延安市某乡镇留守儿童心理健康评估结果分析

【目的】 分析医患关系现状及其主要影响因素,为有效改善医患关系提供参考及依据。 【方法】 在陕西省四所三级医院中,随机抽取240名医生和600名患者,分别用自编的不同问卷(医者和患者各24个条目)对其进行医患关系现状认知的调查,采用SPSS19.0软件对数据进行分析。 【结果】 各种调查结果在医者和患者之间有差异(经?²检验,均为P<0.05), 65.1%的医生认为医患关系相对紧张,其主要社会因素为社会出现信任危机(占58.8%),医护人员的因素是医疗风险高(56%)及工作压力大(39%),患者方面的因素为受不良诱惑多,缺乏理性思考(占58.8%);74.1%的患者认为医患关系相对和谐,但看病贵、看病难(占43.8%)、医生水平不高(占41.7%)、医生服务态度不好(占34.7%)仍是影响医患关系的主要因素;71.0%的医生认为未来一段时期内医患关系的改善不太乐观,而71.7%的患者对其改善持乐观态度。 【结论】 调查显示,医者和患者在认知的诸多方面差异较大,应通过建立医患沟通渠道,媒体对医患关系客观全面的报道,医疗体制的改革及降低药价等措施,促进医患关系的改善。     

低年级医学生学习和传播生命救护知识的意愿调查

【目的】 普通公民的急救知识与技能掌握程度,是衡量一个国家急救医疗体系发展和社会文明程度的重要标志。目前,我国北京、上海的心肺复苏知识普及率尚不足1%,远远落后于美、日等国(15%)和香港(10%);我国内地急救科普工作的最大障碍是人才的奇缺。为了研究将低年级医学生培养成为急救科普人才的可行性,本文以一年级医学生为对象进行了科普意愿的调查研究。 【方法】 参照红十字会的急救员培训与考试大纲,自行编制《生命救护知识与技能的学习和传播意愿调查问卷》,共有47个选择题;面向本校2013级《大学生现场救护》课程的438名学生进行问卷调查。 【结果】 共收回有效答卷403份(92.01%),其中男生130人(32.26%),女生273人(67.74%)。对答卷分析后发现:(1)既往有过各种意外受伤者累计达358人次(0.89次/人),既往有急、重病者累计达178人次(0.44次/人)。(2)从未学习过基本急救知识者352人(87.34%),入大学前学习过急救知识者(12.66%)中认为效果良好的仅占28.89%;积极主动选课和旁听者共计378人(93.80%),其中旁听者91人(22.58%),希望学习并经过技能考核后能获得急救员证书者344人(85.36%)。(3)在学习意愿方面,除电击伤和孕产妇急症救护2题略低于90%外,胸外心脏按压、人工呼吸和突发昏迷、心血管病急重症、溺水、急性哮喘、中毒、窒息以及动物咬蜇伤、骨折、长时间卡压伤等现场救护知识的比例均在92.30%以上;但在各专题的传播范围方面,选择家人、亲友者的比例介于33%~54%之间,选择家乡村民、居民者30%~45%(人工呼吸最低),选择母校师生和校友者9%~18%。 【结论】 医学院新生中既往意外受伤和急、重病的人均发生率很高,但是从未学习过急救知识的学生近90%;虽然一年级医学生学习生命救护知识与技能的兴趣很浓、意愿很强,但是他们大部分只想在家人和亲友中传播,较少的人愿意向乡邻传播,很少愿意回母校向师生和校友传播。     

马尔康市少数民族地区村医健康素养调查

目的 通过调查马尔康市少数民族村医健康素养现状，为促进少数民族地区健康教育提供科学依据。方法 采用整群抽样方法，2018年10月16日至11月1日以参加2018年四川省深度贫困县"一村一医"合格村医培训工程的村医76名作为调查对象，以《健康66条——中国公民健康素养读本》为基础，自编问卷开展调查。问卷包括健康基本知识和理念、健康生活方式和行为、健康基本技能3个维度。分析不同人口学特征村医三个评价纬度差异及各项问题知晓情况。结果 马尔康市少数民族村医达到健康素养水平基本要求的比例为0.0%；达到基本技能素养水平基本要求的比例为9.0%，达到基本知识和理念素养水平基本要求的比例为6.6%、达到健康生活方式和行为素养水平基本要求的比例为0.0%；不同年龄、不同学历的少数民族村医在健康素养总得分差异有统计学意义（P<0.05）；少数民族村医健康素养总得分与文化程度呈正相关（r=0.430，P<0.05）；不同人口学特征的少数民族村医在健康生活方式和行为得分差异无统计学意义（P>0.05）。结论 马尔康市少数民族村医健康素养水平总体较低，应加强针对少数民族村医的健康教育工作。     

大学生性别对其学习和传播现场救护知识的动机的影响探析

【目的】 项目组以本校2013级学生为观察对象进行了调查研究,以便明确男女生对医学知识的学习和传播动机上是否存在性别差异。 【方法】 参照红十字会的急救员培训与考试大纲,自行编制《生命救护知识与技能的学习和传播意愿调查问卷》,共有47个选择题;面向本校2013级公选课《大学生现场救护》的438名各专业学生进行问卷调查。 【结果】 共收回有效答卷403份(92.01%),其中男生130人(32.26%),女生273人(67.74%)。按性别统计分析答卷后发现:⑴男生中积极选修课程者99人(76.15%)、女生中则为188人(68.86%),男生高出7个百分点;女生中旁听者70人(25.64%)、男生中旁听者21人(16.14%),女生高出9.5个百分点;男、女生中希望获取急救员证书的比例均在85%左右。⑵男女生中选择各专题救护知识“非常愿意学习”的比例有差异,除了人工呼吸专题是男生高出女生11.5个百分点外,其余各专题按女生高出男生的百分点降序排列为:孕产妇急症25个点,重物卡(埋)压伤19个点,急性哮喘18个点,动物咬蜇伤15.5个点,电击伤13.5个点,突发昏迷救护13个点,急性窒息、伤口包扎、骨折救护等均为10个点,服毒和中毒救护9个点。⑶男女生中选择希望向非亲友的家乡村民、居民广泛传播的比例有所差异,女生高于男生9~12个百分点的专题知识有突发昏迷、服毒和中毒救护,女生高于男生5~6个百分点的有人工呼吸、动物咬蜇伤、伤口包扎和重物卡(埋)压伤员救护,女生高于男生但差别小于2个百分点的有孕产妇急症、电击伤、骨折、急性窒息和哮喘等。 【结论】 大学新生在学习现场救护专题知识并传播的意愿上存在一定的性别差异,在选课时男生的积极性高于女生,但参与旁听(无学分)的女生比例明显高于男生;同时,女生对于一半以上专题救护知识学习后广泛传播的愿望也高于男生。     

结直肠癌合并2型糖尿病的临床特征分析

【目的】 探讨合并2型糖尿病(DM2)的结直肠癌患者的临床特点,了解高血糖对直结肠癌的影响。 【方法】 回顾性分析31例合并有2型糖尿病的结直肠癌患者临床病历资料(实验组)和60例结直肠癌无糖尿病患者(对照组),分析结直肠癌合并2型糖尿病患者的高血压情况、临床分期及远处转移的特点。 【结果】 无糖尿病组伴有高血压者16.7%,结直肠癌伴2型糖尿病组为29%,差异无统计学意义(P>0.05);无糖尿病组淋巴结及器官转移率为21.7%,合并2型糖尿病的结直肠癌组为46.2%,差异有显著性(P=0.02);高血糖对于结直肠癌患者的性别、TNM分期的影响无统计学差异(P>0.05)。 【结论】 伴有2型糖尿病的结直肠癌患者较单纯结直肠癌患者更易发生转移,2型糖尿病增加了结直肠癌转移的危险性。     

医学生参与大学生科研活动的现状和对策探析——基于低年级学生的视角

【目的】 我校的医学本科毕业生答辩和科研导师制始于1990年,2005年起在低年级学生中推广科研导师制。本文以我校低年级学生为观察对象进行了调查研究,以便配合教育部2012年启动的“本科教学工程”大学生创新创业训练计划和落实好我校本科生创新学分管理的文件精神,促进低年级医学生参与创新创业活动。 【方法】 收集并分析2010年以来我校大学生创新创业项目的立项批文等资料;参照权威文献自行设计《大学生参与创新学习和科研活动的调查问卷》,共42个选择题,内容涉及参与科研活动的经历、意愿、制约因素及希望等;针对我校2013级的420名学生进行调查并对结果进行了统计分析。 【结果】 (1)分析我校2010-2013年度大学生科研项目立项资料表明,大一、大二学生所负责的项目数占当年立项总数的比例分别为2.63%、9.63%、14.96%、20.65%。(2)面向2013级的问卷调查共回收有效答卷403份(95.6%),其中不了解本校的大学生科研信息者占57.07%,参与过科研活动或申报过大学生创新创业项目者共占8.19%,从未参与过创新学习和科研活动者占81.63%,进入大学后查阅、借阅科技文献的次数平均少于1次/月者占85.85%;希望参与科研活动以培养自己的创新能力者占75.43%,希望在低年级得到科研培养并在三年级及以前获得立项资助者72.95%,希望平均每周参与科研活动0.5~2 d者占53.60%;认为自己在毕业前发表1篇以上科研论文、综述比较重要和非常重要者占89.08%,希望掌握科研方法、实验研究技能和仪器操作方法的学生占98.0%;希望学校提前3个月以上发布科研消息、提醒项目申报者者占33.00%,96.27%的学生希望学校能够为一年级开设科研活动课程、讲座和定期组织专题研讨会、创新学习论坛及学术报告会等。 【结论】 我校低年级本科生科研项目立项的比例还很低;大多数低年级医学生表示对大学生科研不够了解,缺乏参与创新学习、科研活动的经历和阅读科技文献的好习惯,但他们有良好的科研动机和执行项目的更多时间,并希望学校能面向新生开设科研课程、专题讲座、研讨型论坛及学术报告会等。     

维甲酸诱导基因I对氧固醇7α羟化酶的调控作用研究

【立论依据】 基因芯片结果显示,敲除维甲酸诱导基因I(RIG-I)的小鼠体内氧固醇7α羟化酶(下文称CYP7B1)基因水平发生变化,说明两者存在慢反应联系,本实验目的旨在探究这两个基因之间是否存在直接调控的快反应联系。 【设计思路】 本实验首先需要对基因芯片的结果进行确定,随后通过多种方式改变RIG-I的表达水平(干扰素刺激、质粒转染等),观察CYP7B1是否存在明显的协同表达变化。如果能确定两者之间确实存在直接调控关系,将进一步探究调控的具体机制,从分子水平阐释调控的环节。 【实验内容】 利用real-time PCR检测基因芯片结果;利用IFNγ上调RIG-I表达水平,并运用real-time PCR检测CYP7B1的表达水平变化;构建载有RIG-I基因的质粒并进行质粒转染,运用real-time PCR和蛋白质印迹法检测CYP7B1的基因表达和蛋白表达变化情况;转染RIG-I promoter,探究其调控CYP7B1的具体机制。 【材料】 细胞:293T细胞、Hela细胞、HepG2细胞等;其他:RIG-I、CYP7B1引物、一抗、二抗及其他常规所需试剂。 【可行性】 预实验中已经确定了RIG-I与CYP7B1间存在慢反应调控关系,同时也确定了相关文献中IFN-γ对RIG-I的上调作用,实验器材、试剂齐备。 【创新性】 本实验首次提出RIG-I基因与CYP7B1及其所参与的脂代谢过程有调控关系,对胆固醇代谢、神经甾体代谢、及CYP7B1缺乏所引起的一系列疾病的研究也可以提供一定的实验依据和理论支持。     

武警某部新老兵重点传染病预防素养现状及影响因素分析

【目的】了解武警基层战士重点传染病预防素养水平及影响因素,为进一步针对性开展传染病专题健康教育提供依据。【方法】采用整群抽样的方法,对驻津武警某部2015年入伍的278名新兵和军龄≥1年的253名老兵进行关于重点传染病预防素养的问卷调查。【结果】该部基层战士具备重点传染病预防素养的比例为31.51%,新兵为20.86%,老兵为40.67%,差异有统计学意义(χ2=30.707,P=0.001)。重点传染病知识、相关健康生活行为方式、药品说明书阅读理解、相关信念态度和相关行为操作5个方面素养总比例分别为45.76%、37.48%、35.78%、68.93%和48.96%,新老兵间差异具有统计学意义(P<0.05)。在重点传染病健康生活行为方式上,除“少去人群密集地”的行为正确率高于80%,其它14项行为正确率均较低。基层战士重点传染病预防素养在不同年龄组、新老兵和不同文化程度组间差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】武警基层战士重点传染病预防素养水平不高,相关健康生活行为方式正确率较低,影响武警部队新老兵重点传染病预防素养的因素主要有年龄、兵龄和文化程度。     

利用乳腺特异表达微RNA转基因小鼠探索乳汁微RNA对子代个体发育的影响

【立论依据】 乳汁是新生儿及婴儿阶段重要的营养来源,其中含有多种免疫球蛋白、脂类以及生长因子等免疫、营养相关物质。近年发现,在哺乳动物乳汁中存在丰富的微RNA(microRNA)。微RNA主要发挥转录后水平基因表达调控作用,参与了多种生理病理过程。目前研究多集中于对乳汁中微RNA存在的证实与含量的检测,尚未见基于直接实验证据获得的乳汁中微RNA对子代个体生长发育作用的报道。据此,我们拟利用转基因模式小鼠对乳汁微RNA是否对子代个体生长发育有影响进行探索。 【设计思路】 首先,针对乳腺特异表达微RNA(miR-X)转基因小鼠乳腺组织及乳汁中miR-X进行定量;其次,利用该miR-X转基因小鼠及野生型小鼠分别哺育野生型新生小鼠,通过对新生小鼠生长发育情况的检测,初步判定乳汁miR-X对子代发育的影响;最后,检测新生小鼠主要脏器miR-X靶基因表达情况。 【实验内容】 利用已建立的乳腺特异表达miR-X的转基因小鼠,分别进行基因组、乳腺组织以及乳汁的外源基因整合情况检测及miR-X的表达及含量检测。实验组用阳性雌鼠哺育野生型新生小鼠,观察并记录小鼠生长发育情况;对照组用野生型雌鼠哺育野生型新生小鼠,观察并记录小鼠生长发育情况。4周后处死部分子代小鼠,取其肝脏等主要脏器,测定miR-X相关靶基因表达情况。 【材料】 乳腺特异表达miR-X转基因雌鼠8只,野生型雌鼠(C57Bl/6)8只及用于合笼繁殖的野生型雄鼠; 【可行性】 乳汁微RNA的存在已被多项研究所证实,为本项目的提出提供了依据;乳汁中营养成分对子代个体的生物学作用已被证实,其中微RNA也必将具有一定的生物学作用。项目组所在实验室具有相关研究经验和仪器设备可保障实验的实施。乳腺特异表达微RNA转基因小鼠的建立为本项目提供了直接可靠的实验材料。 【创新性】 乳汁微RNA对子代个体发育的功能研究将丰富人们对乳汁功能的认识,为改良母乳替代品配方提供了更加直观的依据,为奶制品新的质量检测指标的提出提供了理论基础。此外,乳腺特异表达微RNA转基因小鼠是该项目的重要材料,也是本项目的特色。     

凋亡抑制蛋白ILP-2对乳腺癌细胞MCF-7氧化应激损伤的保护作用

【立论依据】 文献表明氧化应激会损伤体内核酸等生物大分子物质而促进肿瘤的发生发展;凋亡抑制蛋白ILP-2在生长中的乳腺癌有高表达,由此,我们猜想乳腺癌中高表达的ILP-2可能与氧化应激的损伤作用存在联系 【设计思路】 实验以乳腺癌细胞株MCF-7制备氧化应激的细胞模型,研究氧化应激状态下MCF-7内ILP-2的表达情况;RNAi ilp-2基因表达,分析ILP-2与氧化应激损伤之间的关系 【实验内容】 利用H2O2对乳腺癌细胞株MCF-7进行氧化应激造模,流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),分光光度法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;通过瞬时转染敲低MCF-7 ilp-2表达,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测基因和蛋白质表达情况;干扰细胞ilp-2表达并同时进行氧化应激处理,通过MTT、Scratch、FCM等方法检测细胞的存活状态 【材料】 乳腺癌细胞株MCF-7,H2O2,转染试剂,RNeasy Mini Kit,QuantiFast Probe Assay,RIPA 裂解液,一抗,二抗,ROS试剂盒,GSH试剂盒,MDA试剂盒,MTT试剂盒等。 【可行性】 该研究内容所需技术在生物分子研究领域已经非常成熟,所需设备完善,可操作性强 【创新性】 首次研究ILP-2促癌细胞生长作用与氧化应激损伤之间的关系,为进一步阐明ILP-2的作用机制奠定基础。     

头低位训练对脑缺血后认知功能障碍的作用及其机制的研究

【立论依据】 脑缺血是一种临床高发病,它是一种慢性进行性疾病,以学习、记忆、认知、执行功能障碍为特征的一种认知障碍性疾病,但由于其病因不明,尚无特效防治方法,选择有效的防治方案已成为亟待解决的问题。脑缺血的可逆性有赖于脑供血的功能恢复,在有效的时间窗内恢复细胞功能,减少低灌注造成的损伤。在历史上和世界上长期坚持有规律的头低位甚至倒立,能给人体带来三大益处:一是提高智力和反应能力;二是延缓衰老,增神提志;三是预防和治疗各种长期直立和劳累带来的疾病,特别是脑血管疾病。但是,尚未见有关规律性头低位训练对脑缺血后认知功能障碍的作用及其机制的具体科学研究。所以本实验应用行为学、形态学、分子生物学、生物化学等实验手段,深入研究了脑缺血急性期后头低位训练对脑缺血后沙鼠神经元的保护作用及对沙鼠认知功能的影响 【设计思路】 本课题拟通过水迷宫检测头低位不同时间点、角度,通过行为学、形态学及分子生物学比较不同组间头低位对沙鼠全脑缺血再灌注损伤影响;并检测血管内皮功能探讨头低位改善认知功能障碍的作用及其参与机制。 【实验内容】 (1)我们应用沙鼠全脑缺血模型(因为沙鼠没有Willis环,所以被广泛用于全脑缺血模型)。运用Morris水迷宫实验,观察头低位训练对脑缺血沙鼠认知功能的作用。(2)通过免疫组织化学、蛋白质印迹、real-time PCR技术,检测头低位训练对脑缺血后海马神经元学习记忆关键因子CaMKII磷酸化水平的影响。(3)通过检测血中NO含量,探讨血管内皮的功能变化。 【材料】 bcl-2抗体,bax抗体,caspase-3抗体,neun抗体,cam抗体,NO试剂盒,ROS试剂盒,沙鼠。 【可行性】 本实验室硬件设施完善,本课题所涉及方法和技术课题组同学均已掌握并可独立完成。 【创新性】 该课题致力于研究头低位训练对脑缺血后认知功能障碍的改善作用及其神经-血管耦联机制;阐明头低位改善认知功能障碍的作用及其参与机制。为脑缺血后认知功能障碍的改善提供康复手段,为其药物防治提供潜在靶点。     

不同依赖时间对药物依赖者空间认知功能的影响

【目的】 探究不同依赖时间对甲基苯丙胺依赖者和海洛因依赖者空间认知功能的影响。 【方法】 甲基苯丙胺依赖者(40例,M1:甲基苯丙胺依赖1年组16例;M2:2年组24例)、海洛因依赖者(35例,H1:海洛因依赖3年组16例;H2:6年组17例)及对照者(40例)参与2个空间认知实验。实验1:判断6个不同角度手/足图片的手指/足趾朝向,评估被试者空间定向能力。实验2:判断6个不同旋转角度手/足图片肢体的左右,评估空间视觉化能力。 【结果】 (1)M1、M2组,H1、H2组与对照组相比,手足图片各个角度正确率无明显差异。(2)M1组对各个角度足图片的反应明显慢于M2、对照组。M1组对150°、180°和210°手图片的反应明显慢于对照组,210°上慢于M2组。H2组对240°、270°和300°足图片的反应慢于H1、对照组,H2组对各个角度手图片的反应较H1、对照组慢。(3)M2组各个角度足图片正确率明显低于对照组。M1、M2组各角度手图片正确率降低。H1组在120°、180°上,H2组在各个角度上,足图片的正确率显著低于对照组,且0°、240°和300°上, H1与H2两组之间存在差异。H1组在0°、180°、240°和300°上,H2组在各个角度上,手图片的正确率显著低于对照组;在60°、180°、300°上, H1与H2两组之间存在差异。(4)M2组对0°、60°、120°和180°足图片的反应,及对各角度手图片的反应快于M1、对照组。H2组对各个角度足图片的反应慢于H1组,仅在0°上慢于对照组。H2组对各个角度手图片的反应慢于H1、对照组。 【结论】 甲基苯丙胺与海洛因依赖不影响依赖者空间方位认知的准确性,但影响其认知速度。甲基苯丙胺和海洛因依赖损伤依赖者空间视觉化能力的准确性与认知速度,且长时间依赖者更为突出。     

“红围巾关爱行动“对使用干粉吸入剂的COPD患者的健康教育效果

目的 探讨"红围巾关爱行动"对使用干粉吸入剂的COPD患者的健康教育效果。方法 对2014年1月至2016年2月入住安徽医科大学第一附属医院呼吸内科的97例使用干粉吸入剂（DPI）,的COPD患者按随机数字法分为对照组41例与研究组56例,对照组采用常规健康宣教,研究组在此基础上接受"红围巾关爱行动"干预。连续干预2个月后评价两组患者DPI知识知晓率及操作正确率,统计不良反应发生率。结果 研究组DPI知识知晓率及操作正确率分别为70.9%、90.9%,均高于对照组的47.5%、65%,不良反应发生率低于对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论 "红围巾关爱行动"提高了COPD患者DPI知识知晓率、操作正确率及降低了不良反应的发生率。     

β-catenin 在二噁英诱导的男性不育症中的作用机制

【立项依据】 不孕症已成为世界范围内广泛关注的问题,其中男性不育症占约50%,并有逐渐增加趋势。研究表明,环境污染导致的男性不孕问题尤为突出,并成为急需解决的问题。 【设计思路】 近年来,β-连环蛋白(β-catenin) 信号通路在生殖系中的作用日益受到瞩目。β-catenin调节睾丸内生殖细胞发生发育的功能、调控睾丸曲细精管索的正常发育、苗勒氏管的退化等。但其在环境毒素诱导的男性不育症中的机制尚不清楚。 【实验内容】 雄性C57BL/6小鼠 (8周龄,体重20 g)随机分为2组,每组8只:对照组(1个月)和染毒组(1个月)。适应性饲养1周后染毒,染毒组采用灌胃方式,一次性给予50 μg/kg 的二噁英(TCDD),对照组仅给予玉米油。染毒结束后以股动脉放血方式处死所有实验动物。我们将利用精子数检测、H-E 染色法观察TCDD对精子的影响,并用TUNEL染色法观察细胞凋亡。睾丸中的同时利用免疫组化染色法检测β-catenin在睾丸中的组织学分布,并用免疫蛋白质印迹法检测β-catenin的变化。 【材料】 动物:雄性C57BL/6小鼠;药物:玉米油,TCDD;染色液:二甲苯,乙醇,伊红酒精溶液,苏木精染液,TUNEL;抗体:β-catenin 【可行性】 (1)参阅大量文献, 具有坚实可靠的理论依据。(2)课题组成员均全力工作,有能力按时完成本课题。(3)具有完善的实验设备及技术支持。 【创新性】 报道TCDD诱导的精子发生异常中β-catenin的变化,揭示新的有效的TCDD调节因子。     

丝氨酸缺乏和p53依赖的代谢重构对乳腺癌细胞的影响

【立论依据】 丝氨酸对肿瘤细胞增殖具有重要作用。丝氨酸缺乏可导致肿瘤细胞氧化应激,对其增殖产生抑制。肿瘤抑制基因p53在抗氧化代谢中发挥不可或缺的作用,因此p53可帮助肿瘤细胞耐受丝氨酸缺乏。这与p53的抑癌功能是一对矛盾,利用此矛盾可为肿瘤治疗提供新的思路。 【设计思路】 选取p53突变或缺失的三阴性乳腺癌细胞系,给予丝氨酸缺失的培养环境,观察其增殖情况、相关基因和蛋白表达情况。以p53阳性的乳腺癌细胞和正常培养基作对照 【实验内容】 MDA-MB-157(P53 null)或HCC1937(P53 mutant)分别用不含丝氨酸的培养基(-SG)、加入丝氨酸的-SG、加入丙酮酸和GSH的-SG,进行72 h培养,每24 h用流式细胞仪检测细胞数量、细胞周期和细胞内ROS水平,酶标仪检测抗氧化能力、GSH和GSSG水平,Real-time PCR检测P53、PHGDH的mRNA转录,蛋白质印迹检测p53、PHGDH的蛋白表达。MCF-7(P53 wildtype)作为P53的阳性对照。 【材料】 MCF-7、MDA-MB-157或HCC1937、MEM培养液(HyClone SH30024)、丝氨酸、丙酮酸、GSH,相关的试剂盒和试剂。 【可行性】 已进行预实验,已实践过实验内容中提及的操作,已观察到MCF-7在丝氨酸缺乏时增殖先受抑制后恢复、细胞内ROS水平上升、PHGDH表达上升 【创新性】 p53对肿瘤细胞代谢的影响已成为研究热点。多数肿瘤中近一半存在p53基因的突变,丝氨酸在肿瘤增殖中的重要地位,使得丝氨酸、p53以及相关的信号调节通路和酶可能成为肿瘤治疗的新靶点。     

NADPH氧化酶来源的活性氧在2型糖尿病发生发展中的作用

【目的】 探讨NADPH氧化酶来源的活性氧在糖尿病发生发展中起到的作用。 【方法】 我们建立了长时程高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的大鼠模型来模拟人类2型糖尿病。在此模型基础上,运用常规的形态学和生物化学测定有关蛋白质的含量;运用免疫放射法测定胰岛素的含量。通过对糖代谢通路关键酶、血糖、胰岛素的测定来判定大鼠糖尿病的发生、发展。通过对大鼠体内ROS、MDA、TOAS的测定来判定大鼠体内氧化应激的状态。通过测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶及糖原磷酸化酶的活性来反映大鼠糖代谢通路的变化。 【结果】 apocynin可以明显降低糖尿病大鼠的血糖升高水平,于此同时,在apocynin的干预下,糖尿病大鼠体内的氧化应激的水平比其它各组明显降低,其还可降低糖尿病大鼠肝脏糖原分解关键酶的活性、使其更接近于正常水平。 【结论】 NADPH氧化酶来源的活性氧可能通过糖原分解通路,对2型糖尿病的发生发展发挥作用。     

黄芩总黄酮提取的响应面分析及其对Hela细胞作用的研究

【目的】 采用响应面分析法优选超声波法提取黄芩总黄酮的工艺条件,为工业化生产黄芩总黄酮提供理论参考;探究提取纯化后的黄芩总黄酮对Hela细胞增殖的影响,为宫颈癌的治疗提供新的应用依据。 【方法】 采用超声波法提取黄芩总黄酮,对使用Al(NO₃)₃-NaNO₂显色法测定黄芩总黄酮进行方法学考察;选取乙醇浓度、液固比、提取时间3个影响因素进行Box-Benhnken中心组合设计,利用响应面分析法(RSM)对提取工艺参数进行优化;利用优选条件提取黄芩总黄酮后采用大孔吸附树脂法对其进行纯化,用CCK-8法检测所得产物对Hela细胞的生长抑制作用。 【结果】 方法学考察结果表明本实验室采用Al(NO₃)₃-NaNO₂显色法测定黄芩总黄酮及超声提取工艺可靠;提取黄芩总黄酮最佳提取工艺为:乙醇浓度60%,液固比40 mL/g,提取时间45 min;预测值为1.776%,实际得率为1.704%,两者吻合度较高。50~800 μg/mL各组黄芩总黄酮在72 h内均抑制Hela细胞生长,呈时间和剂量依赖性,CCK-8检测结果显示48 h黄芩总黄酮的IC50为323.79 μg/mL。 【结论】 Box-Benhnken设计结合响应面分析法对黄芩总黄酮提取工艺进行优化方便、快捷,得出的参数可信度高、实用性好;纯化后的黄芩总黄酮能显著抑制Hela细胞的生长。     

空气中葡萄球菌的监测及不同源MRSA的溯源分析

【目的】 探讨公共场所空气中葡萄球菌的多样性,并追踪气载MRSA的来源,为预防和控制传染病的传播提供依据。 【方法】 用LWC-1型离心式空气微生物采样器采集医院、教室、车站等公共场所室内空气并分离鉴定其中的葡萄球菌;计算每个采样点的葡萄球菌的浓度;采用K-B纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌及凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)对15 种抗菌药物的敏感性;进一步用头孢西丁纸片法检测其中的MRSA,采用REP-PCR扩增气载MRSA及其它医院源及动物源的MRSA的基因组DNA,用NTsys2.10e 软件,非加权配对法(UPGMA法)做遗传分析的树状图,进行聚类分析,探讨不同源MRSA分离株的遗传相似性,对MRSA进行追踪溯源分析。 【结果】 公共场所空气金黄色葡萄球菌浓度为35~97 CFU/m³,凝固酶阴性葡萄球菌49~102 CFU/m³;葡萄球菌气溶胶总浓度在车站中最高,为132 CFU/m³,其次为医院、教室和公园(P<0.05)。从空气中共分离纯化得到金黄色葡萄球菌 52株,其中MRSA共12 株,凝固酶阴性葡萄球菌 65 株;药物敏感试验结果显示气载葡萄球菌对氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类抗生素的耐药率较高(>85%);但均对万古霉素及替拉考宁敏感。46%的金黄色葡萄球菌和54%的凝固酶阴性葡萄球菌对三类或三类以上抗生素同时耐药,为泛耐药株;12株气载MRSA图谱显示菌株之间密切相关,相似性在50%~100%之间。气载MRSA与医院临床MRSA分离株之间的相似性在60%~100%之间;与动物源MRSA之间的相似性在40%~100%之间。 【结论】 公共场所的空气中存在着多种葡萄球菌的污染,并呈现多重耐药性;空气中的MRSA菌株与医院临床分离株及动物源的MRSA有着非常近的亲缘关系,个别菌株属完全相同的菌株繁殖而来,应加强空气中葡萄球菌尤其是多重耐药葡萄球菌的监测及防控。     

Klotho对脊髓继发性损伤的调节作用及机制研究

【立论依据】 脊髓损伤(SCI)后,病灶区炎症反应、氧化应激、神经细胞凋亡所引起的继发性损伤是创伤后神经功能障碍和影响修复再生的主要原因。已知,Klotho基因缺失鼠(KL-/-)的表型类似人类的衰老表现,包括寿命缩短、动脉硬化、皮肤肌肉萎缩、认知障碍、运动神经元受损、软组织钙化、听力下降、骨质疏松等,但Klotho在中枢神经损伤领域的研究,还知之甚少。 【设计思路】 本项目将发现klotho对脊髓损伤修复的调节作用,明确klotho通过调节氧化应激及细胞凋亡的作用,阐明klotho对中枢神经系统损伤修复的调节机制。 【实验内容】 确立Klotho过表达的脊髓损伤动物模型;评估Klotho促进损伤后运动功能恢复的作用;观察神经组织形态学的改变,评估Klotho对神经胶质瘢痕形成的影响;分析ROS、SOD、8-ohdg等氧化应激及细胞凋亡水平,并筛选其作用靶分子,阐明其作用机制。 【材料】 利用干细胞联合基因治疗手段,将骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为基因搭载受体,使其过表达klotho基因,并移植到脊髓损伤大鼠模型。 【可行性】 辽宁医学院神经生物学教研室和辽宁医学院神经退行性疾病实验室(辽宁省重点实验室)一直从事神经系统损伤的基础研究,并熟练掌握各种实验技术和方法,并且拥有研究所需的实验场所和设备,因此对完成本课题具有较强的优势。 【创新性】 揭示Klotho对神经细胞的保护作用机制,为研究脊髓损伤的基础研究和新型神经营养药物的研发,提供基础。     

TRPC通道在阿尔茨海默病(AD)大鼠的蛋白表达及其功能研究

【立论依据】 阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease, AD)也称老年痴呆症,是发生在老年人的一种中枢神经系统退行性疾病。临床表现为进行性记忆力丧失、认知功能减退以及人格改变。AD的发病病因和机制至今尚不清楚。瞬时受体电位阳离子通道(TRPC)是一类非选择性Ca²⁺通道,广泛表达于平滑肌细胞、内皮细胞和中枢神经系统,主要维持细胞内、ER和线粒体的Ca²⁺水平。在神经系统,主要参与神经增殖和退行性变。单核苷酸多态性(SNP)研究表明,TRPC4通道参与到阿尔茨海默病的发病中,但目前TRPC通道在阿尔茨海默病动物模型神经组织中的表达和功能机制尚不清楚。 【设计思路】 本项目采用寡聚型Aβ早期AD大鼠模型,对TRPC家族通道在神经系统的表达进行分析,给予TRPC通道激活剂和阻断剂,观察分离神经细胞的钙代谢变化及AD大鼠的行为学改变,探讨TRPC通道在AD发病过程中的作用。 【实验内容】 (1)大鼠海马区注射Aβ寡聚体构建早期的阿尔茨海默病模型;Morris水迷宫检测大鼠的神经元损伤和学习记忆功能障碍及病理学改变。(2) 分离海马区的神经元细胞,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测TRPC家族通道在神经组织中的表达。(3)分离海马区的神经元细胞,给予TRPC通道的激活剂和阻断剂,利用激光扫描共聚焦显微镜技术,检测神经细胞的胞内钙离子浓度变化。(4)给予在体AD大鼠模型TRPC通道的激活剂和阻断剂,观察大鼠的行为学改变。 【材料】 Morris水迷宫设备、激光扫描共聚焦显微镜。 【可行性】 研究室拥有本实验所需的设备和大鼠AD模型制备技术。学生拥有基本的分子生物学实验技能。 【创新性】 目前TRPC通道在阿尔茨海默病动物模型神经组织中的表达及其功能机制尚不清楚,未见有相关报道;试验结果可以为以TRPC通道为靶点的阿尔茨海默病的药物治疗提供理论基础。