Plkl的研究进展

Plkl是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，经磷酸化激活，在细胞有丝分裂的不同时期都起到十分重要的作用：在G2晚期M初期参与Cdc25C的活化，继而促成cyclin B／Cdc2的激活、协助中心体的功能成熟以及双极性纺锤体的形成，从而促进M期的起始和染色体正常分离、分配；通过调节APC(anaphase—promoting complex)决定细胞能否按期离开M期。正常情况下，DNA的损伤将阻抑细胞进入分裂期(M)，Plukl活性受抑在其中起关键性的作用。Plkl可以使细胞周期停滞在G2期或M期的多个时点。Plkl尚参与哺乳动物细胞有丝分裂中高尔基体特异性碎解、分离入子细胞并融合重构的过程。在大多教人类肿瘤中Plkl均高表达。已经建立了针对PlklmRNA的反义寒核苷酸，它能特异性地抑制PlklmR—NA及其蛋白产物，有效抑制培养细胞系或裸鼠肿瘤模型中肿瘤细胞的增殖。     

Plk1在急性白血病患者中的表达及其意义

Plk-1（Polo-like kinase 1）是一种高度保守的丝氨酸／苏氨酸激酶，在大多数人类肿瘤中高表达，针对Plk1 mRNA的反义寡核苷酸治疗实验证实对多种肿瘤有效旧。。目前有关Plk-1肿瘤相关性研究主要局限于实体瘤，在白血病等血液系统恶性肿瘤中的表达水平尚不明确。我们采用细胞免疫组化结合激光共聚焦显微镜技术对30例不同类型急性白血病患者骨髓和（或）外周血标本及K562细胞系Plk-1的表达水平及细胞内分布模式进行了研究。     

周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控

为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白(cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖调控的作用，用针对cyclin G1 mRNA5′端编码区起始密码子(ATG／AUG)的ASON，通过脂质体导入HL-60细胞共培养后，用免疫组织化学法和RT-PCR分别检测cyclin G1和mRNA水平的表达，用电镜、细胞原位凋亡检测法(POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡。结果表明：cyclin G1 ASON组与SON及空白对照组相比，ASON能特异地抑制cyclin G1及mRNA水平的表达，当ASON的浓度达到一定程度时，HL-60细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制，出现细胞凋亡，并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论：cyclin G1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达，对白血病细胞的增殖有抑制作用，并可促使细胞凋亡，且有浓度依赖性。     

中心体异常与白血病

中心体（centrosome）作为大多数真核细胞的主要微管组织中心（microtubule organizing center）,在有丝分裂纺锤体（mitotic spindle）的形成及染色体的分离过程中扮演了重要角色。几乎所有的实体瘤都发生了不同程度的数量和结构中心体异常。此外,中心体异常已经在几种不同的白血病中有所研究,如急性髓系白血病、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病和成人T细胞白血病等。中心体异常与肿瘤进展及临床侵袭性之间存在着一定相关性,并导致非整倍体（aneuploid）和基因组不稳定（genome instability）。     

反义寡核苷酸研究进展

反义寡核苷酸的研究已进入一个新的阶段 ,有望在抗病毒、抗肿瘤、炎症性疾病方面成为新的药物 ,并且是研究基因功能的一个有用工具。现对反义寡核苷酸的设计、靶位点选择、修饰 ,以及临床等方面的研究进展作一综述     

CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响

目的:研究CDK1干扰调节PLK1、Aurora B和TRF1对白血病细胞增殖的影响.方法:以人髓原细胞白血病细胞株HL-60为研究对象,通过调节胞内CDK1表达来研究TRF1表达及其变化对细胞增殖和周期的影响.实验分为对照、shRNA-NC、CDK1-shRNA、pcDNA和pcDNA-CDK1共5组.采用RT-PC...     

Wt1反义寡核苷酸阻断白血病微小残留病wt1基因表达的体外研究

本研究通过wt1反义寡核苷酸(ASO)抑制wt1基因的表达,观察微小残留病模型及患者基因表达的变化。取56例复诊急性白血病完全缓解(CR)患者骨髓,用RT-PCR方法筛选出wt1基因表达阳性的骨髓标本。白血病细胞系微小残留病(MRD)模型及筛选出的wt1阳性急性白血病CR患者骨髓标本进行了细胞培养并用wt1ASO处理细胞,观察wt1基因表达的变化。结果表明:wt1基因的敏感性是10-3-10-4;56例急性白血病CR患者骨髓wt1基因的表达阳性率为16%。用wt1ASO处理wt1表达阳性的K562、HL-60细胞系MRD模型以及9例存在MRD的急性白血病CR患者骨髓,发现wt1ASO组有效的阻断了wt1基因的表达,而正义寡核苷酸组和对照组wt1基因的表达仍为阳性。结论:wt1ASO体外能够阻断白血病MRD中残留白血病细胞wt1基因的表达。     

chk1、chk2反义寡核苷酸转染HL-60细胞株增加其放疗后凋亡敏感性

目的 通过反义封闭chk1、chk2基因，阻断细胞周期检测点信号传导通路，从而增加HL-60细胞放疗敏感性。方法 对HL-60细胞进行chk1、chk2正义链和反义链的单转染与共转染，于转染后24h进行放射线照射，照射后24h用Westem blot测量chk1蛋白的变化，用流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡率。结果 反义封闭chk1可增加HL-60细胞放疗后凋亡敏感性，细胞凋亡率为26．31％，明显高于正义链的10．34％，二比较差异有显性(P＜0．05)。转染chk1反义链的HL-60细胞G2／M期阻滞现象减弱，G2／M期细胞为38．42％，转染chk1正义链为54．64％，二比较差异有显性(P＜0．01)。联合反义封闭chk1、chk2具有协同增效作用。结论 反义封闭chk1、chk2基因可增加HL-60细胞放疗后凋亡敏感性。     

特异性反义寡核苷酸抑制白血病细胞株HLA—DPB1基因表达

反义寡核苷酸可以特异性地抑制基因表达，将ＨＬＡ０ＤＰＢ１特异性反义寡核苷酸加入细胞培养基中，对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞株由γ－干扰素诱导的ＨＬＡ－ＤＰＢ１表达有特异性抑制作用。当反义寡核苷酸浓度在４０μｇ／ｍｌ时，１小时后即出现ＨＬＡ０ＤＰＢ１基因表达抑制现象，持续时间达４８小时，７２小时后表达又逐渐恢复；反义寡核苷酸抑制基因表达有很高的特异性，在ＨＬＡ－ＤＰＢ１表达完全被封闭的情况下，与它     

反义C—myb寡核苷酸的研究进展

反义Ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸的研究进展徐学君综述游潮审校华西医科大学附属第一医院神经外科近１０年迅速发展起来的反义技术作为治疗的新方法正受到日益重视，为疾病的临床治疗开辟了一个新天地。反义寡核苷酸可以在核酸水平上有选择地关闭和修饰任何一个特定的基因，使其丧...     

细胞周期素G1反义硫代脱氧寡核苷酸抑制HL-60细胞在裸鼠体内生长的实验研究

目的：探讨细胞周期素G1(cyclin G1)反义硫代脱氧寡核苷酸对HL-60细胞在裸鼠体内生长的抑制作用。方法：将裸鼠随机分成对照组、正义寡核苷酸(SON)组、反义寡核苷酸(ASON)组，其中SON组和ASON组接种转染的HL-60细胞(HL-60／S和HL-60／AS)前接受3Gy的^60Co照射；将各组HL-60细胞接种于裸鼠皮下连续观察裸鼠的出瘤时间、瘤体大小，计算抑瘤率；病理切片用苏木精．伊红染色，电镜观察移植瘤组织的结构和细胞形态变化；用流式细胞仪(FCM)和RT-PCR分别检测cyclin G1蛋白和mRNA水平的表达；电镜和FCM检测细胞凋亡。结果:①cyclin G1 ASON组与SON组和对照组比较，对HL-60细胞在裸鼠体内生长有明显抑制作用，抑瘤率为69．4％。成瘤率、瘤重、瘤体积明显小于SON组和对照组。②镜下见cyclin G1 ASON组的HL-60细胞部分细胞形态发生改变，核分裂象少见，细胞的异型性较小，并且有凋亡细胞出现。结论:cychn G1 ASON能明显抑制HL-60细胞在裸鼠体内的生长，并且促使部分细胞发生凋亡。     

保肢手术的前瞻性基因疗法研究:BLCAP基因在人骨肉瘤细胞发展过程中的调节作用

目的探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础.方法通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响.结果BLCAP基因反义寡核苷酸浓度为10μmol/L时.对此细胞的生长速度和集落形成能力有明显促进效应;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化,对细胞增殖活性有增强作用.结论首次发现BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607有明显的影响,提示BLCAP基因可能作为一种抑癌基因在人骨肉瘤发展过程中起作用.     

WT1基因反义寡核苷酸对急性白血病细胞的抑制作用

WT1基因表达产物能够抑制G CSF对髓前体细胞的分化作用,诱导其促进增殖作用。WT1反义寡核苷酸是与WT1基因转录本mRNA翻译起始段互补的一段18nt寡核苷酸链[1 3 ] 。我们的目的是通过WT1反义寡核苷酸抑制WT1基因的表达,观察细胞凋亡的情况,研究WT1基因在白血病发生、发展中的作用以及探讨WT1反义寡核苷酸在白血病治疗中的应用。材料和方法1　药物和试剂　WT1 反义及WT1 正义硫代寡核苷酸序列根据WT1 cDNA设计,由大连宝生物公司合成。反义链序列:5′GTCGGAGCCCATTTGCTG 3′,正义链序列:5′CAGCAAATGGGCTCCGAC 3′。…     

有丝分裂前期检查点Chfr基因作用的研究进展

细胞在长期进化过程中发展出了一套保证细胞周期中DNA复制和染色体分配质量的检查机制，通常被称为细胞周期检查点(checkpoint)，有丝分裂前期检查点Chfr(checkpoint with FHA and ring finger)蛋白在正常组织中广泛表达，其结构和功能都十分保守，许多研究表明Chfr在细胞分裂过程中发挥着重要作用，细胞分裂存在有丝分裂应激时，Chfr通路激活引起Plk1的泛素化并降解，控制Cdc2激酶的活性，延迟染色体凝集和中心体分离，阻止细胞于有丝分裂前期，它的表达增强细胞对应激的生存能力。本文对Chfr基因的结构，Chfr蛋白质的作用和功能研究进展作一综述。     

bcr—ab反义寡核苷酸治疗慢性髓细胞性白血病的研究进展

自体造血干细胞移植是治疗慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）是一种重要方法,近几年来ｂｃｒ－ａｂｌ反义寡核苷酸在ＣＭＬ的治疗尤其是自体骨髓移植的体外净化方面取得了很大进展,提供了治疗白血病及其他恶性肿瘤的新方法。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对结直肠癌细胞转移潜能的影响研究

目的探讨HOXA1基因反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌HCT116细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法将HCT116细胞分为:15μmol/L的HOXA1 ASODN处理组(ASODN组)、15μmol/L N-ODN处理的无关对照组(N-ODN组)、15μmol/L的HOXA1 SODN处理的正义对照组(SODN组)及正常对照组。Western blotting检测HOXA1、上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达。MTT法检测细胞活力。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。对比四组上述各指标。结果与其他三组相比较,HOXA1 ASODN组可明显下调HOXA1、N-cadherin、Vimentin、PI3K和pAKT蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达,抑制细胞活力、侵袭和迁移能力。结论 HOXA1基因反义寡核苷酸可明显降低结直肠癌细胞转移潜能,机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路,从而逆转上皮间质转化有关。     

周期蛋白D3在小儿急性白血病细胞中的表达及期作用研究

目的　检测周期蛋白D1、D2 、D3 在小儿急性白血病细胞中的表达 ,并研究周期蛋白D3 在小儿急性白血病发病机制中的作用。方法　采用免疫组织化学法检测 43例急性白血病患者白血病细胞和 3种白血病细胞系中周期蛋白D的表达 ;用反义技术和流式细胞术研究周期蛋白D3在白血病细胞增殖中的作用。结果　小儿急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病细胞中周期蛋白D3 阳性表达率分别为 47%和 38% ,急性白血病患者中周期蛋白D1阳性表达率约为5 % ,周期蛋白D2 表达均为阴性 ,正常对照组骨髓细胞周期蛋白D1、D2 、D3 表达均为阴性。周期蛋白D3 在白血病细胞系CEM细胞中表达阳性 ,用周期蛋白D3 反义脱氧寡核苷酸与CEM细胞共培养后 ,细胞增殖受到抑制。结论　周期蛋白D3 在小儿急性白血病细胞中呈现过度表达 ,并对白血病细胞增殖产生重要影响。     

反义核酸技术抗乙型肝炎病毒基因表达新的研究进展

反义核酸包括反义DNA、反义RNA和H-核酸酶(ribozyme)三大技术领域。是近十几年迅速发展起来的旨在利用碱基互补配对原则而选择性抑制特定基因的复制、转录或翻译的一种新的生物技术。乙型肝炎病毒(HBV)与肝硬化、肝癌有密切关系,严重威胁人类健康,根据HBV基因及其转录物的结构和功能及复制的主要环节而选择合适的靶位点,设计合成特异的反义寡核苷酸阻断HBV基因表达,为HBV的治疗开辟新的途径;且为防治输血相关的病毒疾病提供新的思路。     

应用完整原位杂交技术检测人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达

目的：探讨人食管癌EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体的表达，及其对反义寡核苷酸胰岛素样生长因子1受体mRNA表达的影响和食管癌发生、转移的意义。方法：实验于2004-09／12在河南省肿瘤病理重点实验室完成。体外分5组培养人食管癌EC9706细胞，其中4组分别用设计合成的3条封闭胰岛素样生长因子1受体不同基因位点的反义寡核苷酸1～3及1条无关寡核苷酸转染．另一组不转染。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA表达情况。结果：①胰岛素样生长因子1受体mRNA在食管癌EC9706细胞中呈阳性表达。②3条胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染组EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达无差异（2．66&;#177;0．21，2.63&;#177;0.23，2.65&;#177;0.22，P&;gt;0．05)，但均显著低于无关寡核苷酸组及无转染组(5．67&;#177;2．86，5．02&;#177;2．75，P&;lt;0．05)结论：胰岛素样生长因子1受体反义寡核苷酸转染人食管癌EC9706细胞后，可体外抑制EC9706细胞中胰岛素样生长因子1受体mRNA的表达，从而抑制食管癌的发生和转移。为临床预防食管癌的发生、发展和转移提供了理论依据。