隐孢子虫检测方法的改良及优化

人体隐孢子虫病是HIV患者的一种常见机会性感染疾病，与HIV患者死亡率密切相关。然而对于本病的检测却比较复杂，同时还存在着费时、检出率低等缺点。为了促进隐孢子虫检测技术的发展，本文对各种检测技术的改良方法作一综述。涉及面广，不仅包含了对经典方法的改良，如改良抗酸染色法，金胺-酚改良抗酸复染法等，还包括了对当前应用日趋广泛的PCR、ELISA等技术的改良，如Nested-PCR检测方法，非放射性标记探针检测法，双抗夹心-ELISA改良法，间接ELISA检测改良法等。但重点偏向于PCR和ELISA技术的改良及优化，因为这两种方法与其他方法相比较具有特异性强，灵敏度高，检出率高等优点，更重要的是它们具有向临床推广应用的巨大价值和内在潜力。     

隐孢子虫病原分类研究进展

隐孢子虫是一种危害严重的人兽共患的传染病原,不但给畜牧业生产造成巨大损失,甚至威胁人类健康,已成为全球寄生虫学和环境科学领域研究的热点之一,具有重要的公共卫生意义.本文就隐孢子虫在分类学上的研究进展作一综述.     

隐孢子虫病的治疗进展

隐孢子虫病的治疗进展史长松综述姚福宝审校（儿科研究室）关键词隐孢子虫隐孢子虫病治疗中图法分类号Ｒ５３１隐孢子虫病（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）是由隐孢虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ，ＣＰＳ）引起的一种世界范围性人兽共患寄生虫病，其最常见的...     

隐孢子虫病的若干进展

近年来发现引起免疫缺陷性疾病 ,特别是艾滋病患者机会性感染的病原体约有十几种 ,其中原虫主要有隐孢子虫 ,卡氏肺孢子虫 ,弓形体 ,孢子球虫等 ,而在胃肠型的艾滋病机会性感染中 ,以隐孢子虫(cryptosporidium)为最常见。有人统计 5 7例艾滋病患者感染者中有 4 2例死于本病 ,故国外对艾滋患者检查隐孢子虫已列为常规项目[1] 。因其常以并发感染且易造成临床误诊增加了死亡率 ,本文对隐孢子虫的病原生物学特性及临床流行等研究的若干进展予以介绍。1　病原生物学特性隐孢子虫最初于 190 7年被Tyzer发现并描述。对人类致病的报道始见于 1976…     

诊断隐孢子虫病的实验室方法

<正> 隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是一种人畜共患的寄生虫病,由隐孢子虫(cry-ptosporidium)寄生于人体和动物体的消化道及呼吸道的上皮细胞而引起。隐孢子虫于1911年发现,属于原生动物亚界、孢子虫纲、真球虫目、隐孢子虫属。自1976年美国首次报告人体病例以来,随着对该病认识的提高和诊断技术的改进,发现病例日益增多,它不仅易发生于免疫功能缺陷的病人,而且在胃肠炎病例和健康人中也屡有发生。本病的主要症状是腹泻、腹     

分子生物学技术在隐孢子虫病研究中的应用进展

隐袍子虫是一种属于顶端复合物门的寄生性原虫，感染此虫引起的隐孢子虫病是一种全球性的人畜共患寄生虫病。免疫力低下、功能缺陷或免疫抑制的患者感染此虫后，可引起严重胃肠炎并伴有水样腹泻。导致大量体液丢失而危及生命。艾滋病患者中感染率高达48％左右，长期的严重腹泻是艾滋病病人的重要致死因素之一。该病对人类公共卫生造成很大威胁，国外暴发流行时有报告。国内外一些学者相继利用核酸限制性片段长度多态性分析、基因克隆、分子杂交和聚合酶链式反应等分子生物学技术，对隐孢子虫核酸分子进行了大量的研究并取得了一些重要进展，并在隐孢子虫卵囊检测、隐孢子虫病的诊断、流行病学调查及虫种鉴定和虫株分型中得到广泛应用。     

犬隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种重要的人畜共患病。近年来,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界最常见的6种腹泻病之一。犬隐孢子虫病世界各地均有报道,严重威胁着人类和动物的健康。本文对犬隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和寄生部位、流行病学特点、诊断、防治等方面研究状况进行了综述,为犬隐孢子虫病的有效防制提供参考。     

水体中隐孢子虫卵囊的浓集和纯化

隐孢子虫为肠道寄生性原虫,可引起人兽共患病,隐孢子虫病暴发的主要途径是介水传播.水体中隐孢子虫的检测方法大致分为病原学检测、免疫学检测和分子生物学检测.由于水环境中隐孢子虫的含量相对较低,并且经处理后含量更低,同时为了排除环境水样中的干扰,因此在检测之前一般都需要把卵囊从浓集后的浓缩物中分离与纯化出来.浓集方法主要包括微滤膜及滤筒过滤法、超滤法、连续流式离心法、膜溶解法及絮凝沉淀法;分离纯化技术主要有浮聚法、密度梯度离心法及免疫磁珠分离法.本文即对水体中隐孢子虫卵囊的浓集以及分离纯化技术进行综述.     

隐孢子虫PCR检测体系的建立及其应用

目的建立快速检测隐孢子虫卵囊的PCR检测体系,以期在人群和食品及其饮用水腹泻原虫监测中推广应用。方法以隐孢子虫小亚基SSU r RNA和卵囊壁蛋白(COWP)为靶基因,设计巢式PCR和荧光PCR的引物和探针;以分离纯化后的微小隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行扩增,分别进行两种检测方法的敏感性和特异性试验;再用某水牛养殖场采集的58份牛粪样考核检测体系的应用价值。结果设计的巢式PCR引物和荧光PCR引物探针特异性都很高,巢式PCR对隐孢子虫DNA的检测最低OD阈值为2 pg隐孢子虫DNA;实时荧光PCR显示最低检测阈值为200 fg隐孢子虫DNA,灵敏性都比较高,实时荧光PCR的灵敏性比巢式PCR高1个数量级(10倍);58份检测样本中,有一份为阳性样本,PCR产物经序列分析显示为微小隐孢子虫。结论巢式PCR和实时荧光PCR检测隐孢子虫的特异性和灵敏性均高,操作简便,能为隐孢子虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段和方法依据。奶牛感染人兽共患微小隐孢子虫基因亚型,具有人兽共患传播的可能性。     

蚊体内病毒检测方法的研究进展

随着蚊媒传染病对人类社会的危害性逐渐增加,对蚊体内蚊媒病毒进行准确、快速检测的需求越来越迫切。从最初的分离接种法,发展到较新的分子生物学和快速检测试剂盒,检测技术的进步为实现蚊媒病毒的快速准确检测带来可能。本文就蚊体内病毒检测方法的研究进展进行综述。     

食品和水源微小隐孢子虫18S rRNA鉴定方法研究

目的了解生蔬食品及相关水源微小隐孢子虫污染情况,并研究其卵囊分离及18S rRNA鉴定的方法. 方法采用分步离心富集法从78份生蔬食品和相关水源中分离出微小隐孢子虫卵囊并提取DNA模板,利用微小隐孢子虫18S rRNA 的基因序列设计特异性引物（446bp）进行多聚酶链反应扩增,扩增产物经回收克隆后进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列同源性分析. 结果从78 份样品中检出4份特异性条带样品.限性样品的重组克隆经PCR鉴定可重现446bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同.重组菌液的测序结果与Geabank数据库中微小隐孢子虫18S rRNA基因序列的同源性为99%. 结论建立了一种监测生蔬食品及相关水源中微小隐孢子虫污染的基因检测方法.     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

食品污染产单核李斯特菌不同检测方法学评估

目的评价以不同方法检测食品中污染产单核李斯特菌（LMO）效果，并对其检测方法进行优化。方法同时用国标法、改良国标法、改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法对深圳市2004—2006年食品样品进行LMO分离鉴定并进行比较。结果228份样品中8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份LMO细菌培养阳性。国标法、改良国标法，改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法都能栓出LMO，栓出率分别为2、63％、2．63％、3．50％、2、63％。深圳市食品中LMO的污染率为2.63％（国标法），速食类冻品污染率为12．8％（国标法）。结论荧光PCR法栓出率最高，将检测时间由原来的至少4—5d缩短至1d，可用于食品污染LMO状况调查的初筛扣食物中毒的快速诊断；国标法与改良国标法的栓出率相等，而后者的操作更方便。免疫磁性分离法的栓出率最低。     

肺外结核的免疫及分子生物学诊断进展

我国的结核病发病率较高。肺外结核因存在标本难获得、标本量少、标本含菌量少以及结核菌分布不均等自身特点,使传统诊断方法难以达到理想的诊断目标。免疫及分子生物学技术是近年来用于肺外结核诊断较为新颖的方法,以其简便、快捷,且敏感性、特异性较高等优点,在肺外结核的诊断中具有重要参考价值。本文就二者在肺外结核中的诊断进展作一综述,以供进一步探讨和研究。     

安氏隐孢子虫卵囊分离纯化方法研究

目的 建立获取纯净的安氏隐孢子虫卵囊外培养模型。方法研究改进分离纯化安氏隐孢子虫卵囊的方法,采用蒸馏水稀释Sheather’s蔗糖溶液配制不同密度的蔗糖溶液,比较不同稀释比的Sheather’s蔗糖溶液漂浮卵囊的效果,并首次比较了蒸馏水和PBS稀释的Sheather’s蔗糖溶液分离纯化卵囊的活性,将两种方法分离纯化的卵囊37℃水浴1h进行脱囊率比较。结果2：1蔗糖溶液（2体积Sheather’s蔗糖溶液与1体积的蒸馏水）分离奶牛粪样中卵囊效果最好。漂浮三次即可获得大量卵囊,回收率为83．70％,三次漂浮的卵囊总数较Sheather’s蔗糖溶液高57．53％。蔗糖溶液多梯度密度纯化法纯化后的卵囊杂质较少,回收率为47．52％。蒸馏水稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊脱囊率为87．87％,PBS稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊的脱囊率为84．71％,差异无统计学意义P〉0.05）。结论2：1蔗糖溶液适用于分离安氏隐孢子虫卵囊,且用蒸馏水代替PBS稀释Sheather’s蔗糖溶分离纯化隐孢子虫卵囊其活性不受影响。可用于体外培养研究。     

中药复方研究的新途径——引入分子生物学技术

中药复方是中医治疗用药的最主要形式。中药研究由单味中药已转向复方研究。新技术、新方法不断被采用，新科技成就已经应用于中药复方的科研当中。随着生物技术的兴起，特别是分子生物学技术的发展，通过现代生物技术建立表达谱数据库，从而为中药复方研究，提供各种靶基因及分析手段。引入分子生物学技术封中药复方的研究将产生巨大的推动作用。