Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响

目的:研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响。方法:培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别采用流式细胞术检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞凋亡和细胞周期的影响,应用MTT法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞活性的影响,Western blot法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44 细胞自噬相关蛋白LC3、p62 与mTOR 表达的影响。结果:流式细胞术结果表明,与Control组和GFP组相比,Survivin-shRNA组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;随着作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组（P＜0.05）。MTT结果发现Survivin-shRNA可抑制HXO-RB44细胞增殖活性,与Control组和GFP组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果发现,与对照组相比,LC3表达量显著增加（P＜0.01）;而mTOR表达量降低（P＜0.01）。结论:Survivin-shRNA可促进视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的线粒体机制

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡效应及其对线粒体膜电位的影响。方法比色法观察As2O3对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响;AnnexinⅤ荧光探针和流式细胞仪检测早期凋亡细胞;罗丹明123(Rhodamine123)荧光探针染色后,荧光显微镜下观察活细胞线粒体改变,并经流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。结果As2O3明显抑制SK-N-SH细胞的增殖;As2O3诱导SK-N-SH细胞早期凋亡时线粒体膜电位降低。结论降低线粒体膜电位可能是As2O3诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人移行细胞膀胱癌细胞株T24细胞凋亡的作用。方法用MTT法、TUNEL法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2O3诱导T24细胞凋亡的作用。结果As2O3可有效地抑制T24细胞增殖,随着药物浓度增高其抑制作用增强,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条带。TUNEL法呈阳性结果。透射电镜下可见细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。对照组均未见上述变化。对凋亡相关基因Bcl-2免疫组化染色发现其表达下调,同时凋亡主要效应分子Caspase 3被激活。结论As2O3可有效诱导膀胱癌细胞凋亡,通过下调Bcl-2基因表达是其作用机制之一。     

紫杉醇诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡及对磷酸化Bcl-2的影响

目的：研究紫杉醇(Tax)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡及磷酸化Bc-2在其中的作用。方法：应用^3H-胸腺嘧啶掺入分析法观察Tax对细胞生长的抑制作用，以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡，用Western blot分析Tax对磷酸化Bcl-2的影响，用cDNA细胞转染法观察突变型Bcl-2阻断Tax的作用。结果：Tax可明显地抑制Y79细胞的生长，1μmoL／L Tax处理24小时，^3H-胸腺嘧啶掺入率下降达55．43％，Tax可诱导Y79细胞凋亡。在此过程中，Bcl-2被磷酸化。当Y79细胞被转染突变型Bcl-2后，Tax对Y79细胞的作用被阻断。结论：Tax可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡，磷酸化Bcl-2参与其过程。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

地塞米松诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株Lovo、HCT-116、HT-29和SW-480中的表达,观察地塞米松(Dex)在体外对结肠癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:采用免疫组化、RT-PCR检测糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株中的表达;MTT、DNALadder和流式细胞仪等方法进行增殖抑制和细胞凋亡检测。结果:在4种结肠癌细胞株中只有Lovo和HCT-116表达GR。地塞米松在体外作用后,对4种细胞的增殖均有抑制作用,其中对Lovo和HCT-116细胞作用最显著。在Lovo细胞可检测到特征性的凋亡细胞DNA梯带。在流式细胞仪检测显示经1×10-4mol/LDex诱导72h后,在Lovo和HCT-116细胞检测到细胞凋亡,分别为(34.8±1.9)%和(33.6±1.4)%,明显高于未加Dex对照组的Lovo(2.9±0.4)%和HCT-116(6.4±1.3)%,差异有统计学意义(t值分别为28.934和22.980,P值均为0.000)。结论:结肠癌细胞株Lovo和HCT-116表达GR,地塞米松体外抑制Lovo和HCT-116细胞增殖,并诱导其发生凋亡,可能与GR相关。     

粉防己碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：粉防己碱(tetrandrine,Tet)是一种天然化合物,其抗视网膜母细胞瘤作用尚不清楚。该研究拟检测Tet对人视网膜母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其作用机制。方法：采用CCK-8法检测Tet对视网膜母细胞瘤细胞活力的抑制作用;应用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况;在2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色后,采用流式细胞术检测细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测细胞Akt、p-Akt蛋白表达量。结果：Tet显著抑制视网膜母细胞瘤细胞活力,Tet浓度为4、8、10和20 μmol/L处理细胞24 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为5.7%、25.0%、55.1%和84.9%,Y79细胞抑制率分别为2.4%、2.9%、23.8%和54.2% (P<0.01);10 μmol/L Tet处理细胞12、24和48 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为6.0%、45.5%和74.7%,Y79细胞抑制率分别为2.9%、19.4%和43.3%(P<0.01)。Tet诱导细胞凋亡,以10 μmol/L Tet处理细胞24和48 h时,WERI-Rb-1细胞凋亡率分别为(23.70±1.75)%和(34.83±3.15)%,Y79细胞凋亡率分别为(9.62±2.69)%和(14.97±1.50)%(P<0.01),凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制Tet对视网膜母细胞瘤细胞的凋亡诱导作用(P<0.05)。10 μmol/L Tet作用细胞6及12 h后,细胞的ROS产生量较对照组明显上升(P<0.01),N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)能够抑制Tet诱导产生的ROS(P<0.01),NAC抑制ROS后,细胞的凋亡率较单独Tet作用组明显下降(P<0.01)。Tet能够抑制视网膜母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号通路。结论：Tet诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡,该作用机制与细胞内ROS升高、PI3K/Akt信号通路抑制有关。     

紫檀芪诱导人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：紫檀芪是一种天然抗氧化剂,其抗视网膜母细胞瘤的效果仍不明确。拟探讨紫檀芪对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞的细胞增殖、细胞凋亡及细胞自噬的作用,并初步阐明其作用机制。方法：采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞的增殖活力,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的变化,蛋白［质］印迹法(Western blot)检测LC3B及P62蛋白的表达。结果：紫檀芪显著抑制WERI-Rb-1细胞的增殖活力(P<0.01),以25、50和100 μmol/L的药物浓度作用细胞24 h时,细胞增殖活力分别为(93.02±0.47)%、(55.10±2.04)%和(30.33±1.45)%;50 μmol/L紫檀芪处理细胞12、24和48 h时,细胞增殖活力分别为(88.38±3.70)%、(53.37±1.17)%和(29.60±1.05)%。紫檀芪显著诱导细胞凋亡(P<0.01),对照组、24和48 h细胞的凋亡率分别为(4.08±0.79)%、(13.44±2.12)%和(23.49±2.01)%。紫檀芪能够激活WERI-Rb-1细胞发生细胞自噬,上调LC3蛋白的表达,下调P62蛋白的表达,增加细胞内自噬囊泡的数量(P<0.01)。3-MA及Beclin1 siRNA抑制细胞自噬后能够部分逆转紫檀芪的抗肿瘤作用(P<0.01)。3-MA抑制细胞自噬后,紫檀芪处理组的细胞凋亡率为(12.97±2.09)%,3-MA+紫檀芪组为(8.35±1.11)%。siRNA敲低Beclin1后,紫檀芪处理组和siRNA+紫檀芪组的细胞凋亡率分别为(13.80±2.19)%和(9.62±0.52)%。结论：紫檀芪可以显著抑制WERI-Rb-1细胞的细胞增殖并激活细胞自噬促进细胞凋亡。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

吉西他滨抑制骨肉瘤细胞系MG-63增殖和诱导凋亡的实验研究

目的研究吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法利用光镜检测吉西他滨作用后MG-63的形态学变化;MTT法检测吉西他滨对MG-63的增殖抑制;流式细胞仪AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果吉西他滨可明显地抑制MG-63细胞生长,各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,0.1 mg/L及以上浓度的吉西他滨对MG-63骨肉瘤细胞的抑制率可达50%,0.1-100 mg/L的吉西他滨对MG-63的抑制率相似。吉西他滨可诱导MG-63细胞凋亡,在不同浓度吉西他滨（0.1,1.0,10.0,100 mg/L）作用48小时后,MG-63的凋亡率差异无统计学意义（P〉0.05）。并且经琼脂糖凝胶电泳可以显示DNA ladder。结论吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有增殖抑制作用,并且各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加;吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有诱导凋亡作用;0.1-100 mg/L吉西他滨对MG-63的增殖抑制和诱导凋亡作用相似。     

外源性白介素24促进C6细胞凋亡的体外研究

目的 探讨外源性白细胞介素24(interleukin 24,IL-24)体外抑制胶质瘤细胞增殖及促凋亡的相关机制.方法 应用MTT体外观察转染IL-24对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用.应用Hoechst 33258荧光染色体外观察IL-24对C6细胞的促凋亡作用.Western blot法检测c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和caspase-3蛋白的表达变化情况.结果 IL-24能使C6细胞的体外增殖能力降低,转入IL-24的C6细胞(C6/IL-24)增殖能力下降.经Hochest 33258染色,转入IL-24的C6细胞凋亡后出现核固缩、染色质凝集呈块或碎裂状改变.与转入空载体的C6细胞(C6/pLXSN)及C6细胞比较,C6/IL-24细胞的JNK和caspase-3蛋白表达均增高(均P＜0.05).C6/pLXSN与C6细胞比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外源性IL-24基因可抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,该诱导凋亡的作用可能与其上调并激活JNK及caspase-3表达有关.     

三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )体外抑制人鼻咽癌细胞株 (CNE1)增殖及诱导凋亡的作用。方法 :以不同浓度的As2 O3 处理CNE1,用四甲基噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖情况 ,细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果 :As2 O3 明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖 ,其抑瘤作用优于顺铂 (DDP)和 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)。As2 O3 作用于细胞后 ,可见典型凋亡细胞的形态学改变 :细胞核固缩 ,染色质凝集 ,核碎裂 ,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论 :As2 O3 可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长和促进细胞凋亡的作用     

纳米银对人肺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制

目的 探讨纳米银对人肺癌A549细胞毒性的影响及其作用机制.方法 通过显微镜观察纳米银对A549细胞形态的变化.MTT法检测不同浓度纳米银对A549细胞增殖的影响.流式细胞仪检测纳米银对A549细胞周期阻滞的影响.Westemblot和免疫组织化学法检测纳米银对A549细胞凋亡蛋白表达的影响.结果 与对照组比较,随着纳米银药物浓度的增加,A549细胞抑制率显著增加,其半数抑制率为(74.23 ±4.17) mg/L.纳米银作用于A549细胞G2/M期,纳米银中、高浓度明显上调细胞周期调控p21、p53基因的表达;纳米银可抑制Bcl-2蛋白的表达,对caspase-3有活化作用.结论 体外细胞实验证实,纳米银通过抑制A549细胞G2/M期,使p21、p53基因表达紊乱,诱导凋亡因子表达,通过多靶点作用抑制细胞生长.     

TSA诱导胰腺癌BxPC-3细胞周期阻滞与凋亡的研究

目的观察曲古抑菌素A(tricho-statin A,TSA)对胰腺癌BxPC-3细胞增殖及凋亡的诱导作用,探讨TSA抗胰腺癌的作用机制。方法BxPC-3细胞应用TSA处理后采用流式细胞技术分析其细胞周期分布和细胞凋亡率,免疫组化方法检测细胞乙酰化组蛋白H4表达,Western blot分析p21 WAF1/CIP1蛋白表达。结果TSA对胰腺癌BxPC-3细胞具有生长抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。TSA可将BxPC-3细胞阻滞于G0/G1期,TSA组G0/G1期细胞达(61.8±2.5)%,较空白对照组(42.5±2.2)%和乙醇对照组(47.3±3.4)%明显增多(P=0.004);三组细胞凋亡率分别为25.5%、5.5%和5.1%(P=0.000)。TSA组细胞p21 WAF1/CIP1蛋白表达及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调。结论TSA对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和细胞周期具有影响作用并可诱导细胞凋亡,p21 WAF1/CIP1蛋白及其相关染色质乙酰化组蛋白H4表达上调可能是其抗胰腺癌作用机制之一。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响

目的　观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,及其对 cyclin E蛋白的影响。方法　采用 MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌 Hep G2细胞增殖的影响 ;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对 Hep G2细胞周期分布的影响 ,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡的作用 ;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对Hep G2细胞周期调控蛋白 cyclin E的影响。结果　吲哚美辛可抑制肝癌 Hep G2细胞的增殖 ,诱导其凋亡 ,改变细胞周期分布 ,使 G0 /G1 期细胞比例增高 ,S期比例降低 ,同时还可使 cyclin E蛋白表达下降。上述作用具有剂量和时间依赖性 (P<0 .0 5 )。结论　吲哚美辛可诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,影响细胞周期调控蛋白表达 ,从而抑制细胞增殖。     

K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对体外培养的人胰腺癌细胞PC-2凋亡的影响

目的观察针对于胰腺癌K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对体外培养人胰腺癌细胞株PC-2凋亡的影响。方法脂质体将人工合成的针对于K-ras基因第12位密码子点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC-2,流式细胞仪、凋亡细胞原位末端标记（TUNEL）、倒置相差显微镜检测反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞PC-2凋亡的影响。结果转染48小时后,流式细胞仪：实验组有明显的凋亡峰,细胞大部分被阻滞于G1期,S期比例减少。TUNEL：实验组凋亡细胞明显增多。倒置相差显微镜：实验组凋亡小体明显增多。结论针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞PC-2,对癌细胞的凋亡有明显的促进作用。