青蒿琥酯抑制人成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨青蒿琥酯(Art)抑制人成纤维细胞(Fb)增殖的作用及机制。方法取人瘢痕组织,经体外培养及鉴定Fb后,将不同浓度的青蒿琥酯溶液作用于体外培养的成纤维细胞。于倒置显微镜及电镜观察其形态学变化,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)及流式细胞仪观察细胞凋亡,计算增殖抑制率和凋亡指数。结果青蒿琥酯对人瘢痕成纤维有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。浓度为240、120 mg/L的青蒿琥酯的凋亡率和坏死率较对照组高(P<0.01)。组织学观察试验组见成纤维细胞呈椭圆性,胞质颗粒增多,甚至可见细胞核浓缩、核碎裂等现象。结论青蒿琥酯可抑制人成纤维细胞的增殖,具体机制需进一步探讨。     

青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究

目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用.方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化.结果:青蒿琥酯在30～240 mg·L-1浓度范围内作用细胞 24 h 对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P＜0.05),对血管内皮细胞增殖抑制作用不明显(P＞0.05).药物作用 24 h 后,HLF、HSF、HUVEC细胞的IC50分别为:64、60、600 mg·L-1.光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆,突起变短变少,胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化.琼脂糖凝胶电泳结果显示在240 mg·L-1浓度作用 24 h,两种成纤维细胞的DNA出现梯带状的电泳图谱,而内皮细胞的DNA无梯状条带.结论:青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用,而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响.该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡,而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用.     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞Caspase-3表达的影响

目的 观察大蒜新素对人巨细胞病毒（HCMV）感染的人胚肺成纤维细胞（HELs）Caspase-3表达的影响，从细胞凋亡角度探讨大蒜新素抗HCMV效应的部分作用机制。方法 用HCMV AD169毒株感染HELs，建立高感染复数（MOI）和低MOI感染细胞模型；设药物高、中、低剂量分别为9，6和3 μg·mL-1，采用蛋白印迹法检测病毒感染和（或）药物处理后72 h细胞Caspase-3的表达水平。结果 正常细胞仅见Caspase-3 P32表达；HCMV感染细胞P32表达显著增加，还出现活性片段P17条带，且高MOI组P17表达明显高于低MOI组；大蒜新素处理低MOI感染细胞P17表达呈上升趋势，P17/P32比值也明显增加；大蒜新素处理高MOI感染细胞P17表达下调，P17/P32比值也显著下降。结论 HCMV无论高或低MOI感染均可诱导细胞凋亡增多，且高MOI诱导作用更强。大蒜新素一方面使低MOI感染细胞凋亡增多，另一方面抑制高MOI感染细胞的凋亡。前者可能有利于细胞清除病毒，后者则可减少细胞损伤而发挥保护作用。大蒜新素对HCMV感染细胞凋亡的调控呈双向性。     

毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡影响及部分机制的初步探讨

目的研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标识物葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)在人胚肺成纤维细胞凋亡过程中的表达变化,初步探讨毒胡萝卜素对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及部分机制。方法体外用毒胡萝卜素(TG)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,RT-PCR检测细胞中GRP78、CHOPmRNA的表达变化,Western blot检测GRP、CHOP及Caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,经TG作用24 h后,细胞凋亡率增加,并呈浓度依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05)。TG组在24 h的GRP、CHOP表达均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);同时不同刺激组中Caspase-3的表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论毒胡萝卜素可诱导人胚肺成纤维细胞发生凋亡,该凋亡可能与ERS有关。     

青蒿琥酯对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用

目的:观察青蒿琥酯对前列腺癌细胞株PC-3的体外作用,并探讨其可能作用机制。方法:应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪观察不同浓度青蒿琥酯在体外对前列腺癌细胞系PC-3的作用和对细胞DNA含量的影响。结果:青蒿琥酯对前列腺癌细胞系PC-3有明显的生长抑制作用,并能诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖周期。结论:青蒿琥酯对前列腺癌PC-3细胞有明显生长抑制和凋亡诱导作用,提示青蒿琥酯有用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性。     

青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及机制探讨

目的研究青蒿琥酯(ART)对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及其可能机制。方法收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞。用0、75、150、300、600μmol·L-1ART干预24 h,MTT法检测青蒿琥酯的细胞增殖抑制作用,荧光定量RT-PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶1(MMP1)和Ⅰ型前胶原α2链(proCOL1A2)mRNA的表达,Western blot法检测CTGF及Ⅰ型胶原的蛋白表达。结果各测试浓度ART均可抑制成纤维细胞增殖。和对照组相比,CTGF和proCOL1A2mRNA表达降低,而MMP1表达明显升高。Western blot法检测发现CTGF及Ⅰ型胶原表达明显下调。结论 ART能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并下调其CTGF及Ⅰ型胶原表达,同时上调MMP1的表达;通过抑制CTGF,并促进MMP1表达而减少胶原沉积可能是ART抑制增生性瘢痕的机制之一。     

甲基丙烯酸环氧丙酯体外诱导的人胚肺成纤维细胞DNA链断裂

甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)导致人胚肺成纤维细胞 (HELFs)恶性转化及其潜在致癌机理尚未阐明 .本研究用 0 .5- 5.0 mg· L-1的 GMA给体外培养的 HELFs染毒 2 h和 1 2 h,或用 5.0 mg· L-1的 GMA染毒 1 5min- 2 4 h,应用单细胞凝胶电泳技术 (彗星试验 )对 GMA引起的 HELFs DNA断裂作用进行了初步探讨 .琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法观察了 GMA对细胞凋亡的诱导作用 .结果表明 ,GMA可导致染毒细胞 DNA发生剂量和时间依赖性链断裂 .用 5.0 mg· L-1的 GMA染毒后仅 1 h断裂作用即已显著 ,并随染毒时间延长而递增 ,至 2 4 h时损伤最为严重 .但在同样条件下未观察到 GMA对细胞凋亡的诱导作用 .结果提示 GMA导致的非凋亡性 DNA链断裂可能是其诱导 HELFs恶性转化早期重要的遗传事件之一     

甲基丙烯酸环氧丙酯体外诱导的人胚肺成纤维细胞DNA链断裂

甲基丙烯酸环氧丙酯（GMA）导致人胚肺成纤维细胞（HELFs）恶性转化及其潜在致癌机理尚未阐明. 本研究用0.5-5.0 mg·L^-1的GMA给体外培养的HELFs染毒2 h和12 h,或用5.0 mg·L^-1的GMA染毒15 min-24 h, 应用单细胞凝胶电泳技术（彗星试验）对GMA引起的HELFs DNA断裂作用进行了初步探讨. 琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法观察了GMA对细胞凋亡的诱导作用. 结果表明, GMA可导致染毒细胞DNA发生剂量和时间依赖性链断裂. 用5.0 mg·L^-1的GMA染毒后仅1 h断裂作用即已显著, 并随染毒时间延长而递增, 至24 h时损伤最为严重. 但在同样条件下未观察到GMA对细胞凋亡的诱导作用. 结果提示GMA导致的非凋亡性DNA链断裂可能是其诱导HELFs恶性转化早期重要的遗传事件之一.     

青蒿琥酯诱导肺腺癌细胞凋亡作用研究

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)通过诱导肺腺癌A549细胞凋亡从而起到抗肺腺癌作用.方法 不同浓度青蒿琥酯(浓度0.1～800μg/L)作用肺腺癌A549细胞24 h后,利用MTT实验检测青蒿琥酯对A549细胞生长抑制作用,并计算半数抑制浓度(the half inhibitory concentra...     

青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin表达的影响

目的　探讨青蒿琥酯对结肠癌细胞增殖、凋亡及β-catenin 表达的影响。方法　取对数生长期的结肠癌HT-29 细胞,用12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL的青蒿琥酯分别培养24 h、48 h 和72 h。MTT 检测细胞增殖;AnnexinV/PI 双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot 检测β-catenin 蛋白表达。结果　MTT 结果显示,青蒿琥酯能明显抑制结肠癌HT-29 细胞增殖,与对照组（0 μg/mL）相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;AnnexinV/PI 检测结果表明,细胞的凋亡率随着青蒿琥酯浓度的增高而逐渐增高,明显高于对照组（P<0.05）;流式细胞仪检测细胞周期变化的结果显示,HT-29 细胞G0/G1 期比例与青蒿琥酯浓度呈反比（P<0.05）,G2/M 及S 期比例逐渐增加（P<0.05）。Western blot 检测结果证实,青蒿琥酯处理细胞后β-catenin 表达随药物浓度升高而降低（P<0.05）。结论　青蒿琥酯可抑制结肠癌细胞增殖,促进细胞凋亡,下调β-catenin 的表达,有望成为临床治疗肿瘤的新型药物。     

胱天蛋白酶Caspaes-3在子宫内膜癌中的表达及意义

目的研究胱天蛋白酶Caspase-3在子宫内膜癌中的表达,探讨子宫内膜癌的病因及发病机制。方法选取子宫内膜癌组织（组织学分级G1组16例、G2组27例、G3组8例）,子宫内膜非典型增生组织21例,正常子宫内膜组织10例。用免疫组化S-P法检测Caspase-3在子宫内膜癌组、子宫内膜非典型增生组和正常子宫内膜组中的表达。结果 Caspase-3在子宫内膜癌组和子宫内膜非典型增生组的表达明显低于正常子宫内膜组（P〈0.01）,在子宫内膜癌中G2、G3组的表达低于G1组,差异有显著意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论 Caspase-3的低表达可能促使细胞抗凋亡能力增强,导致细胞凋亡不足增殖过度,可能是子宫内膜癌发病机制之一。     

牛蒡子复方制剂对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的：探讨牛蒡子复方制剂（WWZ）对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响。方法：采用改良线栓法制作右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,运用Zea-Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用免疫组化法观察其对Caspase-3蛋白表达的影响。结果：WWZ治疗组脑组织变性坏死程度轻,神经功能缺损评分显著减少,Caspase-3阳性细胞减少（P〈0.01）。结论：WWZ能降低神经功能缺失评分、抑制Caspase-3的激活,提示对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,其脑保护作用可能与抑制缺血区Caspase-3蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。     

Maspin与Caspase-3在人非小细胞肺癌中的表达

目的研究非小细胞肺癌（NSCLC）组织中Maspin及Caspase-3的表达及其相关性,探讨两种因子表达水平与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学方法检测50例NSCLC瘤组织和20例癌旁正常肺组织中Maspin和Caspase-3蛋白的表达情况。结果 Maspin和Caspase-3在NSCLC组织中表达明显低于癌旁正常肺组织（56%vs100%,74%vs100%,P均〈0.05）,且二者在高中分化NSCLC中表达高于低分化组（P均〈0.05）;在Ⅰ、Ⅱ期NSCLC中的异常表达率显著高于Ⅲ、Ⅳ期（P均〈0.05）;NSCLC组织中,Maspin的表达与Caspase-3的表达呈正相关（rs=0.470,P〈0.05）。结论Maspin和Caspase-3在NSCLC组织中表达下调,二者在肺癌组织中的表达呈正相关,提示二者在NSCLC发生、发展中起协调作用。     

青蒿琥酯对人结肠腺癌细胞的放射增敏作用

目的 研究青蒿琥酯对人结肠腺癌SW480细胞的放射增敏作用。 方法 用MTT法测定青蒿琥酯的半数抑制浓度(IC₅₀)。将SW480细胞分为4组：对照组、药物组(给予20% IC₅₀的青蒿琥酯)、照射组(给予6 MV 4 Gy X射线照射)、联合组(经20% IC₅₀浓度的青蒿琥酯培养8 h后,给予6 MV 4 Gy X射线照射)。MTT法测定4组细胞增殖抑制率。再测定细胞集落形成情况,计算细胞集落形成率(PE),细胞存活分数(SF)。根据多靶单击公式,计算平均致死剂量、外推值、2 Gy时的细胞存活分数和放射增敏比。用流式细胞仪测定各组细胞的凋亡率。 结果 青蒿琥酯的IC50为20.87 μg·mL^-1。与对照组相比,3个实验组的细胞增殖抑制率和凋亡率有显著差异(P<0.05),而与其他3组相比,联合组的细胞增殖抑制率和凋亡率有显著差异(P<0.05)。放射增敏比为1.38。 结论 青蒿琥酯对人结肠癌腺癌SW480细胞有一定的放射增敏作用,机制可能与促进凋亡有关。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的:研究A549与肺泡上皮细胞共培养条件下姜黄素对经转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞生长、凋亡及分泌细胞外基质的影响,为姜黄素抗纤维化提供实验依据。方法:将利用与肺泡上皮细胞来源的A549细胞进行transwell跨室共培养的人胚肺成纤维细胞分为5组:对照组、模型组、不同浓度姜黄素(5、10、20μmol·mL-1)进行干预的治疗组。CCK-8法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;ELISA法测定细胞外基质Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)的分泌。结果:姜黄素对人胚肺成纤维细胞有抑制作用,呈剂量依赖式。姜黄素处理组细胞凋亡率较对照组、模型组明显增加(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素治疗组Bcl-2蛋白的表达明显减弱,而Bax蛋白的表达明显增强,Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)浓度下降。结论:姜黄素能抑制TGF-β1刺激的与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞的增殖,降低细胞外基质的形成,促进其凋亡,具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达来实现。     

Survivin和Caspase-3在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究肝细胞癌（HCC）组织及癌旁组织中Survivin、Caspase-3的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系。方法收集我院2006年1月～2007年12月肝细胞癌组织及相应癌旁组织标本70例,免疫组化SP法检测其PCNA、Survivin、Caspase-3的表达,并以PCNA阳性强度计算增殖指数（PCNA-PI）,原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测凋亡指数（AI）。结果Survivin在肝细胞肝癌中表达阳性率高于癌旁组织（P〈0.001）。其阳性表达与肿瘤大小、肿瘤细胞分化程度、门静脉癌栓有关。癌组织中Survivin表达阳性者的增殖指数PCNA-PI高于阴性者（P〈0.05）,凋亡指数低于阴性者（P〈0.05）。Caspase-3在肝细胞癌中表达阳性率低于癌旁组织（P=0.05）;其阳性表达与肿瘤细胞分化程度和HBsAg有关。癌组织中Caspase-3表达阳性者的增殖指数PCNA-PI低于阴性者（P〈0.05）,凋亡指数高于阴性者（P=0.05）。在肝癌组织中Survivin与Caspase-3的表达呈负相关（P=0.044）。Survivin阳性肝癌患者生存率低于阴性者（P〈0.05）。Caspase-3阴性肝癌患者生存率低于阳性者（P〈0.05）。结论Survivin、Caspase-3参与了肝细胞癌的发生发展,Survivin可能通过抑制Caspase-3的活性从而发挥其抑制肝细胞癌细胞凋亡作用,影响预后。     

逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

目的：以牛生长激素(bGH)为模型，建立逆转录病毒载体转移系统，体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS，以获得bGH表达。方法：将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLC-MDR相应酶切位点，获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转洒重组质粒进入包装细胞PA317，筛选长春新碱抗性克隆株，收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS，筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3／bGH和2BS／bGH。结果：RT－PCR分析表明基因转染组的3T3／bGH细胞和2BS／bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带，而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达，而作为对照的3T3／mdr细胞和NIH／3T3细胞均无此蛋白表达。结论：应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞，该系统易筛选，转染效率较高。     

The Influence of Selenium on Methyl Mercury Toxicity in Rat Hepatoma Cells,Human Embryonic Fibroblasts and Human Lymphocytes in Culture

Abstract The effect of methyl mercury and two selenium compounds have been studied in cell cultures. Methyl mercury in concentrations above 1 μM had a pronounced inhibiting effect on the growth of rat Morris hepatoma cells. Glucose and lactate uptake in relation to cell protein was appreciably stimulated by the organic mercury compound. Selenite in low concentrations (0.5 μM) and seleno-di-N-acetyl glycine in thousandfold higher concentrations offered considerable protection against these effects of methyl mercury. The same selenite concentration (0.5 μM), which did not affect cell growth, caused an appreciable protection against methyl mercury (6 μM), even if it was added 3 days after methyl mercury. The methyl mercury inhibited the growth of human embryonic fibroblasts and the DNA-synthesis in the human lymphocytes. However, no protective effect of selenite were observed in these cell types. These results suggest that selenium compounds exert their protective effects through cell specific processes rather than by a direct chemical reaction between selenite and methyl mercury.     

白细胞介素15对儿童骨髓增生异常综合征造血前体细胞caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素15(IL-15)对骨髓增生异常综合征(MDS)造血细胞caspase-3 mRNA表达的影响,以探讨IL-15抑制MDS CD34+造血干/祖细胞凋亡的可能机制.方法:采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化18例MDS患者骨髓CD34+细胞,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测caspase-3 mRNA表达水平,观察IL-15对它们的影响.结果:发现IL-15下调体外培养的MDS造血前体细胞cpp32基因mRNA的表达在0～100 ng/mL范围内呈剂量依赖性,其差异具有统计学意义;从d 1～d 8,随着IL-15作用时间延长,下调caspase-3基因mRNA表达的能力越强,其差异具有统计学意义.结论:IL-15可呈时间与剂量依赖性的下调体外培养的MDS造血前体细胞caspase-3基因mRNA的表达.IL-15下调MDS CD34+造血干/祖细胞caspase-3 mRNA的表达,可能为其抑制该细胞凋亡的作用机制之一.