化学发光微粒免疫分析法检测抗TP抗体的性能评价和应用

目的探讨化学发光微粒免疫分析法(CMIA)检测抗梅毒螺旋体(TP)抗体的性能和S/CO值设定方案。方法采用CMIA检测116例患者的血清抗TP抗体,同时用荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)确认。分别以FTA-ABS检测结果和临床诊断结果作为标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CMIA检测抗TP抗体的性能。结果采用CMIA检测116例患者的抗TP抗体,其中有98例S/CO值>1.1、18例S/CO值≤1.1;FTA-ABS检测结果为阳性70例、弱阳性16例、阴性30例;临床诊断结果为阳性58例、阴性58例。ROC曲线分析结果显示,以FTA-ABS结果为标准,CMIA检测抗TP抗体的曲线下面积为0.885,CMIA S/CO值的最佳临界值为3.66,敏感性为95.7%,特异性为80.0%,Youden指数为0.757,当CMIA检测抗TP抗体的阳性预测值≥95%时,S/CO值为4.25;以临床诊断结果为标准,CMIA检测抗TP抗体的曲线下面积为0.944,CMIA S/CO值的最佳临界值为4.25,敏感性为87.9%,特异性为88.5%,Youden指数为0.764。结论 CMIA的敏感性高,无漏诊,有一定的误诊率,适合作为初筛实验。     

D-二聚体质控品的制备及性能评价

目的研制一种D-二聚体质控品,并对其稳定性进行评价。方法采用无传染标志[人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、梅毒抗体等均为阴性]混合血浆制备质控品,并对其精密度、稳定性进行评价。结果自制的质控品批内及批间不精密度结果分别为1.83%、3.02%,均符合1/4CLIA′88及1/3CLIA′88可接受性能指标规定。于-20℃条件下保存12个月,偏移结果和瓶间均一性(变异系数)均符合1/2CLIA′88可接受性能指标规定。结论自制质控品的均一性和稳定性良好,可用于D-二聚体检测室内质量控制。     

化学发光免疫分析法检测孕妇抗TP抗体阳性判断值探讨

目的建立适合孕妇的抗梅毒螺旋体(TP)抗体化学发光免疫分析法(CLIA)阳性判断值。方法用科美东雅Chemclin CLIA系统检测13 974例孕妇血清抗TP抗体,对抗TP抗体筛查试验呈阳性反应[信号/临界值(S/CO)比值≥1.0]的样本,用免疫印迹法(WB)分析确认。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CLIA的检测性能。结果 Chemclin CLIA系统检出抗TP抗体S/CO比值≥1.0的样本152例,初筛呈阳性反应的样本比率为1.09%;初筛呈阳性反应样本经WB确认,阳性119例,不确定7例,阴性26例,初筛呈阳性反应样本中假阳性率为17.11%。根据ROC曲线,约登指数最大时,抗TP抗体S/CO比值为3.32;Chemclin CLIA系统抗TP抗体筛查试验阳性预测值≥95%的S/CO比值为3.25。结论为既降低抗TP抗体筛查试验假阳性率,又减少须进行补充确证试验的样本数,各实验室应建立针对不同人群和检测系统(试剂)合适的界值,以确定筛查试验阳性样本需进行确证试验的S/CO比值范围。     

复合质控血清研制及临床应用评价

目的制备乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体弱阳性对照复合质控血清,用于日常室内质量控制。方法用HBs Ag、HCV抗体、HIV抗体阳性血清分别与健康人血清进行倍比稀释,选S/CO在2~3之间的稀释度制备室内质控血清。结果自制的复合质控血清变异系数(CV)在15%以内,有很好的稳定性、精密度。结论自制复合质控血清能作为HBs Ag、HCV抗体、HIV抗体实验室检测的弱阳性室内质控血清。     

自制人类免疫缺陷病毒抗体等质控血清及室内质控方法建立研究

目的用人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体酶联免疫试剂盒中阳性对照,制备室内质控血清。建立艾滋病酶联免疫检测的室内质控方法。进行方法可靠性和质控血清稳定性的评价,同时比较两个厂家生产的HIV抗体试剂盒进行自制质控血清室内质控结果以及自制丙型肝炎抗体、乙型肝炎表面抗原血清的室内质控结果的评价。方法将自制的HIV质控品与卫生部HIV质控品按照HIV抗体检测的SOP文件用HIV抗体试剂随患者进行检测,每天测定吸光度,计算S/CO値。连续检测20次计算S/CO值和s,以x±2s为控制限,以x±3s为失控限绘制质量控制框架图。每天随患者标本各加入1份自制质控品和1份卫生部购质控品进行质控将其各自的S/CO描在质控图上,应用多规则质量控制原则分析以发现当天测定批的误差以及误差原因。控制每批次检测的重复性,观察试剂盒间的差异进行两种质控血清质控结果的比对研究。结果自制HIV抗体质控血清方法科学可靠,减少了基质效应,能确保结果的准确性和可靠性。结论稀释阳性对照制备质控品,建立酶联免疫室内质控方法也适用于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体等其他免疫项目的酶联免疫室内质控。不同厂家试剂用自制质控品进行质控结果无差异。     

化学发光免疫分析法检测抗TP抗体S/CO比值与确证试验阳性的相关性研究

目的探讨化学发光免疫分析法(CLIA)检测抗梅毒螺旋体(TP)抗体筛查试验信号/临界值(S/CO)比值与确证试验阳性的相关性。方法经Abbott i2000 CLIA系统(简称Abbott i2000)或科美东雅Chemclin 600 CLIA系统(简称Chemclin 600)检测抗TP抗体S/CO比值≥1.0的血清样本208份,用免疫印迹法(WB)对抗TP抗体筛查试验结果进行确认评价。采用SPSS 19.0软件绘制抗TP抗体S/CO比值受试者工作特性(ROC)曲线,得到敏感性和特异性最佳时的S/CO比值;计算各个S/CO比值区间的阳性预测值,得到阳性预测值≥95%的S/CO比值。结果 Abbott i2000或Chemclin 600检测抗TP抗体S/CO比值≥1.0的血清样本208份,WB检测阳性128份,阴性35份,不确定45份,2个CLIA系统与WB的符合率分别为82.2%和82.8%。当Abbott i2000和Chemclin 600抗TP抗体筛查的S/CO比值分别为≥3.0和≥4.0时,阳性预测值≥95%。结论 Abbott i2000和Chemclin 600检测抗TP抗体的S/CO比值分别为1.0~3.0和1.0~4.0的样本应进行WB确证试验,S/CO比值大于上述上限的样本可直接报告抗TP抗体阳性,这样既能减少确证试验的样本数,又可提高检测报告的可靠性。     

乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物室间质评分析

目的了解乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物检测结果准确度。方法制备乙型肝炎病毒标志物血清质控品，每批均含低浓度样本，乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）约0．5～1ng／mL，乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）约20-30mIU／mL，乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）约2NCU／mL，乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）约4NCU／mL，乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）约2NCU／mL。每批5个样本，共分3批，发放各实验室检测。结果与预期结果比较，参加实验室第1批次正确率为78％，第2批次和第3批次正确率皆为84％。结论乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物检测结果准确度偏低，急需改进和提高。     

ELISA定性检测HBsAg的室内质控探讨

目前国内检测HBsAg的ELISA大多参照生化的质控方法,即选弱阳性标本为质控物,以X图法控制日常工作的精密度,判断实验的有效性。我们改用临界值法进行室内质控,简便易行,现特予介绍。一、室内质控物　高值质控物为10μg/ml,低值质控物为1ng/ml,阴性质控物则取A值在0.04～0.08间的样本20份以上混匀后分装。二、室内质控方法　实验除用试剂盒内的质控品外,同时也检测高值、低值和阴性三种质控物,并将质控结果算出S/CO值点入质控图中(S/CO值:S为样本A值,CO为临界(CutOff)值,即阴性对照A值×2.1。如阴性对照小于0.05时,以0.05计)。参…     

某地区HIV、HCV、TP感染与HBV感染情况调查

目的 探讨成都地区乙型肝炎病毒(HBV)感染与HIV、丙型肝炎病毒(HCV)和梅毒(TP)感染及其相互合并感染的关系,为预防、控制和治疗相关疾病提供参考.方法 对近期半年内该院门诊、住院及体检者HBsAg、抗HIV抗体、抗HCV抗体和抗TP抗体检测结果进行回顾性分析,分析HBsAg阴、阳性结果与其他各项检测结果之间的关系.结果 HBsAg阳性者合并抗HIV抗体阳性率明显高于HBsAg阴性者(P<0.01),HBsAg阴性者TP感染率更高(P<0.01),HBV感染情况与合并抗HCV抗体阳性没有相关性(P>0.05);双重感染与HBV感染相关(P<0.05),以HCV/TP重叠感染与HBV感染相关性最为明显(P<0.05),HIV/HCV重叠感染和HIV/TP重叠感染均与HBV感染无明显相关性(P>0.05);未见HCV、HIV、TP三重感染.结论 HIV感染与HBV感染明显相关,HCV/TP重叠感染与HBV感染也有相关性.     

抗HCV抗体和抗TP抗体筛查试验的假阳性问题及对策研究进展

酶联免疫吸附试验(ELISA)和化学发光免疫分析法(CLIA)检测抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体和抗梅毒螺旋体(TP)抗体存在一定比例的假阳性,故需经确证试验方能报告阳性结果。确定特定检测试剂(系统)在特定人群筛查试验结果的阳性预测值达95%的信号/临界值(S/CO)比值,可作为尽可能降低ELISA或CLIA检测抗HCV抗体或抗TP抗体假阳性率和经济合理应用确证试验的对策。     

化学发光微粒法检测孕妇抗TP抗体的复检范围探讨

目的 探讨基于化学发光法(CLIA)初筛抗TP抗体阳性的孕妇标本应用化学发光微粒法(CMIA)检测的复检范围.方法 选取经科美Chemclin CLIA系统筛查抗TP抗体S/CO≥1.0的548例孕妇血清标本,采用CMIA检测548例孕妇血清标本的抗TP抗体,同时用免疫印迹法(WB)进行确认,以WB检测结果为标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CMIA检测孕妇抗TP抗体的性能.结果 CMIA检出孕妇抗TP抗体的S/CO≥1.0的标本490例,经WB确认,阳性483例,不确定2例,阴性5例,根据ROC曲线,约登指数最大时(0.979),抗TP抗体S/CO为2.31,灵敏度为97.9％,特异度为100.0％;CMIA检出孕妇抗TP抗体的S/CO<1.0的标本58例,经WB确认,阳性11例,不确定9例,阴性38例,根据ROC曲线,约登指数最大时(0.921),抗TP抗体S/CO为0.22,灵敏度为100.0％,特异度为92.1％.结论 根据ROC曲线计算的最佳截断值,CMIA检测孕妇抗TP抗体的复检范围S/CO设定为0.22～2.31,S/CO在此范围的孕妇标本须采用WB确认,以确保结果的准确性.     

电化学发光法检测HCV抗体可靠性分析

目的评价电化学发光法检测丙型肝炎病毒IgG型抗体的可靠性。方法用Roche E601测定新鲜患者标本和质控品的HCV-Ab,通过分析精密度、准确度、阴性和阳性符合率、检测低限、阴性标本可靠性等性能指标评价该检测系统测定HCV-Ab结果的可靠性。结果低、高值标本批内、批间精密度的变异系数(CV)均比厂家要求小;60个室间质评样品检测结果中,HCV抗体阴性符合率为100%(40/40)、阳性符合率100%(20/20);该系统的检测临界值为0.004NCU/ml;40份HCV抗体浓度在0.8COI1.0(接近临界值)且HCV RNA检测结果均小于5.0×102的患者样本,用该检测系统检测均为阴性,阴性标本可靠性为100%。结论该检测系统检测丙型肝炎病毒抗体的性能能够满足临床要求。     

血液检测实验室ELISA试剂的选择评价

目的　综合评价抗 HCV、抗 HIV国产ELISA试剂在血液筛查实验室的应用效果。方法　将参考品试验与常规中试试验相结合 ,参考品试验 :将抗 HCV试剂、双抗原夹心法抗 HIV试剂在 37℃恒温箱中放置 72h后 ,检测参考品的符合率 ,计算每种试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率、约登指数、阳性预测值、阴性预测值 ,比较差别 ;常规中试试验 :用抗 HIV试剂、抗 HCV试剂分别检测常规标本 ,绘制每种试剂阴性结果S/CO分布图 ,观察每种试剂反应模式的均一性。结果　在参考品试验中 ,5种符合国家标准的抗 HCV国产试剂存在差异 ;常规中试试验中 ,抗 HCV、抗 HIV阴性结果S/CO分布图显示了不同试剂本底均一性的差别。结论　血液筛查实验室ELISA试剂的选择 ,在依照参考品的考核结果的同时 ,还应结合常规应用情况 ,就试剂盒本底均一性、功能性、适应性、成分稳定性综合判定。     

第4代人类免疫缺陷病毒酶免检测试剂的应用与分析

目的通过与第3代人类免疫缺陷病毒(HIV)酶免试剂的比较,分析第4代试剂的检测性能。方法运用第3代和第4代试剂平行检测无偿献血者标本、室内质控品、室间质评血清和临床干扰性标本,比较其特异性和灵敏度。结果从无偿献血者血样中检出有反应性标本20例,其中第3代试剂检出7例,第4代试剂检出16例,有2例标本由双方共同检出并最终确认为阳性。检测1NCU/mL室内质控品,S/CO值无明显差异,变异系数(CV)值在11%～14%。室间质评血清检测中,对临界值弱阳性标本的判定只有第4代HIV试剂准确无误。检测干扰性标本,两种试剂检测结果完全一致,未见交叉反应。结论第4代HIV酶免检测试剂适合献血者的筛查,有利于保障血液的安全。     

珠海丽珠乙型肝炎酶联免疫吸附试验试剂盒性能评价

目的对珠海丽珠公司生产的乙型病毒性肝炎(简称乙肝)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(以下简称"珠海丽珠试剂盒")进行性能验证,为实验室选用合适的方法和试剂提供依据。方法参考美国临床实验室标准化研究所EP15-A2标准,采用重复性代替精密度,以乙肝标志物的阳性、阴性符合率和一致率分别作为批内重复性精密度和批间重现性精密度评价指标;选取2015-2016年卫生部临检中心感染性血清学标志物A室间质评物进行准确性验证;将已知浓度的高值质控品用阴性患者新鲜血清作梯度稀释后进行检出限验证;以罗氏电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测结果为标准,对灵敏度、特异度及总符合率进行验证,同时,对ELISA、胶体金免疫层析法(GICT)和ECLIA检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的灵敏度、特异度等进行比较。结果珠海丽珠试剂盒的批内重现性精密度符合率、批间重现性精密度一致率、准确度符合率均为100%。HBsAg、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)的检出限分别为1.33IU/mL、30.00mIU/mL、2.00NCU/mL、4.00NCU/mL、0.44NCU/mL。珠海丽珠试剂盒检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的灵敏度、特异度、总符合率及约登指数均达到较高的水平。ELISA检测HBsAg的灵敏度优于GICT。结论珠海丽珠试剂盒具有较高的精密度、灵敏度及特异度,能够满足临床检测的质量要求。     

酶联免疫吸附测定与免疫印迹试验检测人类免疫缺陷病毒抗体的差异性分析

目的探讨酶联免疫吸附测定(ELISA)与免疫印迹试验(WB)在人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测中的差异性。方法选取陕西省铜川地区进行HIV抗体检测的疑似HIV感染患者105例为研究对象,初筛后进行ELISA、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)复核检测后再经WB验证。分析初筛后ELISA、RT-PCR复核检测结果与WB验证结果的差异性。比较ELISA检测得出的质控物吸光度值与临界值的比值(S/CO)与WB验证结果的差异,并观察WB反应带型结果。结果 105例疑似HIV感染患者ELISA、RT-PCR复核检测结果显示,双阳性98例,WB验证后显示阳性87例,符合率为88.78%(87/98)。ELISA检测结果为阳性但RT-PCR检测为阴性的样本经WB验证后确定阳性1例,符合率为20.00%(1/5)。ELISA检测得出的S/CO值1及S/CO值≥10时与WB验证结果的符合率最高。WB证实为阳性的87例样本中,gp160、gp120出现率均为100.00%,gp41、p24、p17出现率分别为95.40%(83/87)、64.37%(56/87)、56.32%(49/87),另有2.30%(2/87)显示无HIV抗体特异带。结论 ELISA、WB用于HIV抗体检测均具有一定价值,对复核检测结果采用WB验证可提高诊断符合率,但WB验证后的样本中亦存在阴性或不确定性样本,因此应对此类患者进行重点追踪并实施进一步检测。     

丙型肝炎病毒分片段试剂对抗-HCV临界值附近标本的确认价值

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)分片段(抗-HCV-C、抗-HCV-NS3、抗-HCV-NS4、抗-HCV-NS5)试剂对抗-HCV临界(CO)范围标本的确认价值。方法酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测抗-HCV总抗体,结果为临界值(S/CO)或灰区状态(CO±10%)的可疑标本,分离血清后贮存于-29℃低温冰箱内,集中用丙型肝炎病毒(HCV)抗体分片段酶联免疫确认试剂,在全自动酶标分析仪上进行检测,收集可疑标本44例,其中抗-HCVCO±10%阳性24例及CO±10%阴性20例。同时收集抗-HCV总抗体S/CO值大于5.0的标本30例,健康对照标本20例。结果44例抗-HCVELISA总抗体检测S/CO值为灰区状态标本中,HCV分片段确认为阳性者为22.7%(10/44),可疑者为6.8%(3/44),阴性者为70.5%(31/44)。抗-HCVCO±10%阳性中的假阳性率为54.2%(13/24),抗-HCVCO±10%阴性中的假阴性率为5.0%(1/20)。30例抗-HCV检测S/CO值大于5.0的标本中,HCV分片段确认阳性者为80.0%(24/30),可疑者为13.3%(4/30),阴性者为6.7%(2/30);20例健康对照组HCV分片段确认试验均呈阴性反应。结论用HCV分片段酶联免疫确认试剂对抗-HCVELISA总抗体检测是较好的旁证试验,特别对不确定的灰区标本进一步的确认意义甚大,可降低抗-HCV在检测低危人群时所产生的假阳性及假阴性结果,提高临床丙型肝炎诊断的准确率,对血站安全用血、避免浪费血源有一定的实用价值,且操作简便,易于推广应用。     

加强酶免试剂盒中临界值(CUT OFF)的稳定性控制

我们在用全自动酶免分析仪进行临床标本的丙肝抗体(抗-HCV)检测工作中发现,试剂盒中的阳性对照的吸光度(A)常出现波动,由其计算出来的临界值(CUT OFF)(简称CO,下同)有较大变化,从而引起室内质控血清出控,病人样本的前后结果S/CO值不一致,特别是对介于临界值灰区的标本可能会产生假阳性或假阴性的错误结果。对此,应引起临床检验工作者的高度重视。     

利用RIBA实验确定VITROS抗-HCV检测试剂CUT-OFF值的分析

目的采用重组蛋白免疫印迹分析(RIBA)实验设置该实验室常用的VITROS全自动免疫分析仪进行丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测试剂的CUT-OFF值。方法收集抗-HCV阳性标本217例,其中吸光度比临界值(S/CO)8.0有101例,占46.5%,S/CO3.0的极低阳性共69例,占31.8%,拟用RIBA对S/CO8.0的样本进行确认,从而确定抗-HCV的S/CO值与RIBA结果之间的相关关系,以此来建立该实验室CUT-OFF值。对61例S/CO8.0(包括S/CO3.0共49例,3.0～8.0共12例)进行了RIBA确认实验。结果根据RIBA结果可分为3组,31例阴性、21例阳性和9例不确定。其S/CO值分别为阴性组1.67±0.41,阳性组4.41±2.72,不确定组2.64±0.38,不确定组和阳性组的S/CO值比较,差异有统计学意义(P0.05)。抗-HCV的S/CO值与RIBA结果之间呈正相关。根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析抗-HCV的CUT-OFF值为2.10,ROC曲线下面积(AUC)可达0.94,特异度为92.4%,灵敏度为85.2%。结论VITROS抗-HCV的S/CO值与RIBA结果间呈正相关,S/CO值越高,RIBA确认阳性的比例越高;当CUTOFF值为2.10时,可以排除大多数的假阳性结果,是一个合适的临界值。     

血液保养液对抗-HCV检测影响的探讨

目的探讨CPD血液保养液(以下简称CPD)对抗-HCV检测的影响。方法用CPD以5%的幅度对3种浓度的抗-HCV阳性质控物进行梯度稀释后用ELISA方法进行平行检测,观察S/CO值变化情况。随机抽取抗-HCV阳性和阴性献血者各60名,对其试管样本和血袋管样本做ELISA检测比较。结果阳性质控实验组的S/CO值均随保养液的量增加而逐渐降低;阳性物浓度降低5%,S/CO值均有明显降低(P(0.05);其中阳性物浓度95%的S/CO值降低极显著(P(0.01)。试管和血袋管的抗-HCV阳性样本检测结果有差异,弱阳性样本较为明显。结论CPD对ELSIA检测抗-HCV弱阳性样本影响明显,易造成弱阳性样本的漏检。