCL22

目的探讨感染HBV的人正常肝细胞LO2表达趋化因子CCL22的机制。方法首先用HBV病毒感染LO2细胞,通过ELISA检测细胞IL-32表达情况;之后用外源人类重组IL-32蛋白刺激人急性单核细胞白血病细胞THP-1或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,通过ELISA检测TNF-α表达情况;其次用外源人类重组TNF-α蛋白刺激LO2细胞或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,使用特异性抗体通过Western blot检测CREB蛋白磷酸化情况,并通过ELISA检测趋化因子CCL22的表达情况。结果 HBV诱导LO2细胞表达IL-32;病毒诱导的IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α(P0.05);TNF-α诱导LO2细胞活化CREB通路(P0.05);CREB通路活化后促使LO2表达趋化因子CCL22(P0.05)。结论 HBV感染与THP-1共培养的LO2细胞可表达CCL22,其机制可能是HBV诱导LO2细胞表达IL-32,之后IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α,进而TNF-α促进HBV感染的LO2细胞表达趋化因子CCL22。     

透明质酸诱导单核细胞转录因子C/EBPβ的表达活化

目的：应用透明质酸(HA)刺激人外周血单核细胞,探讨转录因子C/EBPβ在单核/巨噬细胞活化中的作用。方法：分离正常人外周血单核细胞,加入透明质酸诱导单核细胞的活化,RT-PCR检测C/EBPβ mRNA的表达水平,采用western blotting检测C/EBPβ的蛋白表达水平。结果：单核细胞在未受到刺激时,转录因子C/EBPβ有本底的表达,在透明质酸刺激单核细胞18h以后,C/EBPβ的mRNA和蛋白表达水平显著上调,而且其表达水平与巨噬细胞的活化状态呈正相关。结论：转录因子C/EBPβ在透明质酸诱导的单核细胞的活化中可能有重要的作用。     

可溶性人类白细胞抗原G与子痫前期的关系

目的：通过检测子痫前期（ PE）孕妇血清中可溶性人类白细胞抗原G（ sHLA-G）水平的变化,探讨其与PE的关系。方法采用ELISA法检测轻度、重度PE及健康孕妇血清中的可溶性HLA-G（ sHLA-G）水平。结果各组孕妇外周血sHLA-G水平：轻、重度PE组孕妇分别为（44．32±10．72） U/ml,（30．08±9．12） U/ml,对照组为（90．52±11．32）U/ml,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．01）;重度PE组与轻度PE组比较,差异亦有统计学意义（P＜0．01）。结论与健康孕妇相比,sHLA-G在PE孕妇外周血中呈明显低表达,sHLA-G表达水平的异常可能与PE的发病有关。     

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞比例及单核细胞程序性死亡受体-1配体表达的变化及意义

目的 分析α-干扰素治疗过程中慢性乙型肝炎患者（CHB）外周血调节性T细胞（Treg）比例及单核细胞程序性死亡受体-1配体（PD-L1）分子表达的变化及其临床意义.方法 21例HBeAg阳性CHB患者接受α-干扰素治疗24周,用流式细胞仪检测治疗前后外周血Treg比例和单核细胞PD-L1表达水平,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测治疗前后血清乙型肝炎病毒（HBV DNA）水平,通过时间分辨荧光免疫法检测治疗前后乙型肝炎病毒标志物,全自动生化分析仪检测治疗前后谷氨酸氨基转移酶（ALT）水平.结果 治疗前CHB患者外周血Treg比例和单核细胞PD-L1表达水平与HBV DNA水平成正相关;治疗24周后,Treg水平明显下降,而单核细胞PD-L1表达无明显变化.在不同应答病例,治疗24周后外周血Treg和单核细胞PD-L1水平较治疗前变化不同.结论 CHB患者外周血Treg和单核细胞PD-L1水平影响α-干扰素抗HBV疗效,测定外周血Treg比例和单核细胞PD-L1的表达,可作为α-干扰素抗HBV疗效预测的免疫学指标之一.     

原发性高血压患者外周血单核细胞趋化因子-1基因表达及意义

目的：观察原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞趋化因-1（MCP-1）基因表达,探讨其与EH的关系及意义。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）法测定62例EH患者和30例正常对照者外周血MCP-1蛋白含量,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测外周血单个核细胞中MCP-1 mRNA表达。结果：与对照组比较,EH组外周血MCP-1蛋白含量及外周血单个核细胞MCP-1 mRNA表达均显著增高（P〈0.01）。结论：（1）MCP-1可能参与了EH的病理生理过程;（2）外周血单个核细胞的MCP-1 mRNA表达上调可能是EH患者外周血MCP-1蛋白含量增高的机制之一。     

Pannexin-1半通道调控NLRP3/Caspase-1介导高血压患者外周血单核细胞焦亡

目的：探索原发性高血压（EH）患者外周血单核细胞上NLRP3/Caspase-1介导的细胞焦亡与疾病的关系及Pannexin-1(Panx-1)半通道对其的调控。方法：采集EH患者及健康受试者外周血，收集外周血浆，ELISA法检测外周血浆中IL-1β含量；免疫磁珠法分选单核细胞，并通过RT-qPCR、Western blot法测定外周血单核细胞上Panx-1、NLRP3炎症体相关分子、效应分子IL-1β及焦亡蛋白GSDMD的表达。体外培养两组人外周血单核细胞，使用免疫荧光法检测Panx-1的表达及定位。在体外培养的EH患者单核细胞上，使用Panx-1半通道抑制剂丙磺舒及特异性siRNA进行预处理，再给予NLRP3炎症体通路激活剂脂多糖（LPS）活化细胞，CCK-8法检测细胞活力，ELISA法分析培养上清中IL-1β含量，Western blot法检测单核细胞上各目的蛋白表达变化。结果：与健康受试组相比，EH组患者外周血浆中IL-1β含量升高；外周血单核细胞上Panx-1、NLRP3炎症体相关分子及GSDMD的mRNA及蛋白表达量上调；单核细胞上Panx-1蛋白表达增强且主要定位于细胞膜...     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞TLR7mRNA表达与血清IL-12，HBV-DNA载量的相关性

目的：研究TLR7在慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞的表达及其与IL-12,HBV—DNA载量之间的关系,探讨TLR7在抗病毒免疫应答中的作用机制及意义．方法-用实时荧光定量PCR法检测38例具有不同HBV-DNA载量的慢性乙型肝炎患者和12例正常对照者外周血单核细胞TLR7mR-NA表达,患者按病毒载量分为低、中、高3组．实时荧光定量PCR法测定血清病毒载量,ELISA法测定血清IL-12的水平,多组均数间的比较用方差分析,直线相关性分析用Spearman秩相关．结果：患者组中TLR7mRNA水平比正常对照组显著降低（P〈0．01）,3组患者间TLR7mRNA表达有显著差异且与血清HBV—DNA载量呈负相关,患者组血清IL-12比正常人显著增高,3组患者外周血清IL-12,低、中病毒载量组的差异无统计学意义（P〉0．05）,其余各组间差异有统计学意义（P〈0．01）,且与病毒载量呈负相关（r=-0．075,P〈0．01）．结论：TLR7在慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞的表达下降,TLR7与IL-12可能在慢性乙型肝炎中对病毒清除有重要作用,其水平降低可能与疾病的慢性化机制有关．     

贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对THP-1源性巨噬细胞M1型极化的调节作用

目的 利用体外诱导巨噬细胞向M1型极化的模式,初探贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对M1型极化的影响。方法 用佛波酯（PMA）联合脂多糖（LPS）及重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）刺激人单核细胞株THP-1细胞,促使其向M1型巨噬细胞分化。通过显微镜观察细胞形态学变化,qRT-PCR法检测诱导后的细胞内IL-1β、TNF-α、IL-6以及IL-8 mRNA表达水平,Western blot法检测核转录因子-κB磷酸化P65蛋白（NF-κB p-P65）和磷酸化信号转导与转录激活物1（p-STAT1）蛋白的表达,确认THP-1细胞向M1型极化,同时检测PV006处理后对上述指标的影响。结果 经PMA联合LPS及rhIFN-γ诱导后,THP-1细胞形态由圆形转变为特征的长梭形或纺锤形,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达升高,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达增强。不同浓度PV006同步处理后,作M1型极化诱导的THP-1细胞未出现特征性的长梭形或纺锤形,大部分细胞仍为圆形。IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达水平下调（P<0.05）,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达减弱。结论 PMA联合LPS及rhIFN-γ可诱导THP-1源性巨噬细胞向M1型极化,PV006有抑制巨噬细胞向M1型分化的作用。     

人单核细胞表达蛋白酶激活受体

目的：使用高纯化的人外周血单核细胞研究蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）在单核细胞上的表达。方法：采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞,采用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析单核细胞PARs表达情况。结果：流式细胞分析示人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3、PAR-4蛋白质,但不表达PAR-2蛋白质;RT-PCR示单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但不表达PAR-2和PAR-4 mRNA。结论：单核细胞表达PARs,为进一步研究PARs在单核细胞上的功能提供依据。     

HLA-G和HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨人类白细胞抗原-G(HLA-G)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测HLA-G、HIF-1α在58例上皮性卵巢癌、30例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中的表达,并分析它们与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系。结果:与卵巢良性肿瘤、正常卵巢组织相比,上皮性卵巢癌组织HLA-G和HIF-1α蛋白阳性表达率都增加,差异有统计学意义(P<0.05)。HLA-G和HIF-1α阳性表达呈正相关(r=0.269,P<0.05),HLA-G阳性表达与肿瘤病理分级、临床病理分期相关(P<0.05)。结论:HLA-G和HIF-1α在卵巢癌生长、浸润、转移过程中发挥了一定作用,可作为判断卵巢组织恶性程度及评估不良预后的重要指标。     

高原地区子痫前期患者胎盘及血清HLA-G表达水平及临床意义

目的 探讨青海高原地区子痫前期患者胎盘及血清中人类白细胞抗原G(HLA-G)表达水平及临床意义.方法 收集2010年9月至2011年3月在青海大学附属医院产科分娩的30名子痫前期患者和30名正常妊娠妇女的胎盘组织和血清样品,应用实时定量RT-PCR技术研究HLA-G mRNA在正常妊娠者和子痫前期患者胎盘中的表达差异,并应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中可溶性HLA-G的表达.结果 (1)青海高原地区子痫前期患者胎盘组织中HLA-GmRNA表达水平为1.42±4.92,明显低于正常妊娠组(9.00±9.94),差异有统计学意义(P＜0.01);(2)子痫前期血清可溶性人类白细胞抗原G( soluble HLA-G,sHLA-G)浓度为688.34±181.988 ng/L,明显低于正常妊娠组织(1030.2±238.568ng/L),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 青海高原地区子痫前期胎盘组织HLA-GmRNA表达水平及血清sHLA-G浓度均明显降低,可能与子痫前期的发生有关.     

银杏黄酮苷元对内皮细胞植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的：探讨银杏黄酮苷元对氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导脐静脉内皮细胞株ECV304植物血凝素样低密度脂蛋白受体-1（Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）表达的调节作用。方法：应用逆转录聚合酶链式反应、SP免疫组织化学法,探讨ox-LDL诱导下内皮细胞表达LOX-1及银杏黄酮苷元的干预作用。结果：6.25~25 mg/L银杏黄酮苷元与脐静脉内皮细胞株ECV304共同培养6~48 h可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）,具有浓度、时间效应关系（P〈0.05）;LOX-1拮抗剂聚肌苷酸可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论：ox-LDL可能通过LOX-1导致内皮功能障碍,银杏黄酮苷元可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

血管紧张素-(1-7)对巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)是否可以调节巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子的表达及TLR4/NF-κB通路在其中的作用。方法佛波酯(130 ng/ml)诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞,分别以不同浓度(0.01、0.1、1μmol/L)的Ang-(1-7)和相同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,50 mg/L)联合刺激,并以A-779[Ang-(1-7)特异性受体阻断剂,10-7 mol/L]预处理以及用TLR4单克隆抗体(5 mg/L)阻断TLR4/NF-κB信号通路。ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。实时PCR检测TLR4的mRNA水平,免疫印迹法检测细胞总蛋白TLR4蛋白水平、IκB蛋白的磷酸化水平以及胞浆蛋白、核蛋白NF-κB蛋白水平。结果与对照组比较,Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达,呈现剂量依赖性(P0.05),其作用可被A-779部分抑制;当TLR4/NF-κB信号通路被TLR4单克隆抗体阻断后,Ang-(1-7)作用可被部分抑制。Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞TLR4mRNA和蛋白表达水平,下调IκB蛋白的磷酸化水平,抑制NF-kB蛋白由细胞质向细胞核内转位(P0.05),其作用可被A-779部分抑制。结论 Ang-(1-7)可以抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,该过程与TLR4/NF-κB信号转导通路抑制有关。     

HLA-G突变分子对NK细胞抑制作用的研究

目的探索可溶性HLAG1分子结构对功能的影响,为其临床应用打下基础。方法通过分子克隆技术,去掉HLAG1重链分子α1功能区氨基端24肽,然后与轻链蛋白在体外与九肽共折叠复性形成复合物,并检测复合物对NK细胞杀伤活性的影响。结果成功构建突变的HLAG1重链分子的原核表达载体,表达的重链蛋白与轻链蛋白形成复合物,经Westernblot鉴定可与HLAⅠ类分子的单抗W6/32结合,并且可明显抑制NK细胞对K562细胞的细胞毒作用。结论α1功能区氨基端缺失24肽的HLAG1分子,可抑制NK细胞的细胞毒作用。     

PCSK9-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3表达的影响

目的:研究枯草溶菌素转化酶9 (PCSK9)-siRNA对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中Caspase-3蛋白表达的影响.方法:用不同浓度.x-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Western blot检测Caspase-3蛋白表达变化.应用Li-pofectamine2000分别转染不同浓度P...     

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

原发性干燥综合征患者血清sHLA-G检测分析

目的：探讨血清可溶性人类白细胞抗原-G（sHLA-G）含量与原发性干燥综合征（pSS）的关系。方法：用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测71例pSS患者和69例健康对照者血清中sHLA-G含量。结果：69例健康人血清sHLA-G的浓度最低为1.43U/mL,最高为32.76U/mL,平均值范围（14.35±8.88）U/mL。71例pSS患者sHLA-G的浓度最低为1.05U/mL,最高为28.82U/mL,平均值范围（8.43±7.24）U/mL。pSS患者血清sHLA-G水平显著低于健康对照组（P〈0.01）。结论：pSS患者血清sHLA-G水平显著降低,sHLA-G水平降低可能参与了pSS的病理过程。     

血清中sHLA-G水平与自然流产的关系

目的:通过定量测定正常妊娠妇女与自然流产患者血清中sHLA-G,探讨sHLA-G的水平与自然流产的关系。方法:采用ELISA法定量检测16例正常妊娠妇女和16例自然流产患者血清中的sHLA-G水平。结果:正常妊娠组血清中sHLA-G的浓度为(1.37±1.44)IU/ml;自然流产组为(0.57±0.27)IU/ml。自然流产组sHLA-G水平明显低于正常妊娠组,差异有统计学意义,P<0.05。结论:血清中sHLA-G水平在维持妊娠的过程中有重要作用,低水平的sHLA-G与自然流产具有一定的关联性。