莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤

目的研究莫诺苷对H2O2诱导的神经细胞氧化损伤的影响。方法培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷(1、10、100μmol/L)预孵育24h,加入H2O2500μmol/L作用18h诱导产生氧化损伤,测定细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果莫诺苷(10、100μmol/L)使活性氧的释放分别降低了37%(P<0.01)、27%(P<0.05),NO的释放分别降低了31%(P<0.05)、53%(P<0.01),莫诺苷(1、10、100μmol/L)有明显抑制GSH的降低的作用。结论莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,有神经保护作用。     

莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的 研究莫诺苷抑制过氧化氢诱导的神经细胞凋亡作用和机制.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷1 μmol/L、10/μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2O2 300～500μmol/L作用18 h,检测神经细胞丙二醛(MDA)、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡.结果 1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L莫诺苷显著抑制丙二醛增加,降低细胞膜电位,抑制细胞凋亡.结论 莫诺苷能够通过抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞脂质过氧化,降低细胞膜电位来抑制细胞凋亡.     

莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒

目的 研究莫诺苷抑制过氧化氧诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒作用.方法 体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别加入莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2 O2 300～500 μmol/L,作用18 h,检测细胞内游离钙离子浓度、乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与未加莫诺苷预孵育的细胞相比,莫诺苷10μmol/L、100μmol/L能抑制神经细胞内游离钙离子浓度增加,莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L能降低LDH的释放率.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒,有神经保护作用.     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的影响

目的研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层超氧化物歧化酶及神经细胞数量的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min,再灌注3 d或7 d。以维生素E(VE)为阳性对照药,采用分光光度法检测大鼠皮层超氧化物歧化酶活性,免疫组化法观察神经细胞数量变化。结果莫诺苷（270 mg/kg）能显著增强大鼠超氧化物歧化酶的活性,莫诺苷（30 mg/kg、90 mg/kg、 270 mg/kg）能抑制神经元数量减少。结论莫诺苷能通过增强大鼠皮层抗氧化能力而抑制脑缺血再灌注引起的神经元损伤。     

莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注神经凋亡的影响

目的研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层谷胱甘肽含量及Caspase-3的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30min,再灌注7d。采用分光光度法检测大鼠皮层谷胱甘肽含量;用Western blot方法检测Caspase-3表达。结果莫诺苷（270mg/kg）能显著增加大鼠谷胱甘肽含量,降低Caspase-3表达。结论莫诺苷能通过增强大鼠皮层抗氧化能力而抑制脑缺血再灌注引起的神经元凋亡。     

莫诺苷对家兔血小板聚集的影响

目的研究莫诺苷对二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)诱导兔血小板聚集的影响。方法采用Born法,检测不同条件下ADP、AA、PAF诱导的兔血小板聚集率。结果与空白对照组相比,莫诺苷能显著抑制由ADP、AA、PAF诱导的兔血小板聚集（P<0.001）,尤对ADP的抑制作用选择性强。结论莫诺苷具有明显抑制兔血小板聚集的作用。     

莫诺苷对二磷酸腺苷诱导兔血小板聚集钙离子的影响

目的观察莫诺苷对二磷酸腺苷(ADP)诱导兔血小板聚集后Ca²⁺+浓度的影响。方法利用钙离子荧光探针(Fura-2 AM)法,通过记录5 min 之内Fura-2 在激发波长340 nm和380 nm处的荧光强度比值,检测不同条件下ADP 诱导血小板聚集后Ca²⁺+的变化。结果与空白对照组相比,莫诺苷能显著抑制由ADP 诱导兔血小板聚集后Ca²⁺+的升高(P<0.001)。结论莫诺苷可能通过降低Ca²⁺+的上升达到抗ADP 诱导的兔血小板的聚集,从而改善体外血液流变学。     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层总抗氧化能力影响

目的 研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层总抗氧化能力的影响.方法 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用分光光度法检测脑组织总抗氧化能力变化.结果 莫诺苷(270 mg/kg)能增强大鼠总抗氧化能力.结论 莫诺苷能通过增强大鼠皮层总抗氧化能力发挥神经保护作用.     

莫诺苷对二磷酸腺苷诱导兔血小板聚集后环氧酶的影响

目的研究莫诺苷对二磷酸腺苷(ADP)诱导兔血小板聚集后环氧酶(Cox)含量的影响。方法利用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测不同给药组间ADP 诱导体外分离的兔血小板聚集后Cox 的含量。结果与空白对照组相比,莫诺苷各剂量组均能显著降低ADP 诱导兔血小板聚集后Cox 的含量(P<0.001),并具有较好的浓度依赖性,其中高剂量组抑制率达30%左右。结论莫诺苷可能通过影响Cox 的含量抑制ADP 诱导的兔血小板聚集。     

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层IL-1β的影响

目的研究山茱萸有效成分莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层IL-1β的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min,再灌注72 h。以秋水仙碱为阳性对照药,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠脑皮层炎症因子IL-1β的变化。结果莫诺苷可剂量依赖性地明显降低由脑缺血再灌引起的IL-1β含量增加(P<0.001)。结论莫诺苷能通过增强大鼠皮层抗炎能力发挥神经保护作用。     

Neuroprotective Effects of Astaxanthin in Oxygen-Glucose Deprivation in SH-SY5Y Cells and Global Cerebral Ischemia in Rat

Astaxanthin (ATX), a naturally occurring carotenoid pigment, is a powerful biological antioxidant. In the present study, we investigated whether ATX pharmacologically offers neuroprotection against oxidative stress by cerebral ischemia. We found that the neuroprotective efficacy of ATX at the dose of 30 mg/kg (n = 8) was 59.5% compared with the control group (n = 3). In order to make clear the mechanism of ATX neuroprotection, the up-regulation inducible nitric oxide synthase (iNOS) and heat shock proteins (HSPs) together with the oxygen glucose deprivation (OGD) in SH-SY5Y cells were also investigated. The induction of various factors involved in oxidative stress processes such as iNOS was suppressed by the treatment of ATX at 25 and 50 µM after OGD-induced oxidative stress. In addition, Western blots showed that ATX elevated of heme oxygenase-1 (HO-1; Hsp32) and Hsp70 protein levels in in vitro. These results suggest that the neuroprotective effects of ATX were related to anti-oxidant activities in global ischemia.     

RNA干扰Survivin基因在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中的作用

目的利用RNAi技术沉默人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞Survivin基因。方法应用RNAi技术,以pGCsi/U6质粒为载体构建Survivin-siRNA重组质粒,体外转染SH-SY5Y细胞,通过RT-PCR检测Survivin基因的表达。结果重组质粒转染SH-SY5Y细胞后其生长明显受抑制;Survivin基因的表达明显低于对照组(P0.01),达到了抑制效果。结论 RNAi可明显降低人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中Survivin基因的表达,从而抑制细胞生长,促进凋亡。     

法舒地尔对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后突触损伤的影响

目的:探讨法舒地尔(Fasudil)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧糖剥夺(OGD)后突触损伤的影响。方法:培养SH-SY5Y细胞,分为空白对照组、OGD组、OGD+法舒地尔组,各3皿。相差光学显微镜下观察细胞突触损伤及修复的细胞形态;Western-Blot检测ROCKⅡ、磷酸化肌球蛋白磷酸酶(p-MYPT1)、突触后致密物-95(PSD-95)、突触素(Synaptophysin)等蛋白的表达情况。结果:形态学显示法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤。OGD组ROCKⅡ及p-MYPT1的表达明显高于空白对照组(P0.05),突触素及PSD-95的表达明显低于空白对照组(P0.01)。OGD+法舒地尔组ROCKⅡ及p-MYPT1表达水平低于OGD组(P0.05),而与对照组差异无统计学意义(P0.05);突触素和PSD-95表达水平高于OGD组(P0.01);PSD-95表达水平高于空白对照组(P0.05),突触素的表达与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),结论:法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤,增加PSD-95、突触素的表达,抑制ROCKⅡ及p-MYPT1的表达。     

米贝地尔对罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究

目的:观察T型钙通道拮抗剂米贝地尔对罗哌卡因致SH-SY5Y细胞凋亡的影响,探讨罗哌卡因诱发神经细胞毒性是否与T型钙通道相关。方法:将SH-SY5Y细胞随机分为4组:SH-SY5Y细胞正常培养组(A组);SH-SY5Y细胞5μmol/L米贝地尔培养组(B组);SH-SY5Y细胞3 mmol/L罗哌卡因培养组(C组);SH-SY5Y细胞5μmol/L米贝地尔+3 mmol/L罗哌卡因培养组(D组)。各组细胞分别在有或无3 mmol/L罗哌卡因处理开始时(T0)、处理后1 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4),MTT法检测细胞活力、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果:与A组相比,C组、D组在T1、T2、T3、T4时点细胞活力明显降低(P<0.05);但C组降低幅度更明显,C组与D组比较,两组在T1、T2、T3、T4时点差异有统计学意义(P<0.05)。C组随时间的递增其细胞凋亡率逐渐增加,在T4时凋亡率达到最高;D组在T1、T2、T3、T4时点的细胞凋亡率明显比C组降低,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:罗哌卡因对SH-SY5Y细胞有毒性作用,米贝地尔可减轻罗哌卡因诱发的神经细胞损伤,提示罗哌卡因诱发神经毒性可能与T型钙通道有关。     

神经干细胞微囊泡抑制H2O2 诱导DRG 神经元氧化应激损伤机制研究

目的 探究神经干细胞微囊泡（neural stem cell microvesicles, NSC-MVs）对H2O2 诱导背根神经节（dorsal rootganglion, DRG）神经元氧化应激损伤的作用及机制。方法 超速离心提取NSC-MVs,并进行电镜和纳米颗粒示踪分析。原代培养大鼠DRG 神经元,β-tubulin Ⅲ荧光染色。建立H2O2 诱导DRG 神经元氧化应激损伤模型,确定作用浓度。经NSC-MVs 预处理,MTT( 四唑盐) 检测神经元活力,流式细胞术检测Annexin Ⅴ和PI,蛋白质印迹检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3,cleaved caspase 9,Bax 和Bcl-2 的表达。结果 NSC-MVs 在透射电镜下呈圆盘状,包膜完整,纳米颗粒示踪显示其粒径为50 ～ 450 nm。MTT 结果显示,与对照组相比,H2O2 组神经元活力明显抑制。当H2O2 浓度为25,50,100 和200μmol/L 时具有显著性差异,细胞活力分别为84.4 %,73.7 %,69.8 % 和49.5 %（F=127.7,P ＜ 0.01）。经100,200 和400 μg/ml 的NSC-MVs 预处理DRG 神经元,细胞活力得到明显提升,分别为51.4 %,67.4 % 和73.5 %（F=49.47,P=0.023）。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,H2O2 组神经元凋亡率显著上升（P ＜ 0.05）,NSCMVs预处理组细胞凋亡率明显下降（P ＜ 0.05）。蛋白质印迹结果显示,与H2O2 组相比,NSC-MVs 显著抑制cleavedcaspase3,cleaved caspase 9 和Bax 蛋白表达（均P ＜ 0.05）,上调Bcl-2 蛋白表达（P ＜ 0.05）。结论 NSC-MVs 能够抑制H2O2 诱导DRG 神经元氧化应激损伤,发挥神经保护作用。     

分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白激活的人PBMC对膀胱肿瘤细胞毒效应的研究

【目的】研究分枝杆菌Ag85B／IL-2融合蛋白激活的人外周血单个核细胞（PBMC）对膀胱肿瘤的细胞毒效应。【方法]MTT法测定Ag85B／IL-2融合蛋白激活的效应细胞（AIAK）对四种膀胱肿瘤细胞BIU-87、T24、EJ、BTT739的细胞毒活性,并与单纯用Ag85B蛋白、BCG和rIL-2激活的效应细胞（分别命名为AAK、BAK和LAK）作比较;用流式细胞仪测定AIAK作用于四种膀胱肿瘤细胞后的凋亡水平。【结果】效靶比为10：1时,AIAK对BIU_87的细胞毒作用显著高于LAK（P〈0.05）和BAK（P〈0.05）;对T24的细胞毒作用非常显著高于AAK（P〈0.01）和BAK组（P〈0.01）;对EJ细胞和BTT739细胞的细胞毒作用显著高于LAK（P〈0.01）、AAK（P〈0．01）和BAK组（P〈0.01）。效靶比为20：1时,AIAK对BIU．87、T24、E-J和BTT739四种膀胱肿瘤细胞的细胞毒作用均显著高于LAK、AAK和BAK组（P〈0．05,P〈0．01）。AIAK作用于四种膀胱肿瘤细胞后,BIU．87（P〈0.05）、T24（P〈0．05）、E-J（P〈0.05）和BTT739（P〈0．05）的凋亡水平均有显著上升。【结论]Ag85B／IL-2融合蛋白激活的人PBMC对膀胱肿瘤具有较高的细胞毒活性并促进其凋亡。     

Protective effect of theaflavins on neuron against 6-hydroxydopamine-induced apoptosis in SH-SY5Y cells

Theaflavins, the oxidation products of tea polyphenols are important biologically active components of black tea. 6-hydroxydopamine is a pro-parkinsonian neurotoxin. Theaflavins could inhibit the auto-oxidation of 6-hydroxydopamine in a dose-dependent manner from 0.5 µg/ml to 25 µg/ml. Here we investigated the protective effect of theaflavins on 6-hydroxydopamine induced SH-SY5Y cells against apoptosis (within this concentration range). It was found that pretreating SH-SY5Y cells with 0.5 µg/ml of theaflavins prevented 6-hydroxydopamine-induced loss of cell viability, condensed nuclear morphology, attenuated 6-hydroxydopamine-induced apoptosis, decrease of mitochondrial membrane potential and the increase of intracellular nitric oxide levels. Our results indicated that theaflavins had protective effect against 6-hydroxydopamine induced apoptosis at low concentrations, possibly through inhibition of reactive oxygen species and nitric oxide production.     

普伐他汀对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨普伐他汀干预对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)凋亡的影响及其相关细胞信号传导通路。方法:应用普伐他汀干预体外培养的第6代人MSCs,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测作用前后ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt通路蛋白的表达及磷酸化情况。将10μmol/L普伐他汀预处理人MSCs 1 h后,换用含1 mmol/L H2O2的完全培养基培养1 h,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;进一步在普伐他汀干预前用特异的细胞信号通路抑制剂或激动剂阻断或激活ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt途径,观察其对普伐他汀作用的影响。结果:普伐他汀可使人MSCs的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,使p38MAPK通路磷酸化水平降低,而其对人MSCs的ERK1/2通路和总Akt、总p38MAPK蛋白水平无显著影响。普伐他汀能抑制H2O2诱导的人MSCs的凋亡(P<0.05),PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002预处理后这种作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对这种作用影响不显著。结论:普伐他汀可激活人MSCs的PI3K/Akt通路,抑制p38MAPK通路,并可抑制H2O2诱导的人MSCs凋亡。PI3K/Akt通路的激活参与了其抗凋亡作用的调控。