癫(癎)患者血浆中微小RNA-7和微小RNA-146a的表达及与脑电图异常的关系

目的 探讨癫(癎)患者血浆中微小RNA(miR)-7、miR-146a的表达特点,分析其与脑电图异常的相关性.方法 选择2017年1月至2020年10月广州医科大学附属脑科医院神经科收治的105例癫(癎)患者(癫(癎)组),根据全数字化视频脑电图仪检测结果将其分为轻度异常组(36例)、中度异常组(38例)、重度异常组(...     

微小 RNA?204?3p通过靶向调控 Krüppel样因子 6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨微小 RNA?204?3p(miR?204?3p)对高糖诱导小鼠足细胞 MPC5损伤的保护作用及其分子机制。方法采用高糖(30 mmol/L D?葡萄糖)处理 MPC5细胞。实时定量 PCR(qPCR)检测细胞中 miR?204?3p与锌指蛋白 Krüppel样因子 6(KLF6) mRNA水平。 MPC5细胞分为 NG组(正常对照)HG组(高糖刺激)HG+miR?204?3p组、 HG+miR?NC组、 HG+si?KLF6组、 HG+si? NC组, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组和HG+m,iR?204?3p+pcDNA组,。蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved?caspase?3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析 miR?204? 3p和 KLF6的靶向关系。结果与正常对照相比,高糖可显著降低 MPC5细胞中 miR?204?3p表达量［(0.41±0.04)比(1.02± 0.08)］上调 KLF6 mRNA［(2.86±0.27)比(1.03±0.08)］和蛋白［(0.89±0.08)比(0.46±0.04)］水平,还可上调 KLF6、desmin［(0.81± 0.07)比(,0.34±0.03)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白表达及细胞凋亡率［(22.46±2.08)%比(5.26±0.64)%］下调 synaptopodin蛋白［(0.34±0.03)比(0.76±0.07)］及 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。与 HG+miR?NC组比较, HG+miR?204?3p组明,显提高 synaptopodin［(0.67±0.06)比(0.32±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.41±0.04)比(0.83±0.08)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白水平及细胞凋亡率［(11.25±1.65)%比(24.58±2.47)%］(P＜0.05)。与 HG+si?NC组比较, HG+si?KLF6组明显提高 synaptopodin［(0.62±0.06)比(0.28±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.49±0.05)比(0.86±0.08)］、 Bax蛋白水平及细胞凋亡率［(14.69±1.87)%比(25.47±2.68)%］(P＜0.05)。 miR?204?3p直接靶向 KLF6。与 HG+miR?204?3p+pcDNA组比较, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足 MPC5细胞中 KLF6、desmin［(0.68±0.06)比(0.36±0.04)］、 Bax蛋白表达量和细胞凋亡率［(18.41±1.67)%比(11.05±1.02)%］,显著减少 synaptopodin蛋白［(0.38±0.03)比(0.69±0.07)］和 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。结论 miR?204?3p通过直接靶向 KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤。     

微小RNA-150 靶向c-Myb 表达对T 淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150 及c-Myb 表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平［(1.42±0.14)比(1.03±0.09)］、凋亡率［(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%］、Bax蛋白表达水平［(0.65±0.18)比(0.42±0.13)］显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA［(0.66±0.14)比(0.98±0.09)］及蛋白表达水平［(0.37±0.06)比(0.64±0.12)］、OD值［(0.25±0.06)比(0.46±0.09)］、PCNA蛋白表达水平［(0.33±0.07)比(0.56±0.11)］显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。     

微 RNA-130a靶向人类 RUNT相关转录因子 3对肺癌 A549细胞增殖和转移的影响

目的 探讨微RNA(miR)-130a与人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)的靶向关系及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响.方法 将体外培养的A549细胞分为对照组(未处理)、anti-miR-NC组(转染miR-130a inhibi?tor阴性对照)、anti-miR-130a组(转染miR-130a inhibitor)、anti-miR-130a+siNC组(转染miR-130a inhibitor和NC-siRNA)和anti-miR-130a+siRUNX3组(转染miR-130a inhibitor和RUNX3-siRNA),采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-130a和RUNX3mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞中RUNX3蛋白和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭与迁移能力,荧光素酶实验检测miR-130a和RUNX3的靶向关系.结果 荧光素酶实验证实,RUNX3是miR-130a的潜在靶基因.与anti-miR-NC组相比,下调miR-130a可抑制A549细胞增殖[(94.72±6.05)％比(51.28±3.24)％]、克隆[(36.15±2.06)％比(15.46±1.25)％]、侵袭[(90.25±5.48)个比(42.18±3.26)个]、迁移[(118.55±9.86)个比(73.48±6.75)个](P<0.05),促进E-cadherin蛋白表达[(0.26±0.03)比(0.48±0.04)](P<0.05),而抑制N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.52±0.03)比(0.25±0.02);(0.68±0.05)比(0.35±0.03)](P<0.05);与anti-miR-130a+siNC组相比,共转染anti-miR-130a与siRUNX3可成功增强A549细胞增殖[(52.16±3.12)％比(72.23±6.13)％]、克隆[(16.08±1.05)％比(22.12±1.34)％]、侵袭[(41.59±3.02)个比(68.32±4.26)个]、迁移能力[(72.26±5.18)个比(98.25±6.02)个](P<0.05),抑制E-cad?herin蛋白表达[(0.52±0.04)比(0.33±0.03)](P<0.05),而促进N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.27±0.03)比(0.46±0.03);(0.33±0.02)比(0.53±0.04)](P<0.05).结论 miR-130a可通过靶向RUNX3抑制A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转移.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

miR-28-5p靶向BECN1对OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的调控作用

目的 探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法 通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28-5p和BECN1的靶向关系。结果 TUNEL染色和caspase-3蛋白水平检测：与对照组比较,姜黄素明显增加凋亡细胞百分比并表达裂解蛋白caspase-3(P<0.05)。相比姜黄素单独作用,细胞凋亡被miR-28-5p显著减弱抑制(P<0.05)。与对照组比较,姜黄素组beclin1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著降低、P62蛋白表达明显升高(P<0.05);与姜黄素组比较,姜黄素+miR-28-5p抑制剂组beclin1表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高、P62蛋白表达明显降低(P<0.05)。通过在线数据库预测：miR-28-5p与BECN1存在靶向的关系;双荧光素酶报告基因实验显示：与阴性对照组比较,miR-28-5p模拟物显著降低BECN1-wt组的荧光素酶...     

自拟治痹汤联合滑膜膏外敷对强直性脊柱炎患者活动度、B和T淋巴细胞衰减因子的影响

目的 探讨强直性脊柱炎患者采用自拟治痹汤及滑膜膏外敷的联合疗法对其活动度及B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的影响。方法 2019年2月至2021年2月期间于驻马店市中心医院收治的78例强直性脊柱炎(AS)患者,采用随机数字表法分为对照组和观察组。对照组给予常规治疗以及滑膜膏外敷;观察组在对照组的基础上给予自拟治痹汤联合治疗,两组均治疗3个月。比较两组患者治疗效果。治疗前、治疗后两组Bath强直性脊柱炎疾病功能指数(BASFI)及Bath强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI),BTLA中T淋巴细胞细胞亚群的参数,炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平,治疗前后的不良反应。结果 治疗3个月后,观察组临床疗效明显优于对照组,总有效率前者高于后者(P<0.05);观察组治疗后中医证候积分均低于对照组(P<0.05);与对照组相比,观察组外周血CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T中BTLA细胞的表达水平明显升高,趋于正常值,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、观察...     

微小RNA-212调控TOB2蛋白表达对转化因子-β1干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化的影响

目的 探讨微小RNA-212(miR-212)对转化因子-β1(TGFβ1)干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的相关机制.方法 体外培养A549细胞,实验分组:PBS组(常规培养)、TGFβ1组(含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-con组(转染an...     

苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响

目的:研究苗药黑骨藤中咖啡酰基奎宁酸类部位(CADF)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞MH7A增殖及炎症因子分泌的影响,探讨CADF抗RA的作用机制。方法:将MH7A细胞分为空白组、TNF-α模型组、甲氨蝶呤组(阳性对照,20 mg/L)和CADF不同质量浓度组(50、100、200、400 mg/L),除空白组外,其余各组均以50μg/L TNF-α刺激活化MH7A细胞。以TNF-α与相应药物的混合液共同作用24 h后,检测细胞的增殖情况和培养液中一氧化氮(NO)、前列腺素E_2(PGE_2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。结果:与空白组比较,TNF-α模型组细胞增殖活性显著增强(P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量显著增加(P<0.01);与TNF-α模型组比较,各给药组细胞的增殖均受到显著抑制(P<0.05或P<0.01),培养液中NO、PGE2、IL-1β、IL-6含量均显著减少(P<0.01),且与CADF具有一定的量效关系。结论:CADF可通过抑制TNF-α诱导的MH7A细胞增殖,减少炎症因子NO、PGE2、IL-1β、IL-6的分泌,从而发挥其抗RA的作用。