粒细胞集落刺激因子治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

OBJECTIVE: To study the therapeutic effects of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) on focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. METHODS: Adult male SD rats were subjected to transient (2 h) middle cerebral artery occlusion (MCAO) and scored 48 h later for such neurological functions as spontaneous movement, paresis, forelimb motor function, climbing ability, pain sensation, and position sense. Twenty rats with the total score less than 12 were divided equally into two groups to receive daily subcutaneous injection of 20 microg/kg of G-CSF for 19 days or the same dose of saline injection (control group). The rats in the two groups were also given intraperitoneal injection of Brdu10 mg/kg for 19 days. The neurological functions of the rats in both groups were examined on a weekly basis after MCAO and on day 21, the rats were killed to prepare frozen sections of the brain tissues for double immunohistochemical staining with Brdu and glial fibrillary acidic protein antibody to identify the neural cells newly evolved from the stem cells. RESULTS: The rats in G-CSF group showed better neurological function recovery than the control rats 3 weeks after MCAO (P<0.05). Obvious regeneration of the neural cells was observed around the infarction area in the rats receiving G-CSF treatment. CONCLUSION: G-CSF promotes neurological function recovery and neural cell regeneration after cerebral infarction in rats and can be effective for intervention of focal cerebral ischemia-reperfusion injury.     

粒细胞集落刺激因子治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的治疗作用.方法 线栓法构建SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型,线栓时间2 h.手术48 h后,对模型鼠神经功能缺失评分,将12分以下的20只大鼠随机平均分为两组:干预性治疗组:予G-CSF 20μg/(kg·d)皮下注射,共19 d;对照组皮下注射等量生理盐水,置同样环境饲养.两组同时腹膜腔注射脱氧溴化尿嘧啶(Brdu)10mg/kg共19 d.两组均于手术后每周进行神经系统功能缺失评测.术后3周,将实验鼠麻醉后处死取脑,脑沿冠状面将鼠脑切成等分,取第3块脑切块,做冰冻切片,行神经干细胞及神经胶质细胞特异性抗体与Brdu抗体免疫组化双染,观察梗死区新生神经细胞.结果 手术后3周,与对照组比较,G-CSF治疗组神经功能恢复好于对照组(P<0.0);治疗组脑组织梗塞灶周围新生神经干细胞和神经胶质细胞增生明显多于对照组.结论 G-CSF能促进脑梗死后神经功能恢复和神经细胞再生,是一有效的脑缺血干预性治疗用药.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型在给予药物粒细胞集落刺激因子（G-CSF）后脑组织bcl-2及bax表达的情况,探讨G-CSF的神经保护机制。方法将36只健康雄性SD大鼠按随机分组原则分为假手术组、模型＋溶媒组及药物组共3组。采用TTC法测脑梗死体积;采用TUNEL法测凋亡细胞数;采用免疫组化法测Bcl-2及Bax表达情况并用医学图像分析系统测定灰度值。结果与模型＋溶媒组相比,G-CSF治疗后脑梗死体积减少;凋亡细胞数减少;Bcl-2表达增加;Bax表达减少;差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 G-CSF治疗可以减少大鼠脑缺血再灌注损伤后脑细胞的凋亡,这可能是G-CSF神经保护作用的机制之一。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的研究

目的 进行重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）的临床前研究和Ⅰ期临床试验。方法在动物模型上进行ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的药理、毒理、药代和药效研究，并在人体上进行安全性评价和初步疗效观察。结果体外实验证明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对骨髓造血祖细胞有促增殖作用；在６０Ｃｏｒ射线照射造成的白细胞低下动物（狗和猴），显示了明显的升白细胞作用；急性毒性试验显示，ＬＤ５０大于５０００μｇ／ｋｇ；小鼠的药代动力学研究表明，注入的ＧＭ－ＣＳＦ主要从尿中排出，并不在体内蓄积；狗的慢性毒性试验表明在高于临床用量３倍时，无明显毒性反应。Ⅰ期临床试验证明，每天在２．５－７．５μｇ／ｋｇ的剂量下使用是安全的，并能升高白细胞。结论ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可用于治疗放疗与化疗引起的白细胞减少症。     

重组人粒细胞集落刺激因子对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠凋亡诱导因子表达的影响

目的:研究分析重组人粒细胞集落刺激因子对新生SD大鼠凋亡诱导因子表达的影响。方法:随机选取7日龄SD大鼠36只,随机分为假手术组（A组）、脑缺血再灌注组（B组）和药物治疗组（C组）,每组各12只。采用Longa线栓法制作大鼠大脑动脉闭塞再灌注模型,C组大鼠在脑缺血2 h后及24 h时给予药物灌注,其余2组给予大鼠注射等量的0.9%氯化钠注射液。实验结束后,采用Longa 5分制标准评分法在24 h时对大鼠的神经功能进行评分,采用免疫组织化学法对大鼠的组织磷酸化c-jun氨基末端激酶、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶进行检测,同时采用原位末端转移酶标记对神经细胞凋亡、TTC染色测脑梗死体积进行相关检测。对凋亡相关基因的表达及凋亡水平进行评价。结果:A组仅有一小部分凋亡细胞,B、C 2组在灌注24 h后可以发现大量的凋亡细胞,细胞核均呈棕褐色,主要分布在缺血脑组织中周围;C组脑梗死程度较B组减轻（P<0.01）。结论:重组人粒细胞集落刺激因子可以起到保护新生SD大鼠神经细胞的作用,避免发生缺血缺氧性脑损伤,这种糖蛋白与细胞凋亡相关基因的表达有关。     

重组人粒细胞集落刺激因子在造血系统疾病中的应用

对因急性白血病（ＡＬ），恶性淋巴瘤，多发性骨髓瘤（ＭＭ）联合化疗及其他药物所致中性粒细胞缺乏症１９例患者予以重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）治疗，中性粒细胞绝对数（ＡＮＣ）达显效，有效分别为１３例（６８．４２％），２例（１０．５２％），总有效率７８．９４％，所需中位时间分别为８，１４天，治疗后ＡＮＣ增值１．５７～１１３６０倍，白细胞（ＷＢＣ），ＡＮＣ达显效，有效时间明显缩短（Ｐ〈０．００     

重组人粒细胞集落刺激因子发酵条件的优化

为使 且人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF)的发酵保持稳定，达到高产的目的，又保证产品的质量，我们从发酵用菌种制备、发酵种子液制备及发酵条件等方面进行了相应的优化。     

基因重组人粒细胞集落细胞刺激因子单克隆抗体的制备及特性

采用高效免疫方法，利用rhG－CSF免疫BALB／C小鼠，经过两次融合制备了3株抗rhG－CSF的单克隆抗体，分别命名为1H11、2B3、2C3；抗体类型均为IgG2a。免疫印迹试验证明为特异性抗G－CSF的单克隆抗体；单抗相加试验和单抗竞争试验表明3株单抗针对G－CSF两具不同的抗原决定簇；中和试验表明2B、2C3识别的位点与G－CSF刺激NFS－60细胞增殖活性有关。     

重组人粒细胞集落刺激因子对急性白血病不同剂量化疗后粒细胞缺乏的影响

目的 :观察重组人粒细胞集落刺激因子 (G -CSF) /重组人粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)不同剂量、不同给药时间 ,对急性白血病大剂量、普通剂量和较低剂量化疗后粒细胞缺乏的治疗作用。方法 :设立治疗组和对照组 ,观察急性白血病 30例 ,共 6 8个疗程化疗。结果 :所有治疗组较对照组感染减轻 ,粒细胞缺乏时间缩短 ,骨髓造血恢复加快。不规则治疗组和对照组比较 ,粒细胞缺乏持续时间、感染程度、骨髓造血恢复无差异。结论 :G -CSF/GM -CSF能缩短急性白血病化疗粒细胞缺乏 ,防治感染 ,促进造血恢复。     

人重组粒细胞集落刺激因子治疗放射性食管炎

目的评价人重组粒细胞集落刺激因子治疗放射性食管炎的疗效和安全性。方法26例发生2级(RTOG分级)放射性食管炎的肺癌患者口服人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF),300μg用100 ml的生理盐水稀释,分3次口服,服用后禁食1 h并卧床0.5 h。记录放射性食管炎级别的变化,使用药物的天数和治疗结束时的白细胞(WBC)数目。结果治疗结束时评价有效、稳定和无效的患者分别为21,3例和2例,有效率、稳定率和无效率分别为80.8%,11.5%和7.7%。放射性食管炎的平均级别由治疗前的2.00±0.00降至治疗后的0.85±0.92 (P=0.000),级别的下降有显著意义。WBC的平均值为(6.108±1.27)×109。结论使用人重组粒细胞集落刺激因子治疗放射性食管炎是有效和安全的。     

粒细胞集落刺激因子、辛伐他汀合用治疗大鼠急性心肌梗死观察

目的对比粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、辛伐他汀及其合用治疗大鼠急性心肌梗死(AMI)血管再生的作用.方法雌性SD大鼠行冠状动脉结扎后分为AMI对照、辛伐他汀、G-CSF和合用药(辛伐他汀 G-CSF)4组,给药2和(或)4周后血流动力学测定及病理分析.结果与AMI对照组相比,辛伐他汀、G-CSF和合用药均能缩小心肌梗死面积,增加梗死区血管密度;G-CSF和合用药均能使左室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dt)升高(P＜0.05或0.01),左室舒张末压(LVEDP)显著降低(P＜0.05或0.01),上述变化合用药更为显著(P＜0.01).结论辛伐他汀、G-CSF单用或合用均能缩小心肌梗死面积,促进血管再生,改善心功能,且以合用更佳.     

头针对急性脑缺血再灌注大鼠炎症反应的影响

目的:探讨头针治疗脑缺血的作用机制。方法:将70只健康SD雌性女鼠随机分为假手术组、模型组和头针组,模型组和头针组再根据缺血再灌注时间的不同(24h、48h、72h),各随机分为3个亚组。采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion.MCAO)再灌注模型,应用神经功能缺损评分(neurological seventy score,NSS)、HE染色及酶联免疫吸附反应观察急性脑缺血再灌注各时间点头针对模型大鼠神经功能缺损,缺血脑组织的炎性浸润,血浆及缺血脑组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleu- kin-1β,IL-1β)和IL-10含量的影响。结果:头针组与模型组各时相的NSS比较,差异均有统计学意义(P<0.01),以脑缺血再灌注72h时较明显。头针组各时相白细胞浸润较模型组明显减少(P<0.01),以脑缺血再灌注72h最为明显。头针组与模型组比较,各时相血浆和脑组织TNF-α、IL-1β的拿量均减少,造模后72h,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);IL-10的分量则增高,造模后48和72h,两组比较差异有统计学意义(P<0.05.P<0.01)。结论:头针有利于大鼠脑神经功能的恢复,可减轻急性恼缺血再灌注后白细胞的浸润,并在一定范围内降低TNF-α和IL-1β表达,增强IL-10表达,从而减缓由其个导的炎症免疫反应,减轻脑缺血再灌注损伤。     

动脉粥样硬化早期大鼠脑缺血再灌注损伤作用的研究

目的：探讨早期动脉粥样硬化对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法：在高脂饲料喂养大鼠36周，造成早期动脉粥样硬化的基础上，采用双侧须动脉结扎模型，检测脑缺血45分钟，再灌注3天后血脂水平、脑组织丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷肮甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的变化以及主动脉、脑组织的病理改变。结果：模型组大鼠脑组织损伤较单纯缺血再灌注组严重，且有统计学意义。结论：动脉粥样硬化可加重脑缺血再灌注损伤。     

粒细胞集落刺激因子对自发性高血压大鼠心室重构的调控

目的研究早期反复给予大剂量粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）动员骨髓干细胞,对自发性高血压大鼠早期心室重构的调控作用。方法 30只10周龄自发性高血压大鼠,随机分为3组,每组10只。G-CSF组连续接受4个周期用药动员骨髓干细胞,1个周期持续14 d,前5 d皮下注射G-CSF50μg/（kg·d）,后9 d不用药物;假性实验组干预药物为生理盐水,注射方法同G-CSF组;空白对照组不用药物。饲养8周后,进行动物超声心动图检查室间隔厚度（interventricular septal thickness,IVST）和左室短轴收缩率。麻醉条件下解剖取大鼠心室,计算心室质量/体质量,左心室心肌病理切片观察。结果 G-CSF组较假性实验组及空白组心室/体质量增加（P〈0.01）,IVST增加（P〈0.05）,左室短轴收缩率明显改善（P〈0.05）。病理结果显示,GCSF组较假性实验组及空白组心肌纤维排列整齐,心肌胶原容积分数和血管周围胶原面积明显降低（P〈0.05）。结论早期反复大剂量G-CSF动员骨髓干细胞,促进心脏适应性肥厚,提高心肌收缩力,抑制心肌纤维化,减轻不良重构,维持心脏功能。     

盐酸法舒地尔对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：验证一种新药盐酸法舒地尔（Fasudil)作为细胞内钙离子拮抗剂对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用。方法：用线栓法和转流法制作大鼠大脑中动脉区缺血再灌注模型，于缺血前30min分别给予盐酸法舒地尔和生理盐水。观察下列指标：缺血后5min、60min和再灌注30min的局部脑血流量（rCBF)；术后3h、24h及48h神经功能；缺血60min、再灌注20min、60min、120min缺血脑组织乳酸含量。结果：法舒地尔组局部脑血流（rCBF)明显高于对照组；法舒地尔组神经功能好于对照组；再灌注60min、120min乳酸含量法舒地尔组少于对照组。结论：盐酸法舒地尔能改善动物模型缺血脑组织局部血流量，加速再灌注过程乳酸清除，具有脑保护作用。     

局部脑缺血再灌注大鼠下丘脑CRH和NGF的动态表达

［摘 要］ 目的：探讨局部脑缺血对大鼠下丘脑的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和神经生长因子(NGF)以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法：选用正常老龄Wistar大鼠32只,雌雄各半,随机分组,每组4只大鼠。分假手术组和实验组,实验组分为缺血15 min组、缺血15 min再灌注1 h、6 h、1 d、2 d、4 d、9 d组。采用免疫组化方法对老龄大鼠局部脑缺血下丘脑的CRH和NGF表达进行动态观察。结果：假手术组下丘脑有少量CRH和NGF表达,实验组在缺血再灌注1 h内下丘脑CRH和NGF表达均无变化,此后缺血再灌注6 h下丘脑CRH和NGF均有短暂一过性消失,随后缺血再灌注2 d二者在下丘脑的表达相继明显增加。结论：脑缺血后下丘脑CRH分泌细胞并非立刻进入活动增强状态;脑缺血后下丘脑后续阶段存在CRH分泌细胞的活动增强效应;NGF对维系HPA的活动可能具有重要作用。     

新生大鼠低氧缺血性脑损伤对脑组织病理形态和神经营养因子的影响

目的改进新生大鼠低氧缺血性脑损伤(HIBI)模型的制作方法,观察低氧缺血对脑组织病理形态和神经营养因子的影响。方法大鼠随机分为空白对照组(n=5)、假手术组(n=8)和HIBI模型组(n=19), HIBI模型制作中省去了经典Rice法中的麻醉步骤和动物手术后休息时间,观察HIBI后大鼠体重增长情况,行为能力表现以及脑组织病理形态学改变;比较HIBI 制模后3 d假手术组及HIBI组鼠脑匀浆beta-NGF和human-NT3的变化。结果(1)HIBI模型组体重增长明显落后于空白对照组和假手术组(P<0.01);(2)HIBI组全部出现不同程度的行为异常:84%翻身不能,63%肌肉颤动和/或头颤,抽搐者占42%,死亡率为21%。制模后3 d HIBI模型组大鼠的行为障碍和异常运动的发生率均明显低于制模当日(P <0.01);(3)HE染色可见HIBI模型组大鼠左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生;(4)制模后3 d鼠脑匀浆human-NT3含量较假手术组增加(P<0.05);β-NGF含量无明显变化。结论制作的新生大鼠HIBI模型更符合临床新生儿HIBI的自然病程。HIBI早期神经营养因子表达增加在神经保护机制中发挥重要作用。