乳酸脱氢酶同工酶C_4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶C_4(LDH-C_4)单克隆抗体(McAb),以免疫荧光、BA-ELISA及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等方法,测定了110例正常及各种不育症患者精子及精浆中LDH-C_4的含量。结果表明:不明原因性不育症、少精症及无精症患者精液中LDH-C_4的含量明显低于正常对照组,与正常组比较P值均<0.001,有极显著性差异;免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。LDH-C_4含量的明显降低可能与男性不育有关。     

大鼠睾丸Leydig细胞的分离纯化技术方法研究

目的 为了深入研究Leydig细胞及其调控因素，采用本实验以获取较高纯度(60％～85％，甚至90％以上)的Leydig细胞。方法 利用Percoll不连续密度梯度离心法，可以简便迅捷地获取较高纯度(60％～85％，甚至90％以上)的Leydig细胞。结果 得到较高纯度(60％～85％，甚至90％以上)的Leydig细胞。结论 本实验采用简便迅捷的方法，虽然不能得到高纯度(95％以上)的Leydig细胞，但可以用简单的设备，较短的时间，获得满足实验要求的较高纯度(60％～85％，甚至90％以上)的Leydig细胞，并通过体外细胞培养，取得具有生物学活性的Levdig细胞克隆，为进一步研究这种细胞提供了条件。     

乳酸脱氢酶C_4抗血清被动免疫大鼠的避孕作用

乳酸脱氢酶C_4(LDH-C_4)抗血清对大鼠有生殖抑制作用。精子凝集试验表明LDH-C_4抗体属凝集抗体。分别在受精前后各4d内,以每只大鼠腹腔注射0.5ml/d抗血清,被动免疫Wistar雌大鼠。受精后14d将其处死,剖腹计数各组妊娠率。结果表明:受精前组妊娠率与对照组无显著性差别;而受精后组与对照组有显著差别,可见部分着床后的胚胎死亡吸收,病理检查胚胎和胎盘均呈明显的炎症反应,提示LDH-C_4抗体能中止胚胎发育。而大鼠其他各重要脏器在形态上未见免疫病理改变。     

乳酸脱氢酶-C_4在大鼠不同成熟期生精细胞中的定位

用ABC免疫组织化学法观察乳酸脱氢酶C_4(LDH-C_4)在性成熟后的Wistar大鼠生精上皮细胞中的定位。结果表明:LDH-C_4定位于粗线期初级精母细胞以后的各级生精细胞中,精原细胞中缺如。显微分光光度分析表明,随着精子的发生,LDH-C_4的相对含量逐渐增加,精母细胞中为0.55±0.09,精子细胞中为0.86±0.13,精子中为0.94±0.04,三者之间有显著性差异(P<0.01)。ABC免疫电镜显示LDH-C_4在大鼠精子的细胞质、线粒体及部分细胞膜上均有分布。免疫荧光显示LDH-G_4在精子表面主要定位于尾部的主段和末段,少量分布于精子头冠部。作者对LDH-C_4细胞定位的生理意义作了讨论。     

兔乳酸脱氢酶C4的分离纯化及动力学研究

建立兔乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）分离纯化的新方法，研究该酶的动力学特性。采用Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｅｒａｎ和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ交联制成Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ－Ｓｅｐｈａｑｒｏｓｅ ４Ｂ染料配体亲和层析柱，结合ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ４５０离子交换层析分离兔ＬＤＨ－Ｃ４，以作图法测定该酶动力学数据。     

Isolation and Purification of Rat Testicular Lactate Dehydrogenase C_4

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲａｔＴｅｓｔｉｃｕｌａｒＬａｃｔａｔｅＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＣ_４ＴａｎＷｅｉｍｉｎ，ｅｔａｌ．（ＡＣＴＡＡＣＡＤＥＭＩＡＥＭＥＤＩＣＩＮＡＥＮＡＮＪＩＮＧ，１９９４，１４（２）：１５６－１５?..     

Further Analysis of El Tor Vibrio Cholerae Strains 1d： Comparison of Two Typing Methods

ＦｕｒｔｈｅｒＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｌＴｏｒＶｉｂｒｉｏＣｈｏｌｅｒａｅＳｔｒａｉｎｓ１ｄ：ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｗｏＴｙｐｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓＪｉａｎｇＸｉａｏｗａｎ（蒋小皖）；ＣｈｅｎＳｈｕｃｈａｎ（陈树昶）；ＪｉａｎｇＸｉａｏｌｉｎ（蒋小陵...     

缺血再灌注对大鼠睾丸脑红蛋白表达的影响

目的探讨大鼠睾丸缺血再灌注对脑红蛋白（neuroglobin,NGB）表达的影响及意义。方法48只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组,建立大鼠睾丸缺血再灌注模型,分别于缺血再灌注后3、6、12、24、48、96h脱颈处死大鼠,提取睾丸组织,常规HE染色进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测NGB的表达变化。结果大鼠睾丸缺血再灌注性损伤后睾丸生精细胞水肿,96h后可见细胞层数减少,排列紊乱,管腔内精子细胞减少。NGB在睾丸缺血再灌注后表达升高,其中mRNA水平6h组和48h组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）,蛋白水平6h组、12h组和96h组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论NGB在大鼠睾丸缺血再灌注后表达升高可能对睾丸损伤有一定的保护作用。     

大鼠胰岛细胞的分离纯化及培养

目的　探讨大鼠胰岛细胞分离纯化和培养的方法。方法　采用胰导管逆行灌注Hanks液分离成年大鼠胰岛,Ⅴ型胶原酶消化,不连续密度梯度Ficoll 4 0 0纯化胰岛。用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果　胰岛细胞的收获量为5 4 0±15 0个胰岛 胰腺,活性>90 % ,纯度>90 % ,高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激的2倍多。结论　胰导管灌注Hanks液,Ⅴ型胶原酶消化和不连续密度梯度葡聚糖纯化胰岛,可以获取数量多,活性和纯度好的胰岛     

两种不同纯化大鼠胰岛细胞方法的比较

  目的 比较分析OptiPrep和Ficoll两种介质纯化大鼠胰岛细胞的效果。方法 将24只SD大鼠随机分成2组,采用明尼苏达大学改良方法提取大鼠胰岛细胞,消化分离胰岛细胞后,分别采用不连续密度梯度Ficoll离心法和OptiPrep离心法纯化胰岛,比较纯化后胰岛细胞数量、纯度、存活率及功能,观察OptiPrep和Ficoll两种介质对大鼠胰岛纯化效果的影响。结果 与 Ficoll组相比,OptiPrep组胰岛细胞的产量（分别为304±13.57和346±9.09）和纯度（分别为88.25%±2.22%和94%±0.82%）均显著增加（P0.05）。 结论 OptiPrep法纯化大鼠胰岛比传统的Ficoll法更有优势,而且OptiPrep价格相对便宜,可以作为纯化大鼠胰岛的常规方法。     

大鼠肝乳酸脱氢酶与磷脂脂质体的相互作用

以荧光光度法研究了大鼠肝ＬＤＨ－Ｍ４与磷脂脂质体的相互作用。磷脂脂质体对ＬＤＨ－Ｍ４具有抑制作用。磷脂酰肌醇（ＰＩ）脂质体的作用比磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）大。当磷脂／蛋白（Ｗ／Ｗ）比为６时，ＰＩ能完全抑制ＬＤＨ的活性，抑制作用呈剂量效应。而磷脂酰乙醇胺，当其磷脂／蛋白（Ｗ／Ｗ）比超过２时，抑制作用不明显，抑制作用呈非剂量效应。当以２８０ｎｍ为激发波长时，ＬＤＨ－Ｍ４的发射峰为３４５ｎｍ，主要为色氨酸的     

大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

目的提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础。方法选择多克隆酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1～1.0mmol/L),调节诱导表达温度(25～37℃)和时间(1～5h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果。结果成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶性表达水平无明显影响。但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6×his标签,增强了目的蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高。结论rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响,但是可溶性重组蛋白两端均携带6×his标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足量rHRF用于进一步的生物学功能研究。     

Effect of Formaldehyde on Spermatogenesis and Testicular Morphology in Adult Rats

Objective To study the effects of formaldehyde （FA） on spermatogenesis and testicular morphology in adult rats. Methods The rats were divided at random into two experimental groups and one control group, each comprising 10 individuals. Rats in two experimental groups were respectively exposed to FA at concentrations of 0.5mg.m^-3 and 10mg.m^-3 （12h per day） for 2 weeks. After the treatment, the testicular weight and morphology, as well as the quantity and quality of sperm were evaluated. Results compared with the control, the testicular weight, sperm count, the percentage of motile sperm significantly decreased （p〈0.05）, while the percent of abnormal sperm significantly increased （p〈0.05） in rats of 10mg.m^-3 FA exposure group. Microscopy with HE staining showed that seminiferous tubules atrophy, spermatogenic cells decreased, seminiferous epithelial cells disintegrated and shed in rats of 10mg.m^-3 FA exposure group. Conclusion FA has a harmful effect on the spermatogenesis; it induces tubular atrophy and sperm abnormality at a dose-dependent manner.     

新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化方法研究

目的 探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞（OECs）的体外培养和纯化方法，为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法 用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs，比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果，根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度，同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果 体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。结论 新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。