自然排卵、促排卵和超促排卵状态下小鼠卵巢组织中生长分化因子-9(GDF-9)的表达

目的:观察自然周期排卵、促排卵与控制性超促排卵(COH)状态下小鼠卵巢生长分化因子-9(growth differentiation factor,GDF-9)表达水平的变化情况。方法:成年雌性小鼠随机分为3组每组10只,分别为自然排卵组(对照组)、孕马血清(PMSG)促排卵组(PMSG组)、控制性超促排卵组(COH组),各组小鼠取排卵期卵巢组织,采用免疫组织化学方法检测GDF-9的表达与定位,并分别采用Western blottting和实时荧光定量PCR法,定量检测GDF-9蛋白与mRNA的含量。结果:各组小鼠卵母细胞与颗粒细胞中均检测到GDF-9的表达,PMSG组与COH组GDF-9蛋白与mRNA的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),PMSG组的表达也明显弱于COH组(P<0.05)。结论:促排卵可促进小鼠卵巢GDF-9的表达,但COH降低促排卵小鼠卵巢GDF-9的表达。     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。     

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15对多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡的影响

目的探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达对卵丘细胞凋亡的影响。方法收集本院行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS组(n=30)和对照组(n=60)患者的卵丘细胞。TUNEL法及流式细胞术检测卵丘细胞凋亡;免疫组织化学方法检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15蛋白表达,运用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对染色强度定量分析;Real-time PCR技术检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL)-2、BCL-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达。结果 PCOS组穿刺卵泡数、获卵数高于对照组(P0.01);PCOS组卵丘细胞凋亡率高于对照组(P0.05);GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组卵丘细胞胞质中均呈阳性表达;PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15、BCL-2、BAX mRNA的表达低于对照组(P0.05),BAX/BCL-2比值高于对照组(P0.05)。Pearson相关分析结果显示PCOS患者GDF-9、BMP-15与BCL-2 mRNA表达呈正相关,与BAX mRNA的表达呈负相关。结论 PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15异常表达可能是卵丘细胞凋亡增加的原因之一。     

GDF-9及其受体在PCOS大鼠卵巢中的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)蛋白及其受体BMPR-ⅡmRNA在PCOS大鼠卵巢的表达。方法:皮下注射DHEA建立PCOS模型,用免疫组化法检测卵巢GDF-9表达;用RT-PCR法检测BMPR-ⅡmRNA的表达。结果:GDF-9主要于PCOS发育正常的初级、窦前、窦状卵泡卵母细胞胞浆中表达,表达强度与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。BMPR-ⅡmRNA相对含量则显著高于对照组(P<0.05)。结论:GDF-9是促进P- COS卵泡发育的主要原因;受体表达上调是诱导雄激素增高的原因之一。     

卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在高胰岛素血症大鼠卵巢中的表达与意义

目的:探讨卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在卵泡发育异常及激素水平变化等方面的作用机制。方法:①利用改良Poretsky方法建立高胰岛素血症动物模型(模型组,n=20):hCG×9d+胰岛素×22d。采用下列方法验证模型:测定空腹血糖、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)、E2、LH、FSH,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);测定大鼠体重及卵巢重量;HE染色方法观察卵巢病理变化。②采用免疫组化和RT-PCR法检测模型动物及正常对照组(n=20)卵巢组织GDF-9 mRNA及蛋白的表达。结果:①与对照组比较,模型组FPG、FINS、HOMA1-IR、T升高(P<0.05)。②组间体重无统计学差异,但模型组卵巢重量显著大于对照组(P<0.05)。模型组各发育阶段卵泡明显减少,但囊性扩张的卵泡和闭锁卵泡增多,卵泡膜细胞增生,卵泡间质明显增厚。③模型组卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组(P<0.05)。结论:高胰岛素血症减弱卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达强度;表达降低的GDF-9可能与PCOS卵泡发育异常及激素水平变化有关。     

卯泡生长分化因子-9（GDF-9）在高胰岛素血症大鼠卵巢中的表达与意义

目的：探讨卵泡生长分化因子-9（GDF-9）在卵泡发育异常及激素水平变化等方面的作用机制。方法：①利用改良Poretsky方法建立高胰岛素血症动物模型（模型组，n=20）：hCG&#215;9d＋胰岛素x22d。采用下列方法验证模型：测定空腹血糖、空腹胰岛素（FINS）、睾酮（T）、E2、LH、FSH，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA1-IR）；测定大鼠体重及卵巢重量；HE染色方法观察卵巢病理变化。②采用免疫组化和RT—PCR法检测模型动物及正常对照组m=20）卵巢组织GDF-9mRNA及蛋白的表达。结果：①与对照组比较，模型组FPG、FINs、HOMA1-IR、T升高（P〈0．05）。②组问体重无统计学差异，但模型组卵巢重量显著大于对照组（P〈0.05）。模型组各发育阶段卵泡明显减少，但囊性扩张的卵泡和闭锁卵泡增多，卵泡膜细胞增生，卵泡间质明显增厚。③模型组卵巢组织GDF-9mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组（P〈0．05）。结论：高胰岛素血症减弱卵巢组织GDF-9mRNA和蛋白的表达强度；表达降低的GDF-9可能与PCOS卵泡发育异常及激素水平变化有关。     

GDF-9和BMP-15在PCOS患者卵母细胞和卵冠丘细胞的表达研究

目的探讨卵源性因子生长分化因子-9(GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(BMP-15)在行体外受精-胚胎移植PCOS患者卵母细胞和卵冠丘颗粒细胞(cumulus granulosa cell,CGC)中的表达情况.方法按1∶4比例收集因男方因素行ICSI后废弃的PCOS患者和对照组患者未成熟生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞或第一次减数分裂中期Ⅰ(metaphase Ⅰ,MⅠ)期卵母细胞.运用免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜(LCSM)对GV期卵母细胞GDF-9蛋白的表达进行检测,对MI期卵母细胞进行BMP-15蛋白表达的检测;应用免疫细胞化学方法检测两种因子在MⅡ期CGC的表达.结果GDF-9和BMP-15在PCOS患者和对照组患者卵母细胞的表达差异无显著.GDF-9在PCOS患者CGC的表达强度为5.01±0.83,显著低于对照组患者的8.88±1.52,P＜0.05.BMP-15在PCOS患者CGC的表达与照组患者比较差异无显著.结论PCOS患者促排卵治疗后卵母细胞GDF-9和BMP-15表达无差异,而CGC GDF-9表达低提示促排卵治疗改善了PCOS卵泡的生长,但可能导致过早黄素化.     

不同控制促排卵方案对子宫腺肌病患者体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨不同控制性超促排卵方案对子宫腺肌病患者IVF-ET结局的影响。方法:回顾性分析146例子宫腺肌病患者的192个IVF-ET周期,根据控制性超促排卵(COH)方案分为GnRH-a短方案组(A组,87个周期)、长方案组(B组,34个周期)和超长方案组(C组,71个周期)。比较分析各组的卵巢刺激与胚胎移植结局。结果:3组间年龄及不孕年限无统计学差异(P>0.05);hCG注射日A组LH水平显著高于B、C组,差异显著(P<0.05);各组间获卵数、优质胚胎数、胚胎移植数等无统计学差异(P>0.05);C组的子宫体积在应用长效GnRh-a后明显缩小,差异显著(P<0.05)。促性腺激素(Gn)使用总量C组显著高于A组和B组,差异显著(P<0.05)。临床妊娠率C组(42.6%)显著高于A组(22.4%)和B组(25.8%)(P<0.05)。结论:超长方案可获得与短方案和长方案同样的优质胚胎数,并可提高子宫腺肌病患者IVF-ET临床妊娠率,但Gn用量增加。     

基于“治未病”思想观察中药补肾调冲方对卵巢早衰大鼠2种相关生长因子表达的影响

目的 探讨中药补肾调冲方对卵巢早衰(POF)大鼠的防治作用及通过调控血管内皮生长因子(VEGF)、碱性纤维母细胞生长因子(b FGF)的表达调节卵巢功能及预防机制。方法 随机选取SD雌性大鼠60只,分别设空白、模型、中药低、中、高剂量组和西药组,每组10只。空白组自由饮水;模型组给予雷公藤多苷片造模14 d;中药组先给予低、中、高不同剂量补肾调冲中药36 d,再给予雷公藤多苷片造模14 d;西药组先给予结合雌激素36 d,再给予雷公藤多苷片造模14 d。实验结束后观察大鼠的卵巢指数、子宫指数;光学显微镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目;ELISA检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)的水平;免疫组织化学法检测VEGF及b FGF蛋白的表达;实时荧光PCR法检测VEGF、b FGF m RNA的表达。结果 模型组大鼠卵巢指数、子宫指数明显低于空白组、各给药组(P0.01);中药低剂量组卵巢指数与西药组比较有统计学差异(P0.05);与模型组比较,各给药组及空白组大鼠始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目明显增多,闭锁卵泡的数目明显减少(P0.01);中药低剂量组与西药组比较大鼠始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目明显减少,闭锁卵泡的数目明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组及空白组血清FSH、LH水平明显降低(P0.01),血清E2、AMH水平明显升高(P0.01);与模型组比较,各给药组及空白组VEGF、b FGF蛋白及m RNA表达明显降低(P0.01),中药低剂量组与西药组比较b FGF蛋白表达及m RNA明显降低(P0.05)。结论 中药补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,预防效果明显,其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够上调VEGF、b FGF的表达,为卵泡发育提供基础,复苏即将凋亡的卵泡,增强卵巢功能有关。     

卵巢反应性对IVF-ET妊娠结局的影响

目的:探讨IVF-ET促排卵周期中卵巢反应性对妊娠结局的预测能力。方法:回顾性分析402个长方案促排卵周期中所需外源性重组卵泡刺激素总量(rFSH)/成熟卵母细胞数(n)的比值(rFSH/n)与妊娠结局的关系。结果:随着rFSH/n比值升高,基础窦卵泡数(AFC)减少、rFSH总用量增大、获卵数减少、平均胚胎评分下降(P<0.05)。当rFSH/n>450时,临床妊娠率明显下降(P<0.05)。结论:卵巢反应性是影响IVF结局的重要因素,妊娠率随着rFSH/n的增加而下降的截点为rFSH/n>450。     

不同控制性超排卵方案中的卵泡发育不同步分析

目的:探讨不同控制性超排卵方案中卵泡发育不同步的情况。方法:回顾性分析行IVF/ICSI助孕的不孕症患者1166个周期。按COH方案的不同,分为长方案组(n=1085)、短方案组(n=34)和超长方案组(n=47);另长方案组中再按年龄分为<30岁组(n=429)、30～34岁组(n=421)和≥35岁组(n=235)。将阴道B超监测最大卵泡与次大卵泡相差3mm视为卵泡发育不同步。分析启动Gn日、启动Gn后4d、7d和9d的卵泡发育不同步情况。结果:①启动Gn日卵泡发育不同步率不同COH方案组间无统计学差异;启动Gn4d、7d、9d卵泡发育不同步率短方案组最高,其次为超长方案组,最后为长方案组,但是仅在启动Gn7d时长方案与短方案比较有统计学差异(P<0.05)。②长方案组中不同年龄组比较,启动Gn日卵泡发育不同步率3组间无统计学差异。启动Gn4d、7d、9d卵泡发育不同步率随着年龄的增长而增高,但仅在启动Gn7d时<30岁组与≥35岁组间和启动Gn9d时≥35岁组与另2组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:①长方案较短方案和超长方案卵泡发育更同步;②随着年龄增长卵泡发育不同步逐渐增加。     

大七气汤对大鼠异位子宫内膜VEGF、MMP-9表达的影响

目的:探讨中药大七气汤治疗子宫内膜异位症的机理。方法:建立SD大鼠子宫内膜异位模型,成功建模3周后将大鼠随机分模型组(B组,n=8)、大七气汤大剂量组(40 g/kg,C组,n=10)、小剂量组(20 g/kg,D组,n=8)、孕三烯酮组(0.5 mg/kg,E组,n=8),并以假手术为正常对照组(A组,n=8),每组给药3周,然后用免疫组织化学方法检测在位、异位子宫内膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶(MMP)-9的表达情况。结果:C、D、E组均降低异位内膜组织VEGF/MMP-9的表达,与B组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C、D、E组间无明显差异(P>0.05)。结论:大七气汤能明显抑制子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜VEGF、MMP-9的表达,从而明显抑制异位内膜周围血管的形成,使异位内膜萎缩。     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠反复自发性发作及海马损伤的干预作用

目的观察中药熄风胶囊单药和联合用药干预治疗对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠反复自发性发作及海马损伤的影响。方法将SPF级健康雄性Wistar大鼠160只随机分为正常组、模型组、熄风胶囊高剂量干预组(熄高组)、熄风胶囊中剂量干预组(熄中组)、熄风胶囊低剂量干预组(熄低组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯联合干预组(联高组)、熄风胶囊大剂量+托吡酯1/2剂量联合干预组(联低组)、托吡酯干预组(TPM组)各20只。运用氯化锂-匹罗卡品化学点燃法,复制癫痫大鼠模型,观察熄风胶囊单药和联合用药干预治疗对大鼠反复自发性发作(SRS)的影响;通过常规病理及电镜观察海马结构形态学改变,应用Timm组织化学染色法进行海马苔藓纤维出芽(MFS)的观察。结果 (1)所有干预组大鼠痫样发作平均级别均低于模型组而高于正常组,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)各干预组诱发癫痫持续状态的大鼠SRS发作次数均高于正常组而低于模型组,差异均有统计学意义(P0.01),其中熄高组SRS次数低于熄中组、TPM组、熄低组,差异均有统计学意义(P0.05);联髙组SRS次数低于熄低组,差异有统计学意义(P0.01)。(3)Timm染色结果显示:所有干预组海马CA3始层及齿状回分子层Timm染色颗粒MFS总面积低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05),其中在CA3区熄高组、联髙组、联低组与模型组相比,差异有统计学意义(P0.01)。(4)光、电镜结果显示:各干预组中联低组海马结构损伤最轻,熄高组海马结构损伤较熄中组、熄低组轻。结论熄风胶囊单药及与TPM联合用药可以有效地减低氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,减轻海马损伤,抑制MFS。     

染色体罗伯逊易位女性携带者对控制性超排卵的卵巢反应

目的:初步探讨罗伯逊易位对控制性超促排卵(COH)中卵巢反应性的影响。方法:回顾性分析12个周期针对罗伯逊易位不孕夫妇行胚胎植入前遗传学诊断(PGD)的COH方案,其中女性罗伯逊易位携带者(研究组)5个周期,男性罗伯逊易位携带者(对照组)7个周期。比较分析患者年龄、体质量指数(BMI)、基础内分泌及COH中降调节天数、Gn使用天数、Gn用量、hCG注射日E2值、获卵数、2PN受精率、2PN卵裂率、移植胚胎数等。结果:年龄、BMI、基础内分泌及COH中降调节天数、Gn使用天数、2PN受精率、2PN卵裂率、移植胚胎数及获卵数组间无统计学差异,但研究组的Gn用量(3 128.6±891.3 IU)明显高于对照组(1 810.0±630.9 IU)(P<0.05);研究组hCG注射日E2值为3 233.8±1 938.2 pg/ml,明显低于对照组的8 143.6±1 926.3 pg/ml(P<0.05)。结论:染色体罗伯逊易位影响卵巢对COH的反应性。