肺癌细胞株E - cadherin的表达状态及其与启动子甲基化的关系

[目的]研究肺癌细胞株上皮钙粘蛋白(E - cadherin)的表达与基因启动子甲基化状态的关系.[方法]采用免疫细胞化学法检测肺癌细胞株NCI - H460、SPCA和A549的E- cadherin蛋白表达;半巢式甲基化特异性PCR法(MSP)和微流控芯片技术检测E- cadherin基因启动子甲基化状态.[结果]...     

多西紫杉醇和维甲酸对前列腺癌PC-3细胞的协同作用

目的　观察多西紫杉醇和维甲酸对前列腺癌细胞系 PC- 3的体外体内协同作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法　应用光镜形态学 ,四甲基噻唑蓝 (MTT)法 ,流式细胞仪和免疫细胞化学法观察 10 - 6、10 - 7、10 - 8mol/L 多西紫杉醇和 10 - 5、 10 - 6、10 - 7mol/L 维甲酸在体外单药或协同对前列腺癌细胞系 PC- 3的生长抑制作用、诱导凋亡、对细胞 DNA含量及 Cyclin D1 表达的影响。观察 PC- 3细胞荷瘤裸鼠单独及协同使用多西紫杉醇和维甲酸前后的体质量、肿瘤重量、血清 PSA和肿瘤 PSA免疫组化表达的变化。结果　 10 - 6 mol/L和 10 - 5mol/L维甲酸协同 10 - 7mol/L以上多西紫杉醇作用 4 8h,可增强对前列腺癌 PC- 3细胞的生长抑制作用 (抑制率≥ 6 9.2 % ,P<0 .0 1) ,增强诱导凋亡作用 (凋亡率≥ 2 3.8% ,P<0 .0 5 ) ,下调 Cyclin D1 的表达 (表达率≤ 14 .2 % ) ,与阳性对照组Cyclin D1 表达率 2 5 .5 %相比差异有显著性 (P<0 .0 5 )。维甲酸使多西紫杉醇所致的 G2 /M期细胞比例由 74 .3%变为 5 7.8% ,部分地逆转了其 G2 /M期细胞周期阻滞 (P<0 .0 5 )。协同治疗前后裸鼠体质量无明显变化 ,但肿瘤质量〔(2 .8± 0 .4 ) g〕、血清 PSA〔(4 3± 11) ng/ml〕和肿瘤 PSA免疫组化的表达率〔(2 6± 3.2 ) %〕在协     

3-羟基-4-喹诺酮类化合物的设计、合成及其抗增殖活性

将二氢杨梅素和喹诺酮抗肿瘤化合物的结构特征拼合,设计了一系列3-羟基-4-喹诺酮类化合物;以3,5-二甲氧基苯胺为原料,经还原氨化、弗克酰基化、微波促进闭环、BBr₃催化脱甲基、Mannich反应等步骤制备得到16个目标化合物;采用MTT法测定了化合物对肺肿瘤细胞株A549和NCI-H 460的增殖抑制活性。所合成的16个化合物均未见文献报道,其结构经IR、MS、¹H NMR确证;活性测试结果显示,多个化合物对两种细胞株均表现出中等的抗增殖活性,化合物11b对NCI-H 46细胞的抑制作用最强。初步构效关系表明:在3-羟基-4-喹诺酮结构的N-1位进入异戊烯基能显著地提高化合物的抗肿瘤活性。     

注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物的体外抗肿瘤作用

为了评价注射用多西他赛磺丁基-β-环糊精包合物(ML061)对各种体外培养肿瘤细胞的细胞毒性作用,本研究选取MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446、HO-8910、Bcap-37、KB、SMMC-7721、HT-29、SW480、LS-174t、SGC-7901、MCF-7、A549、NCI-H460等14个肿瘤细胞株,分别用不同质量浓度(200,20,2,0.2,0.02,0.002,0.000 2,0.000 02μg/mL)ML061处理肿瘤细胞72 h,用MTT法测定细胞活力,并计算药物对各肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50。结果发现,ML061可抑制多种体外培养的肿瘤细胞株的活力,且这种抑制作用呈剂量依赖性。与阳性对照药市售多西他赛注射液奥名润相比,在选取的14个肿瘤细胞株中,ML061对Bcap-37、MDA-MB-435、MDA-MB-435s、NCI-H446和SW480的IC50小于0.1μg/mL。ML061对人卵巢癌Bcap-37、人结肠癌SW480、人小细胞肺癌NCI-H446、人乳腺癌MDA-MB-435及MDA-MB-435s等肿瘤细胞株的体外抑制作用较强。总之,ML061抑制多种体外培养的肿瘤细胞增殖,与阳性对照药奥名润相同,以Bcap-37、SW480、NCI-H446和MDA-MB-435s这4个细胞株较为敏感,而MDA-MB-435对ML061的敏感性高于奥名润。     

TRAIL-Mu3蛋白的体内外抗肿瘤活性及其机制研究

  目的  TRAIL-Mu3是通过将野生型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)的N端突变为8个连续的精氨酸(第114～122位氨基酸)得到的可溶性蛋白突变体。本研究在前期药物构建和制备已经完成的基础上进一步对TRAIL-Mu3蛋白的体内外药效和机理进行初步探索。  方法  采用CCK-8法检测TRAIL-Mu3对肺癌细胞株NCI-H460、A549、NCI-H1299、calu-1的增殖抑制作用,通过流式细胞术（FCM）检测TRAIL-Mu3对A549和NCI-H460细胞凋亡诱导作用,并通过Western blot法检测体外凋亡相关蛋白死亡受体4（death receptor 4, DR4）、死亡受体5（death receptor 5, DR5）、Caspase-3、Caspase-8、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP）的表达情况。建立肺癌细胞株NCI-H460荷瘤小鼠移植瘤模型,TRAIL-Mu3给药方式为尾静脉注射,给药频率分为每日注射1次、隔日注射1次、每周注射3次,观察不同给药频率对移植瘤模型的治疗效果,并进行免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白DR4、DR5、Caspase-3、Caspase-8、XIAP的体内表达情况。  结果  通过细胞增殖及凋亡检测等体外实验证实TRAIL-Mu3较野生型TRAIL表现出更强的体外肿瘤细胞毒性和凋亡诱导能力,并可在体外上调DR4、Caspase-3、Caspase-8的表达或活化（P<0.05）。动物实验结果显示,TRAIL-Mu3隔日给药与每周3次给药抑制作用相近,优于每日给药（P<0.05）,但3种给药方案均可显著抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长。免疫组化结果表明其可在体内上调DR4、Caspase-3的表达或活化,下调XIAP的活化（P<0.05）。  结论  突变体TRAIL-Mu3通过上调死亡受体DR4的表达、增加凋亡相关蛋白Caspase-3/-8的活化、减少XIAP的活化而展现出良好的体内外抑瘤效果。     

伏立诺他衍生物N2E的合成、鉴定及体外抗肿瘤活性研究

目的 合成伏立诺他衍生物N2E并评价其体外抗肿瘤活性. 方法 以辛二酸为原料,先在乙酸酐中回流,使分子内脱水生成辛二酸酐,然后与2-乙氧基苯胺在二氯甲烷中于0 ℃开环胺化得2-乙氧基辛二酸单酰苯胺,再经甲醇酯化和盐酸羟胺胺解得到伏立诺他衍生物N2E;采用质谱、1H NMR、13C NMR等对合成的目标物N2E进行结构鉴定.以人肺癌细胞NCI-H1299、NCI-H460、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2为研究对象,采用MTT法考察N2E对这些肿瘤细胞株的抑制效果,同时观察N2E对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用. 结果 目标物经确证为伏立诺他衍生物N2E[N-(2-乙氧基苯)-N′-羟基辛二酰胺],经归一化法测得纯度约为99.1%;N2E对人肺癌细胞NCI-H1299、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2的抑制效果强于伏立诺他(P<0.001),而对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用较伏立诺他弱(P<0.001). 结论 通过混合酸酐法成功合成了N2E,N2E体外对多种肿瘤细胞株呈现出显著抗增殖作用.     

Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖的影响

目的研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响。方法培养NCI-H460细胞,加入不同浓度Cyclopamine,作用不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增殖的影响,同时用流式细胞仪检测Cyclopamine对NCI-H460细胞周期的影响。结果与空白对照组和Tomatidine对照组相比,2-40μmol/L的Cyclopamine作用于NCI-H460细胞后,倒置显微镜下观察,细胞立体感消失,皱缩成圆形,细胞间隙增大。CCK-8比色法显示,Cyclopamine对NCI-H460细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,20μmol/L的Cyclopamine使NCI-H460细胞生长曲线下移,并可将NCI-H460细胞阻滞在G1期,明显减少其S期细胞数量,引起细胞凋亡。结论Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖有比较明显的抑制作用,提示大细胞肺癌的发生和发展与Shh信号转导通路的异常激活有关。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

圆柱瘤基因（CYLD）的增强表达介入Fas/FasL途径诱导人肺癌细胞株A549/H460坏死的研究

目的探讨圆柱瘤基因（CYLD）在肺癌细胞株A549/H460的表达,及增强其表达对Fas/FasL途径诱导肺癌细胞死亡的影响,并探讨其可能的机制。方法选取5例肺腺癌手术患者癌组织标本作为实验组,自身癌旁正常组织作为对照组,进行CYLD基因实时荧光PCR定量分析;肺癌细胞株A549/H460分别进行CYLD基因增强质粒转染,同样采取实时荧光定量PCR及统计学检验对转染效果进行分析;转染前后的A549/H460细胞株FasL膜蛋白刺激进行培养24 h,通过流式细胞分析细胞死亡情况。结果 5例癌组织和癌旁正常组织均有CYLD表达,且差异有统计学意义（P〈0.05）,对照组为实验组的2.53倍;CYLD基因在A549细胞的表达较转染前高1.40倍,在H469细胞则比转染前高1.83倍;A549/H460细胞的坏死率较转染前增加,尤其是在提前加入zVAD-fmk后进行Fas信号诱导坏死率增加显著。结论肺癌细胞CYLD基因的表达较正常肺组织下调,有效增强肺癌细胞株A549/H460的CYLD基因表达后,FasL膜蛋白可通过Fas信号诱导其显著坏死。     

5-Aza-dC在肺癌细胞系中去甲基化作用机制

目的：研究5-Aza-dC对肺癌细胞系中的去甲基化的作用。方法对正常肺细胞以及5-Aza-dC分组处理的A 549、NCI-H 520甲基化特异性PCR和RT-PCR定量检测。结果未处理的A 549和NCI-H 520细胞中TFPI-2表现出完全甲基化特异性。而经过5-Aza-dC处理过的肺癌细胞系细胞则表现出不完全甲基化状态,并呈现出量效关系。A 549和NCI-H 520细胞在经5-Aza-dC处理后TFPI-2基因mRNA表达均明显高于未处理组,差异具有统计学意义（P<0.05）;并呈现出量效关系。结论5-Aza-dC对肺癌细胞中的TFPI-2基因具有去甲基化作用,并具有量效关系。     

洛伐他汀对3种肺癌细胞株增殖的抑制作用

目的：观察洛伐他汀对肺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法：采用MTT法，观察不同浓度的洛伐他汀分别作用24、48、72h对3种人肺癌细胞（A549，NCL—H460，PGCL3）生长增殖的影响。结果：洛伐他汀用药24、48、72h对3种肺癌细胞的生长增殖均有不同程度的抑制作用。洛伐他汀作用72h对3种肺癌细胞株（A549，NCL—H460，PGCL3）的IC50分别是39．6、28.3、35．6 μmol／L。结论：洛伐他汀能有效抑制肺癌细胞的体外增殖，并且呈时间依赖性和浓度依赖性。     

CRISPR/Cas9系统构建ROCK2基因敲除肺癌细胞系

目的 利用CRISPR/Cas9编辑系统对人肺癌细胞系A549、H460细胞中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2)基因进行稳定敲除,并对其敲除效果进行验证。初步探讨ROCK2基因敲除肺癌细胞株的细胞水平上的功能改变。方法 利用Rock-2 CRISPR 质粒和Rock-2 HDR 质粒转染构建A549、H460 ROCK2基因敲除稳定细胞株。蛋白质印迹法验证敲除效果、用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ROCK2基因的mRNA表达水平。平板克隆形成实验、MTT法检测各细胞株的增殖能力。结果 A549、H460肺癌细胞中ROCK2基因稳定敲除株构建成功。与原始细胞株相比,ROCK2敲除株细胞中的蛋白表达水平完全缺失,细胞内的mRNA表达水平显著下降,而且能降低A549、H460肺癌细胞的增殖能力。结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得ROCK2基因敲除的肺癌细胞系,为进一步研究ROCK2对肺癌生长的影响奠定基础。     

沉默APE1对非小细胞肺癌细胞的放射敏感性的影响研究

目的 研究脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1（APE1）对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响。方法 采用免疫组化染色检测手术标本切片（非小细胞肺癌组织20例及癌旁组织5例）中APE1的表达,Western blot与实时荧光定量（qRT）-PCR检测非小细胞肺癌细胞系（A549,H460,H1299）及肺正常上皮细胞系中APE1的表达;Western blot检测辐照A549与H460细胞0~6 Gy后APE1的表达;构建沉默APE1的A549与H460稳定细胞株后,Western blot检测其辐照6 Gy后APE1的蛋白表达;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成率;CCK-8检测细胞增殖;细胞术流式检测细胞凋亡。结果 非小细胞肺癌组织及细胞系中APE1的表达明显上调;辐照能诱导非小细胞肺癌细胞APE1的表达,且表达随辐照剂量增高而上调;沉默APE1能有效地抑制辐照诱导A549与H460细胞中APE1的表达;成功构建沉默APE1的A459、H460稳定细胞株;沉默APE1联合辐照进一步抑制了非小细胞肺癌细胞克隆形成率、细胞增殖率,同时促进细胞凋亡（ PAPE1可增强非小细胞肺癌细胞的放射敏感性。     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察常氧和低氧环境下不同浓度的三氧化二砷（arsenic trioxide．As2O3）对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。 方法：在常氧（21％O2）和低氧（5％O2）环境下对人肺腺癌细胞A5-19进行体外培养，采用0、1、2、4μmol/L As2O3分别作用A549细胞12、24和48h，甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测A519细胞增殖抑制率；膜连蛋白V（Annexin V）／碘化丙啶（propidium iodide．PI）双标记法检测细胞凋亡。 结果：常氧和低氯环境下．1、2、4μmol／L As2O3均能显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡，且会随As2O3浓度的升高和作用时间的延长而增强；该作用在两种环境下的差异无统计学意义。结论：As2O3可抑制A549细胞增殖和促进细胞凋亡；在低氧环境和常氧环境下对A549细胞具有同样的细胞毒性作用。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究

目的: 探讨生存素(Survivin)的反义寡核苷酸(A SO DN)对肺癌细胞株的作用。方法: 在脂质体介导下,分别以100 nmol/L、300 nmol/L和500 nmol/L的Survivin A SO DN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株SPC-A1,于24 h、48 h、72 h用逆转录聚合酶链反应(RT-P CR)检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Survivin蛋白,流式细胞仪检测凋亡。结果: NCI-H446和SPC-A1皆表达Survivin基因和蛋白。随着ASODN浓度增加,Survivin mRNA明显下调,其差异有显著性,其中ASODN 500 nmol/L作用72 h时两种细胞Survivin mRNA抑制率分别达62.72%和67.43%;Survivin蛋白表达也有类似的变化;ASODN对两种细胞生长抑制和诱导凋亡作用随浓度增大和作用时间延长而增强。结论: Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin基因和蛋白表达,呈时间、浓度依赖性,诱导凋亡的效果也呈剂量、时间依赖性,500 nmol/L的浓度作用72 h效果最佳。     

人参皂甙对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡及其周期的影响

目的：探讨中药20(R)-人参皂甙Rg3(Rg3)对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。方法：进行人肺腺癌细胞株A549、人脐静脉血管内皮HUVEC304细胞培养,不同浓度Rg3干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,了解不同浓度Rg3对上述细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果：3×10-6 mol/L的Rg3可导致A549细胞明显凋亡,凋亡率为29.8%,与对照组(15.0%)相比差异有统计学意义（P<0.05）。Rg3对A549细胞周期的影响无显著差异。1×10-4 mol/L的Rg3对内皮细胞的生长抑制率为12.53%,显著高于其它组（P<0.05）,不同浓度Rg3对条件培养液（CM）诱导的血管内皮细胞的增生均有明显的抑制作用（P<0.05）,电镜下可见10-6 mol/L浓度的Rg3可使CM诱导的内皮细胞出现凋亡小体。 结论：适当浓度的Rg3有抗肿瘤作用和抑制肿瘤新生血管生成的作用。     

苦参总黄酮体内外抗肿瘤作用实验研究

目的：考察苦参总黄酮（kushenflavonoids，KS—Fs）的体内外抗肿瘤作用。方法：采用甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazolium，MTT）比色法检测KS—Fs对多种肿瘤细胞株的生长抑制作用；构建S180肉瘤、H22肝癌和Lewis肺癌小鼠肿瘤模型和人非小细胞肺癌H460、食管癌Eca-109裸小鼠移植肿瘤模型，研究KS—Fs体内抗肿瘤作用；急性毒性试验考察KS—Fs的毒副作用。结果：KS—Fs和苦参酮（kurarinone，Kur）在体外有比苦参总碱（kushenalkaloids。KS—As）更强的细胞毒作用（半数抑制率：KSFs4．9～29．4〉g／ml，Kur2．0～13．1〉g／ml，KSAs〉200／lg／m1）。体内研究表明KSFs和Kur不仅能有效抑制小鼠H22肝癌、S180肉瘤、Lewis肺癌（瘤质量抑瘤率60％～80％），而且能显著抑制人非小细胞肺癌H460和人食管癌Eca109裸小鼠移植肿瘤的生长（瘤质量抑瘤率在41％～47％）。小鼠口服和静脉注射KS—Fs的最大耐受剂量分别大于2．8g／kg和750mg／kg，远远超过苦参碱（口服半数致死量为1．18g／kg），且无明显毒副作用。结论：研究表明KSFs或Kur是新颖的高效低毒的抗肿瘤候选药物。     

紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h最为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.     

视黄酸对肿瘤坏死因子α诱导肺泡上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549增殖凋亡的影响与视黄酸(RA)对其调控作用。方法用不同浓度的TNF-α、1μmol/LRA和10μg/LTNF-α+1μmol/LRA处理肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞24h和48h后MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。用10μg/LTNF-α处理24h或48h后继续培养,用台盼蓝染色计算24、48和72h活细胞数。结果分别用0、0.1、1、5、10μg/L浓度的TNF-α培养A549细胞24h和48h测定细胞增殖数(%):24h分别为95.0%、90.0%、79.6%、72.4%和59.6%,方差分析结果F值为18.04,P<0.01;48h分别为93.2%、82.7%、61.5%、50.3%和44.7%,F值为40.61,P<0.01。用10μg/LTNF-α处理A549细胞24h,其对细胞的增殖抑制作用可逆转,但处理48h后的A549细胞增殖抑制作用不能逆转。用TNF-α和视黄酸培养A549细胞12、24与48h后,凋亡的细胞数(%)TNF-α组分别为14.3%±3.2%、18.6%±2.9%和43.4%±3.5%,与对照组(6.3%±1.2%,8.2%±1.3%和26.1%±2.5%)比较差异有统计学意义;视黄酸加TNF-α组为4.8%±1.1%,5.2%±1.3%和16.4%±2.3%,明显少于TNF-α组。结论视黄酸通过抑制TNF-α对肺泡Ⅱ型上皮细胞的破坏,可以达到减轻肺泡上皮细胞损伤,保护肺表面活性物质的作用。