采用稀释法评价狼疮抗凝物对凝血因子活性检测的干扰

目的 探讨稀释法在评价狼疮抗凝物(LAC)对凝血因子活性检测的干扰中的应用.方法 选取该院健康体检者30例作为作为对照组,将这30例受试者的混合血浆标本分别按1:1、1:21、1:22、1:23、1:24、1:256种不同稀释比例配制成不同浓度的血浆,检测标本中的凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ活性,将其与所对应稀释度的理论值作线性相关分析.选取于该院住院治疗的LAC阳性且凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)均延长的抗磷脂综合征患者6例作为LAC阳性组.将6例LAC阳性组患者的血浆标本按同样的方法进行梯度稀释并对上述8种凝血因子的活性进行检测.结果 对照组8种凝血因子活性检测值与理论值均呈直线相关(R2≥0.90,P<0.05).随着稀释倍数的增加,内源性凝血因子活性随之升高,能恢复到大致正常水平,且升高到一定水平时不再随着稀释倍数的增加而继续升高.结论 病理性抗凝物质如LAC可对内源性凝血因子活性检测造成干扰,稀释法可通过降低干扰物质的滴度来获得更加准确的凝血因子检测值.     

FⅧ抑制物与狼疮抗凝物对凝血因子检测结果的影响

目的 分析与探讨内源性凝血因子活性假性减低的原因。方法 回顾性分析我院2022年2月至2023年2月门诊与住院病例并分为2组,FⅧ抑制物阳性致内源性凝血因子活性假性减低组6例;狼疮抗凝物（LAC）阳性致内源性凝血因子活性假性减低组15例,检测相关凝血指标,分别将2组稀释3个梯度（1∶2、1∶4、1∶8）后检测内源性凝血因子,对比分析稀释前后数据。结果 FⅧ抑制物组：6例患者活化部分凝血活酶时间（APTT）延长显著且纠正试验均不纠正;内源性凝血因子活性均减低,其中FⅧ活性减低最显著,经3个梯度稀释后FⅧ活性变化均较小,FⅨ、FⅪ、FⅫ活性均恢复为接近正常水平;LAC组：稀释前后FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性结果差异均有统计学意义（P<0.05）且均能恢复至接近正常水平。结论 FⅧ抑制物阳性与LAC阳性均可对内源性凝血因子活性检测结果造成干扰并导致其出现假阳性,但FⅧ抑制物阳性组稀释3个梯度后FⅧ检测结果变化较小,未恢复为接近正常水平,而LAC阳性组FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性均恢复为正常水平。     

低凝血酶原血症-狼疮抗凝物综合征1例实验室检查结果分析

<正>低凝血酶原血症-狼疮抗凝物综合征(HLAS)是一种狼疮抗凝物(LAC)阳性同时伴有凝血酶原(凝血因子Ⅱ)降低的疾病,该病典型临床表现为出血。近年来关于HLAS的相关报道甚少,一方面由于该病是一种罕见的疾病,临床医生对该病的诊断和治疗缺乏经验,另一方面部分该病患者临床表现不典型,容易与其他疾病混淆,造成误诊。本文对本院诊断的1例HLAS患者的实验室检查结果进行分析,以期为临床诊疗提供参考依据。1 临床资料患儿,女,3岁,     

肾炎患者伴狼疮抗凝物-低凝血酶原综合征1例

<正>狼疮抗凝物-低凝血酶原综合征(Lupus anticoagulant hypoprothrombinemia syndrome,LAHS)是一种罕见的临床疾病，表现为狼疮抗凝物(Lupus anticoagulant,LAC)阳性同时伴有凝血酶原(凝血因子Ⅱ，FⅡ)降低，该病典型的临床表现为出血^[1-4]，实验室诊断基于3个基本指标，即LAC阳性、FⅡ活性降低，FⅧ抑制物阴性^[5]。近年来国内报道仅十余例LAHS^[6-9]，该病在临床上非常少见，临床医生对该病的诊断和治疗缺乏经验，部分患者临床表现不典型，容易与其他疾病混淆，造成误诊。1例慢性肾小球肾炎患者因需行肾脏穿刺活检来我院诊治，经分析该患者合并狼疮抗凝物-低凝血酶原综合征，报道如下。     

狼疮抗凝物实验室规范化检测进展

狼疮抗凝物(lupus anticoagulants,LAC)是一类针对带负电荷磷脂或磷脂与蛋白质复合物的自身抗体,其持续阳性预示动静脉血栓以及习惯性流产等不良事件的发生,此外可作为抗凝治疗效果的监测指标。但由于分析前、分析中诸多因素(如样本的准备、筛查试验的检测试剂和方法选择)影响检测结果的准确性和重复性,其临床应用效果不太理想。本文依据国际血栓与止血学会(ISTH)、英国血液学标准委员会(BCSH)以及临床实验室标准化协会(CLSI)等相关指南及文献,对LAC实验室检测相关问题作一综述。     

三种稀释蝰蛇毒磷脂时间试验检测狼疮抗凝物分析性能评估

摘要:目的?对3种稀释蝰蛇毒磷脂时间试验(dRVVT)的狼疮抗凝物(LA)检测方法进行性能评价，比较不同系统间检测结果的一致性，并初步探讨不同检验流程对检测结果的影响。方法?按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件及临床血液学检测常规项目分析质量文件(WS/T 406—2012)，对3种LA检测方法的精密度、携带污染率进行评价，验证3种方法检测LA的参考区间(RI)/cut-off值，并分析检验结果一致性和不同检验流程对检测结果的影响。结果?3种dRVVT检测方法重复性以CV表示为0.44%～1.69%；期间精密度以CV表示，为1.43%～2.43%。3种检测方法携带污染率绝对值<3.00%。系统1和2的RI验证通过，系统3验证未通过。3种不同系统筛选试验、确认试验及比值间结果差异有统计学意义(P=0.000)。3种不同系统阴阳性判断结果间差异有统计学意义(χ2=11.333，P=0.000)。系统3以说明书推荐流程分析结果，与筛选/确认比值(R)或标准化比值(NR)结果表示方式相比，53例阴性结果中2例为假阴性。结论?3种dRVVT检测系统性能良好，适于临床常规使用。但各实验室应验证或建立适合本实验室的RI/cut-off值，确定合理的检测流程，关注检测分析前中后影响因素，合理解释检测结果。     

某院狼疮抗凝物检测阳性人群分布特征分析

目的 分析首都医科大学附属北京天坛医院狼疮抗凝物(LA)检测阳性人群分布特征。方法 回顾性收集2016年1月至2022年10月于该院就诊并行实验室LA检测人群的信息,根据患者年龄、性别、疾病谱及阳性检出情况进行分类汇总,共纳入3 403例患者(观察组)。另选取同期来该院进行体检的健康人群作为对照组。LA检测分别采用二氧化硅凝固时间(SCT)法和改良的稀释蝰蛇毒时间(dRVVT)法并根据其阳性检出情况分为dRVVT阳性,SCT阳性及双阳。结果 两组LA检测人群平均年龄比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组检出LA阳性患者384例,检出率为11.28%,对照组检出LA阳性患者146例,检出率为13.33%,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组LA阳性患者的男性占比为45.57%,低于对照组LA阳性患者的男性占比(87.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 分析LA检测阳性人群分布特征对患者病因学探索及进一步预防血栓事件的发生具有重要的意义。     

狼疮抗凝物检测的性能验证及大连地区参考区间建立

目的对用稀释蝰蛇毒时间(DRVVT)检测狼疮抗凝物(LA)方法进行性能验证,并建立此方法在大连地区的参考区间,为临床实验室检测LA提供参考依据。方法按ISO15189文件要求对DRVVT法检测LA日内精密度、日间精密度、准确性、携带污染率、试剂更换批号比对在CS-5100血凝仪上进行性能验证,并按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP28文件要求对138例表观正常体检健康者用DRVVT法进行LA检测,建立参考区间。结果 LA检测筛选、确证时间、LA比值日内精密度、日间精密度、携带污染率、准确性、试剂更换批号比对均符合ISO15189相关文件要求。筛选、确证试验、LA比值参考区间分别为29.3～40.3s、28.7～34.7s、0.96～1.22,与试剂说明书有差异(31.0～44.0s、30.0～38.0s、0.80～1.20)。LA比值临界值(1.22)高于试剂说明书(1.20)。结论 DRVVT法检测LA性能验证符合ISO15189文件要求,可以用于临床。但大连地区参考区间与说明书有差异,各地应建立自己的参考区间。     

儿童低凝血酶原血症-狼疮抗凝物综合征1例并文献复习

低凝血酶原血症-狼疮抗凝物综合征(hypoprothrom-binemia-lupus anticoagulant syndrome,HLAS)是一种特殊罕见的病症,主要见于儿童,表现为狼疮抗凝物(LA)阳性的患儿体内具有非中和性的抗凝血酶原抗体(antiprothrombin, aPT),该抗体与凝血酶原(proth...     

狼疮抗凝物阳性患者临床数据横断面研究

目的对狼疮抗凝物阳性患者进行临床数据横断面研究。方法采用稀释的蝰蛇毒时间(dilute Russell viper venom time,dRVVT)和硅土凝固时间(silica clot time,SCT)进行血浆狼疮抗凝物检测。对患者的年龄、性别、疾病类型、抗磷脂抗体数据和抗凝用药情况进行分析。结果 LA阳性患者总体年龄为35(14～88)岁,其中男性为53(17～69)岁,女性为34(14～88)岁,两组间差异有统计学意义(U=5 658.5,P=0.002)。401例患者中包括结缔组织病182例(45.4%),病理妊娠及不孕症115例(28.7%),抗磷脂综合征44例(11.0%),静脉血栓栓塞症27例(6.7%),心脑血管疾病19例(4.7%),免疫性血小板减少症或全血细胞减少14例(3.5%);在341例结缔组织病、病理妊娠及不孕症和结缔组织病患者中,男性7例,女性334例;在46例静脉血栓栓塞症和心脑血管疾病患者中,男性37例,女性9例。401例患者中,dRVVT和SCT均呈阳性者166例(41.4%),仅dRVVT阳性者149例(37.2%),仅SCT阳性者86例(21.4%);结缔组织病在上述3组每组中的所占比例率均为最高(分别为49.4%、39.6%和47.7%)。双阳性组、dRVVT(+)组和SCT(+)组的各项抗磷脂抗体阳性率间差异均无统计学意义(P均0.05)。结论 LA阳性患者之间存在明显的年龄、性别和疾病类型特征差异,检测前应充分评估患者是否符合检测适应证,且应同时检测dRVVT和SCT以避免漏诊,此外,还要充分了解患者的用药情况,必要时选择适合的采血时间进行复检。     

稀释法在消除溶血对凝血检测干扰中的应用

目的探讨稀释法消除溶血对凝血检测结果影响的可行性。方法选取外观正常凝血标本65例,取35例标本血浆2倍稀释后与未稀释血浆检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)值,统计学线性分析并建立直线回归方程。另30例标本注射器反复抽吸使其溶血后,溶血前后凝血检测结果行统计学分析;并对溶血后标本2倍稀释,稀释后结果通过回归方程换算出的结果与溶血前原检测结果进行比较。结果标本稀释前后血浆的PT和APTT两项指标检测值具有线性相关特征。溶血前后两项指标测定结果显示:溶血后测定值高于溶血前,差异有统计学意义(P<0.01)。溶血标本2倍稀释后两项指标检测值经过回归方程换算后所得数据与未溶血的原检测数据相比并无显著统计学差异(P>0.05)。结论临床上对于溶血标本PT和APTT的检测,采用稀释法后能较好消除溶血对检测结果造成的影响。     

稀释回归法在脂血标本凝血检测中的应用探讨

目的探讨稀释回归法在脂血标本凝血凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)检测中应用的可行性。方法随机收集昆明市延安医院40例门诊及住院外观正常(无脂血、无黄疸、无溶血)凝血标本,分别检测原血浆和3倍、5倍稀释后血浆的PT、APTT两项指标,将稀释前与稀释后两组数据进行线性回归分析,得到各指标的回归方程。另外收集昆明市延安医院门诊及住院外观脂血标本33例,根据三酰甘油(TG)的不同浓度分成3组,轻度脂血组(1.7mmol/L≤TG11.0mmol/L)12例,中度脂血组(11.0mmol/L≤TG20.0mmol/L)13例,重度脂血组(TG≥20.0mmol/L)8例,检测3倍稀释血浆和高速离心后血浆的PT、APTT两项指标,并将稀释后结果带入正常凝血标本的回归方程所得结果与高速离心法结果进行比较。结果正常凝血标本5倍稀释血浆绝大部分标本无法检测出结果,所以取3倍稀释血浆稀释前后结果进行线性回归分析得到PT、APTT的回归方程。3组脂血标本3倍稀释后的PT、APTT两项指标经过相应回归方程计算,所得结果与原血浆高速离心后检测结果的差异均无统计学意义(P0.05)。结论稀释回归法可以用于临床脂血标本的凝血PT和APTT检测。     

Update of the guidelines for lupus anticoagulant detection

Summary.  One of the conclusions of the subcommittee meeting on Lupus Anticoagulant/Phospholipid dependent antibodies, held in Geneva on 2007, was the need to update the guidelines on Lupus Anticoagulant (LA) detection. Particular emphasis was given to several aspects discussed in this official communication. A new paragraph is dedicated to the patient selection, and aims to minimize inappropriate requests for LA testing. Modalities for blood collection and processing are fully delineated and the choice of tests is limited to dRVVT and a sensitive aPTT. Calculation of cut-off values for each diagnostic step are clearly stated. A final paragraph reports the interpretation of the results in general and in particular situations.     

Evaluation of coagulation factor abnormalities in long-acting anticoagulant overdose

Abstract

Newer Rodenticides of the long-acting anticoagulant or “superwarfarin” class are gaining popularity. Since few cases of severe, prolonged anticoagulation after ingestion have been reported, the course of toxicity is not precisely understood. In this case of an intentional ingestion of brodifacoum, a longitudinal analysis of specific coagulation factor derangements was carried out in an attempt to guide a future treatment strategy for this type of toxicity.

Results of this analysis demonstrated a profound decrease in levels of factors II, VII, IX, and X, lasting at least 43 days post ingestion. Treatment with subcutaneous vitamin Kl in doses up to 100 milligrams per day was without complication and was effective in reversing the coagulopathy produced by brodifacoum.     

Analytical method for evaluation of coagulation activity of factor VIII

A single-stage method is used for evaluating factor VIII (fVIII) clotting activity. This method is based on evaluation of activated partial thromboplastin time with fVIII-deficient plasma as the substrate. The activity of fVIII in the plasma is estimated by the graphic analytical method, which is difficult and not sufficiently accurate. An analytical method for estimating the activity of fVIII is validated. The authors prove the adequacy of empirical model used for evaluation of fVIII activity on the basis of results of processing of a vast scope of experimental data. The range of values for this parameter is -6.00 +/- 0.16.     

Effects of the oral,direct factor Xa inhibitor edoxaban on routine coagulation assays,lupus anticoagulant and anti-Xa assays

Edoxaban is an oral direct factor Xa inhibitor for prophylaxis and treatment of thromboembolic disorders. The effects on common coagulation assays are clinically valuable information and in certain clinical situations a quick assessment of the anticoagulant is wanted. Our aim was to investigate the effect of edoxaban on routine coagulation methods and evaluate anti-Xa assays, commonly used for other direct factor Xa inhibitors, for estimation of the drug concentration. Edoxaban was spiked to plasma samples from healthy subjects in the concentration range 0–742 µg/L and analyzed using different reagents for activated partial thromboplastin time (APTT) and prothrombin time (PT). Assays for antithrombin, activated protein C resistance, lupus anticoagulant (LA) and chromogenic anti-Xa assays were also included. Edoxaban displayed similar effects in vitro to other oral direct Xa inhibitors. The concentration needed to double the coagulation time varied between assays and reagents; 539–758 µg/L for the APTT and between 329 and 2505 µg/L for the PT. Edoxaban gave false high antithrombin activities in assays based on Xa-inhibition. Two integrated assays for LA, both based on activation with dilute Russell’s viper venom, displayed different results. Chromogenic anti-Xa assays displayed linear dose-response curves with edoxaban up to approximately 500 µg/L. In conclusion, therapeutic concentrations of edoxaban variably affect different coagulation assays, and even different reagents within an assay group. In comparison with other oral Xa-inhibitors, the in vitro effects of edoxaban were more similar to rivaroxaban than apixaban. For measurement of edoxaban concentration in plasma, it is possible to use the chromogenic anti-Xa assays.     

A modification of a method of evaluating the coagulation activity of factor VIII

The authors suggest that factor VIII activity be calculated relative to the value of activated partial thromboplastin time of substrate hemophilic plasma. This value is determined by replacing the tested plasma in the reaction mixture with veronal-acetate buffer. This modification has been developed to eliminate the shortcomings of the single-step technique for measuring this factor activity, that are explained by the use of nonstandard donor plasma and by the necessity to have such plasma during the investigation. A formula has been derived for the calculation of factor VIII coagulation activity in hemophilic patients and the advantages of the suggested modification are demonstrated.     

狼疮样抗凝物质对正常妊娠妇女凝血功能的影响

目的探讨狼疮样抗凝物质(LA)对妊娠妇女凝血功能的影响.方法采用血浆蝰蛇毒时间(RVVT)测定40例正常妊娠妇女及32例非孕正常妇女的LA比值,同时检测血浆凝血酶原时间(PT),活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)含量.结果妊娠组妇女LA比值明显高于对照组(P＜0.01),PT和APTT缩短,FIB升高(P＜0.01).妊娠组LA比值与PT、APTT和FIB的相关性,相关系数r分别为-0.63,-0.72,0.71(P＜0.01).结论妊娠妇女血液凝固性增强在一定程度上与LA增多有关.     

MODS抗凝治疗中凝血因子X检测的意义

目的探讨多器官功能障碍综合症(MODS)患者在低分子量肝素抗凝治疗过程中凝血因子X和凝血参数监测的意义.方法采用ACL 200血凝仪连续监测(0,1h,24h,48h,96h)MODS患者血浆凝血因子X活性、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)的变化,分别将使用低分子量肝素抗凝后1h,24h,48h,96h血浆凝血因子X活性、PT、APTT与用药前比较.结果使用低分子量肝素抗凝治疗后1h,PT、APTT均延长,凝血因子X活性明显下降;低分子量肝素维持量(第24h,48h,96h)时,凝血因子X活性各测定值之间无显著性差异(P＞0.05),但与用药前比较,具有非常显著性差异(P＜0.01),而PT、APTT与用药前比较无显著性差异.结论在低分子量肝素抗凝治疗过程中,监测凝血因子X和凝血参数非常必要,且监测凝血因子X较监测PT、APTT更为有用.检测血浆凝血因子X活性是监测MODS患者低分子量肝素抗凝治疗过程中十分有用的方法.