GABAA受体激动剂和拮抗剂对大鼠梨形皮质,海马Fos表达？…

为探讨γ－氨基丁酸受体（ＧＡＢＡＡ）与癫痫发病机制之间的关系,应用免疫组化技术结合脑电图就ＧＡＢＡＡ受体激动剂蝇蕈醇对马桑内酯致痫大鼠大脑皮质,海马Ｆｏｓ表达的影响进行研究,并与ＧＡＢＡＡ受本拮抗剂荷包牡丹碱致痫大鼠的Ｆｏｓ表达进行比较。结果显示：侧脑室注射马桑内酯诱发癫痫发作后１ｈ,双侧齿状回颗粒细胞层,海马锥体细胞怪及注射侧梨形皮质有大量Ｆｏｓ阳性细胞,对侧梨形皮质未检测到Ｆｏｓ表达．;     

GABAA受体激动剂和拮抗剂对大鼠梨形皮质、海马 Fos表达的影响及其与癫痫发病的关系

In order to investigate the relationship between epileptogenetic mechanism and GABA_A-receptor, the effect of GABA_A-receptor agonist (muscimol) on Fos protein expression were studied in cerebral cortex and hippocampus of epileptic rats induced by coriaria lactone (CL) by using immunohistochemical staining, and the Fos expression was compared with that of epileptic rats induced by GABA_A -receptor antagonist (bicuculline). The results showed that there were a lot of Fos-positive cells in bilateral granular cellular layer of dentate gyrus, hippocampal pyramidal cellular layer and piriform cortex of injecting side 1h after seizure induced by injecting CL into the lateral ventricle. Fos expression was not observed in contralateral piriform cortex. Muscimol injected into the lateral ventricle inhibited remarkably Fos expression in the dentate gyrus, hippocampal gyrus, while the piriform cortex was not affected. The stronger Fos expression in bilateral piriform cortex but no expression in the dentate gyrus and hippocampus was observed 1h after seizure induced by bicuculline. The electroencephalogram (EEG) confirmed that CL and bicuculline induced spike, slow complex or sharp, slow complex waves, whereas muscimol inhibited these epileptic discharges. These data suggested that GABA_A receptor might play an important role in epileptogenesis.     

GABAA受体拮抗剂对吸入麻醉药催眠作用的影响

目的　分析吸入麻醉药乙醚、安氟醚、异氟烷和七氟醚催眠作用与GABAA 受体的关系。方法　给小鼠分别腹腔注射麻醉剂量的乙醚、安氟醚、异氟烷、七氟醚 ,待小鼠翻正反射消失后 1min ,静脉注射一叶秋碱 5mg/kg或侧脑室注射荷包牡丹碱每只 0 .5μg /10 μl,对照组分别注射同等容积的生理盐水或人工脑脊液 ,观察并记录各组的翻正反射消失持续时间。结果　一叶秋碱和荷包牡丹碱对上述 4种麻醉药的翻正反射消失持续时间均无明显影响 (P >0 .0 5)。结论　GABAA 受体并非乙醚、安氟醚、异氟烷和七氟醚催眠作用的主要靶位     

非NMDA受体拮抗剂对大鼠牙髓伤害性刺激诱导的延髓Fos表达

目的 研究兴奋性氨基酸非ＮＭＤＡ受体在牙髓伤害性信息传递中的作用,为揭示牙痛的产生机制打下基础。方法 将实验动物随机分为４组。第１组单纯给予机械穿髓刺激;第２组预先侧脑室注射非ＮＭＤＡ受体拮抗剂ＣＮＱＸ,再给予相同的穿髓刺激;第３组只行ＣＮＱＸ侧脑室注射,不予穿髓刺激;第４组为正常对照组。动物存活相同时间后取延髓做Ｆｏｓ蛋白免疫组化反应。观察３组动物Ｆｏｓ免疫反应阳性细胞的数量与第１组比较没有显著     

腺苷受体激动剂对致痫大鼠海马神经细胞bcl-2,Bax基因表达的影响

目的　观察腺苷A1受体激动剂 2 氯化腺苷 (2 CAdo)对马桑内酯致痫大鼠海马神经细胞bcl 2 ,Bax基因表达的影响。方法　采用马桑内酯诱导癫痫发作模型 ,通过免疫组织化学方法检测bcl 2 ,Bax蛋白来观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的动态变化及 2 CAdo对其的影响。结果　海马CA1区癫痫发作后 2 4hbcl 2表达量增多 ,4 8h明显下降 ,72h仅有少量表达 ,7天时其表达量再度升高。而Bax表达则在癫痫发作 2 4h开始增多 ,4 8h显著增多 ,72h表达达高峰 ,之后逐渐减少 ,7天表达量最少。给予 2 CAdo组各相应时间点bcl 2表达量较对照组明显增高 (P<0 .0 5 ) ,Bax表达量较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,经统计学处理均有显著性差异。结论　 2 CAdo减少癫痫发作后海马神经细胞的凋亡 ,对神经细胞有保护作用     

腹腔注射蝇蕈醇和荷包牡丹碱对异丙酚小鼠翻正反射的影响

目的：观察腔注射γ-氨基丁酸A（GABAA）受体激动剂蝇蕈醇和（或）其拮抗剂荷包牡丹碱对异丙酚致小鼠翻正反射消迭持续时间及ED50的影响。方法：①40只小鼠随机分为4组,每组10只,分别腹腔注射生理盐水10ml/kg、蝇蕈醇0．5mg/kg、荷包牡丹碱4mg/kg。蝇蕈醇0．5mg/kg 荷包牡丹碱4mg/kg,15min后静注20mg/kg异丙酚,记录小鼠翻正反射消失持续时间。②57只小鼠随机分为4组,如下腹腔注射药物后,测定异丙酚使小鼠翻正反射消失的ED50值。结果：腹腔注射0．5mg/kg蝇蕈醇明显延长异丙酚致小鼠翻正反射消失的时间（P＜0．05）;并降低ED50值（P＜0．05）;4mg/kg荷包牡丹碱对异丙酚致小鼠翻正反射消失的持续时间和ED50值皆无明显影响,但可部分拮抗蝇蕈醇对异丙酚麻醉的增强作用。结：GABAA受体可能不是异丙酚全麻作用的主要靶位。     

音乐对大鼠海马 GABAA受体表达的作用

目的研究音乐刺激对海马神经元GABAA受体表达的影响.方法在大鼠生长发育的不同时期,给予音乐刺激,用免疫组织化学和PCR技术及图像分析系统定量研究音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体及其编码该受体的mRNA的表达.结果音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体免疫染色的光密度比对照组增加,在CA1区分别从对照组(32.21±4.23)增加到持续音乐组(44.72±6.21),生后音乐组(43.61±6.12),胎期音乐组(34.34±4.54);编码受体的mRNA表达相对量增加,从对照组(0.67±0.23)增加到持续音乐组(0.99±0.34),生后音乐组(0.92±0.32),胎期音乐组(0.73±0.25),这些变化以持续音乐刺激组最明显,生后音乐刺激组次之,胎期音乐刺激组和对照组最弱.结论音乐刺激能增强大鼠海马神经元GABAA受体及编码该受体的mRNA表达,其增强作用具有刺激时间依赖性关系.     

癫痫状态大鼠海马GABA、GABAA受体α5亚单位表达的动态变化

目的 探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)及GABAA受体α5亚单位在癫痫持续状态(status epilepticus, SE)大鼠海马中的变化规律及其与自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure, SRS)的关系.方法 采用匹罗卡品诱导大鼠SE模型,用免疫组化技术检测大鼠SE后4个时相点即6、48、72 h和7 d海马GABA和GABAA受体α5亚单位表达的动态变化.结果 PILO组大鼠SE后6 h至7 d,海马内GABA能神经元持续减少,尤其以SE后48 h至7 d 改变最为明显,并与对照组比较差异极显著(P＜0.01);SE后6 h,PILO组大鼠海马GABAA受体α5亚单位的表达开始下降,SE后72 h至7 d,GABAA受体α5亚单位的表达显著降低,并明显低于对照组(P＜0.01).结论 GABA及GABAA受体Rα5亚单位表达的下调可能是SRS产生的重要因素之一.     

海藻酸诱导复杂部分发作癫痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的表达

目的:研究海藻酸(KA)致痫大鼠海马GABAA受体α1亚单位的动态表达水平以及加巴喷丁(GBP)干预对它们的影响,探讨复杂部分发作癫痫(CPS)的发生机制,为开发针对GABA受体亚单位水平的新型抗癫痫药物(AEDs)提供理论依据。方法:成年雄性Wistar大鼠海马CA3区注射2μgKA建立复杂部分发作模型,采用免疫组化SABC法检测癫痫大鼠海马各区GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)的动态表达水平,并用GBP干预癫痫的发作观察GBP对GABAARα1表达的影响。结果:KA致痫后海马CA1区、CA3区GABAARα1表达呈先升后降趋势,齿状回(DG)表达水平则逐渐增加。GBP对癫痫早期GABAARα1表达无直接影响。结论:在KA诱导的CPS模型中,GABAARα1表达减少和由此所引起的抑制功能减弱,可能是癫痫发生的一种分子机制。     

谷氨酸受体在大鼠c—fos基因的表达及其与癫痫易感性的关系

为探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体在ｃ－ｆｏｓ基因表达及其与癫痫易感性的关系，我们以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法测定结果显示：（１）外源性ＮＭＤＡ可诱导脑细胞ｃ－ｆｏｓ基因的ｍＲＮＡ表达；竞争性或非常竞争性ＮＭＤＡ受体拮抗剂可完全阻断ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达。（２）ＮＭＤＡ诱导脑内ｃ－ｆｏｓ的ｍＲＮＡ表达随神经元发育呈上升趋势，于体外培养２４天达高峰。（３）在发育中，听源性癫痫易感大鼠脑     

马桑内酯致痫时大鼠大脑皮层和海马诱发电位的特征

采用皮层贴敷马桑内酯的方法致痫大鼠。电刺激一侧坐骨神经,引导对侧皮层感觉运动区和海马ＣＡ１－ＣＡ２区诱发电位,以了解大鼠致痫状态下皮层和海马诱发电位的特征。结果显示,在皮层脑电图和海马电图出现高频痫样放电期间,皮层诱发电位振幅高达（１．８１±０．７２）ｍＶ,海马诱发电位为（１．８３±０．２９）ｍＶ,但二者变化方向相反。结果提示,皮层和海马诱发电位高振幅变化与脑电图、海马电图痫样放电的频率相关。     

马桑内酯致痫大鼠皮层及海马神经元的放电模式

在腹腔注射马桑内酯所致的急性癫痫和慢性点燃癫痫大鼠模型上，观察了大脑皮层和海马神经元膜电位的变化及放电模式。结果显示：皮层脑电图出现明显的阵发性痫样放电，胞内微电极记录皮层及海马神经元放电的模式为：①单纯去极化；②去极化并伴有阵发性或持续性放电；③去极化与超极化交替出现等。表明马桑内酯可以引起大脑皮层及海马神经元生物电活动的改变，其改变形式不一，但主要引起去极化。     

实验性局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白的表达

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白表达的意义及其机制。方法　采用免疫组化法观察Fos蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮层和基底节区的动态变化。结果　Fos蛋白在大脑中动脉阻断 1h后 ,随再灌注时间延长其分布不同。基底节区持续时间长 ,阳性细胞多 ,而皮层持续时间短 ,阳性细胞少。其中再灌注 90min ,Fos蛋白表达最显著。大脑中动脉供血中心区皮层几无表达。结论　Fos蛋白的表达与神经细胞存活密切相关 ,出现Fos蛋白表达的区域神经元易于耐受缺血性损害而存活 ,可能是神经细胞自我保护机制之一 ,Fos蛋白的表达存在扩散抑制     

大鼠脑挫裂伤后Fos蛋白表达及硫酸镁的作用

目的　通过鼠脑外伤模型 ,在脑的不同部位检测Fos蛋白表达。并在大鼠脑外伤后早期用MgSO4 治疗 ,通过对Fos蛋白的检测 ,探讨MgSO4 的作用机制 ,为今后脑外伤患者早期用MgSO4 治疗提供理论依据。方法　用Feeney脑挫裂伤模型 ,5 0g× 12cm的能量作用于鼠脑顶部皮质 ,造成脑挫裂伤。脑外伤后 30min、1h、2h、4h分别在尾壳核、海马、损伤周顶部皮质测定Fos蛋白。大鼠脑外伤后 10min股静脉注射MgSO4 ,在伤后 2h检测Fos蛋白表达。结果　 ( 1)外伤后 30min ,只有损伤周顶部皮质出现明显Fos蛋白表达 (P <0 .0 1)。脑外伤 1h、2h、4h伤侧尾壳核、损伤周顶部皮质、双侧海马皆出现Fos蛋白高表达 (P <0 .0 1)。Fos蛋白表达以 2h时最为明显。 ( 2 )MgSO4 治疗后以上 3个部位的Fos蛋白表达与生理盐水假治疗组相比有明显下调 (P <0 .0 1)。结论　脑外伤可诱发Fos蛋白表达 ,脑外伤后 10min ,MgSO4 治疗 ,能下调Fos蛋白表达。表明脑外伤后早期MgSO4 治疗 ,能明显减轻脑外伤后继发性脑损伤     

穴位埋药线对难治性癫痫大鼠癫痫样波的发放及大脑海马和颞叶皮质多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp表达的影响

目的：探讨穴位埋药线对难治性癫痫大鼠癫痫样波的发放及大脑海马和皮质中多药耐药相关蛋白 MRP1、P-gp表达的影响。方法（1）造模：大鼠海马区注射红藻氨酸（KA）,经过点燃和再次亚惊厥剂量点燃造模,且脑电图检测有癫痫样波发放者筛选为造模成功耐药难治性癫痫模型鼠。（2）分组与处理：普通线组（PTX组）与药线组（YX组）,先埋一侧穴位,间隔15 d后埋对侧穴位。拉莫三嗪组（LTG组）按照人用拉莫三嗪剂量换算灌胃大鼠,每日2次;空白对照组（Normal组）和模型组（Model组）给予灌胃同等体积的蒸馏水,均灌胃30 d。（3）采用VEEG-1518K型数字化视频脑电监测分析系统检测脑波基本节律的波幅与频率变化。（4）标本处理与检测：采用免疫组织化学技术,检测多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp在海马与颞叶皮层不同部位的表达。结果各组治疗前比较差异无统计学意义（P＞0.05）;各组治疗后,YX组、LTG 组分别与Model 组、PTX组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,YX组与LTG组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与Model组相比,LTG组和YX组干预后能降低致痫鼠EEG 痫波放电持续时间与发放频率以及海马区和颞叶皮质区多药耐药蛋白 MRP1、P-gp 的表达水平（P<0.05或P<0.01）;YX组与PTG组比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论（1）埋药线使KA致痫鼠EEG痫波放电持续时间缩短,发放频率减少。（2）KA点燃难治性癫痫模型大鼠大脑海马区存在多药耐药蛋白MRP1、P-gp的表达较皮质区明显升高。（3）埋药线逆转与降低致痫鼠海马区多药耐药蛋白MRP1、P-gp的表达水平,可能是其抗癫痫生物学作用机制之一。     

一叶秋碱和荷包牡丹碱催醒作用的实验研究

目的分析静脉麻醉药硫喷妥钠、羟丁酸钠、依托咪酯、异丙酚和氯胺酮全麻效应与GABAA受体的关系.方法给小鼠分别腹腔注射麻醉剂量的上述药物,待小鼠翻正反射消失后1min,静脉注射一叶秋碱5mg/kg(0.1ml/10g)或侧脑室注射荷包牡丹碱0.3μg(10μl),对照组分别注射同等剂量的生理盐水或人工脑脊液,观察并记录各组的翻正反射消失持续时间.结果一叶秋碱使依托咪酯的翻正反射消失持续时间由(12.8±7.1)min缩短为(6.5±2.8)min(P＜0.05),却不能缩短硫喷妥钠、羟丁酸钠、异丙酚和氯胺酮麻醉小鼠的翻正反射消失持续时间;而荷包牡丹碱对于上述5种静脉麻醉药均不能缩短其翻正反射消失持续时间.结论一叶秋碱对依托咪酯的全麻效应有一定的非特异性拮抗作用,但不能拮抗硫喷妥钠、羟丁酸钠和异丙酚的全麻效应;荷包牡丹碱对于这5种静脉麻醉药的全麻效应均无拮抗作用.结果提示GABAA受体GABA位点并非硫喷妥钠、羟丁酸钠、托咪酯、异丙酚和氯胺酮全麻作用的主要靶位.     

丹红注射液对颞叶癫痫大鼠海马可塑性的影响

目的研究丹红注射液对氯化锂-匹罗卡品点燃慢性颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy,TLE）大鼠海马神经元及GFAP表达的干预作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫痫大鼠模型,将50只造模成功的颞叶癫痫大鼠随机分为颞叶癫痫组（生理盐水10ml/kg腹腔注射）及丹红治疗组（丹红注射液10ml/kg腹腔注射）,另选10只大鼠作为正常对照组;每组大鼠随机分为5个不同时间点：24h、3d、7d、15d及30d。采用尼氏染色及免疫组化染色,检测每组大鼠不同时间点海马CA1区神经元存活数目及GFAP表达。结果与正常对照组相比,颞叶癫痫组大鼠海马CA1区存活神经元数目明显减少,海马GFAP表达显著增多（P〈0.05）;与颞叶癫痫组相比,丹红治疗组大鼠海马CA1区存活神经元数目明显增多,海马GFAP表达显著减少（P〈0.05）。结论丹红注射液可以减轻颞叶癫痫大鼠海马神经元脱失及减少GFAP表达,有助于减轻大鼠发作程度及阻断慢性颞叶癫痫的形成和发展。