记忆性T细胞和HIV疫苗

HIV疫苗被认为是预防艾滋病的最有效工具。以前研制的HIV疫苗，大多数能诱导机体产生记忆性B淋巴细胞和持久的抗体，但并不能保护机体免受HIV的感染。记忆性T细胞的研究给研究HIV疫苗提供了新思路。本文着重描述了记忆性T细胞的分群、分化、形成和维持的一般规律及其在HIV疫苗研制中的意义。     

T细胞疫苗对HCV的清除作用

1 材料和方法 1.1 材料 雌性BALB/c小鼠(H-2d) 5～6 wk龄; P815细胞(H-2d,仅表达MHC Ⅰ类抗原,不表达MHCⅡ类抗原);SP2/0(H-2d)细胞;表达丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的质粒载体pcDNA-C、pcDNA-CE1、pcDNA-CE1E2[1];腺病毒表达载体pAd.HCV-C、pAd.HCV-CE1、pAd.HCV-CE1E2[2];Na51CrO4;抗CD8 单克隆抗体;小鼠抗HCV C单克隆抗体;重组鼠源性IL-2;2-巯基乙醇等.     

T细胞疫苗治疗小鼠H22肝癌的实验观察

目的：探讨T细胞疫苗（Tcell Vaccine，TCV）治疗实验动物肿瘤的效应。方法：建立荷肝癌（H22）小鼠模型。14d后，对实验组和对照组的荷瘤小鼠分别按1、3、10、17d，4次行TCV或生理盐水治疗。观察小鼠的生存情况及病理组织学变化。结果：实验组小鼠十第4次TCV治疗后，肿瘤生长稳定，随后肿瘤出现缓慢缩小，其中7／8的小鼠在实施TCV治疗结束后35d内，皮下肿瘤全部消退。生存天数均〉100d；对照组小鼠皮下肿瘤呈进行性增大，全部小鼠于接种活肿瘤细胞后45d内死亡。病理组织学观察，实验组肿瘤组织大片坏死，癌巢周边炎细胞明显增多；对照组肿瘤组织中瘤细胞增生活跃，周边有少量炎细胞浸润。结论：TCV治疗小鼠H22肝癌能激发宿主抗肿瘤免疫反应，引起肿瘤坏死，消退，值得进一步研究。     

半抗原修饰的肿瘤疫苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤效果观察

目的：探讨用半抗原修饰的瘤苗治疗小儿T淋巴细胞瘤的方法。方法：将C57BL/6小鼠随机分为灭活RMA（小鼠T淋巴细胞瘤来源的细胞系）肿瘤细胞组，二硝基苯（DNP）修饰的灭活RMA肿瘤细胞组，RMA肿瘤细胞破碎物组，DNP修饰的RMA肿瘤细胞破碎物组和生理盐水对照组共5组（每组10只），于免疫接种后第10d用RMA肿瘤细胞再攻击实验小鼠，观察它们抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力（主要观察出瘤时间，肿瘤生长速度和生存期）。结果：DNP修饰的灭活PMA肿瘤细胞可诱导小鼠产生抗肿瘤免疫保护力，主要表现为小鼠肿瘤生长速度减慢，生存期延长。而灭活RMA肿瘤细胞，RMA肿瘤细胞破碎物和DNP修饰的肿瘤组织破碎物不能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫保护力。结论：半抗原修饰的瘤苗可作为有效的抗淋巴瘤瘤苗。     

T辅助细胞在疫苗研制中的作用

发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注，其意义在于，已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减毒的活疫苗要安全并且相对而言比制造亚单位疫苗要容易。然而，多肽疫苗的发展面临巨大挑战。这一方法在诱导遗传背景复杂的人群免疫反应方面受到限制，这与主要组织相溶性复合物(MHC)多态性有关。因同样的理由，肽类免疫应答常因缺乏适当的辅助T淋巴细胞(HIL)而引导出不充分的细胞毒素T淋巴细胞(CTL)和抗体反应。另一个运用线性肽链结构的可能缺点是：为了引导出合适抗体反应，表面免疫球蛋白受体簇对于激活静息的B细胞就成为必须因素。由WHC多肽性引起的问题可由运用不加区别的T细胞表位来解决。从麻疹病毒F蛋白(氨基酸288到302)中得到的不加区别的T细胞表位和鼠的确定结合在多种MHC分子上的辅助T细胞表位(v1EB，aa191-209)已被定性并且被用于能极大激发免疫应答的结构中，以克服单一限制型免疫应答的缺陷。合成的，非自然Pan DR表位(PADRE)具有退化的结合几种通常HLA—DR的能力，能以绝对效价和抗体反应质量两种形式来增强激发短肽链的免疫应答。另外，一些所谓的从流感病毒血凝素(HA)来的“不加区别的”T细胞表位，恶性疟疟原虫红细胞前期抗原和分枝杆菌蛋白被报道能激发广泛的免疫应答。为了不加区别地结合于几种同型和同种异型的MHCⅡ类分子，这些肽类应显示出部重叠MHC结合形式或应利用保存于配体中的固定位点和应缺失等位基因特异性固定残基，以防止结合于其它Ⅱ类分子。了解MHCⅡ类分子对肽链的不加区别及特异性识别的生物物理学基础将为在疫苗设计中突破遗传限制的策略提供分子水平的依据。     

HIV感染者T淋巴细胞亚群的特点及临床意义

目的研究艾滋病病毒(HIV)感染对外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法采用流式细胞术(FCM)检测145例HIV感染者外周血中T淋巴细胞表型的变化,并与30例健康体检者作比较。结果HIV感染者CD4 细胞百分率和CD4 /CD8 比值显著降低,CD8 细胞百分率明显升高。与对照比较,差异有统计学意义(P<0.01);感染者年龄不影响其表达,差异无统计学意义(P>0.05)。结论HIV感染者T淋巴细胞亚群的检测,对判断病情和评价疗效均具有重要的临床价值。     

HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞免疫病理改变的研究

目的　探讨我国HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞的免疫病理改变情况及其临床意义。方法　收集 13例HIV感染患者 (HIV组 )、2 7例AIDS患者 (AIDS组 )和 5 1名健康献血员 (正常对照组 )的抗凝血 ,用人T淋巴细胞亚群的特异性荧光抗体标记 ,通过流式细胞仪检测外周血CD4 + T淋巴细胞 (T4细胞 )、CD8+ T淋巴细胞 (T8细胞 )及其亚群 ,并检测患者血浆HIV载量。结果　正常对照组、HIV组和AIDS组外周血T4细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 84 9± 2 88,4 37± 184 ,5 0± 5 1,组间比较P <0 0 1;T8细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 5 79± 175 ,10 31± 345 ,5 35± 338,HIV组明显高于正常对照组(P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞 (CD4 + CD4 5RA+ CD6 2L+ )亚群比例分别为 4 3 0 %± 11 4 % ,4 4 2 %± 12 8% ,2 4 8%± 15 5 % ,AIDS组明显为低 (P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 36 8± 16 2 ,185±134,18± 2 0 ,组间比较P <0 0 1;T4功能细胞 (CD4 + CD2 8+ )亚群比例分别为 93 1%± 8 1% ,6 2 6 %±2 8 2 % ,5 6 9%± 2 6 4 % ,组间比较P <0 0 1;T4和T8激活细胞 (CD4 + HLA DR+ ,CD8+ HLA DR+ ,CD8+CD38+ )亚群比例均表现为AIDS组 >HIV组 >正常对照组 (P <0 0 5 ) ;T4和T8凋亡细胞 (CD4 +CD95 + ,C     

HIV／AIDS合并HBV／HCV感染病毒载量水平及与T淋巴细胞相关性的探讨

目的：探讨人类免疫缺陷病毒（HIV）／艾滋病（AIDS）合并乙型肝炎病毒（HBV）／丙型肝炎病毒（HCV）感染后病毒载量水平变化及对机体T淋巴细胞免疫机制的影响。方法分别测定 HIV／AIDS单纯感染组,HIV／HBV合并感染组,HIV／HCV合并感染组3组的 HIV RNA、HBV DNA、HCV RNA、CD4＋ T淋巴细胞频数、CD8＋ T淋巴细胞频数、CD4／CD8比值,并分析各组T淋巴细胞与HIV RNA的关系,HBV DNA／HCV RNA与HIV RNA、CD4＋ T淋巴细胞、CD8＋ T淋巴细胞、CD4／CD8比值的相关性。结果 HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组及 HIV／HCV合并感染组的CD4＋ T 淋巴细胞与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组的CD8＋ T淋巴细胞与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组及 HIV／HCV合并感染组的CD4／CD8与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论合并感染 HBV后,HIV／AIDS患者T细胞的数量下降更明显,致HIV RNA、HBV DNA高载量,加速了 HIV病情进展;感染 HBV后CD4＋ T细胞的数量下降比感染HCV更明显。     

HIV感染的DC对T淋巴细胞影响的相关性研究

在HIV感染过程中,DC不仅不能有效提呈抗原,介导病毒清除,反而促进HIV感染T淋巴细胞,抑制其免疫功能,甚至促进T细胞凋亡。笔者就HIV感染的DC对T淋巴细胞的影响做一综述。     

T细胞疫苗免疫诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用探讨

目的　探讨供体抗原特异性T细胞疫苗诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用。方法　分别用LOU/C大鼠脾细胞和LEW大鼠脾细胞免疫BN大鼠 ,获取被免疫BN大鼠的脾细胞制备成针对LOU/C大鼠的T细胞疫苗 (LCTCV)和针对LEW大鼠的T细胞疫苗 (LTCV)。分别用制备的T细胞疫苗免疫正常的BN大鼠 (0 .2ml/次 ,1次 /周 ,连续 3次 ) ,于第 3次免疫后第 5天以被疫苗免疫BN大鼠作为受体 ,以LOU/C大鼠作为供体进行原位肝移植 ,设单纯移植组作为对照。观察移植后大鼠的平均存活时间 (MST) ,并对肝移植物进行组织病理学观察 ;于移植后第 7天以受体BN大鼠的脾细胞作为反应细胞 ,以LOU/C大鼠的脾细胞作为刺激细胞进行单向混合淋巴细胞反应 (MLR)。结果　单纯移植组MST为 (8.4 3± 1.99)d ,　LTCV免疫组为 (11.2 9± 1.98)d ,与单纯移植组比较P <0 .0 5 ,LCTCV免疫组为 (17.4 3± 4 .12 )d ,与LTCV免疫组比较P <0 .0 1;观察移植后第 7天组织病理学改变 :单纯移植组呈明显的急性排斥反应病理征象 ,　LTCV免疫组仅出现轻度的炎性细胞浸润和细胞水肿 ,　LCTCV免疫组肝移植物结构基本正常 ,未发现明显的病理损害 ;MLR结果表明 :单纯移植组每分钟脉冲数值为(16 0 0 2± 2 330 ) /min、在LTCV免疫组为 (10 0 2 2± 1348) /min ;比单纯移植组明显     

新型冠状病毒疫苗免疫BALB/c小鼠后的T细胞表位鉴定

目的 鉴定携带新型冠状病毒S、N和M基因的疫苗在BALB/c小鼠上的T细胞表位。方法 用携带新型冠状病毒S、N和M基因的DNA疫苗和痘病毒载体疫苗免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,末次免疫1个月内取小鼠脾细胞,用ELISPOT法检测其对新型冠状病毒特异性多肽的T细胞免疫反应,筛选出具有阳性反应的多肽片段,并对其表位进行预测分析。结果 S、N、M基因分别鉴定出12、2、17条阳性多肽。S基因中多肽S49、S50、S100、S101、S102、S103阳性反应率为100%,且免疫刺激指数最高;覆盖M蛋白全长的41条多肽中有7条能刺激50%以上的小鼠产生阳性反应。预测分析结果显示,S、N、M基因分别有10、1、16个MHC-1 H-2限制性表位,主要位于S基因的RBD区、N基因RBD区以及M基因的跨膜区。这些表位在SARS-CoV-2及其变异株、SARS-CoV中高度保守。结论 新型冠状病毒DNA疫苗和痘病毒载体疫苗诱导了针对多个基因、多个表位的特异性T细胞应答,未来通用型疫苗设计应包含能诱导细胞免疫的多个抗原,特别是包含保守表位的结构抗原。     

多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察

目的:动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后4～8周、2～8周、2～8周和6～10周升高,分别在免疫后6、6、4～6和8周达最高水平。结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗在免疫早期(2～8周)即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。     

MIF基因修饰的瘤苗免疫小鼠后T细胞数量和功能的分析

目的：研究了细胞在巨噬细胞游走抑制因子（MIF）基因修饰的瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应中的应用。方法：将重组MIF腺病毒转染小鼠FBL3红白血病细胞制成的瘤苗接种于小鼠体内,观察脾脏和淋巴结中T细胞数量和功能的改变。结果：经MIF基因修饰的瘤苗免疫后,小鼠脾细胞和腹股沟引流淋巴结细胞数量明显增多,脾细胞CTL活性显增强,引流淋巴结中CD3^ 、CD28^ 、CD4^ 和CD8^ T细胞百分率均较对照组增加。MIF基因修饰的瘤苗免疫对小鼠受野生型FBL3肿瘤细胞再攻击具有明显的保护作用。结论：MIF基因修饰的瘤苗能诱导T细胞介导的抗肿瘤免疫反应,有可能作为肿瘤基因治疗的候选。     

日本血吸虫重组BCG-sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法：将10^6CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠,分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只,收集血清,常规ELISA法检测IgG抗体,同时设PBS皮下注射对照组。结果：皮下注射组和静脉注射组IgG抗体水平都于免疫后4周显著增加,免疫后10周达最高水平,并持续在较高水平至免疫后16周。疫苗免疫后10周静脉注射组的抗体水平显著高于皮下注射组。结论：日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗静脉注射免疫效果优于皮下注射。     

以Ad-Easy载体系统快速构建PTEN重组腺病毒表达载体

目的 应用Ad-Easy腺病毒载体系统构建携带抑癌基因PTEN的重组腺病毒表达载体.方法 用插入有抑癌基因PTEN和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTrack-CMV转化已经含有腺病毒骨架载体pAdEasyl的E.coliBJ5183(Ad-1 cells)进行同源重组,获得重组腺病毒质粒,经Pac Ⅰ线性化后,转染293细胞.结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的293细胞出现细胞病变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因,荧光显微镜能观察到293细胞内有绿色荧光.结论 腺病毒Ad-Easy系统是一种较为简便、快速的构建重组腺病毒的好方法,且生成的病毒滴度高、转导效率好,为进一步研究PTEN基因应用于癌症基因治疗提供实验基础.     

Gene therapy for allergic rhinitis with recombinant adenovirus vector containing CTLA4Ig in mice

Objective: To examine the role of recombinant adenovirus vector containing CTLA4Ig gene( Ad-CTLA4Ig) in the treatment of induced allergic rhinitis in mice. Methods: Allergic rhinitis was induced by sensitizing and challenging with ovalbumin ( OVA). Ad-CTLA4Ig was intraperitoneally injected 30 min before OVA challenge. Adenovirus vector without inserted CTLA4Ig cDNA served as the control. The symptoms and morphological changes of nasal mucosa of each group were observed, and the serum levels of IgE against OVA were detected with ELISA. Results: There were no obvious symptoms and pathological changes in Ad-CTLA4Ig treated group, in which the serum OVA-specific IgE levels were significantly lower than that in control groups (P < 0. 05). Conclusion: Ad-CTLA4Ig prevents and treats allergic rhinitis of mice, implying the possibility of the usage of Ad-CTLA4Ig against allergic rhinitis in clinic in future.     

腺病毒载体介导CTLA4Ig基因治疗小鼠变应性鼻炎

目的 检测CTLA4Ig-重组腺病毒载体（Ad-CTLA4Ig）在变应性鼻炎治疗中的作用。方法 采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎。实验组在OVA激发前30min予以Ad-CTA4Ig腹腔注射。未转CTLA4IgcDNA的腺病毒载体（Adv）作对照。比较各组动物鼻部症状和鼻粘膜形态学改变，并采用ELISA法测定血清中OVA－特异性IgE水平。结果 CTLA4Ig重组腺病毒实验组小鼠鼻部症状和鼻粘膜病理改变不明显，并且血清中OVA－特异性IgE水平明显低于对照组（P＜0.05）。结论 Ad-CTLA4Ig可防治小鼠应变性鼻炎的发生，提示CTLA4Ig-重组腺病毒载体有可能运用于临床变应性鼻炎的治疗。     

VERO细胞狂犬病疫苗免疫效果的观察

目的 比较氢氧化铝佐剂和无佐剂Vero细胞狂犬病疫苗免疫效果的影响。方法 以常规免疫程序用氢氧化铝佐剂与无佐剂两种疫苗分别免疫豚鼠。并分别于3、7、14、30、60、90、180和360d采血并以小鼠中和法测定不同时间抗体水平。结果 氢氧化铝佐剂组和无佐剂组，抗体出现时间不一致，无佐剂组稍早，阳转率于第3d已为5．0％，而佐剂组为0，两组于第60d皆达到100．0％；抗体水平两组也稍有差别，无佐剂组较高，但比较差异无显著性，在第60d达到高峰，第90d逐渐下降。结论 初步显示，无佐剂Vero细胞狂犬疫苗免疫效果较佐剂组稍好。     

160名成人接种重组酵母乙肝疫苗效果观察

目的探讨成人接种重组酵母乙型肝炎疫苗（YDV）的免疫效果。方法选择160名23-48岁身体健康状况良好的中学老师，其乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）3项指标均为阴性。按0、1、6个月程序，每剂10μg/1.0ml接种YDV。结果第1针免疫注射后的第12、24个月时，抗-HBs阳转率分别为83、75％、67、50％。女性抗-HBs阳转率均高于男性（P〈0．05）。小于35岁组的抗-HBs阳转率均高于35岁以上组（P〈0．05）。接种重组酵母乙型肝炎疫苗后，本组观察对象均无局部和全身不良反应。结论重组酵母乙型肝炎疫苗对成人具有良好的免疫原性和安全性。     

钙网蛋白融合HBsAg基因重组腺病毒新型载体疫苗的构建与鉴定

目的:构建表达钙网蛋白(calreticulin,CRT)与乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)融合基因重组腺病毒载体(Ad-CRT/HBsAg),为研发新型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)治疗性疫苗奠定基础?方法: 采用腺病毒表达系统(ViraPowerTM Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体?首先利用RT-PCR的方法扩增CRT基因,并进一步构建CRT与HBsAg基因融合重组的pJW4303表达载体,在构建过程中给融合基因加上特定的CACC接头,再克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆, 经PCR及测序鉴定正确后, 用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆Ad-CRT/HBsAg?表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒?经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测Ad- CRT/HBsAg载体是否能正确表达目的蛋白?结果:构建的含有CRT/HBsAg融合基因的腺病毒表达克隆,经PCR和测序鉴定构建正确?重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增,获得的病毒滴度为2.68×1011 pfu/ml,且这个重组病毒载体能正确表达CRT/HBsAg融合蛋白?结论:成功构建了CRT/HBsAg融合基因重组腺病毒载体(rAd-CRT/HBsAg),为此重组载体用于治疗HBV慢性感染以及HBsAg阳性肝癌奠定基础?