关节软骨损伤组织工程修复的实验研究

目的：（1）研究不同体外培养时间软骨的生物学特性，探讨运用于软骨组织工程中软骨种子细胞的最适宜培养时间和条件。（2）应用组织工程技术探讨运用自体关节软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（3）应用组织工程技术探讨应用同种异体软骨细胞修复关节软骨缺损的可行性。（4）研究修复关节软骨缺损的软骨细胞来源。方法：（1）取新西兰兔关节软骨细胞体外培养，观察软骨细胞的形态学变化，生长曲线，酸性粘多糖及胶原分泌情况。（2）建立关节软骨缺损模型，应用自体关节软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（3）应用同种异体软骨细胞复合生物支架Pluronic修复关节软骨缺损，观察修复效果。（4）应用3H－TdR放射自显影方法，确定修复关节软骨缺损的细胞来源。结果：（1）体外培养第四代软骨细胞的增殖能力达到高峰，而第二代软骨细胞分泌基质能力最强。（2）自体或同种异体软骨细胞复合Pluronic修复关节软骨缺损，12周后缺损表面较平滑，与正常软骨界面愈合较好，MASSON三色染色显示胶原分布已较均匀， 骨细胞呈柱状排列，II型胶原在细胞周围阳性表达，而空白对照和材料对照组未见明显修复。（3）3H－TdR放射自显影方法证实修复软骨组织的细胞来源于体外移植细胞，软骨细胞植入体内早期仍进行有丝分裂，而在中后期软骨细胞以分泌基质为主，植入的细胞与周围软骨细胞间存在物质交换。结论：（1）软骨细胞在体外培养2－3周左右是作为软骨组织工程种子细胞的最佳时机。（2）自体或同种异体组织工程化软骨是修复关节软骨缺损的较好方法。（3）组织工程化软骨修复关节软骨缺损的细胞来源于体外移植的软骨细胞。     

聚乳酸涂层的多孔羟基磷灰石负载软骨细胞移植修复兔关节软 …

目的 研究复合材料负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损。方法 把软骨细胞种植到聚乳酸（ＰＬＡ）涂层的多孔羟基磷灰石（ＨＡ）表面,培养２周后,移植软骨细胞－载体的复合体修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损（直径约５ｍｍ,深约２．５ｍｍ,达钙化层）,然后对缺损的修复情况在移植后进行大体、光镜评估和电镜观察。另外对兔膝关节正常的软骨和移植后１２周缺损处的修复软骨进行胶原量的测定。结果 移植的软骨细胞能在复合材料上良好     

天然支架在软骨组织工程中应用的研究现状

由于软骨内无血管，缺乏血液供应，细胞代谢缓慢，临床上常见的由创伤和各种疾病（如骨关节炎，剥脱性骨软骨炎、骨坏死等）引起的关节软骨缺损难以自行修复。修复关节软骨缺损的传统的方法（关节灌洗清理术、微骨折、软骨下钻孔、骨膜和软骨膜移植）都存在一些技术上的局限性，均不能实现长期的软骨修复。自体软骨移植在临床上技术较成熟，但也存在供区缺损、来源有限等不足，异体软骨移植因免疫排斥反应而受到限制。组织工程化软骨的出现为软骨缺损修复提出了新的途径。1977年Green将分离、培养的软骨细胞与脱钙骨支架联合培养，开始尝试软骨组织工程的研究，并认识到细胞培养支架的重要性。目前，软骨组织工程中支架分为天然和人工合成支架。     

CPPf/PLLA支架负载人半月板纤维软骨细胞的体外实验研究

目的探讨聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸（CPPf／PLLA）支架负载人半月板纤维软骨细胞的有效性和可行性。方法将人半月板纤维软骨细胞接种CPPf／PLIA支架并在体外培养,应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察纤维软骨细胞的粘附、生长和增殖情况,培养14d,行HE、TB（甲苯胺蓝）及Ⅰ型胶原免疫组化染色观察纤维软骨组织形成情况。结果纤维软骨细胞在支架上粘附、生长和增殖良好,体外培养14d能形成较成熟的纤维软骨组织。结论CPPf／PLLA支架具有良好的细胞相容性,可作为负载人纤维软骨细胞的载体。     

组织工程修复关节软骨缺损的实验研究

目的　用组织工程的方法 ,将新生关节软骨细胞先在高分子聚乳酸材料上进行体外培养 ,然后移植于关节软骨缺损处 ,以达到修复关节软骨缺损的目的。方法　取新生新西兰兔关节软骨细胞培养于高分子聚乳酸材料支架上。将 16只兔的 32个膝关节股骨髁处人工造成一 4m m× 6 m m大小缺损 ,并随机分为二组。 组 10只兔 ,2 0个关节缺损 ,用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植修复。 组 6只兔 ,左膝用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体修复 ,表面覆盖单层软骨细胞 ;右膝仅用高分子聚乳酸材料修复。术后分别于 4、8、12、2 4周取标本进行大体、光镜、组织化学的方法进行结果评估。结果　用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体能修复关节软骨缺损 ,且为透明软骨。新生软骨组织胶原定型为 型胶原。结论　用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体移植 ,关节软骨缺损能获得透明软骨修复     

胶原凝胶复合CPPf/PLLA支架与软骨细胞的相容性研究

目的研究软骨细胞与胶原凝胶复合CPPf／PLLA支架的细胞相容性,为软骨组织工程提供适宜的种子细胞载体。方法将胶原凝胶包埋的软骨细胞整合入CPPf／PLLA三维支架并进行体外培养,采用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上粘附、生长和增殖等情况,从组织学和Ⅱ型胶原免疫组化对复合组织进行评价。结果软骨细胞能良好地在支架上粘附、生长和增殖,新形成的组织为透明软骨样组织、细胞外基质有Ⅱ型胶原分布。结论胶原凝胶复合CPPf／PLLA支架具有良好的细胞相容性,可作为软骨细胞栽体。     

同种异体骨髓基质细胞移植修复兔膝关节骨软骨缺损

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)作为种子细胞在软骨组织工程中的应用.方法 同种异体BMSCs与丝素蛋白-异体松质骨共培养构建组织工程化骨软骨复合体,移植修复兔膝关节骨软骨缺损,术后2、4、12周取材,行组织学观察及Ⅱ型胶原、Brdu免疫组化染色.结果 BMSCs能在丝素蛋白和松质骨支架上较好的黏附、生长,共培养后成功地构建了组织工程化骨软骨复合体;体内移植后生成透明软骨样组织并修复了骨软骨缺损.结论 同种异体BMSCs可作为软骨组织工程的种子细胞,丝素蛋白-松质骨双相支架负载同种异体BMSCs可用于骨软骨缺损的修复.     

藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损

目的 探讨异体关节软骨细胞作为软骨种子细胞修复关节软骨缺损的可行性。方法 无菌取成年新西兰大白兔四肢关节软骨，酶消化法分离细胞，条件培养基体外培养扩增，藻酸钙凝胶包埋培养1周，植入兔膝关节股骨髁间软骨缺损，对照组缺损旷置。术后3、6个月分别取材，观察缺损修复情况；切片特染和免疫组化观察修复组织病理，并Wakitnni评分评估修复质量。结果 7／8缺损为成熟透明软骨组织修复，1／8为纤维软骨修复；Wakitani平均评1．75分；空白对照组评7．65分。实验组3个月组标本未见淋巴细胞或白细胞浸润，6个月组标本未见明显退变；所有标本均未见藻酸残留。结论 用藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的方法是可行的，异体关节软骨细胞在适当的处理后可成为关节软骨组织工程种子细胞。     

关节软骨缺损修复的研究进展

关节软骨缺损的修复一直是骨科临床和实验研究中亟待解决的难题之一 ,人们一直在探索一种有效的修复方式。本文就关节软骨缺损的自身修复、自体或异体骨软骨移植、骨膜或软骨膜移植、软骨细胞移植、三维立体细胞培养组织工程技术及干细胞定向诱导分化的修复等六个方面 ,综述了关节软骨缺损修复的研究进展。1　关节软骨缺损的自身修复软骨细胞的增殖能力极低 ,在正常成熟关节中几乎见不到有丝分裂 ,其分裂周期不是以日、月计 ,而是以年计。一般按损伤的程度可分为部分厚度的软骨缺损和全层关节软骨缺损两类。部分厚度的软骨缺损 ( PTCD) ,…     

髂骨来源的“双相”BMG结合软骨细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨应用髂骨来源的"双相"骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)结合软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损的有效性和可行性。方法:使用酶消化法体外分离培养并扩增兔肋软骨细胞;使用自体来源髂骨构建"双相"BMG支架材料;将软骨细胞种植与BMG支架材料上构建成为细胞-BMG复合物;将制作好的27只软骨缺损动物模型随机分为3组。将细胞-BMG复合物移植于软骨缺损模型进行修复治疗作为实验组。将BMG支架移植入软骨缺损模型作为材料组;空白对照组不做处理。分别在术后4周、8周和12周通过大体形态学(依据国际软骨修复协会评分量表)、病理组织学染色及免疫组织化学染色方法对各组修复效果进行评价。结果:番红O染色,甲苯胺蓝染色和Collagen II免疫组化染色分别提示术后12周时实验组的修复组织非常类似于正常关节软骨,组织表面与正常软骨组织平面几乎持平,材料组软骨缺损处得到了部分修复,而缺损组的修复效果较差。按照ICRS量表,大体形态学和病理组织学评分结果提示:术后12周实验组的修复效果与其他两组相比有明显统计学差异(P<0.05)。结论:自体髂骨来源的"双相"BMG结合软骨细胞在体内可形成具有一定结构功能的软骨组织,能够应用于再生修复软骨的缺损。     

关节软骨下骨移植后对关节软骨影响的实验研究

目的：探讨关节软骨下大块骨缺损骨移植后,局部成骨活动的发生与演变、关节软骨的活性变化及术后关节面塌陷、关节软骨退变等并发症的原因。方法：在家兔胫骨上端内侧,模拟临床骨肿瘤刮除,建立关节软骨下大块骨缺损动物模型,采用新鲜自体骨与同种异体脱钙骨移植后,通过大体观察、组织学观察、放射自显影方法进行动态观察。结果：模型建立２周后,软骨下骨完全坏死,出现吸收腔;４周时吸收腔内出现新的毛细血管,新骨开始沉积;到１２周时,坏死软骨下骨中毛细血管完全恢复,有８２５％的死骨被新骨替代。结论：（１）关节软骨下骨移植时,大量刮除软骨下骨,会增高术后关节软骨退变的发生率。（２）在关节软骨下骨移植时,如果大量刮除软骨下骨,将引起软骨下骨的缺血坏死,坏死的软骨下骨将逐渐被新生骨爬行替代。（３）用新鲜自体骨与异体脱钙骨移植修复关节软骨下大块骨缺损相比较,均经历了被吸收、血管长入、新骨形成取代移植骨的过程,愈合及修复程度均无显著差异。     

曲安奈德注射液灌注颞颌关节上腔对滑膜和关节囊的影响

目的观察颞颌关节上腔灌洗术并注入曲安奈德注射液治疗滑膜炎和关节囊炎的临床疗效。方法对41例颞颌关节滑膜炎和关节囊炎病例进行关节上腔灌洗,然后注入曲安奈德注射液15mg。1个月后复诊,观察治疗效果。结果经治疗后显效28例（68．3％）;好转12例（29．3％）;无效1例（2．4％）。结论关节上腔灌洗术治疗颞颌关节滑膜炎和关节囊炎疗效肯定。     

关节软骨浅表层的透射电镜观察

目的　观察正常关节软骨浅表层的超微结构。方法　应用透射电子显微镜对正常成年兔膝关节软骨进行超微结构观察。结果　透射电镜下正常成年关节软骨浅表层由三层结构组成 :最上层为一黏液层 ,中层为一层细胶原纤维网 ,下层为含梭形细胞的胶原纤维层。结论　浅表层的三层结构是关节软骨的重要组成部分     

关节软骨损伤的治疗进展

关节软骨损伤是骨科较为常见的疾病。据统计,在行关节镜治疗者中,66％有关节软骨病变,11％有全层软骨损伤。目前普遍接受这样的观点：成年人关节软骨一旦损伤,其修复能力非常有限,直径〈3mm可以部分或完全修复,直径〉4mm的缺损则很难自行修复。现将关节软骨损伤的治疗方法介绍如下。     

关节软骨缺损修复细胞的体视学变化

[目的 ]利用图像分析技术 ,进一步了解关节软骨缺损的修复过程 .[方法 ]在 38只家兔双侧膝关节股骨髌面制作 3 0mm× 6 0mm全层关节软骨缺损区 ,随机分成红骨髓移植组、红骨髓 骨膜复合移植组和骨膜移植组 ,观察家兔股骨髌面软骨体视学变化 ,包括计算单个修复细胞面积及修复组织数密度 .[结果 ]透明软骨细胞除单个细胞面积数值较小外 ,修复组织数密度较钙化软骨细胞的数值高 ;各组再生组织中的单个细胞面积随时间推移逐渐增大 ,而修复组织数密度随时间推移逐渐减少 .     

兔软骨细胞的分离与培养

目的 探讨免软骨细胞培养方法。方法采用胶原酶Ⅱ分段消化法从4周龄新西兰兔的关节软骨中分离出软骨细胞并进行原代和传代培养。每日在倒置显微镜下观察细胞形态及其生长情况。并用甲苯胺蓝异染色进行细胞表型鉴定。结果软骨细胞形成单层的时间原代培养1周左右，传代培养约4～5天，细胞以圆形或上皮样细胞形态为主。甲苯胺蓝染色证实细胞可合成蛋白多糖，异染反应主要集中在细胞集落样生长区，异染程度以原代培养最为显。结论采用本方法培养兔软骨细胞是可行的。