血清miR-148a检测作为肝癌标志物的临床价值研究

目的:探讨血清miR-148a作为肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)标志物的临床应用价值?方法:实时荧光定量PCR法(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HCC患者血清miR-148a水平,并与良性肝病组以及健康对照组进行比较分析?结果:HCC患者血清miR-148a水平明显低于良性肝病组及健康体检组 (P < 0.001)?ROC曲线(receiver operating characteristic curve)结果显示HCC组 vs. 良性肝病组的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.666,95%置信区间(Confidence interval,CI)为0.581~0.744,诊断灵敏度为67.7%,特异性为59.2%(P < 0.001);HCC组 vs. 健康对照组的AUC为0.746,95%CI为0.663~0.818,诊断灵敏度为43.6%,特异性为96.1%(P < 0.001)?血清miR-148a与HCC患者肿瘤大小(P=0.011)及TNM分期(P < 0.001)有关,而与其他临床参数无明显相关性(P > 0.05)?HCC患者术后血清miR-148a水平与术前相比明显升高(P=0.023);而术后出现复发或转移的HCC患者其血清miR-148a水平明显下降,并且低于术前水平(P < 0.05)?生存曲线分析显示血清miR-148a低表达的HCC患者其总生存率明显低于血清miR-148a高表达的HCC患者(P < 0.001),Cox回归分析进一步显示血清miR-148a可作为HCC预后评估的一个独立决定因子?结论:HCC患者血清miR-148a明显降低,并与HCC病情?恶性进展及预后相关,可作为HCC诊断与鉴别诊断?病情评估?疗效观察及预后判断的指标?     

椎间盘退变血清与尿液分子标志物的研究进展

椎间盘退变（intervertebral disc degeneration, IVDD)的诊断还是根据病史、临床体检和影像学的一致性来判断,MRI是最佳的辅助检查方法。但是,影像学变化是滞后于组织病理学改变的,无法在病理变化的早期做出诊断。目前,血清与尿液分子标志物在许多疾病诊断中发挥重要作用。细胞外基质降解和炎症介质的产生是椎间盘退变的重要的病理过程。本文对椎间盘退变相关分子标志物研究进展进行综述。     

儿童Wilms瘤分子分型标志物的研究进展

Wilms瘤是儿童最常见的肾脏恶性肿瘤.随着各项医疗手段的发展,Wilms瘤患儿生存率有了很大提高.研究表明,Wilms瘤因不同的组织学分型具有不同的预后.加深对肿瘤分子层面的认识能够使我们更好地了解肿瘤的生物学特性并对不同肿瘤进行区分,以帮助指导儿童Wilms瘤的治疗和预后判断.本文就儿童Wilms瘤在分子分型标志物研究方面的进展作一综述.     

血清miR-30a-5p作为原发性肾病综合征新分子标志物的研究

目的 观察原发性肾病综合征(PNS)患者血清miR-30a-5p的表达水平,并探索其临床价值.方法 选取在首诊并诊断为PNS的160患者作为病例组,按照1 ∶ 1匹配原则另选160例同期健康体检人员为对照组.收集两组临床资料和血液样本,检测血生化指标,并采用定量PCR技术检测血清miR-30a-5p的表达水平.对患者进...     

基于CLINPROT技术鉴定弓形虫感染的血清分子标志物

目的旨在通过液体蛋白芯片-MS/MS技术(即CLINPROT技术)发现并鉴定弓形虫感染的血清分子标记物,并分析其应用于临床检测的敏感性和特异性。方法运用CLINPROT技术对弓形虫感染患者的血清样本进行分析,并进一步采用蛋白电泳、质谱鉴定等方法对筛选的蛋白分子进行鉴定,最后通过ELISA方法对其在健康正常人和弓形虫感染患者的血清样品中的表达情况进行了检测,并采用ROC曲线评价了其临床应用价值。结果通过CLINPROT技术,发现了一个在弓形虫感染的血清样本中特异性上调的蛋白,进一步通过蛋白电泳和质谱鉴定方法,发现该特异性上调蛋白为SAA;采用ROC曲线分析显示,其敏感性和特异性分别为84.1%和80%。结论可将CLINPROT技术应用于弓形虫感染血清分子标记物的寻找和鉴定;可将SAA蛋白用作为弓形虫感染的血清分子标志物。     

妊娠期糖尿病患者血清miR-146a表达与胰岛素抵抗的关系

目的 观察妊娠期糖尿病(GDM)患者血清miR-146a表达,研究血清miR-146a表达与胰岛素抵抗的关系.方法 选择2019年1月至2020年1月邓州市中心医院112例GDM患者作为研究对象,确诊时检测血清miR-146a表达水平,治疗1个月后,根据每日需要补充的胰岛素总剂量(TDID),将患者分为极度、严重胰岛素...     

子宫内膜癌分子标志物检测及术前血清CA125的临床价值

目的探讨子宫内膜癌中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶—张力蛋白基因(PTEN)、抑癌基因(p53)、细胞增殖核抗原(Ki-67)的表达与意义,以及术前血清癌抗原125(CA125)对子宫内膜癌的临床意义。方法收集100例子宫内膜癌患者临床资料、组织病理学结果、免疫组织化学结果、术前血清CA125结果,进行统计学分析。结果患者发病年龄越大、组织学类型为非内膜样内膜癌、手术—病理分期越晚、病理分级越高、肌层浸润越深,ER、PR阳性表达率越低(P﹤0.05);p53阳性表达率与患者发病年龄、绝经状态、病理分级有关(P﹤0.05);Ki-67阳性表达率与组织学类型、手术-病理分期、病理分级有关(P﹤0.05);血清CA125阳性表达率与组织学类型、手术-病理分期、病理分级、肌层侵润、淋巴结转移有关(P﹤0.05)。结论术前诊断性刮宫标本进行免疫组织化学检测ER、PR、PTEN、p53、Ki-67有助于明确子宫内膜癌的临床病理特征;术后子宫内膜癌组织标本免疫组织化学检测分子标志物联合检测血清CA125水平,有助于判断子宫内膜癌患者的预后,具有一定的临床意义。     

HBV DNA实时荧光定量与乙肝血清标志物结果的比较和分析

目的探讨本地区HBV DNA实时荧光定量与乙型肝炎病毒血清标志物(两对半)检测结果的相关性。方法用Roche公司生产Light Cycler荧光定量分析仪测定HBV DNA;乙肝血清标志物采用上海科华生物公司出品的ELISA试剂检测。结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc三项均阳性患者,血清中检出HBVDNA达90.14%;HBsAg、抗-HBe和抗-HBc三项均阳性患者,血清中检出HBV DNA达50.87%;HBsAg、HBeAg二项阳性患者,血清中检出HBV DNA达76.92%。结论实时荧光定量检测在临床上对乙型肝炎基因诊断,特别是进行抗病毒治疗和治疗监测方面具有重要意义。     

蛋白质芯片技术检测血清室间隔缺损特异标志物的研究

目的应用蛋白质芯片技术筛选单纯性室间隔缺损血清特异标志物。方法采用病例对照设计。用CMIO蛋白质芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿与85例儿科常见痛患儿血清，筛选血清差异蛋白。结果有21个蛋白具有统计学差异．其中质荷比6640、784、8571，079、6441、972、8698．804、3322．549、2128．960、2291、255、2055，652、2243．846和2．99．661等10个蛋白在VSD患儿血清中呈高表达，而质荷比2050．946、9306．537、7783．535、9198．666、2143．745、4604．572、7993．109、2824．602、2230．218、2083．311和9360．675等11个蛋白下调。结论蛋白质芯片技术是进行室间隔缺损分子流行病学研究的有效工具，所筛选出的蛋白成分可能是单纯性室间隔缺损的血清标志物。     

腹泻患者肠道菌群数量变化及ERIC-PCR指纹图谱分析

目的了解粪检有白细胞的腹泻患者与健康者肠道菌群变化及指纹图谱差异。方法提取解放军第252医院临床门诊30名健康成人和30例腹泻成人的粪便总DNA为模板,分为对照组和腹泻组。荧光定量法测定肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌的菌群数量,ERIC-PCR指纹图谱法检查各组肠道菌群组成多样性差异。结果两组肠道菌群数量:对照组粪便中双歧杆菌为(8.85±0.57)拷贝/g,乳酸杆菌为(8.36±0.45)拷贝/g;腹泻组粪便中双歧杆菌为(8.28±0.68)拷贝/g,乳酸杆菌为(7.79±0.39)拷贝/g;与对照组比较,腹泻组中该两种细菌数量明显减少(P<0.05)。大肠埃希菌和肠球菌数量在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。腹泻患者肠道菌群ERIC-PCR指纹图谱条带明显减少。结论腹泻患者的肠道菌群结构发生了改变,菌群数量明显减少。     

猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒I型(FHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和Taq Man探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立FHV-1实时荧光定量PCR方法,并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法;该方法的线性范围为(1×102~1×109)copies/μL,与单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猫细小病毒(FPV)均无交叉反应,检测灵敏度可达到10 copies/μL。批内变异系数均小于5%。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的快速定量检测。     

新疆妇女宫颈病变组织 miR-146a/133b 的表达及临床意义

目的：探讨miR-146 a/133 b在新疆维、汉民族宫颈组织中的差异性表达及其临床意义。方法采用RT-qPCR法检测 miR-146a/133b 在石蜡包埋的宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中的相对表达量,分析其在宫颈癌发生、发展中的临床意义。结果与宫颈炎组织比,CIN 和宫颈癌组织 miR-146a/133b 的表达水平显著升高(P <0.05),且随宫颈病变的加重,两者的表达水平逐渐升高,宫颈癌组织中维、汉民族 miR-146a 存在差异性表达(P <0.05)。结婚年龄小于20岁、肿瘤直径大于或等于4 cm、有 HPV 感染的宫颈癌组织中 miR-146a/133b 呈高表达(P <0.05)。结论miR-146a/133b 参与宫颈癌的发生、发展,可能成为宫颈癌病情预测及评估新的分子标志物。     

MiR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层患者外周血清和 主动脉组织中的表达及其临床意义

目的：研究miR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection,TAAD)患者外周血清及 主动脉壁组织中的表达,探讨miR-146b在TAAD发病中的意义及机制。方法：将研究对象分为对照组(n=23)和TAAD 组(n=27),收集所有研究对象的外周血清、术中主动脉壁组织和临床资料。运用实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qRT-PCR)检测各组外周血清及主动脉壁组织中miR-146b的表达水平。比较不同主动脉夹层风险级别的miR- 146b水平,对miR-146b水平与TAAD患者主动脉夹层破裂风险进行相关性分析。运用DIANA LAB-TarBase 6.0数据库及 TargetScan靶基因预测软件预测miR-146b相关靶基因。结果：TAAD组外周血清和主动脉壁组织中miR-146b表达水平均 较对照组增高(P<0.001);中度风险和重度高危的TAAD患者外周血清和主动脉壁组织中miR-146b的表达水平较轻 度风险患者明显增高(P<0.05);TAAD外周血清和主动脉壁组织中miR-146b差异表达与主动脉夹层高危风险呈正相 关(r=0.862,0.872;P<0.05)。核因子κB1(nuclear factor kappa B1,NF-κB1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、基质金属蛋白酶-16(matrix metalloproteinase 16,MMP16)和肌动蛋白2(actin alpha 2,ACTA2)为miR-146b的靶基因。结论：TAAD患者外周血清和主动脉壁组织中miR-146b表达升高可能与TAAD发 病及病情严重程度相关。     

实时荧光定量PCR法检测EG-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

目的：通过实时荧光定量PCR法检测内皮衍生基因-1(EG-1)的基因在甲状腺癌组织中的表达,探讨EG-1与甲状腺癌发生、发展的关系。 方法：选取38例甲状腺乳头状癌患者（病例组）和15例良性甲状腺疾病患者的甲状腺组织(对照组）,采用实时荧光定量PCR法检测甲状腺组织中EG-1基因的表达,同时应用免疫组化学法检测EG-1的表达水平。结果：免疫组织化学结果显示, EG-1主要定位于癌细胞的细胞质,甲状腺乳头状癌组织中EG-1 mRNA和蛋白表达水平明显高于良性甲状腺疾病患者 (P<0.05)。EG-1 mRNA表达与组织学分级有关(P<0.05),与性别、年龄无明显关联性(
P>0.05)。结论：EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中表达明显增高,EG-1基因可能在甲状腺癌的发生、发展中起重要作用。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的临床意义

目的检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量,了解其与免疫学指标的关系。方法采用荧光定量PCR技术和ELISA法,分别检测287例乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量和免疫学指标。结果287例乙型肝炎患者血清中检出HBVDNA199例,阳性率为69.34%(199/287);144例HBsAg、HBeAg、抗HBc三项阳性的血清,其血清中HBVDNA也全部阳性;而HBsAg、抗HBe、抗HBc三项阳性和HBsAg、抗HBc二项阳性的标本,HBVDNA的检出率分别38.9%(42/108)和37.1%(13/35)。结论乙型肝炎患者血清中HBVDNA的拷贝数与HBeAg密切相关,但系统转换不能说明HBV停止复制,而只是复制水平的降低而已。     

SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平

目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平.方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测.结果:标准曲线呈良好的线性关系.标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增.结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台.     

实时荧光定量PCR法对ICU患者痰液标本中鲍曼不动杆菌耐药基因的检测及其评价

目的 探讨重症监护病房（ICU）患者感染鲍曼不动杆菌（AB）的碳青霉烯类药物耐药情况,阐明实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法进行耐药基因检测的临床应用价值。 方法 收集ICU患者的痰液标本285份,分别进行传统培养鉴定药敏和RT-qPCR耐药基因检测。统计分析耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）检出率、耐药基因检测的符合率和其他抗菌药物的耐药情况。 结果 共检出AB 151株,检出率为52.98%。AB对碳青霉烯类药物耐药率为72.20%。采用RT-qPCR法检测OXA-51基因检出AB的符合率与传统培养方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。OXA-23基因检出CRAB的符合率与传统培养方法比较差异无统计学意义（P>0.05）。108株AB感染OXA-23阳性标本对米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦、黏菌素和替加环素的耐药率较低。 结论 ICU患者痰液标本培养鉴定出AB的耐碳青霉烯类药物的检出率高。与传统培养方法比较,RT-qPCR法更简便、快速,且检测符合率更高。CRAB对米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦、黏菌素和替加环素的耐药率低。     

实验树鼩空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR方法的建立

目的为实验树鼩微生物检测提供一种快速、简便、灵敏,并且特异性强的空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR检测方法。方法根据空肠弯曲菌的Hip O区域、沙门菌的in V区域和志贺菌的ipa H区域设计特异性引物和探针,并进行单病原定量PCR检测验证;后分析多重PCR的灵敏度和特异性,并使用该多重PCR方法检测实验树鼩样品。结果本研究的PCR要素可用于空肠弯曲菌、沙门氏菌及志贺菌等单种菌的实时荧光定量PCR扩增。多重定量PCR扩增出了空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺氏菌标准扩增曲线;该方法的灵敏度为1×103ng/μL;特异性检测未从其他参考菌株中检出阳性。结论该多重定量PCR方法在实验树鼩微生物检测中具有很好的应用和推广前景。     

8-hydroxydeoxyguanosine as a biomarker of oxidative DNA damage induced by environmental tobacco side-stream smoke and its mechanism

Objective To study the genotoxicity effect of environmental tobacco side-stream smokes (ETSS) on oxidative DNA damage and its molecular mechanism. Methods DNA adduct 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) was used as a biomarker of oxidative DNA damage. The level of 8-OHdG in DNA exposed to ETSS was detected by high performance liquid chromatography with electrochemical detection. Organic and inorganic components in ETSS were analyzed by gas chromatography-mass spectrum and atomic absorption spectrum respectively. Results Particle matters (PMs) and volatile organic compounds (VOCs) in ETSS could directly induce oxidative DNA damage and formation of 8-OHdG. There were 123 and 84 kinds of organic components in PMs and VOCs respectively, and 7 kinds of inorganic components in ETSS. Some components, especially quinones and polyphenols in ETSS, could produce free radicals in vitro by auto-oxidation without any biological activity systems, and with the catalytic reaction of metals, the DNA adduct 8-OHdG was produced. Conclusion ETSS have biological oxidative effect on DNA in vitro and in vivo, and expressed direct genotoxicity. 8-OHdG is a valuable biomarker of oxidative DNA damage.