转染反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞XIAP基因表达及细胞周期作用的实验研究

目的研究转染反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞凋亡抑制蛋白基因（X-linked inhibitor of apoptosisprotein,XIAP）表达的抑制作用及对细胞周期凋亡的影响．方法脂质体介导ASODN瞬时转染QBC939细胞,荧光显微镜观察ASODN转染入细胞的情况,并计算转染率;RT—PCR检测转染前后XIAPmRNA表达的变化;流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化和凋亡率．结果转染后24h可达到最佳的转染效果;ASODN组的XIAP基因水平明显低于对照组（P〈0．05）,流式结果显示转染后QBC939G0／G1期细胞高于阴性对照组,凋亡率高于对照组（P〈0．05）．结论脂质体介导转染ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的XIAP基因表达,使其发生G0／G1期阻滞,并诱导胆管癌细胞凋亡,有望成为胆管癌基因治疗新的靶点．     

CD24蛋白在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨CD24蛋白在膀胱癌中的表达及其与膀胱癌临床特征的关系。方法采用免疫组化方法对43例膀胱肿瘤、10例正常膀胱组织中CD24的表达进行检测。结果CD24蛋白主要表达于膀胱恶性肿瘤细胞的细胞膜和胞浆中,其阳性例数为27例,阳性率为62．8％,在正常膀胱组织中1例阳性表达,阳性率10％。在43例膀胱肿瘤石蜡标本中,CD24表达强度与肿瘤分级和分期有关,恶性程度高的肿瘤阳性表达高于恶性程度低的肿瘤,浸润性癌也高于非浸润性癌（P〈0．05）。结论①CD24在膀胱癌中的表达明显高于在正常膀胱组织中的表达。②CD24高表达与膀胱移行细胞癌的分化和浸润性进展密切相关。③CD24高表达可能成为判断膀胱移行细胞癌预后的一个重要指标。     

TGF-β1与膀胱癌发生发展的相关研究

目的探讨转化生长因子（transforming growth factor betal，TGF-β1）与膀胱癌发生发展的的相关性．方法采用免疫组化S—P法分别检测40例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱粘膜组织中TGF-β1的表达情况．结果TGF-β1在膀胱癌Ⅳ级中的表达水平明显高于膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级及正常膀胱粘膜组织（P〈0．05）．表浅性膀胱癌（Ta-T1期）与浸润性膀胱癌（T2-T4期）中TGF-β1的表达差异无统计学意义（P〉0．05）．结论TGF-β1的高水平表达是高度恶性表型膀胱癌的一个重要指标，但与膀胱癌临床分期的关系不大．     

过表达 TRPM8对膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭的影响

目的：观察过表达TRPM8基因的质粒pcDNA3．1－TRPM8对人膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将连有 TRPM8的质粒 pcDNA3．1－TRPM8稳定转染 T24细胞后筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组： T24组（未转染）、T24－0组[转染 pcDNA3．1（＋）质粒]和 T24－TRPM8组（转染 pcDNA3．1－TRPM8质粒）。应用 RT －PCR 检测 TRPM8 mRNA 改变,MTT 法检测 T24细胞的增殖情况,Transwell 检测细胞侵袭转移能力。结果T24－TRPM8组 TRPM8的 mRNA 水平表达较其他两组升高（P ＜0．05）,MTT 和 Transwell 分别显示 T24－TRPM8组 T24细胞增殖和转移率较其他两组增加（P ＜0．05）。结论过表达 TRPM8可以促进 T24细胞增殖及侵袭能力,从而促进膀胱癌的进展,是潜在的膀胱癌治疗靶点。     

转染CD258-Fc基因抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的体内外实验研究

目的探讨转染CD258-Fc基因抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的作用及对人膀胱移行细胞癌动物模型抑瘤率的影响，以探讨CD258-Fc基因转染实现抗肿瘤的作用，为人膀胱移行细胞癌的基因治疗提供新思路。方法 以LipofectaminTM脂质体介导CD258-Fc基因转染人膀胱移行细胞癌T24细胞株，通过绘制细胞生长曲线、MTT比色法以及流式细胞仪检测观察CD258-Fc转染对T24细胞增殖的影响，PCR、Northern分析检测转染CD258-Fc基因在T24细胞的表达，WestemBlot检测蛋白表达，T24细胞接种于裸鼠，分组给予CD258-Fc基因转染进行治疗，评价其抑瘤率。结果 CD258-Fc基因的表达可以抑制T24细胞的体外生长，T24／CD258-Fc细胞的生长曲线较对照组明显降低；MTT比色显示T24／CD258-Fc的细胞活力与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）；PCR及Northern分析提示CD258-Fc基因转染后在T24细胞上调表达，WesternBlot检测到蛋白高表达：流式细胞仪检测显示基因转染使瘤细胞的生长滞留在G0＋G1期，S期细胞明显减少，并观察到细胞凋亡。动物实验T24／CD258-Fc、T24／CD258-Fc＋IFN—γ肿瘤抑制率可达48．66％和60．98％，显著高于对照组（P〈0．05），且两组间差异具有统计学意义（P=0．032）。结论 CD258-Fc基因转染对T24细胞具有体内外抗肿瘤的作用，提示CD258-Fc基因转染T24细胞技术有可能为人BTCC的基因治疗提供-种新的治疗策略与手段。     

膀胱尿路上皮癌中MHC I类链相关蛋白A的表达及临床意义

目的：探讨膀胱尿路上皮癌中MHCI类链相关蛋白A（MICA）的表达及临床意义。方法：用免疫组化检测75例膀胱尿路上皮癌及15例正常膀胱黏膜中MICA蛋白表达,对MICA蛋自在膀胱黏膜、不同级别及分期的膀胱癌中的表达进行统计学分析。结果：MICA蛋白在膀胱癌的表达率（48．0％）高于正常膀胱黏膜（P〈0．05）,其中在非浸润性尿路上皮癌的表达率为59．0％（P〈0．05）,浸润性36．1％;高、低级别非浸润性癌MICA蛋白表达无统计学意义;MICA蛋白在Ta、T1和T2-4期膀胱癌的表达率分别为59．0％、41．2％和31．6％,MICA蛋白在浸润性膀胱癌（T1-4）的表达低于非浸润性膀胱癌（Ta）（P〈0．05）。结论：MICA蛋白表达上调可能与膀胱尿路上皮癌的发生有关。而MICA蛋白表达缺失可能与膀胱癌的浸润有关。MICA蛋白可作为膀胱癌免疫治疗的候选治疗靶点。     

p16、nm23-H1基因蛋白在膀胱癌的表达与临床意义

目的：探讨抑癌基因p16及肿瘤抑制基因nm23-H1在膀胱中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学s-p法检测18例正常膀胱组织中及38例膀胱移行细胞癌组织中p16及nm23-H1的表达。结果：p16在正常组织、膀胱癌中阳性表达率分别为88．8％（16／18）、47．4％（18／38），两者间有显著差异性（P＜0．01）。nm23-H1在正常膀胱组织、膀胱癌中阳性表达率分别为83．3％（15／18），44．7％（17／38）。两者间有显著差异（P＜0．01）。提示，p16、nm23-H1阳性表达率与膀胱移行细胞癌的临床分期、临床分级、肿瘤大小及是否转移有密切关系。结论：p16、nm23-H1在膀胱癌中的阳性表达对抑制肿瘤生长，浸润和转移起重要作用，可作为膀胱癌患者预测转移和预后及判断膀胱移行细胞癌生物学行为的良好指标。     

P16和PTEN在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨P16和PTEN在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法使用免疫组织化学法fs—P法）检测和比较P16蛋白、PTEN蛋白的表达情况,并以PBS作为阴性对照,以确诊前列腺癌的标本切片作为阳性对照。结果P16蛋白在正常膀胱黏膜中表达的阳性率为92．31％（24／26）,在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率40．32％（25／62）,差异明显（P〈0．05）故有统计学意义;PTEN蛋白在正常膀胱黏膜中表达的阳性率为96．15％（25／26）,在膀胱移行细胞癌中表达的阳性率45．16％（28／62）,差异明显（P〈0．05）,有统计学意义。结论P16与PTEN蛋白在正常膀胱组织中均表现为高表达,在膀胱移行细胞癌均表现为低表达,说明P16蛋白与PTEN蛋白在膀胱癌的发生、发展中可能具有一定的协同作用。     

UCA1在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨UCA1 mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及其与病理分级、临床分期和复发的关系。方法采用SYBR GreenⅡ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应试验方法检测39例膀胱癌组织及8例膀胱正常组织中UCA1 mRNA的表达情况。结果39例膀胱癌组织中UCA1 mRNA表达阳性39例,阳性率分别为100％;8例膀胱正常组织中UCA1 mRNA表达阳性3例,阳性率分别为37．5％;UCA1 mRNA的表达在癌组织和正常组织中的阳性率比较差异有显著性（P〈0．05）;UCA1 mRNA的表达与病理分级、临床分期和复发关系密切（P〈0．05）。结论UCA1参与了膀胱癌的发生发展过程,对膀胱癌的诊断、判断病理分级、临床分期和预后具有重要临床意义。     

成熟型Smac真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞中的表达

目的 构建成熟型Smac基因真核表达载体．探讨成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡的可能性。方法 以Xba Ⅰ和Bam HⅠ双酶切质粒pET15b-Smac．回收酶切释放基因片断．定向插入以Xba Ⅰ和BamHⅠ双酶切的真核表达质粒pcDNA3．1（-）中．构建含有成熟型Smac基因的真核表达载体pcDNA-MT Smac．测序鉴定重组的质粒。构建的质粒转染膀胱癌T24细胞．在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导下以原位未端转移酶标记法（TUNEL）检测凋亡率。结果 以T7引物测序证实得组的质粒pcDNA-MT Smac含有成熟型Smac基因。空白对照组、50ng／ml TRAIL处理组、转染Smac组和转染Smac后50ng ml TRAIL处理组的凋亡率分别为1．6％、20．2％、1．7％和35．7％．未经TRAIL诱导．T24细胞及转染了成熟型Smac的T24细胞间凋亡率差异无显著性意义（P〉0．05）．然而作TRAIL的诱导下．转染了成熟型Smac的T24细胞凋亡率明显高于术转染细胞．其差异有级显著性意义（P〈0．01）。结论 成功构建了含有成熟型Smac基因的真核表达载体．并证实该基因可以促进TRAIL诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡．为研究成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡提供了实验依据。     

SOX6在膀胱癌发生发展中的作用及相关机制

目的:研究SOX6在膀胱癌中的表达特征,并探讨其在膀胱癌中发挥的生物学效应及相关机制。方法:利用免疫组化检测膀胱癌组织和癌旁组织中的SOX6的表达,蛋白印记（Western blot）及荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测SOX6在膀胱癌细胞（T24、BIU-87、EJ、5637）和正常膀胱上皮细胞（SV-HUC-1）中表达情况。通过SOX6高表达质粒和空载质粒分别转染膀胱癌细胞（EJ、5637）,使用Transwell方法检测两组细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测迁移能力,Western blot法检测E-cadherin和Vimentin的表达,使用CCK-8实验检测两组细胞的增殖能力,流式细胞术检测凋亡情况,并研究对膀胱癌细胞的蛋白酶体活性的影响。结果:与癌旁组织和正常膀胱上皮细胞相比,膀胱癌组织和细胞中SOX6的表达显著下降,在细胞EJ和5637尤其明显。与对照组对比,转染SOX6高表达质粒的EJ 和5637膀胱癌细胞的迁移、侵袭、增殖能力减弱,凋亡增加,上皮间质转化能力减弱,同时蛋白酶体活性显著降低。结论:SOX6在膀胱癌中作为抑癌基因发生作用,通过降低蛋白酶体活性来抑制膀胱癌的发展。     

△Np63 mRNA在膀胱癌组织中的表达及意义

目的：探讨△Np63 mRNA在膀胱移行细胞癌（TCCB）中的表达及意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测48例TCCB患者肿瘤组织、10例对照膀胱组织△Np63 mRNA的表达，并分析△Np63 mRNA表达与TCCB临床分期、病理分级等的关系。结果：48例TCCB组织中△Np63 mRNA表达阳性率为75．0％（36／48），对照组膀胱组织中△Np63蛋白表达阳性率为0．0％（0／10），TCCB组△Np63 mRNA表达阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。不同临床分期肿瘤组织中△Np63 mRNA表达阳性率、各组间△Np63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。不同病理分级肿瘤组织中△Np63 mRNA表达阳性率、各组间△Np63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：TCCB组△Np63 mRNA表达水平均明显高于对照组，提示△Np63与TCCB的发生密切相关，其可能为TCCB发生的重要促进因素，△Np63 mRNA表达水平和TCCB的临床分期、病理分级没有相关性，故△Np63在TCCB进展中的作用有待进一步研究。     

DAPK基因在膀胱癌细胞迁移和调亡中的作用研究

目的 通过体外实验初步研究抑癌基因死亡相关蛋白激酶(deathassociat-edproteinkinase,DAPK)在膀胱癌细胞中的迁移和调亡中的作用研究.方法 首先采用免疫荧光染色的方法检测DAPK基因在膀胱癌细胞中的定位,然后用脂质体将全长外源性DAPK基因瞬时转染至不表达该基因的T24细胞中,分别采用划痕实档验和流式细胞术检测转染前后膀胱癌细胞的迁移能力和凋亡水平的变化.结果 免疫荧光染色发现DAPK基因定位于膀胱癌细胞的胞浆和胞膜.划痕实验提示转染DAPK基因的T24细胞迁移能力下降,流式细胞术检测证实DAPK基因转染后T24细胞凋亡率显著提高.结论 作为抑癌基因,DAPK在膀胱癌细胞中具有促进细胞凋亡并抑制细胞迁移的能力.     

组织芯片中膀胱移行细胞癌cyclinD1蛋白表达的临床病理学意义

【目的】探讨组织芯片中膀胱癌cyclinD1蛋白表达的临床病理学意义。【方法】应用组织芯片制作机制作膀胱移行细胞癌组织芯片，并用免疫组织化学方法检测组织芯片中膀胱癌cyclinD1的表达．统计其与临床病理学参数的相关性。【结果】在组织芯片中，成功检测了58例膀胱移行细胞癌cyclinD1蛋白表达，其中27例（46．6％）cyclinD1表达阳性。膀胱癌G3级cyclinD1阳性表达率高于G1、2：级的阳性表达率（68．8％VS．38．1％，P=0．036），浸润性膀胱癌cyclinDl表达阳性率高于表浅性膀胱癌的阳性表达率（73．7％VS．33．3％。P=0．004），膀胱癌肿瘤大小和数目与cyclinD1蛋白表达无统计学意义上的相关性（P〉0．05）。【结论】cyclinD1蛋白表达与膀胱移行细胞癌的分级、分期相关，可作为膀胱癌恶性程度的指标之一。     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

腺病毒介导的HSV-TK基因系统联合羟基喜树碱对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的HSV-TK系统联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用.方法 使用含有HSV-TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞T-24细胞,表达GFP为转染成功标志,同时观察转染率,PCR检测TK表达.以正常T-24细胞为空白对照,转染成功后分别加入GCV、GCV HCPT,采用MTT法测定单纯HCPT作用于人膀胱癌细胞72 h细胞增殖抑制率、各组治疗转染后人膀胱细胞24、48、72 h细胞存活率;流式细胞仪检测GCV(0.5 mg/ml) HCPT(10 mg/L)作用T-24细胞4h后的凋亡情况.结果 随着浓度的增高,HCPT对T-24细胞的生长抑制率逐渐增高,HCPT浓度为0.01 mg/L时T-24生长抑制率为14%,50 mg/L时T-24生长抑制率为63%,当HCPT浓度大于100 mg/L时,抑制作用无明显增加(P=0.216).GCV组、GCV HCPT各组对转染后细胞有明显杀伤作用(P=0.00),GCV HCPT组随HCPT浓度增高和作用时间的延长,杀伤效率明显增高.0.5 mg/ml GCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72 h后,细胞存活率为34.6%,GCV(0.5 mg/m1) HCPT(10 mg/L)组的细胞存活率仅为8.07%(P=0.00).GCV 10 mg/mlHCPT作用后4h,T-24细胞出现M1期前典型的细胞凋亡峰,凋亡率达52.93%.结论 HSV-TK/GCV系统联合HCPT治疗能增强自杀基因系统对人膀胱癌的杀伤作用,能够良好地诱导人膀胱癌细胞的凋亡.     

藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用

目的：藤黄酸能抑制包括乳腺癌、肝癌、血液系肿瘤以及乳腺癌在内的多种肿瘤细胞的生长,但是目前对于藤黄酸在泌尿系肿瘤作用的报道尚少。文中旨在研究藤黄酸诱导膀胱癌细胞凋亡和细胞周期阻滞作用可能的机制。方法实验分为4组,藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组及阴性对照组（加入等渗盐水）。体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87,将不同浓度藤黄酸加入处于对数生长期的人膀胱癌BIU-87细胞共培养,免疫组化法检测瘤组织Caspase-3蛋白的表达,使用流式细胞仪检测分析藤黄酸诱导人膀胱癌细胞的凋亡作用和细胞周期变化。结果藤黄酸1．0μmol／L组、2．0μmol／L组、3．0μmol／L组免疫组化评分分别为（4．28±1．86、5．03±0．78和6．47±1．31）,较对照组（2．13±1．27）明显升高,差异均有统计学意义（ P＜0．05）。流式细胞术结果显示：细胞周期 G0／G1期细胞逐渐减少,G2／M 期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显。结论藤黄酸可通过增加 Caspase-3蛋白的表达来促进膀胱癌细胞凋亡,可阻滞膀胱肿瘤细胞周期,抑制膀胱肿瘤细胞的增殖。     

凋亡抑制基因Livin在膀胱癌中的表达及临床意义

目的检测凋亡抑制基因Livin在膀胱移行细胞癌组织中的表达,以探讨其在膀胱癌发生、发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法,检测了60例膀胱移行细胞癌中Livin基因的表达情况。结果60例膀胱癌组织中Livin基因阳性表达率为28．3％,10例非肿瘤膀胱组织无一例Livin表达阳性;Livin的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期无关（均P〉0．05）;21例复发性膀胱癌组织中Livin阳性表达率为38．1％（8／21）,高于原发性膀胱癌（23．1％,9／39）。结论Livin在膀胱癌的发生发展中具有一定意义,Livin高表达提示患者可能有早期复发的倾向。     

干细胞相关基因Sox2在膀胱癌的表达及对膀胱癌细胞体外增殖影响

目的:初步研究干细胞相关基因Sox2在膀胱癌的表达及其对膀胱癌细胞体外增殖能力的影响?方法:利用免疫组织化学和免疫荧光法检测Sox2在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株T24的表达;将构建成功的pcDNA3.1-SOX2-EGFP质粒转染膀胱癌细胞,采用半定量RT-PCR和Western blot检测Sox2的表达,进一步通过MTT实验初步探讨Sox2对膀胱癌细胞T24体外增殖能力的影响?结果:膀胱癌Sox2高表达率为68.6%;构建的pcDNA3.1-SOX2-EGFP转染膀胱癌细胞T24后能够成功表达;MTT实验显示,Sox2可促进膀胱癌细胞株T24体外增殖(P < 0.05)?结论:Sox2在膀胱癌组织及细胞均可检测到表达,并能促进膀胱癌细胞株T24的体外增殖?     

中华眼镜蛇膜毒素12对膀胱癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响*

目的 探讨中华眼镜蛇膜毒素12（MT-12）对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及自噬的影响。方法 ①采用CCK-8法检测不同浓度（0.10、0.25和0.50?μg/ml）的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120?h后，对膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力的影响；②采用流式细胞术检测MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24?h后，对膀胱癌RT4、T24细胞凋亡的影响，主要观察细胞凋亡率的改变；③Pan-Caspase抑制剂和MT-12处理膀胱癌细胞后通过MTT法检测细胞活力；④通过GFP-LC3转染，观察自噬小体形成，通过Western blotting检测自噬标志物的表达情况。结果 CCK-8检测结果显示，不同浓度的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120?h后，MT-12能抑制膀胱癌RT4、T24的细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示，MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24?h后，实验组可以增加凋亡细胞的比例。Pan-Caspase抑制剂V-ZAD-FMK对2株膀胱癌细胞系进行处理后，MT-12并未完全失去对膀胱癌的抑制效果。Western blotting和GFP-LC3转染检测结果显示，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大，GFP-LC3转染结果自噬体（绿色荧光点）增多。结论 MT-12以浓度-时间依赖的方式抑制膀胱癌RT4、T24细胞的增殖能力，并诱导其调亡；MT-12能够引起细胞的自噬，并且自噬性的死亡可能发生在MT-12对膀胱癌细胞的抑制作用过程中。