叶酸靶向长春新碱纳米微球对腺样囊性癌细胞活性的影响

目的 制备连接有叶酸(folic acid,FA)的长春新碱(vinscristine,VCR)靶向缓释纳米微球(nanopaticles,NP)FA-PLGA(VCR)-NP,观察其表征及对体外培养的腺样囊性癌低转移株(adenoid cystic carcinoma,ACC-2)细胞增殖的抑制作用.方法 采用改良的复乳法制备FA-PLGA(VCR)-NP,测定NP的粒径分布、载药率及体外释放曲线等;MTT比色法检测高浓度下的PLGA-NP对肿瘤细胞的毒性作用,比较药物组VCR、PLGA(VCR)-NP、FA-PLGA(VCR)-NP 3种药物在不同浓度和不同作用时间对ACC-2细胞的抑制作用;异硫氰荧光素标记PLGA-NP和FA-PLGA-NP,荧光显微镜观察FA-PLGA-NP的靶向性及游离FA对其影响.结果 FA-PLGA(VCR)-NP形态圆整,大小均匀,平均粒径249.2nm,载药率4.5%,体外释放时间达14 d;PLGA-NP与ACC-2细胞共培养5 d,细胞存活率达80.0%以上;给药后第4～5天FA-PLGA(VCR)-NP对ACC-2细胞的抑制率显著高于VCR,3种药物对细胞抑制作用均呈时间和浓度依赖性;FA-PLGA-NP可靶向附着于ACC-2细胞表面,这种识别可以被FA竞争性抑制.结论 FA-PLGA(VCR)-NP具有稳定的栽药率和体外释放行为,具有良好的靶向识别力,体外实验证实具有优于VCR原药的抗肿瘤能力.     

胶质源性神经营养因子对体外培养的人腺样囊性癌细胞增生和迁移的影响

背景 嗜神经侵袭是泪腺腺样囊性癌(ACC)有别于其他泪腺肿瘤最重要的生物学特征,胶质源性神经营养因子(GDNF)在涎腺ACC嗜神经侵袭中发挥了重要的作用,但GDNF对ACC细胞生物学功能的调控作用尚需进一步探讨. 目的 研究GDNF对体外培养的人ACC-2细胞增生和迁移能力的影响,为进一步明确ACC的神经侵袭机制提供实验依据. 方法 将ACC-2细胞系在含质量分数10％胎牛血清(FBS)、100 U/ml(商品单位)青霉素、0.1 g/L链霉素的RPMI-1640培养液中进行常规培养和传代,取对数生长期的ACC-2细胞制成单细胞悬液以2×104个/ml的密度接种于96孔板中,实验组加入终质量浓度分别为20、60、80、100、120 μg/L的GDNF,对照组为仅含10％ FBS的RPMI-1640培养液.细胞培养48 h后,用免疫组织化学法检测ACC-2细胞中GDNF蛋白的表达,MTT法检测不同质量浓度GDNF作用不同时间后人ACC-2细胞的吸光度(A570)值;用Transwell小室法检测不同质量浓度GDNF作用不同时间后迁移的ACC-2细胞数目.结果 免疫组织化学法检测表明,GDNF可在ACC-2细胞的细胞质中表达.标准培养48 h后,随着GDNF质量浓度的提高,ACC-2细胞A570值明显增加,各组间的差异有统计学意义(F=3.336,P=0.026).与对照组比较,各质量浓度GDNF组ACC-2细胞A570值均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).80 μg/L GDNF作用后,随着培养时间的延长,ACC-2细胞A570值逐渐增加,差异有统计学意义(F时间=39.979,P=0.000),各时间点GDNF组间ACC-2细胞A570值均明显高于对照组,组间总体比较的差异有统计学意义(F组别=13.212,P=0.003).GDNF作用细胞30 h后,随着GDNF质量浓度的增加,ACC-2细胞迁移数量明显增加,差异有统计学意义(F=144.886,P=0.000).用100 μg/L GDNF培养24、30、40 h,随着培养时间的延长,ACC-2细胞系迁移数量明显增加,且各时间点GDNF组细胞迁移数均明显多于对照组,差异均有统计学意义(F时何=46.747,P=0.000;F组别=63.786,P=0.000). 结论 GDNF可以促进体外培养的人ACC-2细胞的增生和迁移能力,并且分别具有剂量和时间依赖性.     

眼眶腺样囊性癌动物模型的建立及局部化学治疗的初步观察

目的:建立眼眶腺样囊性癌裸鼠模型,通过瘤内注射化疗药物使肿瘤内药物达到高浓度,确定最佳药物浓度,从而减少大剂量化疗药物对全身损害,为局部注射化疗药物治疗眼眶恶性肿瘤提供动物实验基础和临床参考。方法:通过瘤细胞悬液接种法建立裸鼠眼眶原位移植腺样囊性癌模型;比较全身化疗和局部化疗对肿瘤增殖的抑制作用,得出局部化疗最佳药物浓度;电镜和光镜观察,初步研究局部化疗的副作用。结果:接种瘤细胞7d后,37只裸鼠成瘤,成瘤率100%;局部注射VCR2μg时,与全身用药的抑瘤率和治疗效果无显著性差异(77.82%,66.65%;P>0.05),当注射VCR3μg时,其抑瘤率与全身用药组相比有显著性差异(93.09%,66.65%;P<0.05),当注射VCR4μg时,其抑瘤率与全身用药组相比,结果无显著性差异(82.82%,66.65%;P>0.05);局部注射区皮肤及眶内软组织病理组织学检查,均未见局灶性坏死等副作用。结论:采用瘤细胞悬液接种法成功建立裸鼠眼眶腺样囊性癌动物模型;局部注射VCR的最佳治疗浓度为0.03g/L;注射局部未见毒副反应,瘤内注射是一种安全有效的化疗方法。     

靶向5-氟尿嘧啶纳米微球对体外培养的人晶状体上皮细胞作用的研究

目的评价靶向人晶状体上皮细胞免疫载药纳米微球HILE6-PLA（5-FU）-NP的免疫学特征及体外对靶细胞的特异性结合和杀伤作用.方法采用碳二亚胺法将5-氟尿嘧啶（5-FU）聚乳酸纳米微球PLA（5-FU）-NP与抗人晶状体上皮细胞单克隆抗体HILE6连接,制备免疫载药纳米微球.测定其中5-FU与HILE6物质的量之比;ELISA法检测连接后单克隆抗体HILE6的活性变化.设免疫纳米微球组、HILE6与载药纳米微球混合组、载药纳米微球组、空白对照组,MTT法检测对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用.间接免疫荧光法观察单克隆抗体HILE6、免疫纳米微球和载药纳米微球对兔晶状体上皮细胞的附着、内化过程.结果免疫纳米微球中5-FU与HILE6物质的量之比约为1809：1,单克隆抗体HILE6保留免疫活性可达原抗体的84%.免疫纳米微球对晶状体上皮细胞作用2 h的半数抑制剂量IC50为5.0μg/ml,抑制作用较载药纳米微球组、单克隆抗体与微球混合组有明显提高.免疫纳米微球在30 min内可识别并附着于兔晶状体上皮细胞;2 h进入细胞质均匀分布;4 h后集中于细胞核区.结论免疫纳米微球HILE6-PLA（5-FU）-NP可携带大量药物,保持特异的免疫活性,在体外识别并进入晶状体上皮细胞有效抑制其增殖.     

顺铂联合全反式维甲酸对OCM-1裸鼠移植瘤模型作用的研究

目的 观察顺铂(CDDP)和全反式维甲酸(ATRA)对脉络膜恶性黑色素瘤细胞株OCM-1裸鼠移植瘤的作用.方法采用体外细胞培养法培养OCM-1,20只4周龄雄性裸鼠随机分为4组,将细胞接种至裸鼠皮下,建立异位移植瘤模型.CDDP、ATRA及两药联合分别处理移植瘤模型,TUNEL法检测肿瘤组织.结果 CDDP组抑瘤率为43.20%;ATRA组抑瘤率为37.65%;联合组抑瘤率为65.94%,经金氏公式计算得出q值为1.02(1.153>q>0.85).结论CDDP和ATRA对OCM-1裸鼠移植瘤的抑制具有相加作用.CDDP和ATRA联合应用可抑制肿瘤生长,其机制可能和诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

姜黄素、丹参单体和苦参碱抑制IL-1β诱导下兔RPE细细胞增生的体外实验研究

背景 增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是临床上常见的致盲眼病.视网膜色素上皮(RPE)细胞是PVR发生和发展中的关键细胞,研究中药对体外培养RPE细胞的作用及原理对于防治PVR并揭示其发病机制具有重要意义. 目的 研究姜黄素、丹参单体、苦参碱对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔RPE细胞增生的抑制效果.方法 取第3～4代体外培养的有色兔RPE细胞,采用透射电子显微镜鉴定细胞结构.采用MTT法检测2.5、5.0、10.0、20.0 μg/L IL-1β培养后24、48和72 h RPE细胞的增生率;并检测5、10、20 μg/ml姜黄素和丹参单体IH763-4以及100、200、400 μg/ml苦参碱对IL-1β诱导RPE细胞增生的抑制率.采用线性回归分析计算各药物的半数抑制率(IC50)剂量.结果 初分离的兔RPE细胞呈球形,细胞中可见大量黑色素颗粒;第4代细胞色素颗粒明显减少,形态更加狭长.免疫细胞化学染色结果显示,细胞角蛋白(AE1/AE3)在细胞质表达呈阳性.透射电子显微镜下可见细胞顶端有大量的微绒毛,细胞间可见连接复合体.不同质量浓度IL-1β组培养后24、48、72 h细胞增生率总体比较差异均有统计学意义(F时间=30.33,P=0.00;F浓度=9.37,P=0.00);组内相邻培养时间点间细胞增生率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),同一培养时间点相邻质量浓度IL-1β组间细胞增生率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).10.0μ,g/LIL-1β培养72 h后细胞增生率达峰值.不同质量浓度姜黄素、丹参单体和苦参碱不同培养时间点细胞抑制率总体比较差异均有统计学意义(姜黄素:F时间=128.75,P=0.00;F质量浓度=334.05,P=0.00.丹参单体:F时间=39.32,P=0.00;F质量浓度=165.57,P=0.00.苦参碱:F时间=267.76,P=0.00;F质量浓度=912.34,P=0.00).3种药物对RPE细胞的抑制作用均呈明显的剂量和时间依赖性,组内相邻培养时间点间细胞抑制率比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),相邻质量浓度药物组间细胞抑制率的比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).培养后24、48及72 h,姜黄素的IC50分别为26.77、19.01和9.45 μg/ml,丹参单体的IC50分别为33.72、23.47和12.56μg/ml,苦参碱的IC50分别为570.96、352.25和97.50 μg/ml. 结论 IL-1β可促进RPE细胞增生,10.0 μg/L IL-1β促增生作用最显著;姜黄素、丹参单体、苦参碱均可抑制IL-1β诱导的RPE细胞增生,其抑制作用均呈时间和剂量依赖性,其中姜黄素抗增生作用最强.     

新型石墨烯量子点在视网膜母细胞瘤成像中的作用研究

目的探讨叶酸表面功能化修饰N掺杂石墨烯量子点(FN-GQDs)在视网膜母细胞瘤细胞标记及成像中的作用和生物安全性评估。方法荧光显微镜检测FN-GQDs在视网膜母细胞瘤细胞株(Y79)体外培养中的标记、成像能力。构建裸鼠皮下瘤模型,检测FN-GQDs在体内对皮下Y79瘤体组织的靶向成像能力。并分别采用CCK-8和组织切片染色评估FN-GQDs在细胞体外培养和动物体内的生物安全性。结果荧光显微镜检测结果显示FN-GQDs可成功标记体外培养的Y79细胞株,并实现持续、稳定的荧光成像。裸鼠皮下Y79瘤模型的实验结果显示:FN-GQDs可通过血液循环向瘤体组织聚集,实现肿瘤的在体靶向成像。CCK-8和组织切片染色显示,FNGQDs组相较于生理盐水对照组,无明显的细胞毒性和体内系统毒性(P>0.05)。结论 FN-GQDs实现了对Y79体外细胞特异性标记与体内瘤体组织的靶向性成像,为视网膜母细胞瘤的早期诊断与筛查提供了非常具有前景的新方法。     

人腺样囊性癌多药耐药细胞系的建立

目的:建立人腺样囊性癌耐药细胞系,为阐明腺样囊性癌的多药耐药机制及逆转尉药提供模型及研究依据.方法:以长春新碱(VCR)为诱导剂,通过浓度递增间断刺激法对人腺样囊性癌细胞系(ACC)进行体外诱导耐药,建立耐VCR的腺样囊性癌细胞系ACC/VCR.细胞计数法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物敏感性.结果:ACC经体外诱导后,ACC/VCR细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)和平阳霉素(PYM)的耐药性明显增强,具有交叉耐药,对环磷酰胺(CTX)、氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)耐药性无明显变化.耐药前后ACC细胞的生长曲线、群体倍增时间和光镜下的形态无明显改变.结论:VCR可诱导腺样囊性癌细胞产生多药耐药.     

曲安奈德对PVR中增殖细胞抑制效果的观察

目的：探讨不同浓度曲安奈德对体外培养的视网膜前膜细胞、视网膜色素上皮细胞（RPE）及神经胶质细胞的抑制率差异,找出视网膜前膜细胞达最大抑制率时的最低有效药物浓度,用于指导临床外伤性增生性玻璃体视网膜病(PVR)防治。 方法：用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度曲安奈德(TA)对体外培养的视网膜前膜细胞、RPE及神经胶质细胞的作用。 结果：三种细胞对TA的反应不完全相同,其中视网膜前面细胞达最大抑制率时所需要TA的最低有效药物浓度0.8mg/mL,RPE细胞最大抑制率所需TA最低有效药物为0.4mg/mL,神经胶质细胞最大抑制率所需TA最低有效药物为0.6mg/mL;且抑制率与药物作用时间呈正相关性。 结论：TA能够有效抑制体外培养的视网膜前膜细胞、RPE细胞及神经胶质细胞的增生;抑制视网膜前膜细胞增殖所需TA药物浓度明显高于RPE和神经胶质细胞。     

褪黑素对裸鼠HXO-RB44细胞皮下移植瘤的抑制作用

目的 研究褪黑素(melatonin,MLT)对裸鼠HXO-RB44细胞皮下移植瘤的生长抑制作用及其相关机制.方法 50只裸鼠视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)皮下移植瘤模型,随机分成5组,每组10只:A组为阴性对照组;B组、C组、D组分别为低、中、高浓度MLT治疗组;E组为阳性对照组.低、中、高浓度MLT治疗组分别按每只每次腹腔注射MLT 20 mg·kg-1、40mg·kg-1、60 mg·kg-1各2 mL进行给药,阴性对照组注射等量生理盐水,阳性对照组每只每次腹腔注射等量足叶乙甙(4 mg·kg-1);每天给药1次,共7 d.观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体质量的变化.采用组织病理学检查,观察裸鼠移植瘤的形态学特征;采用免疫组织化学、Western blotting检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达情况.结果 E组白细胞、血红蛋白、血小板计数值及谷丙转氨酶、谷草转氨酶、次黄嘌呤核苷值与A组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05),MLT各治疗组裸鼠血常规结果及肝、肾功能与A组相比,差异无统计学意义(P>0.05);不同时间点B组、C组、D组裸鼠体质量与A组比较,差异无统计学意义(P>0.05);B组裸鼠皮下移植瘤肿瘤质量与A组相比,差异无统计学意义(P>0.05),表明低剂量的MLT对裸鼠移植瘤的生长无抑制作用,C组、D组与A组进行比较,差异均有显著统计学意义(P均<0.01),表明大剂量的MLT对裸鼠移植瘤的生长有抑制作用;低、中、高浓度MLT治疗组及阳性对照组裸鼠移植瘤抑瘤率分别为12.50%、27.89%、40.72%、44.52%;组织病理学检查发现MLT治疗组及E组肿瘤内出血、坏死的程度明显高于阴性对照组,免疫组织化学及Western blotting检测发现MLT治疗组VEGF、ICAM-1及其蛋白的表达明显低于阴性对照组;MLT的治疗剂量与VEGF、ICAM-1蛋白的表达呈高度负相关.结论 MLT、对HXO-RB44细胞皮下移植瘤生长有抑制作用;MLT能抑制裸鼠移植瘤内VEGF、ICAM-1蛋白的表达,其浓度与VEGF、ICAM-1蛋白的表达呈高度负相关.     

Corneal parameters and their correlations with refractive error,axial length,anterior chamber depth and lens thickness in black South Africans

目的:收集南非健康黑人的角膜直径(CD)、曲率(ACC)和角膜中央厚度(CCT)的数据并探讨其与屈光不正等效球镜(SE)、眼轴长度(AL)、前房深度(ACD)、晶状体厚度(LT)的相关性,及三个角膜参数之间的相关性.方法:选取600例受试者,包括305例男性和295例女性(平均年龄:28.15±13.1y,年龄范围:10~66y)接受全面的眼科检查,包括验光,裂隙灯和眼底镜检查.Oculus Keratograph 4检测CD和ACC,ivue-100光学相干断层扫描检测CCT.Nidek AR-310 A自动验光仪和主观验光检测屈光不正.Nidek US-500 A超检测AL,ACD和LT.结果:由于左右眼参数评估的差异无统计学意义,此处只显示右眼的结果.角膜各项参数平均值如下:CD=11.77±0.32 mm(10.30-13.70 mm),ACC=7.88±0.29 mm(7.13~8.88 mm),CCT=493.05±33.2μm(412~590μm).CD与SE无相关性(r=0.05,P=0.24).CD与AL(r=0.58,P=0.00)、ACD(r=0.63,P=0.00)显著相关,但与LT(r=-0.40,P=0.00)呈负相关.ACC与SE(r=-0.03,P=0.48)无显著相关性.ACC与AL(r=0.40,P=0.00)呈正相关.ACC与ACD(r=0.04,P=0.56)、LT(r=-0.03,P=0.88)无显著相关性.CCT与角膜以外其他参数间无显著相关性.角膜各项参数的相关性表明,CD与ACC(r=0.71,P=0.00)、CCT(r=-0.68,P=0.00)相关.结论:CD与AL、ACD、LT相关,ACC与AL相关.CCT与角膜以外其它参数无相关性,是一个独立的因素.在角膜各项参数中,CD与ACC、CCT相关.     

Inhibitory efficacy of intravitreal dexamethasone acetate-loaded PLGA nanoparticles on choroidal neovascularization in a laser-induced rat model.

Purpose: The aims of this study were to investigate the inhibitory efficacy of intravitreal dexamethasone acetate (DA)-loaded by (D, L-lactide-co-glycolide) (PLGA) nanoparticles on choroidal neovascularization (CNV) in a laser-induced rat model and to evaluate its mode of drug release. Methods: DA loaded with PLGA nanoparticles containing 50% DA was prepared using an emulsification/solvent evaporation method. CNV was unilaterally induced by laser photocoagulation in rats. Different dosages of sterilized DA-loaded PLGA nanoparticles suspensions by intravitreal injection were evaluated (i.e., 50, 100, 200, and 400 mug) and the blank PLGA vehicle was the control. The concentration of DA in vitreous was measured by reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). Flash electroretinography and transmission electron microscopy were performed to assess retinal toxicity. Fluorescein fundus angiography was performed to evaluate the incidence of CNV on days 14 and 56. The animals were sacrificed on day 56, then eyecups were processed for histologic analysis. Results: The in vitro release of DA from nanoparticles showed that 50% of the drug was released over 2 weeks and controlled release in a linear pattern for 40 days. The pharmacokinetics of DA-loaded PLGA nanoparticles in the eyes with CNV demonstrated a triphasic pattern. The DA concentrations in vitreous remained within the effective range, which is capable of inhibiting inflammatory responses for more than 56 days. On day 14 after photocoagulation, the incidence of CNV was 47.4% as for 50 microg, 28.2% for 100 microg, 15.8% for 200 microg and 7.9% for the 400 microg DA-loaded PLGA nanoparticles group, respectively, and 65.8% for the control. On day 56, The inhibition of DA-loaded PLGA nanoparticles on CNV showed a dose-dependent effect. No sign of retinal toxicity was detected. Conclusions: These results suggest that DA-loaded PLGA nanoparticles can dose-dependently inhibit the development of experimental CNV. The controlled intraocular delivery system of DA-loaded PLGA nanoparticles may be a potentiality for CNV treatment.     

放射性125Ⅰ粒子对泪腺腺样囊性癌组织杀伤作用的观察

背景 腺样囊性癌(ACC)是泪腺上皮性肿瘤中恶性程度最高的一种肿瘤,侵袭性强,复发率和死亡率高。尽管可以采用手术切除、放射治疗和化学治疗等综合性治疗,但疗效仍欠佳。 目的 探讨125 Ⅰ粒子组织间植入对裸鼠移植性ACC的治疗效果,以及粒子放射活度与疗效的关系。方法 在BALB/C裸鼠背部皮下注射0.1 ml ACC-2癌细胞5×10 7个/ml建立荷人ACC裸鼠模型30只。注射后14d选取瘤体体积大致相等的荷瘤鼠25只,用随机数字表法分为5组,每组5只裸鼠。治疗组每只裸鼠分别植入1枚125 Ⅰ粒子,按放射活度分为G1组(0.4 mCi)、G2组(0.6 mCi)、G3组(0.8 mCi)、G4组(1.0 mCi)4个治疗组,G0组(对照组)植入无活性的空心粒子1枚,B型超声扇形扫描对125Ⅰ粒子进行定位监测。每2天测量1次肿瘤直径并计算各组肿瘤体积抑制率,14d后断颈处死裸鼠,制作肿瘤组织标本,行透射电子显微镜及常规病理学染色检测肿瘤坏死凋亡情况并记录肿瘤坏死凋亡边缘距离125 Ⅰ粒子的最大半径。 结果 125 Ⅰ粒子植入14 d,G0组平均瘤体积为( 3713.19±243.23) mm3,G1组、G2组、G3组、G4组分别为(3113.35±316.54)、(2635.85±261.21)、(2538.37±312.16)、( 1686.28 ±231.65 )mm3,与G0组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);G1组、G2组、G3组、G4组的抑瘤率分别为(20.11±3.09)％、(36.18±2.54)％、(40.83±4.17)％、(66.63±5.34)％,即随着125Ⅰ放射活度的增加,抑瘤率明显增高,差异有统计学意义( F=120.240,P=0.000)。125Ⅰ放射活度与抑瘤率呈正相关( r=0.653,P=0.008)。G1组、G2组、G3组、G4组凋亡或坏死距离粒子的最大有效治疗半径依次为(5.2±0.5)、(6.4±0.7)、(7.4±0.4)、(8.2+0.5)mm,差异有统计学意义(F=29.22,P=0.000);125Ⅰ放射活度与最大有效治疗半径呈正相关( r=0.609,P=0.004)。结论125Ⅰ粒子组织间植入对裸鼠移植性ACC持续照射可以抑制肿瘤细胞增生周期,是一种安全、有效、可行、不良反应少的治疗方法。     

放射性125I粒子对泪腺腺样囊性癌组织杀伤作用的观察

背景腺样囊性癌（ACC）是泪腺上皮性肿瘤中恶性程度最高的一种肿瘤，侵袭性强，复发率和死亡率高。尽管可以采用手术切除、放射治疗和化学治疗等综合性治疗，但疗效仍欠佳。目的探讨125I粒子组织间植入对裸鼠移植性ACC的治疗效果，以及粒子放射活度与疗效的关系。方法在BALB／C裸鼠背部皮下注射0．1ml ACC-2癌细胞5×10^7个／ml建立荷人ACC裸鼠模型30只。注射后14d选取瘤体体积大致相等的荷瘤鼠25只，用随机数字表法分为5组，每组5只裸鼠。治疗组每只裸鼠分别植入1枚125I粒子，按放射活度分为G1组（0．4mCi）、G2组（0．6mCi）、G3组（0．8mCi）、G4组（1．0mCi）4个治疗组，G0组（对照组）植入无活性的空心粒子1枚，B型超声扇形扫描对125I粒子进行定位监测。每2天测量1次肿瘤直径并计算各组肿瘤体积抑制率，14d后断颈处死裸鼠，制作肿瘤组织标本，行透射电子显微镜及常规病理学染色检测肿瘤坏死凋亡情况并记录肿瘤坏死凋亡边缘距离125I粒子的最大半径。结果125I粒子植入14d，G0组平均瘤体积为（3713．19±243．23）mm3，G1组、G2组、G3组、G4组分别为（3113．35±316．54）、（2635．85±261．21）、（2538．37±312．16）、（1686．28±231．65）mm3，与G0组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；G1组、G2组、G3组、G4组的抑瘤率分别为（20．11±3．09）％、（36．18±2．54）％、（40．83±4．17）％、（66．63±5．34）％，即随着125I放射活度的增加，抑瘤率明显增高，差异有统计学意义（F=120．240，P=0．000）。125I放射活度与抑瘤率呈正相关（r=0．653，P=0．008）。G1组、G2组、G3组、G4组凋亡或坏死距离粒子的最大有效治疗半径依次为（5．2±0．5）、（6．4±0．7）、（7．4±0．4）、（8．2±0．5）rnm，差异有统计学意义（F=29．22，P=0．000）；125I放射活度与最大有效治疗半径呈正相关（r=0．609，P=0．004）。结论125I粒子组织间植入对裸鼠移植性ACC持续照射可以抑制肿瘤细胞增生周期，是一种安全、有效、可行、不良反应少的治疗方法。     

△ψm和Caspase3在As_2O_3诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡过程中的作用

目的：探讨线粒体膜电位（△ψm）、Caspase3在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用。方法：进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度（0,1.0,2.0,4.0,8.0μmol/L）分别作用于ACC-2细胞,用Rh123染色,流式细胞仪检测8.0μmol/LAs2O3作用前、后（24h）,ACC-2细胞的线粒体膜电位（△ψm）变化;用多功能酶标仪进行Caspase3活性检测。结果：空白对照组ACC-2细胞内Rh123荧光强度最强,8.0μmol/LAs2O3处理组ACC-2细胞内Rh123荧光强度减弱,其差异有显著性（P〈0.05）;随着As2O3药物浓度的增高（0,1,2,4,8μmol/L）,ACC-2细胞的Caspase3酶活力单位逐渐增加。结论：As2O3作用于ACC-2细胞,可通过降低线粒体膜电位从而引起细胞凋亡。随着As2O3药物浓度的增高,ACC-2细胞的Caspase3酶活力单位逐渐增加,Caspase3被激活,细胞可发生不可逆转的凋亡过程。     

普拉洛芬滴眼液不同用药时间对干眼症疗效的影响

目的　探讨普拉洛芬滴眼液不同用药时间对干眼症疗效的影响。方法　选取我院眼科门诊诊断为双眼干眼症的患者１１７例,按照随机数字表法将患者分成普拉洛芬１４ｄ组（３９例）、普拉洛芬３０ｄ组（４０例）和对照组（３８例）。普拉洛芬１４ｄ组给予１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液（１４ｄ）联合１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）;普拉洛芬３０ｄ组给予１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液（３０ｄ）联合１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）,对照组仅给予１ｇ·Ｌ－１玻璃酸钠滴眼液（３０ｄ）。给药方法均为局部滴双眼,每次１滴,每天４次。分别于治疗前后检测３组患者的泪液分泌试验Ｉ（ＳｃｈｉｒｍｅｒＩｔｅｓｔ,ＳＩｔ）、泪膜破裂时间（ｔｅａｒｂｒｅａｋ-ｕｐｔｉｍｅ,ＢＵＴ）和角膜荧光素染色（ｃｏｒｎｅａｌｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｓｔａｉｎｉｎｇ,ＦＬ）评分。结果　治疗前３组患者人口基线特征比较差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。治疗后普拉洛芬１４ｄ组ＳＩｔ（７．１１±１．３６）ｍｍ和ＢＵＴ（８．４２±０．７９）ｓ均高于对照组ＳＩｔ（５．１９±０．８５）ｍｍ和ＢＵＴ（５．９２±１．２４）ｓ;ＦＬ评分（０．７３±０．７２）显著低于对照组（１．８８±０．７１）,差异均有统计学意义（ｔＳＩｔ＝８．０００,Ｐ＜０．００１;ｔＢＵＴ ＝１０．８７０,Ｐ＜０．００１;ｔＦＬ＝－７．６６７,Ｐ＜０．００１）;治疗后普拉洛芬３０ｄ组ＳＩｔ（７．３８±１．０１）ｍｍ和ＢＵＴ（８．１２±１．００）ｓ均高于对照组,ＦＬ评分（０．８８±０．６８）显著低于对照组,差异均有统计学意义（ｔＳＩｔ＝９．１２５,Ｐ＜０．００１;ｔＢＵＴ＝９．５６５,Ｐ＜０．００１;ｔＦＬ ＝－６．６６７,Ｐ＜０．００１）;但治疗后普拉洛芬１４ｄ组与普拉洛芬３０ｄ组的ＳＩｔ、ＢＵＴ和ＦＬ评分差异均无统计学意义（ｔＳＩｔ＝－１．１２５,０．４＞Ｐ＞０．２;ｔＢＵＴ＝１．３０４,０．２＞Ｐ＞０．１;ｔＦＬ＝－１．０００,０．４＞Ｐ＞０．２）。结论　短期应用１ｇ·Ｌ－１普拉洛芬滴眼液治疗干眼症即可达到较好的疗效,它是辅助治疗干眼症的有效药物。     

Effects of Erythropoietin-Dextran Microparticle-Based PLGA/PLA Microspheres on RGCs

Purpose. We explored the neuroprotective effects of erythropoietin (EPO)-loaded dextran microparticle-based Poly(DL-lactide-co-glycolide)/Poly(DL-lactide) (PLGA/PLA) microspheres (EPO-dextran PLGA/PLA microspheres) on retinal ganglion cells (RGCs) in optic nerve crush rats for a prolonged period of time. Methods. EPO-dextran PLGA/PLA microspheres were prepared first by a novel solid-in-oil-in-water (S/O/W) technique. Then, the in vitro EPO release profile was assessed. Afterward, the bioactive effect of EPO released from EPO-dextran PLGA/PLA microspheres was explored in vitro on the retinal explants. Lastly, the neuroprotective effects of EPO-dextran PLGA/PLA microspheres on RGCs were evaluated in optic nerve crush rats with TUNEL staining for apoptotic RGCs. The level of glial fibrillary acidic protein (GFAP) expressed in retina was explored by immunohistochemistry staining. Survival RGCs were observed by DiI retrograde labeling using a DiI fluorescent tracer (1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate). Results. The results demonstrated that a sustained release of EPO from PLGA/PLA microspheres could last for at least 60 days. EPO released from the microspheres showed as efficaciously neuroregenerative as EPO protein solution on retinal explants (P = 0.2554 for neurite density, P = 0.1004 for neurite length). TUNEL staining revealed that EPO-dextran PLGA/PLA microspheres remarkably reduced RGCs death when compared to the control (untreated) group (P < 0.01 at five days and one week post-crush, P < 0.05 at two weeks post-crush). Increased GFAP expression in retina was reduced greatly in EPO-dextran PLGA/PLA microspheres-administrated rats two weeks post optic nerve crush. DiI retrograde labeling revealed that a single injection of EPO-dextran PLGA/PLA microspheres significantly promoted RGCs survival (P < 0.01 at four and eight weeks post-crush). Conclusions. A single intravitreal injection of EPO-dextran PLGA/PLA microspheres appeared to have a prolonged protective effect on RGCs in optic nerve crush rats. The PLGA/PLA microspheres may be a feasible protein delivery system, such as EPO, to intravitreal injection for retinal degeneration diseases.     

新型免疫抑制剂J2纳米混悬液抑制大鼠角膜移植排斥反应的实验研究

目的　观察计算机辅助药物设计的新型免疫抑制剂Ｊ２纳米混悬液（ｎａｎｏ-ｓｕｓｐｅｎ-ｓｉｏｎ,ＮＳ）结膜下注射对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法　成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为供体,Ｓｐｒａｇｕｅ-Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠为受体,建立同种异体穿透性角膜移植模型。手术大鼠随机分成３组,每组各１６只（３２眼）,Ａ组:ＳＤ大鼠自体角膜移植,结膜下注射空白溶剂０．０５ｍＬ;Ｂ、Ｃ组为同种异体角膜移植组,术后分别给予结膜下注射空白溶剂０．０５ｍＬ及１０ｇ?Ｌ－１Ｊ２ＮＳ。术后记录角膜植片排斥指数（ｒｅｊｅｃｔｉｏｎｉｎｄｅｘ,ＲＩ）,当ＲＩ≥６,确定为排斥。各组于角膜移植后７ｄ、１４ｄ随机选取２只行术眼及同侧颌下淋巴结病理学检查。结果　Ａ组:术后２～３ｄ角膜植片由透明逐渐变为混浊、水肿,随后保持透明。Ｂ组:术后３～５ｄ角膜植片开始水肿、混浊,７～１０ｄ时水肿、混浊发展迅速。Ｃ组:术后１周反应与Ａ组相似,之后出现角膜水肿、混浊,术后９～１４ｄ角膜完全混浊。Ａ、Ｂ、Ｃ组的角膜植片生存时间分别为（３０．００±０．００）ｄ、（１０．７５±１．６０）ｄ、（１４．３３±２．９３）ｄ,三组间差异有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。组织学观察发现:Ａ组术后炎症反应轻微,基质厚度基本正常或增厚,内皮层完整。Ｂ组术后１４ｄ时可见典型的免疫排斥反应,植片角膜上皮空泡样改变、部分崩解坏死。Ｃ组较Ｂ组角膜植片中细胞成分和新生血管均少,同侧颌下淋巴结增生明显减弱。结论　Ｊ２ＮＳ结膜下注射有抑制大鼠角膜移植排斥的作用,可减轻角膜移植术后角膜植片和同侧颌下淋巴结的细胞增生,抑制免疫应答。